前言：中文期刊网精心挑选了向雷锋学习范文供你参考和学习，希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感，欢迎阅读。
向雷锋学习范文1
“如果你是一滴水，你是否滋润了一寸土地?如果你是一线阳光，你是否照亮了一分黑暗?如果你是一颗粮食，你是否哺育了有用的生命?如果你是一颗最小的螺丝钉，你是否永远守在你生活的岗位上?”这是选自雷锋日记中的一段话，影响和鼓舞了几代人，是永远让我们怀念和崇敬的对生命价值的诠释。
今年的3月5日，是同志号召“向雷锋同志学习”50周年纪念日，作为新时代的大学生，我们应该肩负历史使命，学习雷锋勤俭节约、热爱集体、助人为乐的精神，用实际行动践行雷锋精神。在此，北京大学医学部青年志愿者协会向全体同学倡议：
一、学习雷锋勤俭节约的优良作风。古语有云“克勤于邦，克俭于家”，厉行节约、反对浪费是中华民族的传统美德。节约需要我们从身边的小事做起，“一粥一饭，当思来之不易;半丝半缕，恒念物力维艰”，关上教学楼空教室里亮着的灯、拧紧卫生间里滴水的龙头、节约使用每一张纸、吃光餐盘中每一粒饭……让我们在细节里践行雷锋精神，使之发扬光大，传承不息吧!
二、传承雷锋克己奉公的集体主义精神。北医为我们创造了优美安宁的学习、生活环境，北医的美好也同样需要我们每一个人去悉心呵护。树立“校园是我家”的主人翁意识，爱护公共财物，不乱扔果皮纸屑，垃圾分类投放，遵守食堂秩序……让我们为美化校园风貌而严格律己吧!
向雷锋学习范文2
“向雷锋同志学习”主题活动工作总结
为纪念同志“向雷锋同志学习”题词51周年，大力弘扬雷锋精神和“奉献、友爱、互助、进步”的志愿精神，以实际行动培育和践行社会主义核心价值观，3月2日，市文明办、长城爱心大本营联合市中医院开展“送医送药送温暖”学雷锋志愿服务活动，为文登市侯家镇的贫困家庭送去了温暖。
专家门诊开到农村大集上
2日上午9时许，下乡送医送药送温暖的志愿者们来到文登市侯家镇。他们兵分两路开展活动，一路志愿者在侯家镇大集上支起了义诊摊位，现场为村民义诊;另一路志愿者则深入侯家村、山前村、南渠格村、小洛村，为身体行动不便的残疾人上门送医送药。
早已得到义诊消息的村民们，大清早就从各村赶来了，在提前搭好的桌子前，来自市中医院眼科、心脑科、针灸科等科室的专家还没落座，很多村民们便围上来咨询。
“大夫，我这眼睛里长了个痘，您给看看是怎么回事。”来自河杨家村的杨女士在志愿者引导下，来到眼科医生的摊位。她说，“最担心这个病会遗传，得知医生来这里，就趁这个机会咨询一下眼科专家。”现场，市中医院眼科主任赛自金仔细为她进行了检查，告诉她不会遗传，并为她开具了药单，杨女士满意而去。
在义诊摊上，有的村民拿来了在乡镇医院就诊时的病例和化验单，来找市中医院的医生“确诊”一下，有的村民专门请教按摩推拿技术，现场人头攒动。“头一次一下子见了这么多专家，都不知道先看哪儿了。希望这样的活动能越来越多。”许多村民表示。
爱心温暖坚强母亲的心
2日上午，志愿者们带着大米、蔬菜等日用品和药品来到侯家镇小洛村王炳凤的家中，探望王炳凤母女。
王炳凤的女儿因2001年的一场车祸成了植物人。王炳凤不离不弃守在女儿身边，四处求医、悉心照顾，用母爱唤醒了“沉睡”的女儿，如今女儿已经能够扶着母亲的肩膀站起来了。2012年3月，王炳凤的丈夫突患心肌梗塞去世，全家的生活重担都压在了王炳凤身上。面对种种困难，她用一颗坚强的心来支撑着自己，继续为女儿的康复努力着。
王炳凤的故事深深感动了许多人。昨天，随行的医生们为王炳凤的女儿进行了身体检查，现场交给王炳凤如何为女儿进行分阶段康复训练的方法，并给这个不幸的家庭送来1000元慰问金、药物以及大米等生活用品。
向雷锋学习范文3
赵浩博
大家都认识雷锋叔叔吧？雷锋是我们学习的榜样，走到哪里，好事就做到哪里。今天，我们学校组织一次“学雷锋，树新风”活动。
老师带领着我们搞校园卫生，我们的任务是去综合楼擦窗户。“到了，到了。”一名同学说道。我已经迫不及待了，迅速地爬上了窗户。有的同学蹲着擦，有的同学躺着擦，还有的同学歪着身子擦，这可是四楼啊！就连胆小如鼠的女生也不犹豫地爬上窗户台，擦了起来。再看看我，我可是有“恐高症”的呀！我蹑手蹑脚地爬，老师走过来对我说：“挺勇敢嘛！小心。”好像老师在鼓舞着我，我的心里一下就有了勇气。
啊！保持卫生真是一件不容易的事呀！让我想起了雷锋的一句名言：一朵鲜花打扮不出美丽的世界，一个人先进总是单枪匹马，众人先进，这样才能移山填海。
雷锋真是我们的好榜样啊！
向雷锋学习范文4
话题还得从这三个老兵中的主要人物，坚持40多年学雷锋、做雷锋、宣传雷锋，今年已经77岁的中国雷锋精神研究会理事李克孝说起。
李克孝产生办流动展览的想法始于2004年。他说：“那天，我参加了关工委的一个活动，在和小学生闲聊时，我随口问了一句，‘你们知道雷锋吗?’一个小朋友很兴奋地举起了手，‘爷爷，我知道我知道，雷锋是香港演员。’”听到这里，李克孝心情很不平静。当晚，平常一夜睡到大天亮的李克孝失眠了，他辗转反侧，终于有了一个主意：我必须为宣传雷锋做点事。
就在这年的3月1日，李克孝迈出了宣传雷锋的第一步，用自己的藏品在嘉兴市秀洲初中举办了第一场“雷锋生平回顾展”。
那天，他起了个大早，叫了辆车，把100多公斤重的藏品运到学校里的指定地点，一一摆开。这次展览，李克孝没向学校收一分钱，“我只提一个要求，每个同学参观完后，回去必须写一份观后感交给老师。”
三年过去了，如今李克孝已在嘉兴及邻近地区无偿办了60多场“雷锋事迹展览”，有5万多人参观。“老夫喜做黄昏颂，满目青山夕照明”，李克孝乐此不疲。
李克孝个人办雷锋事迹展览的事感动了许多人。当兵8年，从部队转业到地方的马水泉得知李克孝期盼有个固定场所摆放学雷锋资料和实物后决定无偿提供展览场地，与李克孝一起共建杭州雷锋事迹展览馆。听到马水泉的这一想法，李克孝喜出望外……
与李克孝、马水泉同时感到振奋的，还有远在辽宁鞍山的当年曾为雷锋拍摄大量照片的摄影家张峻。这些年，张峻在全国举办了84次题为“雷锋精神永恒”的图片展。听说李克孝的“流动展览”后，决定把第85次图片展设在杭州，并将展出照片全部留给杭州雷锋事迹展览馆收藏。
向雷锋学习范文5
关键词:高校公共体育课教师;人格特征;教学风格类型
中图分类号:G804.85文献标识码:A文章编 号:1007-3612(2009)06-0073-04
A Correlation Analysis of the Personality of Public P. E. Teache rs in Colleges and Their Teaching Styles
LIN Liping1, CHEN Zuosong2
(1. Physical Education Department, Putian College, Putian 35110 0, Fujian China; 2. College of Physical Education and Sports Science, Fu jian Normal University, Fuzhou 350007, Fujian China)
Abstract: As the issuing of the New Program and reformation of College P. E. Cur riculum System, the paper tries to find out whether public P. E. teachers' perso nalities are closely related to their teaching styles in their individualized te aching by methods such as literature review, questionnaires and physical statist ics. The result shows that: the personality features of public P. E. teachers ar e correlated to their teaching styles and have influences the formation of theirteaching styles. The individual personalities of personality features of the te achers predict legal teaching style, while the squeamishness of the personalityfeatures predicts legal and global teaching styles.
Key words: public P. E. teachers in colleges; personality; teaching styl es
新《纲要》强调高校体育教师要改变教学理念,树立以学生发展为本的教育观, 充分重视启发和调动学生的主动性、积极性和创造性,关注学生的个体差异,发展学生的个 性,重视学生人格形成的发展规律[1]。这将要求高校体育教学由教学模式化向教 学个性化 转变,形成个性教学,高校体育教师要实现个性教学,必将要对体育教学思想、教学内容、 教学观点、教学作风、教学方法方式、教学技巧等方面进行选择,而这些方面正是教学风格 的具体体现。因此,教学风格是体育教学理论一个不容忽视的课题,它对体育教学效果有着 重要的影响。这不仅表现影响学生的学习风格、学习态度的形成,个性特征的培养,人格素 质的发展,而且对学生的兴趣、情感、合作精神的养成、学习氛围的创建以及学习效率和进 度等方面均有重要的影响[2]。所以,进行高校公共体育课教师教学风格的研究, 对贯彻落实新《纲要》具有现实意义和时代价值。
不同流派的教育理论在研究教师教学风格形成的影响因素中,都认为人格影响着教师教学风 格的形成[3]。然而,高校公共体育课教师的人格特征在教学实践中对其教学风格 的形成产 生怎样的影响;高校公共体育课教师人格特征的不同,其教学风格是否存在差异;人格特征 怎样影响和影响哪种类型的教学风格,影响程度有多大,这些都缺乏实证研究,因此,研究 高校公共体育课教师人格特征与教学风格的关系,为高校公共体育课教师根据自己的人格特 征寻找适合自己的教学风格提供理论依据,为更好地实现个性化教学,提高教学效果。
1 研究对象与方法
1.1 研究对象第一轮调查被试来自福建省福州大学、福建医科大学、福建农林大学、闽江大学、泉州学院 、莆田学院、龙岩学院担任公共体育课的教师,共发放问卷150份,回收145份,回收率96.7 %,有效问卷142份,有效率97.9%。第二轮调查被试是厦门大学、集美大学、华侨大学、 福州大学、福建医科大学、福建农林大学、闽江大学、宁德师专、泉州学院、莆田学院、龙 岩学院、三明学院担任公共体育课的教师,共发放问卷350份,回收315份,回收率90.0%, 有效问卷300份,有效率94.9%。
1.2 研究方法
1.2.1 文献资料法根据研究的目的和内容,围绕个性特征与教学风格的关系问题,查阅并分析了国内外与本课 题相关的论著、书籍、文件和文献资料等。
1.2.2 问卷调查法
1.2.2.1 艾森克人格问卷(EPQ)该问卷是在艾森克人格问卷量表(EPQ)的基础上由北京大学心理学系修订的中国版本量 表,该量表有较高的信度和效度,操作简便,包括4个分量表(各12个项目)48个项目。1)内 外向维度(E):内外向维度高表示人格外向,可能是好交际,喜聚会,随和乐观,喜欢变化,渴 望刺激和冒险,情感易于冲动;分数低表示人格内向,可能是好静,富于内省,除了亲密的朋友 以外,对一般人缄默冷淡,不喜欢刺激,喜欢有秩序的生活方式,情绪比较稳定;2) 神经质 维度(N):反映受试者正常行为表现出的情绪是否倾向于稳定,它反映正常行为,并非病态 。分数高表示可能是焦虑的、担忧的,常常郁郁不乐,忧心忡忡,对刺激反应过于强烈,以至于 出现不理智的行为;3) 精神质维度 (P):精神质又称作倔强,讲求实际,并非暗指精神 病。分数高可能是孤独的,不关心他人的,缺乏情感投入,不近人情,感觉迟钝,好挑衅, 喜欢干奇特的事但不顾危险,难以适应外部的环境,同时也表现独立性、竞争性、创造性能 力强;4) 社会掩饰性(L):反映受试者的掩饰或社会性朴实的倾向。通过第二轮调查结果 ,问卷的内部一致性检验表明,内外向(E)分量表的12个项目折半信度系数=0.651、神经 质(N)分量表的12个项目折半信度系数=0.706、精神质(P) 分量表的12个项目折半信度系数= 0.648。
1.2.2.2 教师教学风格问卷(TSTI)由Grigeorenko & Stern berg 编制的教学风格评价量表(TSTI),该量表是一个教师的自陈 量表,共7个分量表,49个项目,分别评价立法型(4、6、8、15、18、34、49)、执行型 (14、19、28、33、36、42、48)、评判型(10、17、25、32、37、41、43)、整体型(1 、11、24、26、29、30、46)、局部型(2、9、12、13、23、31、45)、激进型(3、7、16 、20、38、39、44)和保守型(5、21、22、27、35、40、47)7种类型教学风格。每个分 量表包括7个项目混合排列,每一项目采用7级评定(从完全适合到不完全适合)记分分别为 1、2、3、4、5、6、7。
通过对预调查数据的分析、处理,经过专家评议,对整理出来的条目加以评价修改,重新修 订一套适合体育教师的教学风格问卷,使之在评价结构和语言陈述上更符合体育教师教学的 特点,量表共47个项目,删除原量表的第29条目和37条目,每一项目采用5级评定(从完全 适合到不完全适合)记分分别为1、2、3、4、5。分别评价立法型(4、6、8、15、18、33、 47)、执行型(14、19、28、32、35、40、46)、评判型(10、17、25、31、39、41)、整 体型(1、11、24、26、29、44)、局部型(2、9、12、13、23、30、43)、激进型(3、7 、16、20、36、37、42)和保守型(5、21、22、27、34、38、45)七种类型教学风格。
利用修订后的量表进行第二轮调查,调查结果的内部一致性信度,克隆巴赫系数分别为:立 法型(Legislative)克隆巴赫系数a=0.655;执行型(Executive)克隆巴赫系数a=0 .828;评判型(Judicial)克隆巴赫系数a=0.701;整体型(Global)克隆巴赫系数a=0 .636;局部型(Local)克隆巴赫系数a=0.660;激进型(Liberal)克隆巴赫系数a=0.7 33;保守型(Conservative)克隆巴赫系数a=0.731。
1.2.3 数理统计法 运用 SPSS11.5作为统计工具对所有调查数据 进行统计分析。
2 结 果
2.1 高校公共体育课教师人格特征的一般情况(表1)高校公共体育课教师人格特征的研究,有助我们了解高校公共体育课教师突出的人格特征, 预测其兴趣爱好、教学风格、未来在教学情境中的表现以及可能存在的弱点,提高高校公共 体育教学的效果以及高校公共体育课教师在学生心目中的威望。表2显示:不同性别高校公 共体育课教师人格特征没有显著的差异;不同学历的高校公共体育课教师人格特征之间不存 在显著差异;不同职称的高校公共体育课教师人格特征在精神质和内外倾方面没有存在显著 的差异,但在神经质方面存在明显的差异;不同教龄的高校公共体育课教师人格特征没有显 著的差异。但在进一步进行组间比较时发现,教龄在15 a以上的高校公共体育课教师与高职 称的高校公共体育课教师人格特征在精神质维度上得分最高;教龄在5～15 a的教师更外向 ;教龄在5 a以下的教师神经质维度上得分最高。
2.2 高校公共体育课教师教学风格的一般情况(表2)为了分析高校公共体育课教师教学风格的人口统计学特征,从表1我们可以发现:不同性别 的高校公共体育课教师教学风格类型在执行型、评判型两种类型上存在显著的差异(P< 0.05),男教师更倾向于执行型教学风格和评判型教学风格。
表2还显示:不同学历、不同职称、不同教龄的高校公共体育课教师教学风格类型都不存在 显著的差异,但初级职称的高校公共体育课教师教学风格在立法型、评判型、局部型和激进 型四种风格上的得分高于中级和高级职称的教师;中级职称的高校公共体育课教师教学风格 类型在执行型、整体型和保守型三种风格上的得分高于初级和高级职称的教师;高级职称 的高校公共体育课教师教学风格类型在执行型、评判型和局部型三种类型上得分最低。然而 ,相对于教龄较短的高校公共体育课教师,教龄在15 a以上的老教师教学风格类型更倾向于 立法型和保守型两种;教龄在5～15 a的教师教学风格类型在激进型的得分最低。
2.3 高校公共体育课教师的人格特征与教学风格类型的关系(表3)为了检验高校公共体育课教师人格特征对教学风格的关系,本研究应用多元线性回归分 别对人格特征的3个维度与教学风格的7个维度进行相关分析,并在此基础上进行讨论。
2.3.1 高校公共体育课教师的人格特征与教学风格类型的相关分析本研究探索高校公共体育课教师的人格特征对教学风格是否存在关系,结果发现:高校公共 体育课教师人格特征的两个维度精神质和神经质与教学风格的立法型、执行型和整体型存在 显著的相关关系;精神质与立法型教学风格存在显著的正相关关系,与执行型教学风格存在 负相关;神经质与立法型教学风格存在负相关,与整体型教学风格存在正相关,内外 倾与任 何一种教学风格类型的相关都不显著。然而进一步对高校公共体育课教师人格特征的3个维 度和教学风格的7个维度之间进行分析,结果发现:高校公共体育课教师人格特征的内外倾 与神经质之间存在正相关;立法型教学风格除了与执行型教学风格相关不显著外,与其他5 种类型都存在显著相关;执行型教学风格与评判型、整体型、局部型和保守型教学风格存在 相关;评判型、整体型、局部型、保守型与其他6种教学风格类型都存在显著相关;激进型 与执行型教学风格相关不显著之外,与其他5种类型都存在显著相关。
2.3.2 高校公共体育课教师的人格特征与教学风格类型的回归分析本研究采用逐步回归分析高校公共体育课教师的人格特征对教学风格的类型是否有显著的预 测效应。以人格特征的3个维度为自变量,以教学风格类型的7个维度为因变量,通过逐步回 归法来分析人格特征对教学风格类型是否有预测性贡献。
高校公共体育课教师人格特征的精神质分别进入立法型教学风格、执行型教学风格的回归方 程,而且具有预测效应,但精神质对立法型教学风格的预测方向是正向外,对执行型教学风 格的预测方向是负向的。高校公共体育课教师人格特征的内外倾没有进入回归方程,对教学 风格类型没有预测效应。高校公共体育课教师人格特征的神经质分别进入立法型教学风格、 整体型教学风格的回归方程,且有的预测效应,然而却是负向的(表4)。
3 讨 论
从影响体育教师教学风格形成的因素分析,有关学者的研究只是宏观地进行论述,缺乏考虑 体育教师工作的特殊性和体育教师人格特征等问题进行实质性研究。体育教师的教学风格与 其个性是分不开的,高校公共体育课教师的个性特征是其教学风格形成的基础,体育教师的 个性特征作为一种潜在的教育资源在教学风格中具有重要的意义[4]。关于这点, 从教学风 格理论研究中我们也可以总结出:体育教师的个性特征与教学风格是紧密联系的。本研究旨 在探索高校公共课体育课教师在新《纲要》的颁布及高校体育课程目标体系改革的情况下, 要实现个性化教学,其个性与教学风格是否存在紧密联系。结果发现高校公共体育课教师的 人格特征与教学风格的类型存在相关关系,人格特征的两个维度精神质和神经质与教学风格 的立法型(对教材的使用不特别要求,教学内容培养学生自我解决发现、自我分析和自我解 决问题的能力,教学步骤一般由学生自己设计合理的身体练习,教学的方法能激励学生发挥 自己的创造力,课堂气氛活跃)、执行型(对教材的使用一般由学校或上级教育行政部门选 定的课本,教学内容与步骤严格遵照教学手册的说明,采用指定的教学方法,课堂严谨有序 )和整体型(对教材的使用不特别要求,教学内容既要传授动作技能及其细节,也要讲授知 识、原理,重点是讲授可以用于分析不同问题的方法,教学步骤尽可能地将所学的知识和技 能加以联系,教学的方法能提供给学生系统的思维方法,课堂有序)存在显著的相关关系。 精神质与立法型教学风格存在显著的正相关关系,与执行型教学风格存在负相关;神经质与 立法型教学风格存在负相关,与整体型教学风格存在正相关;内外倾与任何一种教学风格类 型的相关都不显著。然而进一步对高校公共体育课教师人格特征的3个维度和教学风格的7个 维度之间进行分析,结果发现:高校公共体育课教师人格特征的内外倾与神经质之间存在正 相关,立法型教学风格除了与执行型教学风格相关不显著外,与其他5种类型都存在显著相 关,执行型教学风格与评判型(对教材的使用一般根据学生的学习反馈选取课本,教学步骤 和内容根据学生学习进展状况调整,在教师互相听课和评估彼此的教学状况中不断改进教学 的方法)、整体型、局部型(对教材的使用不特别要求,教学内容重点在解释具体问题的细 节操作上,尽可能地将所学的知识和技能加以联系,布置一些对学生具有挑战性的动作技能 ,课堂有序)和保守型(对教材的使用一般由学校或上级教育行政部门选定的课本,教学步 骤和内容几乎相同,采用传统的教学方法,课堂严谨有序)教学风格存在相关;评判型、整 体型、局部型、保守型与其他6种教学风格类型都存在显著相关;激进型(使用最新教学成 果的课本,教学步骤和内容新颖、独创,提出问题,并给学生提供解决问题的机会,课堂气 氛活跃,教师起引导作用)与执行型教学风格相关不显著外,与其他5种类型都存在显著相 关。这进一步证明了影响教学风格形成的因素是很复杂的,除了个性特征对教学风格类型的 形成有决定作用外,还有其他主客观因素。一个人有怎样的人格特征,在教学实践中有可能 形成相应的教学风格,但教学风格没有好坏之分,尽管教师的个性不同,教学风格也不一样 ,高校公共体育教师在不同时期的教学目标、教学任务,面对不同的教学对象,其教学风格 有利也有弊,我们很难说哪一种类型的教学风格好,只要学生欢迎,能取得好的教学效果, 这种教学风格就值得肯定。
进一步的多元回归分析发现,高校公共体育课教师的人格特征在其教学风格类型的形成过程 中有一定的作用。高校公共体育课教师人格特征的精神质分别进入立法型教学风格、执行型 教学风格的回归方程,而且具有预测效应,但精神质对立法型教学风格的预测方向是正向外 ,对执行型教学风格的预测方向是负向的。高校公共体育课教师人格特征的神经质分别进入 立法型教学风格、整体型教学风格的回归方程,且有预测效应,然而却是负向的。而高校 公共体育课教师人格特征的内外倾没有进入任何一个回归方程,对教学风格类型没有预测效 应。这也进一步表明高校公共体育课教师的人格特征与教学风格的关系可能较为复杂。所以 从预测的结果分析,高校公共体育课教师的精神质人格特征对立法型教学风格具有预测作用 ,可以解释立法型教学风格的2.8%变异,其预测力相对较弱;低精神质人格特征的体育教师 更容易形成执行型教学风格,低神经质人格特征的高校公共体育课教师更易形成立法型和整 体型教学风格。
参考文献:
[1] 教育部文件.全国普通高等学校体育课程教学指导纲要[C],2002,8.
[2] 李如密.教学艺术论[M].济南:山东教育出版社,1995:397-426.
[3] 刘民.教师的个性特征在体育素质教育中的价值[J].河北师范大学学报(自然科学 版)2003,27(5):538-540.
向雷锋学习范文6
【摘要】 目的 观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法 行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵低剂量组：50 mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：200 mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达。结果 通痹灵高、低剂量组VEGF mRNA表达较对照组明显降低(P＜0.05)。结论 通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGF mRNA表达水平，从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。
【关键词】 通痹灵；类风湿关节炎；滑膜细胞；血管内皮生长因子
Abstract：Objective To study effect of Tongbiling (TBL) on VEGF mRNA expression in RA synovlcytes cultured in vitro and explore its mechanism. Method Synovial cells from the knee joint in patient with RA were digested， pided and separately cultured after arthroscopy. Blank controls：DMEM culture containing 10% FBS in saline；Low-dose admission group of TBL：DMEM culture containing 10% FBS in 50 mg/L TBL；High-dose admission of TBL：DMEM culture containing 10% FBS in 200 mg/L TBL. RNA were distilled. Expression of VEGF mRNA were detected with RT-PCR. Result Compared with control group， expression of VEGF mRNA in low and high-dose admission groups of TBL both decreased (P
Key words：Tongbiling；rheumatoid arthritis；synovial cell；vascular endothelial growth factor
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是以损害全身多关节特别是四肢小关节为主的慢性自身免疫性疾病，主要表现为慢性、对称性、进行性多关节炎，其典型的病理特征为炎症滑膜增生、单核细胞浸润和新生血管形成。关节滑膜的慢性炎症、增生，形成血管翳，侵犯关节，最终导致关节畸形和功能丧失。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是最有力的血管生成因子，在RA病理过程中起着关键作用[1-2]。本实验就其对体外培养RA患者膝关节滑膜细胞VEGF基因水平的影响进行研究，进一步明确通痹灵对血管新生的影响。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
通痹灵浸膏(由桂枝、芍药、知母、生姜、甘草、麻黄等10味中药组成，广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取，每克浸膏相当于原药材3.45 g)，DMEM(美国GIBCO公司生产)。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，杭州四季青公司生产)，胶原酶、胰蛋白酶、焦碳酸二乙酯(diethylpyrc arbonate，DEPC，美国GIBCO公司生产)，PCR marker(北京鼎国生物技术发展中心)，RT-PCR通用试剂盒及β-Actin引物(大连宝生物工程有限公司)，Primer软件设计及VEGF基因扩增引物(赛百胜公司)。CO2恒温培养箱(德国HERAEUS公司生产)，倒置相差显微镜、荧光显微镜(日本OLYMPUS公司生产)，超净工作台(苏州净化设备厂生产)，核酸蛋白成像仪(Pharmacia公司)，核酸蛋白分析仪(Beckman公司)，电泳仪及水平电泳槽(美国Bio-Rad公司)，PCR仪(美国PERKIN EIMER公司)，低温高速离心机(SIGMA公司)，常温低速离心机(北京医用离心机厂)，分光光度计(Beckman公司)，电转仪(美国Bio-Rad公司)。
1.2 类风湿关节炎患者滑膜细胞的分离提取及培养
RA患者肿胀的膝关节行关节腔镜手术取滑膜组织。将所取标本倒入玻璃皿中，用Hanks液洗涤3次，用眼科剪反复剪碎组织约2～3 mm2大小，加入含10%胎牛血清的DMEM和0.2%胶原酶(终浓度为0.2%)，移入75 cm2培养瓶中，37 ℃、5%CO2培养箱中消化10 min；反复吹打后移入离心管，1 000 r/min离心10 min；弃去上清液，加入2 mL含10%胎牛血清的DMEM吹打终止消化；用200目钢网过滤后1 000 r/min离心10 min，去上清液，加入含10%的DMEM 2 mL吹打均匀，移入75 cm2培养瓶中于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，观察细胞生长情况。生长3 d后细胞生长良好，长满培养瓶，消化分瓶，定时观察换液，长到一定数量后冻存部分细胞保证以后备用，剩余部分维持培养，取7～10代用于实验，每瓶待细胞长至约0.8×107时施加作用因素。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵低剂量组：1.5 μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：150 μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。待施加因素后培养72 h，细胞生长至107时进行裂解细胞提取总RNA。
1.3 总RNA提取
取培养的滑膜细胞消化离心，用PBS洗涤3次，加入0.8 mL RNAsol完全裂解细胞，转移裂解液至1.5 mL EP管中，加入80 μL氯仿，水平震动10 s，冰浴5 min，40 ℃低温离心机10 000 r/min离心20 min，吸取上清液移至另一EP管中，加入等量异丙醇完全混合后冰浴20 min，40 ℃低温离心机10 000 r/min离心20 min，去上清液，用1 mL 75%乙醇洗涤沉淀物，小心倒去乙醇，自然风干10～15 min，加入适量DEPC H2O溶解。
1.4 RNA样品鉴定
①电泳：取RNA样品5 μL，用1%琼脂糖凝胶电泳可见3条电泳带(见图1)；②吸取5 μL入核酸和蛋白分析仪的吸光度测量管，测λ＝260 nm吸光度(管中另加DEPC H2O补至1 mL，等于稀释200倍)。取2 μL做反转录反应。
1.5 反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)
反应利用PCR扩增仪进行。①RT反应合成cDNA：取5 μL总RNA加热70 ℃ 5 min，以破坏其二级结构；在20 μL反转录反应体系中进行，1 μL AMV反转录酶、2 μL总RNA、2 μL dNTP、4 μL MgCl2、2 μL 10-RT Buffer、7.5 μL DEPC H2O、0.5 μL RNase Inhibbtor、1 μL Random 9 mers；30 ℃反应10 min，40 ℃反应30 min，99 ℃变性5 min，5 ℃ 5 min。②PCR反应：在50 μL反转录反应体系中进行，8 μL cDNA、1 μL VEGF引物(正、反向引物各0.5 μL)、0.25 μL TakaRa Ex TaqHs、10 μL 5×PCR Buffer、28.75 μL DEPC H2O、2 μL β-Actin；VEGF引物：上游引物5’-GTG CGA GCA GCG AAA GCG C-3’，下游引物3’-CGA CAA GAG CGA AGC CGA A-5’；β-actin：上游引物5’- GAG GGA AAT CGT GCG TGA C-3’，下游引物5’-CTG GAA GGT GGA CAG TGA G-3’，94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s， 35个循环；72 ℃延伸3 min，4 ℃保存。
1.6 DNA琼脂糖凝胶电泳
配制1%琼脂糖凝胶，内含0.5 μg/mL的溴化乙锭，电压设定为100 V；加入10 μL靶基因与2 μL DNA Buffer混合液上样进行电泳40 min。
1.7 电泳条带测定及成像
电泳条带用凝胶成像系统拍照并进行电泳条带光密度分析，以VEGF标本靶基因条带光密度参数与内参基因(β-Actin)条带的光密度参数之比值作为该标本VEGF mRNA的表达水平参数。
1.8 统计学方法
采用SPSS11.0 for Window统计软件进行方差分析。
2 结果
2.1 反转录多聚酶链式反应结果
我们设计的VEGF引物可以检测到的主要是VEGF165，结果表明该细胞系表达的以VEGF165为主，经RT-PCR扩增后的VEGF165为528 bp，经电泳检测，VEGF条带清晰可见，β-actin为759 bp，其条带清晰可见，无杂带出现(见图2)。
2.2 半定量结果
电泳图像分析扫描仪扫描电泳条带得到VEGF与β-Actin条带各自的峰面积积分值，计算各样品的VEGF与β-Actin的比值。结果见表1。表1 通痹灵作用于RA滑膜细胞后VEGF mRNA的表达(略)
3 讨论
近年来的研究表明，VEGF在RA病理过程中起着关键作用，尤其在RA早期滑膜血管翳形成过程中，VEGF通过与其受体结合发挥生物学作用[3]，可增加血管通透性，提高炎性渗透，促进内皮细胞生长、迁移和新生血管形成[4]。RA的滑膜和滑膜液中富含VEGF，滑膜及滑膜液的VEGF表达有助于血管的渗透和血管新生[5]。
前期的大量研究已经证实，通痹灵对多种细胞因子有明显的干预作用，其中对CIA大鼠滑膜VEGF有明显抑制作用[6]。本实验应用通痹灵作用于体外培养的RA滑膜细胞，结果显示，其高、低剂量组对VEGF mRNA的表达较空白对照组均明显降低(P＜0.05)，表明通痹灵可抑制VEGF mRNA表达。结合前期实验研究结果可以看出，通痹灵在VEGF蛋白及基因表达两个水平均可起到下调作用，但究竟是二者同时抑制还是通过抑制基因表达从而阻断翻译过程的进行，或者通过阻抑其他调节VEGF表达的因子而起到作用尚不得而知，仍需进一步研究。然而，该药物临床上治疗RA疗效明显，能够在多个环节、多个靶点起到调节作用。本实验旨在探讨通痹灵在血管内皮细胞有丝分裂增殖、血管新生和血管翳形成等机制中所表现的作用，推测通过抑制VEGF及其基因表达减少、滑膜新生血管的形成，乃至骨质侵蚀破坏、血管通透性增高、炎性物质外渗等一系列病理环节中起到阻抑作用可能是其作用机制之一。
参考文献
[1] T Pufe， W Petersen， B Tillmann， et al. Splice variants VEGF121 and VEGF165 of the angiogenic peptide vascular endothelial cell growth factor are expressed in the synovial tissue of patients with rheumatoid arthritis[J]. J Rheumatol，2001，28(7)：1482－1485.
[2] M Harada， K Mitsuyama， H Yoshid， et al. Vascular endothelial growth factor in patients with rheumatoid arthritis[J]. Scand J Rheumatol，1998，27(5)：377－380.
[3] Zeng H， Dvorak HF， Mukhopadhyay D. Vascular permeability factor(VPF)/vascular endothelial growth factor(VEGF) receptor-1 down-modulates VPF/VEGF receptor-2-mediated endothelial cell proliferation， but not migration， through phosphatidylinositol 3-kinase-dependent pathways[J]. J Biol Chem，2001，276：26969－26979.
[4] Senger DR， Gaci SS， Dvorak AM， et al. Tumour cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid[J]. Science，1983，219：983－985.
