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救火事迹材料范文1
【关键词】 组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)；包被Dacron；PTEE；表面血小板
近年来的很多研究表明［Lin TL，Lu FM，Sheu MS. Antimicrobial coatings: A remedy for medical device-related infections. Med Dev Tech，2001］，在由生物材料引发的感染（biomaterial centered infection，BCI）中，45%的原因是因为生物材料与人体接触时，血液和组织中的纤维粘连蛋白（fibronectin）、玻璃粘连蛋白（vitronectin）和纤维蛋白原（fibrinogen）会吸附在材料表面，形成一层蛋白膜，而细菌很容易在这层蛋白膜上黏附，继而生长繁殖，逐渐形成一层顽固的水合多聚糖性质的生物活性膜（biofilm）［1］。这层生物膜可以吸收营养物质，具有一定厚度，产生很强的抗药能力，传统的抗菌治疗是无法根除的。根据细菌性感染的机理，本文就t-PA对生物材料表面血小板黏附的作用及影响进行初步探讨。
1 实验材料与方法
1.1 材料和仪器 涤纶（Dacron）B型（苏州华明织带有限公司），膨体聚四氟乙烯（PTEE，美国Gore&Associates公司）。谷胱苷肽硫基转移酶（Glutathione-S-trasferase，GST）和GST-t-PA融合蛋白由实验室制备，液体培养基（法国生物梅里埃公司）。
1.2 材料的包被 将Dacron和PTEE薄膜剪裁成96孔酶标板等大的原片，用蒸馏水充分漂洗干净后在70%的酒精中浸泡30min，无菌条件下取出、晾干，置入96孔板中，每种材料分成3组，每孔分别加入100μl含0.5mg/ml GST-t-PA的Tris-HCl缓冲液（pH8.0）或含0.5mg/ml GST的Tris-HCl缓冲液或单纯的Tris-HCl缓冲液，4℃放置过夜，弃去上清液，用Tris-HCl缓冲液（50mM Tris-HCl，pH8.0/120mM NaCl）轻轻漂洗两次移入新的96孔板孔中备用。
1.3 材料植入动物模型的制作 2.5～3.0kg雄性新西兰大耳白兔72只（武汉大学医学院动物实验中心），随机分为3组(各组24只)：空白对照组，GST蛋白组和GST-t-PA蛋白组，每组又分为两组，D组（放置Dacron片）和PEET组(放置PEET片)。
动物称重后，2%戊巴比妥钠（35mg/kg）耳缘静脉麻醉动物，备皮消毒后沿股动脉走向切开皮肤，分离出两侧的股动脉和股静脉，结扎股动脉的侧枝循环，经股静脉注射肝素(10U/kg体重)，5min后从两端夹闭股动脉，其间间隔不小于6cm，用眼科剪剪开0.3cm左右的纵口，用生理盐水将血管内的血液冲洗干净，然后放入经GST蛋白或GST-t-PA蛋白包被处理的两种涤纶材料膜片，空白组进行手术后血管缝合，不予以任何处理。用3-0聚丙烯线缝合血管，移去动脉夹使血流再通，密切观察手术处股动脉搏动情况。麻醉恢复后，正常饲养。于术后第2天，每组随机选8只行血小板沉积实验。
1.4 血小板在材料表面黏附的观察（体外实验） 取空白组新鲜兔动脉血，按9∶1的比例与3.8%的枸橼酸钠溶液混匀，离心分离富含血小板的血浆，用PBS将血小板数目调节至106/ml，取150μl加到上述处理的材料表面然后于37℃放置30min，弃取血浆，用PBS将材料膜片轻轻漂洗3遍后用2.5%的戊二醛固定2h，经冷冻干燥后进行扫描电镜观察。随机选取6个视野进行血小板计数。
1.5 对机体内血小板黏附的观察（在体实验） 在植入物后2天，各组8只动物按前述方法麻醉，常规分离提取血小板，于血小板悬液内逐渐滴加Cr51铬酸钠溶液18.5MBq（0.5mCi）。将51Cr标记的血小板悬液2ml经股静脉注入体内，1h后取出移植材料，用PBS轻轻冲洗，并置于γ记数井中记数，同时抽取全血标本确定以确定游离和细胞51Cr活性，测定血小板计数和凝血酶原时间(PT)。
2 结果
2.1 血小板在材料表面黏附的观察（体外实验） 结果显示，用t-PA重组蛋白及GST蛋白处理医用Dacron及PEEP片，可明显抑制血小板在其表面的粘附，对Dacron片，用GST包被使其表面的血小板数目比对照组减少了大约42.3%(P＜0.01)；而TFPI重组蛋白处理组的血小板粘附数目减少更为明显，与对照组相比减少了大约76.4%(P＜0.01)。在聚氯乙烯材料的实验中，也得到了类似的结果，其中GST处理的材料表面的血小板数目比对照组减少了大约34.1%(P＜0.05)；TFPI重组蛋白比对照组则减少了大约74.8% (P＜0.01)。在两种材料的实验中GST组与TFPI重组蛋白组之间相比都有明显的差异(P＜0.05) (见图1)。
2.2 在体实验中机体内血小板沉积的影响 在体实验研究表明，Dacron组中，GST-tPA组血管血小板沉积明显少于GST组和空白对照组载体组和空白对照组，（P＜0.05）；PEEP组也得出相同的结论。见表1。
1 Conarweron JW，Stewart PS，Greenberg EP. Bacterial biofilms. A common cause of persistent infections. Science，1999，284：5418.
2 Tang L，Sheng Y. The mechanism of device－centered infection. Thans Soc Biomater ，1998，24：7.
3 Lijuen HR，Collen D.Strategies for the improvement of thrombolytic sgents.Throb Haemost，1991，66:88-110.
4 Collen D，Lijnen HR. Thrombolytic agents. Thromb haemost，2005，93(4):627-630.