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太阳底下范文1
羽绒服不可以放在太阳底下暴晒,因为羽绒服属于锦纶织物,很怕阳光暴晒,如果将羽绒服长时间放在阳光下暴晒,会使锦纶面料纤维老化。羽绒服应该放置在干燥通风处晾晒,在晾干后轻轻拍打羽绒纠集处,令羽绒完全舒展。
羽绒服不能放入洗衣机内清洗,应该手洗,或者是干洗,有的羽绒服不可以干洗,在清洗羽绒服之前,应该先观察羽绒服标签上的说明。90%的羽绒服标明要手洗,不能干洗,因为干洗用的药水会影响保暖性,也会使布料老化。如果用洗衣机清洗的话,羽绒服会变形,导致薄厚不均,不仅影响美观,还影响保暖性。
清洗完羽绒服之后,可以用洗衣机甩一下,不要甩太长时间,将羽绒服的水分拧干就可以,不需全部将水分甩干。羽绒服多采用化学纤维和混纺纤维等作面料,耐热性比较差,长时间处于高温下会加速老化,并且经过阳光暴晒后,容易褪色,甚至可能分解出有害化学物质。
羽绒服放置在通风处晾晒即可,不需要接触太强烈的阳光,羽绒服被晾干后,应该整理下羽绒服不均匀的地方,然后将羽绒服挂置在衣柜里。
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太阳底下范文2
有人说儿童是一本书虽然要读懂这本书并非易事,但要成为一位出色的教师就必须去读它,并且打算读一辈子。有人说,儿童是花木,教师是园丁,园丁悉心照料着花木,但需要尊重它们自然地成长。实际上,儿童比花木要复杂的多,教师的工作比园丁的工作也复杂的多,尽管他们拥有着共同或共通的规律。
当我真正走上工作岗位时,我发现,我不是学者,不能用深遂的思想思考我的价值;我也不是诗人,不能用优美的诗句讴歌我的职业。但是我是教师,一名从事教育事业的工作者,我可以深深思索推演心中最奥秘的哲理;我也可以采撷如花的词句,构筑心中最美好的诗篇 我爱我平凡的事业,我愿青春在这片热土中闪光!雨果曾说过: 花的事业是尊贵的,果实的事业是甜美的,让我们做叶的事业吧,因为叶的事业是平凡而谦逊的。 当我每次面对孩子们时,我感到神圣与自豪,因为我从事着绿叶的事业,我是人民教师!
然而,社会的发展和人性本身的弱点使我的物欲不断膨胀。不断膨胀的物欲必然带来心理的不平衡,必然带来精神的空虚,物质和精神的落差迫使我不得不承受痛苦的折磨,而且是长期的,挥之不去的。我为自己在黑夜的漫漫无际中看不见一丝阳光而苦恼,我为自己无心再单纯地对待每一张渴望知识的脸庞而羞愧。当我看到仍然有数不尽的教师们无怨无悔,像春蚕、像蜡烛,用自己的青春和生命来捍卫这个职业的圣洁时,我如梦初醒。他们用自己的行动,用自己生命的痕迹激励着我们这些后来人,这些同行们,让我们由不情愿到情愿,由情愿到全身心地热爱这个工作。因为,生命的意义远不止于功利。 人吃饭是为了活着,但活着绝不是为了吃饭 。生活中许多微小中藏有博大,短暂中孕育永恒。
路在脚下延伸,而我刚刚起步!路在脚下延伸,而我就在铺路!不管漫长的路上荆棘丛生或是布满沼泽,我都一如既往,绝不退缩。多年的风风雨雨酸甜苦辣,为人师者的种种滋味尝遍过后,我愈来愈感觉到,自己离不开这个职业,这个职业也需要我。古代大教育家孔子呕心沥血,以教为重的精神教育着我;现代伟大教育家陶行知先生从教几十年,始终安于 粉笔生涯 的献身精神、鞠躬尽瘁的高尚情怀激励着我,增强了我热爱教育事业的信念。我爱我平凡而又神圣的职业。我愿作红烛,我甘为人梯,我愿在这个工作岗位上,默默无闻,辛勤耕坛。古人云: 一年之计,莫如树谷:十年之计,莫如树林;终身之计,莫如树人 ,塑造灵魂这一神圣的使命是金钱所无法衡量的,我庆幸命运赐给了我这个职业。
假如有人问:在人生的道路上,如果能再有一次机会,让你重新选择,你会选择什么职业?我一定会响亮地回答:教师 这个阳光底下最光辉的职业。因为这是我今生今世无悔无怨的选择!虽然我们很清贫,但是我们也是最富有的,因为,我们是春天播撒种子的人,我们心中有着秋收的期盼;我们也是清晨的一缕阳光,我们有着勇往无惧的精神,是任何乌云也挡不住的;我们还是夜空中的启明星,我们有着奔向光明的执着!我自豪,我是教师!我光荣,我是人民的教师!
太阳底下范文3
2、泰迪根据体型分为标准型、迷你型和玩具型。
3、一个月大小的泰迪,用温水把狗粮泡开、泡软喂食。
4、辅食可以使用婴儿的米粉,使营养更全面。
太阳底下范文4
关键词:太阳能烟囱;供暖;全新风系统;通风量
中图分类号:X83文献标识码:A文章编号:16749944(2016)02011104
1引言
太阳能烟囱依靠太阳辐射增加烟囱内部空气温度,使得烟囱内外产生温度差形成浮力,从而形成烟囱内空气的流动,利用“烟囱效应”来强化室内自然通风,改善建筑内热湿环境,提高室内空气品质。太阳能烟囱不消耗常规能源,不需要额外的动力装置,仅利用可再生能源―太阳能,具有降低建筑采暖通风与空调能耗,改善室内空气品质及能源资源可再生等优点,在绿色建筑和生态建筑的发展推广中有良好的应用前景\[1,2\]。
在太阳能烟囱应用中,可根据室外太阳能辐射强度及室外空气参数开闭不同的风阀,从而实现通风降温、供暖等不同功能[3]。目前国内外学者对太阳能烟囱的研究主要集中在分析太阳能烟囱几何结构和倾斜角度对其通风降温性能的影响。2003年,王丽萍[4]利用实验模拟分析了trombe墙体式太阳能烟囱的特性。2005年,杨卫波等人[5]对太阳能通风墙进行模拟,发现空气夹层厚度的盲目增大及风速的增加会降低其通风性能。2006年,陈会娟、陈滨等[6]借助计算程序采用一维热网络模型对特朗贝墙体的集热性能进行了分析计算。1994年,A.Bouchair[8]研究了利用太阳能烟囱促进被动式通风的方式,发现存在一个可以获得最大通风量的最佳太阳能烟囱高宽比,如果烟囱宽度过大,在通道中心将会存在空气回流。2014年,Leng Pau Chung等人[10]利用CFD软件对太阳能烟囱在湿热环境下的通风进行了模拟研究,得出:一个36 m3 的房间,烟囱深度可在0.6~1.0 m,烟囱高度可在1.5~2.0 m,室内空气流速为0.04~0.223 m/s。现有文献对太阳能烟囱在冬季工况下的运行模式进行研究的文献较少。2013年,王汉青、郭娟等[7]对Trombe墙式太阳能强化自然通风方式在冬季工况下白天的运行模式进行了模拟研究。2014年,A.P. Haghighi等人[9]对太阳能烟囱在温带地区的通风与供热进行了模拟研究,研究尺寸为4 m×4 m×3.125 m的房间,其烟囱高3.125 m、宽4 m、深0.2 m,得出:室外温度为5 ℃,太阳辐射强度为215 W/m2时,还能满足室内的供热需求。只要设计合理的烟囱,就可达到室内热舒适性的需求。研究不同结构参数的太阳能烟囱在一定太阳辐射强度下对应的冬季采暖对降低建筑采暖能耗具有一定的实际价值。
夏热冬冷地区最冷月平均温度为0~10 ℃,处在我国太阳能资源一般区,太阳辐照量为4 200~5 400 MJ/(m2・年)。武汉素有“三大火炉”之称,夏热冬冷的气候特点最为典型,一年中,1月平均气温最低,为3 ℃;7月平均气温最高,为29.3 ℃[11]。此地区不属于采暖区域,若太阳能烟囱可用于供暖,可降低建筑采暖能耗。本文介绍了太阳能烟囱通风降温和采暖运行模式,着重分析计算了太阳能烟囱在夏热冬冷地区采暖的运行性能,并对其可行性进行了探讨。
2太阳能烟囱工作原理及流程
2.1结构
太阳能烟囱在建筑中的应用如图1所示,建筑南墙设有Trombe墙,太阳能烟囱主要由透明玻璃板和Trombe墙组成烟道,透明玻璃板上下分别设有阀门1和2,Trombe墙烟囱通道侧表面设有吸热材料,另一侧表面设有绝热材料,墙体上下分别设有阀门3和4。实际应用中,可根据室外气象参数启闭对应的风阀,从而实现太阳能烟囱不同的运行模式。
2.2流程及特点
2.2.1夏季工作流程
(1) 在清晨、傍晚,室内温度高于室外温度,关闭阀门2、3,打开阀门1、4,实现室内通风降温,室内热空气进入空气通道被加热后排出,可以改善室内空气质量,增加室内的换气次数,除去室内的一部分冷负荷。
图1太阳能烟囱结构示意
(2) 在白天,室内温度低于室外温度,关闭阀门3、4,开启阀门1、2,阻止室外热量向室内的传递。
(3) 在深夜,室内温度高于室外温度,集热墙已经没有热量可以利用时,开启所有风口,此时通风墙进行热压和风压下的自然通风,室外空气通过下侧的两个风口进入室内,室内空气通过上侧的两个风口排到室外。过渡季节,也可以采用这种运行方式,全天开启风口,排除室内余热并进行通风换气。
22.2.2冬季工作流程
(1) 室内空气循环系统。冬季,关闭阀门1、2,打开阀门3、4,利用太阳能加热烟囱内的空气,将热空气送入室内,将此通风模式定义为室内空气循环系统。空气通道里的空气加热后在浮力作用下上升,从集热墙的上风口进入室内,向房间提供热空气,同时,房间的冷空气进入空气通道进行补风,室内空气是一个内循环过程,没有新风的补充。在冬季清晨、傍晚,室内温度高于室外温度时,采用这种运行方式,防止室外冷空气侵入室内,室内空气吸收太阳能,只进行内循环。
(2) 全新风系统。当室外空气温度不是很低时,也可以关闭阀门1、4,打开阀门2、3,将室外新鲜空气通过烟囱加热送入室内,将该通风系统称之为全新风系统。在这种方式下,室外冷空气进入空气通道后,被加热上升从集热墙的上风口进入室内,向房间提供热空气的同时还对房间进行了新风的补充。在冬季白天,室内温度低于室外温度时,采用全新风运行模式,室外空气吸收太阳能后进入室内,将室外热量及集热墙吸收的太阳能代入室内,并进行通风换气,补充新风。
3太阳能烟囱通风量计算
3.1烟囱通风量计算公式
以全新风系统为例,根据质量守恒定律,太阳能烟囱诱导的空气质量流量为[12]:
式中G为质量流量,kg /s;Cd为流量系数,在此模型中取Cd=0.57[13];Ρ0 为出口空气密度,kg/m3;A0为出口面积,m2;g为重力加速度,m/s2;L为太阳能烟囱高度,m;T0为出口的空气温度,K;Ta为室外空气温度,K;Ar为出口面积与进口面积之比。单位面积吸热板的能量平衡方程\[14\]:
式中α为吸热板的吸收率,取α= 0.95;τ为玻璃的透射系数,取τ= 0.85;S(t) 为太阳辐射强度,W/m2;hf为吸热板与流道中空气之间的换热系数,W/(m2・K);Tp为吸热板温度,K;Tfp为流道中空气的平均温度,K;UL为吸热板与周围环境之间的热损失系数,W/( m2・K);Ta为室外空气温度,K。
式(2)中参数的取值计算方法参见文献\[14\]。假设沿太阳能烟囱空气流动方向为X轴,由于太阳能烟囱通道中空气夹层的厚度很薄,通常在0.1~0.3 m之间变化\[15\],为此计算中忽略烟囱深度,将太阳能烟囱视为二维平面,计算中只考虑烟囱高度方向和宽度方向。则太阳能烟囱通道X方向上微元长度中空气的能量平衡方程表示为:
比较式(11)、(12),当Ta=Tr时,式(11)和式(12)完全相同。所以,当室内外温度相同时,全新风系统和室内空气循环系统的通风量一样。当Tr>Ta时,室内空气循环系统的通风量小于全新风系统的通风量。反之,全新气系统的通风量大于室内空气循环系统的通风量。从式(11)、(12)中可以看出,太阳能烟囱的通风量受太阳辐射强度、烟囱高度、烟囱宽度及室内外温度等参数影响。
3.2计算结果及分析
武汉冬季室外平均风速为3.7m/s,太阳辐射强度最高为447 W/m2[11] 。计算中,α=0.95,τ = 0.85\[14\],Ai=Ao=0.1 m2,烟囱高度为1~4 m,烟囱宽度为1~4 m[9],太阳辐射强度为200~400 W/m2,计算得在不同工况下太阳能烟囱的通风量,计算结果如图2~图6所示。
从图2、图3和图4可以看出,通风量随太阳能烟囱高度、烟囱宽度以及太阳辐射强度的增加而增加。这主要是由于高度的增加导致集热面积增大,从而可吸收更多的太阳辐射能,以此来加热夹层空气,驱动其流动。因此,与建筑屋面配合,适当增加太阳能烟囱长度将会达到更好的通风效果。
研究得,在Ta=Tr的情况下,全新风系统与室内空气循环系统的通风量相同。武汉地区房间不供暖情况下,室外温度为-3 ℃时,室内温度为0 ℃\[15\] ,得出图5、6。从图5可以看出,室内温度高于室外温度时,室内空气循环系统的通风量比全新风系统小。从图6可以看出,烟囱出口温度随太阳辐射强度的增加而增大。
4供热效果分析
选取烟囱尺寸为H=3.125 m,W=4 m,对全新风系统与A.P.Haghighi[9]的研究结果进行对比。根据热量的计算公式Q=cm(to-tr),c=1010 J/(kg・K),tr=10 ℃,计算结果见表1。
2613.270
根据面积热指标法计算,Q=qn・m・F\[15\],F为建筑面积。选取供热面积热指标qn・m=90(W/m2)\[16\],对于太阳能烟囱房间大小为4 m×4 m×3.125 m[9],房间所需热负荷为1 440 W,与表1对比,显然新风系统在太阳辐射强度为200 W/m2时,不能满足房间的供热需求。这与A.P.Haghighi[9]的研究结果基本相符。
对于武汉地区冬季不供暖的房间,室外温度为-3 ℃,室内温度为0 ℃\[15\]。全新风系统与室内空气循环系统空气获得的热量结果表2、表3。
全新风系统与室内空气循环系统相比,全新风系统的通风量比室内空气循环系统的通风量大,但全新风系统烟囱出口温度比室内空气循环系统烟囱出口温度低,计算结果表明:室内空气循环系统可提供的热量比全新风系统大,更容易满足室内热舒适需求。对于3 m×3 m×3 m的房间,所需热负荷为810 W。在太阳辐射强度为200 W/m2时,全新风系统和室内空气循环系统得到的热量分别能达到室内热负荷的76.6%、94.2%。在太阳辐射强度为300 W/m2、400 W/m2时,可满足室内热负荷需求。其与热负荷需求适合的房间搭配在一起,是可以满足供热需求的。由此可见,太阳能烟囱用于供暖也是可能的。对于不同体积的房间,烟囱有不同范围的尺寸,只要设计合理的烟囱就可达到室内热舒适性的需求\[10~20\]。
5结语
(1) 太阳能烟囱用于室内通风降温及供暖,既改善了室内热环境,又可以节约能源。
(2) 太阳能烟囱通风量受太阳辐射强度、烟囱高度、烟囱宽度及室内外温度等因素影响,随着太阳辐射强度、烟囱高度及烟囱宽度的增加而增加。当室外温度相同时,室内温度低于室外温度时,室内空气循环系统的通风量比全新风大;室内温度高于室外温度时,室内空气循环系统的通风量比全新风小。
(3) 太阳能烟囱可以满足房间供热需求。在太阳辐射强度为200 W/m2时,全新风系统和室内空气循环系统得到的热量分别能达到室内热负荷的76.6%、94.2%。在太阳辐射强度为300 W/m2、400 W/m2时,可满足室内热负荷需求。
参考文献:
[1]荆海薇.太阳能烟囱自然通风效果实验研究[D].西安:西安建筑科技大学,2005.
[2]孙鹏.被动式采暖降温技术对室内热湿环境调节作用的研究[D].大连:大连理工大学,2006.
[3]卢敬彦.太阳能通风技术实验研究[D].重庆:重庆大学,2008.
[4]王丽萍.太阳能烟囱提高室内热压通风效果的数值模拟[D].西安:西安建筑科技大学,2003.
[5]杨卫波,施明恒.太阳能通风墙的性能研究[J].建筑热能通风空调,2005,24(3):17~21.
[6]陈会娟,陈滨.特朗贝墙体冬季集热性能的计算及预测[J].建筑热能通风空调,2006,25(2):1~6.
[7]王汉青,郭娟,周慧文.运用Trombe墙改善室内热环境的数值模拟研究[J].建筑热能通风空调,2013,32(6):74~77.
[8]A.Bouchair.Solar chimney for promoting cooling ventilation in southern Algeria[J].Building Services Engineering Research & Technology,1994,15(2):81~93.
[9]A.P.Haghighi,M.Maerefat.Solar ventilation and heating of buildings in sunny winter days using solar chimney[J].Sustainable Cities and Society,2014(10):72~79.
太阳底下范文5
论文关键词:人口老龄化,农村养老保险,动态递进式模式
一、引言
国际上通常把60岁以上的人口占总人口比例达到10%,或65岁以上人口占总人口的比重达到7%作为国家或地区进入老龄化社会的标准。根据安徽省老龄办、省社会保障研究会2006年组织的一项安徽省“空巢老人”现状调查及对策研究预测,到2010年,安徽省60岁及以上老年人口将达到876.5万人,占总人口的比例将超过13.1%。到2020年,安徽省60岁及以上老年人口将达到1177.5万人,老年系数为16.6%左右。据预测,安徽省人口老龄化高峰将于2030年到来,并将持续20余年。至2030年前后,安徽省60岁及以上老年人口占总人口的比例将达到22.9%,老年人口将达到1669.1万人,而在60岁以上人口中农村居民占70%,可见安徽省农村人口老龄化形势严峻,农村居民养老问题面临着巨大的压力,保证农村居民老有所养是构建和谐社会重要一环也是我国政府的重要职责。目前,我国新型农村养老保险尚未建立,伴随着农业剩余劳动力迁往经济比较发达地区经济论文,外出人员以农村青壮年为主,留下的都是老年人,使得农村留守老人数量和发展速度都已经超过了城市。在农村,年老丧失劳动能力的农民,除部分土地收入和来自家庭的赡养外,没有固定的养老收入,且青壮年子女大多外出务工,生活风险和困难程度都要比城镇老年人高,这直接导致农村养老需求加大,仅靠传统家庭养老方式已经难以满足现实需求。
目前,我省各地区农村经济、自然、 人文地理等条件有很大程度上的差异性,各地区农村居民对于养老保障有着不同的层次的需求,这决定了在我省范围内实行统一的农村养老保障制度不符合现实情况,而建立符合地区特点的养老保障制度才是可行的政策选择论文开题报告范文。在对这一问题研究上,大多数学者对中国的养老区域划分习惯沿用的依然是“东部地区”、“中部地区”和“西部地区”的地理区域划分标准或“发达地区”、“欠发达地区”和“贫困地区”的经济区域划分标准,不仅针对性不强,更不利于农村养老问题的解决及区域间养老工作的协调。因此,本文采用因子分析法和聚类分析法,一方面我省各类地区可以先实行新型农村养老保险制度的覆盖,另一方面各地区的新型农村养老保险制度发展不能一蹴而就,而应当根据不同类型地区的人口老龄化进程、参保覆盖率的最优变化路径、期望寿命的变化,采用非均衡的推进模式对所有农村居民进行渐次的、动态递进式的全覆盖。
二、研究方法与指标体系
1. 研究方法
根据人口老龄化相关理论设计出一系列相关的统计指标和统计变量,采取因子分析和聚类分析等方法分析各变量之间的变化关系及其对目标变量的影响程度。本文首先列出各地区与农村养老相关的变量,且把这些变量看作彼此之间是有机联系的;其次,运用因子分析法筛选出公因子,在对因子进行旋转解释其意义后计算出各公因子的得分,以此说明各地区的养老特征并进行相关分析;最后,在因子分析的基础上,按各个地域单元相对于主因子得分进行聚类分析,结合具体的地域空间结构,对安徽省农村进行养老区域的划分。
2. 指标体系
为了更好地根据地域性的不平衡来把握我省动态递进农村养老保险制度路径与和进程,必须建立完善的指标体系,结合安徽省的具体情况,考虑不同地区的数据真实性、可得性以及代表性的基础上上,本文选择了17个指标经济论文,指标体系如表1所示,这些指标作为农村养老区域划分依据。
表1 2008年安徽省农村保险情况
变量
变量字母表示
单位
第一产业生产总值
X1
亿元
人均生产总值
X2
元/人
财政收入
X3
万元
社会保障与就业支出
X4
万元
农林牧渔的总产值
X5
万元
农林牧渔建设项目投资
X6
万元
农村人均现金支出
X7
元
农民人均纯收入
X8
元
耕地面积
X9
公顷
乡村从业人员
X10
人
家庭户规模
X11
人/户
65岁以上人口所占比例
X12
%
老年抚养比
X13
%
外出人口占总人口的比重
X14
%
征用土地面积
X15
平方公里
受灾面积
X16
千公顷
农村低保人数
太阳底下范文6
【关键词】 内皮型一氧化氮合酶;基因多态性;缺血性脑血管病
Abstract:Objective To investigate the relation between endothetial nitric oxide synthase(eNOS) gene polymorphism and cerebral ischemic stroke patients of Ningxia. Methods A case-control study was performed to determine whether the variable number of tandem repeats(VNTR) polymorphism of eNOS gene were associated with cerebral ischemic stroke. The VNTR polymorphism of eNOS gene was analyzed with PCR in 468 patients with cerebral ischemic stroke group and 596 healthy subjects group from Ningxia population, Results Involved in this study, VNTR4 of eNOS gene showed 3 genetypes, named eNOS4a, eNOS4b and eNOS4a/4b. The frequencies of the three genetypes were as follows:aa-type 2.7%,ab-type 18.7%,bb- type 78.6% in patient group and aa-type 1.2%,ab-type 13.6%,bb-type 85.2% in control group,stastic difference between two groups was significant (χ2=9.122,P=0.010). The frequencies of eNOS4a in cases was significantly higher than that in controls(χ2=10.008,P=0.002). Conclusion eNOS4a is an genetic factor which is associate with cerebral ischemic stroke of Ningxia population.
Key words:endothetia nitric oxide synthase; gene poiymorphism; cerebrovascular disease
越来越多的研究表明[1-2],遗传因素在缺血性脑卒中的发生、发展中起着重要作用,这些基因的缺陷可能是缺血性卒中的危险因素,探讨其遗传背景,对预防和治疗缺血性脑血管病有重要意义。目前已知一氧化氮合酶有三个亚型,分别是神经元型NOS(nNOS)、内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS),其中由eNOS基因编码所产生的NO是一种自由基性质的气体,具有强烈的舒张血管、松弛血管平滑肌和抑制内皮细胞增殖及特异的神经系统病理生理作用[3],是最具生物活性的eNOS。该基因第4内含子具有27个碱基数目的可变重复序列多态性(VNTR),根据重复次数不同表现为eNOS4a/4a、eNOS4b/4b、eNOS4a/4b 3种基因型,研究显示a等位基因较b等位基因具有更重要的病理意义[4]。本研究旨在探讨和进一步证实eNOS基因多态性与宁夏地区缺血性脑血管病的相关性。
1 资料与方法
1.1 研究对象
本研究共纳入缺血性脑血管病患者共468例,其中血栓性脑梗死404例,腔隙性脑梗死33例,短暂性脑缺血发作 21例; 男338例,女130例,平均年龄59.43岁。病例组来自宁夏医科大学附属医院神经内科2007年1月至2008年7月缺血性脑血管病住院患者,经详细神经系统检查及CT、MRI证实,诊断符合1995年中华医学会第4届脑血管会议修订的缺血性脑血管病诊断标准,并除外栓塞、低血容量、感染、肿瘤等所致的脑梗死。对照组596例,选择同期在宁夏医科大学附属医院门诊和体检中心进行常规健康体检的人群,其中男489例,女107例,平均年龄43.96岁。
1.2 主要试剂和仪器
Promega公司全血DNA提取试剂盒;北京天根生物工程公司提供预混式PCR反应体系试剂,标准分子量 marker,上、下游引物并进行PCR反应产物测序。引物设计为:上游:5’-AGGCCCTATGGTAGTGCCTTT-3’,下游:5’—TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3’。高速离心机、PCR仪、琼脂糖凝胶电泳仪、紫外光成像设备等均由宁夏医科大学中心实验室提供。
1.3 方法
1.3.1 DNA提取与纯化
所有研究对象均抽取清晨空腹外周静脉血3mL,EDTA抗凝后储存于-80℃冰箱备用。严格按照promega公司全血DNA提取试剂盒说明书,取全血300μL提取并纯化DNA,-20℃保存备用。
1.3.2 聚合酶链反应
反应体系50μL,组成为:模板DNA 2μL,预混式PCR反应体系25μL,上、下游引物各2 μL,ddH2O 19μL。反应条件:94℃ 2 min,94℃ 45 s,59℃ 1 min,72℃ 1 min,终末72℃延伸5 min,共35个循环。
1.3.3 基因型判定
反应结束后,取PCR产物6μL于2%琼脂糖凝胶中电泳,电压80V,45 min后取出凝胶在紫外灯下判定基因型。
1.3.4 序列测定及分析
将部分判定为纯合子基因型的PCR产物经回收纯化后送北京天根生物公司测序,并根据重复序列数目证实基因型的正确性。
1.4 统计学方法
所有实验数据采用SPSS 11.5统计软件建立数据库,基因频率采用计数法,各组间基因型频率和等位基因频率的差异显著性用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PCR反应产物凝胶电泳图(图1,见封4)
aa基因型为393bp大小条带,bb基因型为420bp大小的条带,ab基因型为含393bp和410bp条带。
2.2 PCR反应产物测序图
4次27bp重复序列,证实为aa基因型(图2,见封4)。5次27bp重复序列为bb基因型。
2.3 观察组和对照组eNOS基因型及等位基因频率分布(表1)。
表1显示,两组对象eNOS基因型及等位基因频率间差异有统计学意义(P=0.010,P=0.002)。表1 各观察组eNOS基因型及等位基因频率分布(略)
3 讨论
缺血性脑血管病是一种多因素参与的疾病,很多基因和环境因素共同起作用,遗传因素在缺血性脑卒中的发生、发展中起着重要作用。探讨易感基因的遗传背景及其作用方式,对预防和治疗缺血性脑血管病有重要意义。
eNOs基因在人类染色体上定位于7q35-36区,跨度约21Kb,含有26个外显子和25个内含子,相应的信使核糖核酸约4.1 Kb,翻译生成含1203个氨基酸的蛋白产物。eNOS基因在单倍体人类基因组中以单拷贝基因形式存在,eNOS基因DNA串联重复序列多态性和单核苷酸多态性超过15种,分别位于5’端的1474,924,786,691,编码区的774,894,以及内含子2,4,8,11,12,13,18,22和23。己有研究认为,eNOS基因多态性是影响NO合成的重要因素,与多种疾病相关联[4]。由于 eNOS 基因的多态性可影响 eNOS 的表达与功能,导致 eNOS 活性改变 ,而eNOS 是 NO 合成的关键酶 ,其活性变化直接调节 NO 的生成量及其生物学效应。因而可以说 ,eNOS基因的作用最终可能是通过 NO 效应来完成的。在脑卒中脑缺血时,NO含量变化对继发性脑水肿与脑梗死的病理生理过程起重要作用。脑缺血早期由eNOS介导的NO增多可扩张血管,抑制血小板黏附和聚集,对抗缺血性脑损伤而起保护作用。中晚期则可因iNOS诱导过量的NO而导致神经细胞死亡[5]。
NO又称内皮舒张因子,是一种不呈Ca2+依赖性胞裂外排式释放,而以弥散方式透过细胞膜到达靶细胞的生物活性物质。其主要作用包括:扩张血管、调节血压;增加血管壁通透性,抑制血小板聚集;维持脑血管舒张和自动调节;调节突触传递功能,参与突触可塑性构建、痛觉调制;并可介导GLU的神经毒性作用。
本研究检测的人群中发现了2种等位基因a、b和3种基因型bb、ab、aa(图1)。4次27bp重复序列为aa基因型(图2见封4),5次27bp重复序列为bb基因型。eNOS基因的VNTR在缺血性脑血管病患者中aa基因型频率为2.3%,ab基因型频率18.4%,bb基因型频率为79.3%,对照组中aa基因型频率为0.95%,ab基因型频率为13.57%,bb基因型频率为85.48%。a等位基因频率在患者组和对照组分别为12.1%、8%,经χ2检验,两组间的各种基因型频率及等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。显示脑梗死组 eNOS4a 携带者明显多于对照组,说明eNOS VNTR4与宁夏地区人群缺血性脑卒中发病有关联,携带a等位基因的基因型发生缺血性脑卒中的危险性增加。
参考文献
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