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对指导意见的意见和建议范文1
关键词：王粲;刘祯;逸气;普世性
建安文学在中国文学史上有着举足轻重的地位，是中国灿烂辉煌的诗歌文化的滥觞。建安风骨对后来中国文学思想史上一大批文人的崛起都起到积极的作用：为文学理论提供大量的论证研究，如曹丕的《典论q论文》;对诗体的发展也起到不可忽视的贡献，曹氏三父子对五言诗的发展;建安风骨对后世尤其是唐诗的影响是巨大的，李白诗歌“绣口一吐，便是半个盛唐”的气度也自然少不了“建安风骨”的影响。在建安文学中，王粲和刘祯作为七子中的佼佼者，在历史上一直被奉为很高的评价。钟嵘在《诗品》中，“自陈思以下，祯称独步。”以刘祯为优;《文心雕龙》中又赞“仲宣为七子之冠冕乎！”显然又是以王粲为优。但两人的艺术价值及在文学史上谁更胜一筹，在当今“国学热”的大背景下，青少年如何才能更好地学习传统文化，弘扬传统文化都有着重要的指导意义，这都是是本文要研究和探索的。
一、刘祯的“逸气”
（一）文采情高
刘祯以其五言诗闻名。曹丕评之，“其五言之善者，绝妙时人。”刘祯的诗文被认为是“情高以会才”，而在《文心雕龙・风骨》中可见“情高”、“会采”便是“逸气”的两个特征。刘祯的诗文大多亡佚，现仅存的19篇就多是反映对人生中困窘的感慨以及对生命流逝，命途多舛的家国之恨。然而其笔下的诗文却具有超越的意识，这显然是文章极具张力并且蕴含“逸气”的主要原因。往往是在跌入痛苦的渊薮后又能重振信心，奋发反抗。这是刘祯诗文保留的虽不多，却影响甚大的一个重要原因。
“悲剧精神”是建安文学的一个共同特征，在刘祯的诗文中随处可见，但他绝地后的超越却让文章有了独特的张力和思想力度。《杂诗》前半节：“沉迷薄领间，回回自昏乱”，结尾却是：“安得肃肃羽，从尔浮波澜。”表现出试图挣脱痛苦的决心和勇气，前后对比，一股豪放洒脱的“逸气”萦绕其间。
刘祯诗文的“情高”除了在其陷入困境后的呐喊上，还体现在安逸生活中仍不忘大志的忧伤气质。《公宴》中，同为邺下文人的其他人大多作文表达感恩，祝贺等。如王粲作文“愿我贤主人，与天享巍巍。”而刘祯却在“永日行游戏，欢乐犹未央。”的欢悦欣喜后仍不忘“投翰长叹息，绮丽不可忘。”宴乐之中仍然不忘胸中大志。难怪王夫之也评价，“《公宴》诸诗，如无公干，则当日群饮，酒肉气深，文章韵短矣。”
（二）意象高洁
钟嵘在《诗品》中将刘祯列为上品诗人，认为他是“仗气爱奇，动多振绝，贞骨凌霜，高风跨俗” 而笔者认为正是在意象取材上的“高风”才成就了其诗文的“跨俗”。刘祯善于在诗文中用意象来自况，常见的有：劲松，频藻，凤凰等。《赠从弟三首》中，“岂不常勤劳，羞与黄雀群。”将频藻自况，表现了对世俗的鄙视厌弃，却不甘沉沦，奋发进取的决心。再如失题诗“青青女萝草，上依高松枝。幸蒙庇养恩，分惠不可D。”女萝依附高松象征自己对曹氏父子既感激又不失自尊。
同样写鸟，建安时期大多数人笔下的是凡鸟。王粲在《杂诗》“百鸟缤翩，振翼群相追。”然而刘祯却更善于将“灵鸟”写入诗中。如《公宴诗》中“灵鸟宿水裔，仁兽游水梁”，再如《赠从弟》中的凤凰。长于比兴这是建安文学的共同特征，但刘祯诗文中意象取材高洁，这却是其中较为突出的。
二、王粲的“冠冕”
（一）文采细腻
王粲文笔细腻华美，颜延之评之“四言侧密”。而钟嵘对刘祯评价是“气过其文，雕润恨少”。相较刘祯诗文的直抒胸臆，王粲更侧重于辞藻的描写。王粲更加擅长对场面的描写。例如《七哀诗》中对社会现实的描绘“出门无所见，白骨蔽于野”这句与曹操《蒿里行》中“白骨露于野，千里无鸡鸣”相比，更具有画面感，冲击力，哀鸿遍野的残酷和悲痛失望
更甚。
（二）思想普遍性
建安时期是社会动荡，思想高度碰撞的时期。王粲更像是一个矛盾的统一体。建安七子中的孔融视儒家传统为审美标准，刘祯是主情文学的开拓者，而王粲诗文中的悲情却处处蕴含普适性，因而更易引起人们的共鸣和感动。《从军行》、《登高赋》等都是从社会角度抒发文人群体，士兵群体，劳苦大众的厚重的情感，正是因为他诗文中蕴含的悲剧精神的普遍性使得他作品的思想更加丰满而有深度。
袁济喜认为，王粲相较刘祯更具家学背景的优势。由于王粲有着山阳王氏家族学统的先天优势，又经历了荆州学术解放思想的洗礼及蔡邕对他文学价值观的多元化影响，故逐渐形成一种全面而开放的文学思想理念和思想深度。可见，刘勰赞其是“七子冠冕”不只是从文学审美层面对其才华进行了肯定，更是从社会全面展示的普遍性进行赞同。
三、总结
关于王粲和刘祯谁应该得“七子之冠冕”，我们很难有一个可以被说服的统一的审美标准来评定。但二人所代表的建安风骨却是对后世的文学和思想发展都有着不可忽视的作用。尤其是当代国学热的兴起，让越来越多的人关注到文学自觉的时代，而王粲和刘祯作为建安七子的代表人物，他们作品所体现的文学价值和思想内涵更是值得一代人思考和敬仰，这对于如何正确引导国学热现象有重要的思考意义。
参考文献：
[1]钟嵘，诗品.[M].
[2]宋景昌，论刘祯[J].殷都学刊，1992，2.
[3]傅刚.魏晋南北朝诗歌史论.[M].吉林教育出版社，1995.
[4]徐公持.魏晋文学史.[M].人民文学出版社，1999.
[5]袁济喜，徐晓.论“七子之冠冕”的形成.[J].中国人民大学国学院.
对指导意见的意见和建议范文2
关键词：社会主义核心价值观；理论认同感；当代大学生；辅导员作用探究；应对策略
一、大学生社会主义核心价值观的内涵
1、社会主义核心价值观的概念
社会主义核心价值观，是指在社会主义国家中，公民经过系统的培养和培训应当具有的热爱社会主义祖国，运用良好的职业道德和专业知识、专业技能，服务于社会主义建设，为国家的富强和人民的事业而奋斗，并以此作为人生价值的观念。
对于社会主义国家的公民而言，拥有高度的社会主义核心价值观，不但对个人而言是一件好事，可以提升个人的作为公民的素质，而且，对于国家民族而言，也更具重大的价值和意义。
社会主义核心价值观的实施，使公民能够为国家的强盛而努力，树立国兴我荣、国衰我耻的观念。
2、大学生核心价值观的定位
大学生核心价值观是指：作为国家民族的栋梁，大学生应当担负起建设有中国特色社会主义，努力实现中国梦的任务。所以要把树立和践行社会主义的核心价值观，作为自己的职责和义务，以身作则起好引领作用，使全民在社会主义核心价值观的问题上达到一个相当高的程度。
二、我国关于辅导大学生社会主义核心价值观的发展状况
笔者采用文献检索的方式，了解了我国一些著名高校如：上海交大、西南政法大学、中山大学等。通过相关资料分析、定量和不定量分析、专题分析等方式，发现如下状况：
其一：亮点频出，令人欣喜。总体而言，对于辅导当代大学生，在社会主义核心价值观体系的认同方面，我国不少知名大学的总体情况比较良好。师生们对此的认识的都比较到位，绝大部分学生拥有正确的社会主义核心价值观，很多老师对于辅导大学生社会主义核心价值观的工作，都抓得很好。绝大多数学生认为，辅导员在其成长当中作用挺大，但也有一部分学生对辅导员的作用并不看好，甚至认为他们几乎没有能够对自己的世界观、人生观和社会主义核心价值观上，起到什么作用。有些学生还反映，辅导员对其社会主义核心价值观的思想政治辅导工作做得不到位，态度急躁。
其二、认知缺失，不足令人堪忧。亮点的存在固然可喜，不足的存在却也令人忧虑，必须予以探讨，才能使社会主义核心价值观的辅导工作不至于在大学管理工作中处于滞后的地位。
不足主要表现为：由于当今社会主义经济思潮的负面影响及西方各形各色的社会价值观的影响，使我们的辅导工作方式单一，导致不少学生对社会主义核心价值观体系，缺乏高度的认同感。同时，在辅导教师的课堂中，教学思路显得不够活跃，师生互动情况不太良好，学生对于参加社会主义核心价值观的实践活动不够积极，学校关于社会主义核心价值观的工作考核和相关的投入都还有待商榷。
三、西方关于辅导大学生思想教育方面的做法和借鉴实施
西方不少国家中一些知名的大学，如麻省理工学院、剑桥大学、圣安德鲁斯大学等等，均能搞好学生的思想辅导工作，采用五个纬度的方式对学生的思想健康、人生价值观，从深度和高度上进行引领，教师的辅导工作做得非常落实。主要体现在：对学生进行思想品德、专业知识、就业规划等进行指引，关注学生身心健康，关注学生社会认同程序。一些国家还专门就此建立了专题档案，规范要求学生在求职、就业等多方面均能合乎其在专题档案中所预计的目标。
这种职业追踪挡案体制，我们完全可以借鉴实施于我们的辅导教学中，并给合我国国情制定完善体系，促使大学生群体进入社会之后也能够保持其正确的社会价值观念并予以落实。
四、面临的挑战和科学的对策研究
当今社会需要的是道德、文化、心理、身体等各方面合格和具备良好的社会主义核心价值观的高素质人才，而一些学校在此方面的辅导工作流于形式，学校教师不够重视对学生的辅导工作，方式单一，又急于求成，很难引起学生的认同。很难适应我国人才挑选的需要。为此，我们应该采取以下对策：
其一、用多种方式激励辅导员发挥其专业指导者的引领热情
一些大学在考核机制，人才评聘诸方面不够落实，导致耐心辅导、成绩卓越的辅导员和工作状况不够良好的辅导员在绩效考核上无法区分而伤害了其工作的热情。
第二、提高教师辅导大学生社会主义核心价值观工作的标准和要求
为此，学校应当使用粗线条方式进行掌控，教师采用精细化的手法进行辅导和管理，力求帮助学生处理好大学学习中成为人才、选择朋友、选择职业、热爱社会主义祖国、健康乐观生活等一系列的人生问题，真正成为祖国的优秀人才。
其三、构建社会主义核心价值观辅导的一系列完整的体制
无规矩不成方圆，当今的大学生群体中必须建立一系列实用性的体制，才能帮助辅导员积极开展对学生的社会主义理想、就业方向、职业道德感等方面的辅导工作。并建立具体的亮点和问题档案以提高师生对此的思想认知和综合素质。无论举手投足还是实践工作，都可以力争落到实处，以适应当今社会发展的需求。通过及时地对大学生进行指导和反馈，可以引领学生进行社会主义特色的职业规划和定位，使其为将来适应社会主义职业发展和奉献社会主义事业而打下思想基础。
其四、身正为范，增强辅导员的学识和人格魅力
在辅导教师的选用上克服一些学校的随意性，选择一些学识过人、经验丰富、耐心细致、擅长心理工作的教师通过其特有的人格魅力，带着严谨的辅导工作态度，去感动、关爱、说服和引导学生，使其能够在点滴的行为中，处处践行我们的社会主义核心价值观。从大一到大四对学生进行一系列的职业思想规划，帮助学生成长，并且快乐地走向我们社会主义社会需要的岗位。
其五、“知”“行”结合以生动的方式帮助大学生，实现社会主义核心价值观与社会生活的融合
完全脱离职业利益的理论导向，必定枯燥乏味缺少说服力。以社会实践生活作为教育来导向，如西方社会的义工跟踪制度，可以借鉴来让学生体验奉献的快乐，使其社会主义价值观的构建自然地延伸到社会课堂中去。用鲜活的方式评价和培养学生，并予以评估，最终使其自觉构建科学的社会主义心价值观。
结束语
如果孩子是祖国的花朵，那么大学生就是民族的栋梁，辅导大学生构建社会主义价值观的工作，意义非凡。诚愿此文对你对我都有帮助。
（作者单位：西华大学艺术学院）
参考文献：
对指导意见的意见和建议范文3
【摘要】
目的观察糖平煎对2型糖尿病（T2DM）大鼠糖脂毒性和胰岛素抵抗（IR）的影响。方法采取高热量饲料喂养结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法复制T2DM大鼠模型，分为正常对照组、模型对照组及糖平煎大、小剂量组，连续治疗4周，观察血糖（FBG）、血脂（TG，TC，HDL-C，LDL-C）、血清胰岛素（FINS）、胰岛素敏感性指数（IAI）的变化。结果大、小剂量糖平煎治疗4周，和模型对照组比较，FBG，FINS，TG，TC，LDL-C显著降低，而HDL-C，IAI明显升高（P
【关键词】 2型糖尿病 胰岛素抵抗 葡萄糖毒性 脂毒性 糖平煎
胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR) 是2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM）发病的重要因素和显著特征，而T2DM时持续存在的“糖毒性”“脂毒性”是IR的重要因素。我们以前进行的动物实验证明了糖平煎对2型糖尿病大鼠血流变、微循环有良好治疗作用［1］，本实验进一步观察糖平煎对T2DM大鼠糖脂毒性和IR的影响，以进一步探讨其作用机理。
1
材料
雄性Wistar大鼠50只，体重180～220g。糖平煎由黄芪14 g，黄连6 g，荔枝核6 g，丹皮6 g，桑叶8 g，僵蚕10 g，山药10 g，元参10 g，苍术10 g组成，水煎浓缩煎液，每毫升含生药2 g。链脲佐菌素（STZ）美国Sigma产品。甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C)、血糖（FBG）、血清胰岛素（FINS）试剂盒由北京中杉金桥生物公司提供。
2 方法
2.1 分组及给药 随机取10只大鼠为正常对照组，喂基础饲料（总热量6.94 J/g）。其他大鼠喂高热量饲料（基础饲料加蔗糖、炼猪油和鸡蛋，总热量21.33 J/g）4周，再腹腔注射STZ 30 mg/kg，2周后检测FBG、 FINS、血脂，取FBG >7.8 mmol/L，具有超重、高血脂、高胰岛素血症、胰岛素敏感性指数降低的大鼠，确定为T2DM模型［2］。选择T2DM大鼠30只，随机分为模型对照组及糖平煎大、小剂量组，每组10只。按人与大鼠体表面积折算的等效剂量比给药，大剂量组每日给药7.2 ml/kg，小剂量组每日给药3.6 ml/kg（加入3.6 ml/kg蒸馏水），模型对照组和正常对照组每天给7.2 ml/kg蒸馏水，灌胃1次/d，连续4周。
2.2 指标检测 实验结束颈总动脉插管取血，按照各试剂盒说明进行操作，采用酶法测定FBG、血脂；采用放免法测定FINS；采用李光伟法［3］计算胰岛素敏感性指数IAI=Ln［1/ FBG×FINS］ (Ln:自然对数) 。
2.3 统计分析 组间数据以±s表示，采用SPSS 12.0统计分析软件以方差分析进行统计处理。
3 结果
3.1
糖平煎对大鼠脂毒性影响 见表1，与正常对照组相比，各模型组TG，TC，LDL-C明显升高， HDL-C明显降低。糖平煎大、小剂量治疗4周后，可明显降低TG，TC，LDL-C，明显升高HDL-C，与模型对照组相比，差异有统计学意义（P
表1 糖平煎对T2DM大鼠TG，TC，LDL-C，HDL-C的影响（略）
与正常对照组比较，*P
3.2 糖平煎对大鼠糖毒性和IR的影响 见表2。与正常对照组相比，各模型组FBG、FINS明显增加，IAI明显降低。糖平煎大、小剂量治疗4周后， 可明显降低FBG、FINS，明显提高IAI，与模型对照组相比，差异有统计学意义（P
表2 糖平煎对T2DM大鼠FBG，FINS，IAI的影响（略）
与正常对照组比较，*P
4 讨论
课题组认为T2DM的基本病机为“气阴两虚、痰淤阻络、脾虚肝郁”，“脾虚、肝郁、痰淤”在T2DM病理及其并发症中有着重要意义。治疗上从“脾”论治，强调“滋阴兼益气”“化痰必和血”“健脾需调肝”，拟方“糖平煎”，由黄芪、山药、苍术、元参、黄连、桑叶、丹皮、僵蚕、荔枝核等药组成。方中黄芪配山药、苍术配元参为北京名医施今墨经验。黄芪、苍术健脾益气，燥湿化痰；山药、元参益气养阴，清热解毒；黄连清热燥湿；丹皮活血凉血；僵蚕化淤通络；桑叶散热平肝；荔枝核疏肝理气。全方甘苦凉润，清热泻火而滋燥生津，活血凉血而益气淡渗，临床治疗T2DM、改善并发症取得了良好疗效。结合现代药理研究，黄连小檗碱有胰岛素增敏、抗脂质过氧化作用，能够抑制糖原异生，有利于降低高血糖；桑叶中含有脱皮固酮、芸香苷、槲皮素，可促进葡萄糖转化为糖原；荔枝核中含有α- (亚甲环丙基) 甘氨酸可以使血糖下降、肝糖元降低，以及黄芪多糖、薯蓣皂苷、苍术苷、丹皮酚等活性成分均有降血糖作用。
“糖毒性”是指持续高血糖对胰岛β细胞、全身众多组织细胞的损伤作用。持续高血糖对胰岛β细胞有直接毒性作用，损害β细胞对葡萄糖刺激下正常促进INS分泌的反应，加重INS的分泌异常乃至分泌缺陷，加重受体后水平的缺陷导致IR。对全身组织的毒性作用主要是蛋白质非酶糖化的影响，许多蛋白在高糖环境中可以发生非酶糖化，进而刺激细胞合成和释放一系列的细胞因子和生长因子，影响组织细胞的增殖与分化及基质的合成和分泌，对机体产生毒性作用［4］。血脂异常以TG、TC、LDL-C水平升高，HDL-C水平降低为特征，可以导致、加重IR，称为“脂毒性”。TG在肝脏、肌肉的沉积与FINS升高关系密切，可能在IR产生过程中发挥重要作用。而血清游离脂肪酸（FFA）流入胰腺组织，超过其氧化能力， FFA酯化为TG会导致胰腺的功能亢进或者功能异常，导致β细胞的损害，影响了胰岛素分泌造成IR［5］。同时，脂毒性的产生可能依赖于糖毒性，高血脂对正常血糖环境下的大鼠胰岛β细胞分泌功能无明显损害，长期慢性高血糖可显著促进脂毒性对胰岛β细胞功能的损害［6］。在IR评价方面，采用李光伟与美国NIH的糖尿病流行病学家Peter H.Bennett于1993年提出的IAI法，经美国国立卫生院Phoenix糖尿病临床及流行病学研究所320例胰岛素钳技术研究的材料证明，此胰岛素敏感性指数在糖耐量正常、糖耐量低减和2型糖尿病人群与正常血糖高胰岛素钳技术测定的胰岛素敏感性显著相关(r分别为0.78，0.71，0.71)，是一种简单而可靠的IR评价方法［3］。
本实验大、小剂量糖平煎治疗4周后，和模型对照组比较，FBG，FINS，TG，TC，LDL-C显著降低，HDL-C、IAI明显升高，差异均有统计学意义（P
【参考文献】
［1］ 李永民，李建东，张永鹏，等.中药糖平煎对2 型糖尿病大鼠血糖血脂、血流变及球结膜微循环的影响［J］.中国中医基础医学杂志，2006，12（1）：39.
［2］ 郭啸华，刘志红，李 恒，等.实验性2型糖尿病大鼠模型的建立［J］.肾脏病与透析肾移植杂志，2000，9（4）：351.
［3］ 李光伟.胰岛素抵抗评估及其临床应用［J］.中华老年多器官疾病杂志，2004，3（1）:11.
［4］ 刘树琴.2型糖尿病患者的胰岛素抵抗与葡萄糖毒性分析［J］.中国慢性病预防与控制，2002，10（6）：281.
对指导意见的意见和建议范文4
[关键词]成骨分化；骨髓间充质干细胞；同种异体；免疫调节
[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）11-1976-05
近年来，随着组织工程的兴起和发展，应用骨髓间充质干细胞（BMSCs）构建组织工程骨已成为骨组织重建修复的一个新途径。骨髓间充质干细胞是一种具有很强自我更新能力的原始细胞，具有多向分化潜能，可分化为不同类型的细胞，如骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等[1-4]，另外研究发现BMSCs免疫原性低且有免疫调节作用。它能抑制由非特异性丝裂原（PHA等）、炎症细胞因子（IL-2、Anti-CD3 Ab）等诱导的淋巴细胞增殖[5-8]。
自体BMSCs要达到一次治疗量，需要在体外大量培养扩增，其过程可能要花大约一个月的时间。因此，对于一些急性严重的骨缺损，可能错过了最佳的治疗时机，将无法应用于其临床治疗。同种异体BMSCs来源广泛，易于获取，弥补了自体细胞来源缺乏的不足，在临床运用上有着广阔的前景和重要的意义。同时，成骨诱导对于构建组织工程骨至关重要，成骨分化后的BMSCs是否仍能发挥免疫调节作用，在体内各种刺激因子的作用下是否能保持免疫调节功能，这是同种异体骨组织工程体内构建成功与否的重要前提。
本实验旨在探索成骨分化的同种异体BMSCs在三种实验条件下（双向MLR、PHA刺激、IL刺激）是否能发挥免疫调节功能，为进一步同种异体组织工程骨的体内构建提供免疫学理论基础。
1 材料和方法
1.1 材料：普通级成年Beagle犬3只[许可证号： SCXK （京） 2007-0005]，体重10～13kg，雌雄不限，经北京实验动物质检站检测，由玛斯公司提供，于中国医学科学院整形外科医院动物中心进行饲养，实验过程中对动物的处置符合2006年科技部《关于善待实验动物的指导性意见》的规定[9]。各试剂及仪器见表1。
1.2 方法
1.2.1 犬骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化：原代骨髓间充质干细胞接种后48h换液，去除未贴壁的细胞，继续培养。约7天后细胞生长达80%融合，胰蛋白酶-EDTA消化，按1.6× 104/cm2密度传代。第1次传代后，一部分细胞加入含10nmol/L地塞米松、10mmol/L β-磷酸甘油钠、50μmol/L L-2-磷酸抗坏血酸的DMEM成骨诱导培养基（Osteogenic Medium）；另一部分细胞作为阴性对照，仍用普通含血清培养基进行培养。以后每3天传代1次，传至第2代细胞，倒置相差显微镜下观察。
1.2.2犬骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化鉴定：茜素红染色：制备经成骨诱导培养21天的细胞爬片，4%多聚甲醛固定2h，加入配制的茜素红染液（茜素红0.1g溶于蒸馏水100ml，调节pH值至7.2），染色5min，洗去染液后以丙酮洗数秒、丙酮/二甲苯洗数秒，树酯封片后倒置相差显微镜下观察。
碱性磷酸酶染色：制备经成骨诱导培养14天的细胞爬片，甲醛固定同上，BM-Purple试剂盒染色，染色后固定、封片、镜下观察同上。
1.2.3 第三方BMSCs、OM-BMSCs灭活备用：取第2代BMSCs、OM-BMSCs细胞悬液0.9ml，加入100μg/ml的丝裂霉素C 0.1ml，使其终浓度为10μg/ml，放置于37℃，CO2细胞培养箱灭活2h。之后分别用普通培养基、成骨培养基洗涤3次以去除残余的丝裂霉素C，重悬后细胞计数。按照实验分组，取1×104/孔接种于96孔板相应位置，隔天待BMSCs完全贴壁后将原有培养基吸出，进行后续实验。另外分别单独接种1×104/孔BMSCs、OM-BMSCs作为空白对照组（Blank1组、Blank2组）。
1.2.4 犬外周血单个核细胞（PBMCs）分离抽取2只互为同种异体比格犬外周血5ml，缓慢加入到含有3.5ml Ficoll Plus淋巴细胞分离液的15ml离心管中，离心2000rpm，20min。吸取中间白色云雾状的有核细胞层，即分离得到PBMCs。用淋巴细胞培养基（RPMI1640培养基，含10%FBS、1%青链霉素、50μM 2-ME）重悬后离心1000rpm，5min，洗涤2次后细胞计数，分别作为供体细胞和受体细胞。
1.2.5 第三方BMSCs、成骨诱导的BMSCs（OM-BMSCs）对于双向混合淋巴细胞反应（MLR）中PBMCs增殖的影响：96孔培养板共分三组，每组7个复孔，反应体系总量为200μl，不足者以淋巴细胞培养基补充。A组：将供体和受体犬PBMCs接种于96孔板中，5×104/孔，作为对照组；B组：A组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板；C组：A组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃，5%CO2培养箱内培养120h后，加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl，再放回细胞培养箱内孵育4h，用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值（B组-Blank1）代表B组PBMCs的增殖情况；OD值（C组-Blank2）代表C组PBMCs的增殖情况。
1.2.6第三方BMSCs、OM-BMSCs对于经PHA刺激后的PBMCs增殖的影响：96孔培养板共分三组，每组7个复孔，反应体系总量为200μl，不足者以淋巴细胞培养基补充。D组：将受体犬PBMCs接种于96孔板中，5×104/孔，加入植物血凝素A（PHA），终浓度为1μg/ml，作为对照组；E组：D组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板； F组：D组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃，5%CO2培养箱内培养120h后，加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl，再放回细胞培养箱内孵育4h，用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值（E组-Blank1）代表E组PBMCs的增殖情况；OD值（F组-Blank2）代表F组PBMCs的增殖情况。
1.2.7第三方BMSCs、OM-BMSCs对于经IL-2刺激后的PBMCs增殖的影响：96孔培养板共分三组，每组7个复孔，反应体系总量为200μl，不足者以淋巴细胞培养基补充。G组：将受体犬PBMCs接种于96孔板中，5×104/孔，加入IL-2、OKT3（anti-CD3 antibody），终浓度为100U/ml，作为对照组。H组：G组各组分加入已铺被1×104/孔BMSCs的96孔板；I组：G组各组分加入已铺被1×104/孔OM-BMSCs的96孔板。96孔板放置于37℃，5%CO2培养箱内培养120h后，加入CellTiter96 Aqueous One Solution Assay 20μl，再放回细胞培养箱内孵育4h，用酶标仪在490nm波长测定PBMCs的OD值。OD值（H组-Blank1）代表H组PBMCs的增殖情况；OD值（I组-Blank2）代表I组PBMCs的增殖情况。
1.2.8 统计学分析：应用SPSS13.0软件进行统计学处理，数据以x±s表示，组间均数比较行一维方差分析，P
对指导意见的意见和建议范文5
【关键词】 川芎嗪注射液; 腹膜间皮细胞; 高糖; ⅰ型胶原; 基质金属蛋白酶1; 基质金属蛋白酶抑制剂1; 体外实验
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 6569.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
free full text (html and pdf) is available at .
forward linking and reference linking via crossref.
doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucoseinduced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
guisong zhu, jinsong he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 (mmp1) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low, medium and highdose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 in culture supernatants were measured by enzymelinked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucoseinduced type ⅰ collagen and timp1 expressions in a dosedependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium and highdose ligustrazine injection could significantly increase mmp1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp1/timp1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase1; tissue inhibitor of metalloproteinase1; in vitro
腹膜纤维化是腹膜透析治疗的主要并发症，最终导致腹膜功能衰竭，这是腹膜透析患者退出治疗的主要原因［1］。腹膜纤维化以细胞外基质（extracellular matrix, ecm）的过度沉积为特点［2］。研究表明，ecm的过度沉积是由于ecm合成与降解失衡而引起［3］。ⅰ型胶原是腹膜纤维化中主要的ecm［4］，其降解过程受基质金属蛋白酶1（matrix metalloproteinase1, mmp1）及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1）调控［5］。有研究证实，高糖能上调腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells, hpmcs）ⅰ型胶原和timp1的表达，降低mmp1活性［3］。本研究通过观察川芎嗪注射液对高糖刺激下hpmcs ⅰ型胶原、mmp1和timp1表达的影响，探讨川芎嗪在防治腹膜纤维化中的作用及其机制。
1 材料和方法
1.1 试剂和主要仪器 川芎嗪注射液（江苏苏中药业集团股份有限公司，批准号为国药准字h20020630）；50％葡萄糖注射液（江苏方强制药厂，批号为200710111）。磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution, pbs）、胎牛血清（fetal calf serum, fcs）、trizol和rpmi1640粉剂等（gibco公司）；胰蛋白酶和琼脂糖粉等（promega公司）；ⅰ型胶原、mmp1和timp1酶联免疫吸附测定（enzymelinked immunosorbent assay, elisa）试剂盒（adl公司）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, bca）蛋白含量检测试剂盒（南京凯基生物科技公司）；ⅰ型胶原、mmp1、timp1和βactin引物，mmlv第一链cdna合成试剂盒和taq酶等（invitrogen公司）；抗细胞角蛋白抗体、抗细胞波形蛋白抗体、第ⅷ因子抗体和抗白细胞cd45抗体（北京中山生物技术有限公司）。nu2500e二氧化碳培养箱（nuaire公司）；全自动酶标仪（biobank公司）；生物电泳图像分析系统（上海复日科技有限公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 hpmcs的培养与鉴定 取来自南京大学医学院附属鼓楼医院普外科择期腹部手术患者（排除尿毒症、腹膜炎）捐献的大网膜组织，按文献［3］方法原代培养hpmcs，按1︰3传代，第3代细胞用于实验，每次实验均由来自3个患者的标本进行3次独立实验。倒置相差显微镜观察hpmcs呈多边形，似铺路鹅卵石样外观；免疫组化鉴定抗细胞角蛋白抗体和抗波形蛋白抗体染色阳性，抗第ⅷ因子抗体和抗白细胞cd45抗体染色阴性。
1.2.2 实验步骤和分组 hpmcs用含1％fcs的rpmi1640培养液同步培养24 h后分为5组（每组设3个样本）：正常组（完全培养液）、高糖对照组（2.5％葡萄糖）和高糖（2.5％葡萄糖）加低、中、高剂量川芎嗪（10、20和40 mg/l）组。各组完全培养液均为含有15％ fcs的rpmi1640培养液。细胞置于37 ℃、5％ co2培养箱培养48 h。
1.2.3 elisa法检测细胞上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1含量 分组干预48 h后，离心收集上清液，按elisa试剂盒说明书检测ⅰ型胶原、mmp1和timp1表达水平。用0.1 mol/l naoh溶解细胞沉淀，bca蛋白检测试剂盒测定细胞沉淀中蛋白质浓度，用相应蛋白质浓度结果校正检测结果。
1.2.4 半定量rtpcr 分组处理同上。采用trizol一步法提取总rna，2 μg总rna进行逆转录合成cdna，50 μl反应体系进行pcr扩增，以βactin作内参照（引物序列及反应条件见表1）。1.5％琼脂糖凝胶电泳（110 v，15 min）进行pcr产物鉴定，电泳图像分析仪扫描分析，mrna相对含量用其pcr产物吸光值（absorance, a）与βactin a值的比值表示。引物及pcr反应条件见表1。
1.3 统计学方法 实验数据用x±s表示，采用spss 15.0软件进行统计分析，组间差异比较采用单因素方差分析，两组间均数比较采用lsdt检验。检验水准α=0.05。 表1 ⅰ型胶原、mmp1、timp1和βactin引物序列及pcr反应条件
2 结 果
2.1 上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1蛋白质水平 与正常组比较，高糖对照组上清液中ⅰ型胶原和timp1含量显著升高（p<0.01），mmp1含量显著下降（p<0.01）；与高糖对照组比较，低、中和高剂量川芎嗪组上清液中的ⅰ型胶原和timp1含量显著降低（p<0.05, p<0.01），且两者均呈量效关系，中、高剂量川芎嗪组上清液mmp1含量显著增加（p<0.01）。见表2。表2 各组上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1蛋白质表达
2.2 hpmcsⅰ型胶原、mmp1和timp1 mrna的表达 与正常组比较，高糖对照组hpmcs ⅰ型胶原/βactin mrna和timp1/βactin mrna分别上升（15.43±0.83）倍和（4.19±0.09）倍（p<0.01），mmp1/βactin mrna下降（86.9±0.44）%（p<0.01）；与高糖对照组相比，低、中、高剂量川芎嗪组ⅰ型胶原/βactin mrna和timp1/βactin mrna表达水平均显著下调（p<0.05），两者均呈量效关系，中、高剂量川芎嗪组mmp1/βactin mrna表达显著增加（p<0.05）。见图1和图2。
3 讨 论
高糖透析液导致ecm过度沉积是腹膜纤维化的病理基础［2］，研究表明，高糖不仅增加hpmcsⅰ型胶原的表达，并且引起ⅰ型胶原降解酶系mmp1/timp1的表达失衡［3］。我们的研究结果与之基本相同，此外我们发现，川芎嗪能显著对抗高糖的上述作用。
在生理条件下，hpmcs可以产生一定量的ecm和mmps/timps［3, 6］。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系，几乎能降解全部ecm成分。timps是内源性分泌蛋白，作为mmps的特异性抑制因子，其n'端可与相应的mmps催化活性中心的锌离子结合而抑制其催化活性［7］。本实验通过研究川芎嗪对hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型胶原及其降解酶系mmp1/timp1分泌及表达的影响，旨在探讨川芎嗪对hpmcs在高糖环境下ⅰ型胶原的合成和降解的干预作用及其机制。结果显示，川芎嗪能显著降低高糖所致的ⅰ型胶原的过度合成，同时显著下调timp1的表达，增加mmp1的表达，提示川芎嗪亦能通过调节mmp1/timp1的平衡，从而促进ⅰ型胶原的降解，减少ecm沉积。由此我们推测，川芎嗪可能具有预防或延缓腹膜纤维化的作用。
川芎嗪是中药川芎的有效成分之一，属酰胺类生物碱，具有活血化瘀的功效。药理实验证明，川芎嗪具有扩张血管、改善微循环、调节免疫和钙离子拮抗的作用［8］。目前川芎嗪抑制ⅰ型胶原、timp1和增加mmp1表达的机制尚不清楚。以往的研究发现这可能与抑制转化细胞生长因子β1（transforming growth factorβ1, tgfβ1）表达有关［9, 10］。tgfβ1是重要的致纤维化细胞因子，参与了腹膜纤维化的病理过程［2］。tgfβ1可增加ⅰ型胶原的合成，并且抑制mmps的活性而激活timps，使ⅰ型胶原降解减少［3, 11］。有研究报道，川芎嗪能降低多种细胞如心肌细胞、肝细胞和血管内皮细胞的胶原合成和timp1表达，而增加mmp1的分泌和表达，进一步的研究发现这可能是通过抑制tgfβ/smads信号传导通路继而抑制tgfβ1表达的结果［9, 10, 12］。我们前期研究证实，川芎嗪能下调高糖致hpmcs tgfβ1的表达（文章待发表）。因此我们推测，川芎嗪抑制tgfβ1的表达可能是其抑制hpmcs ⅰ型胶原合成和调整mmp1/timp1表达平衡的机制之一，其具体机制将是我们下一步要研究的内容。
综上所述，川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型胶原的过度合成，并且通过调节mmp1/timp1的平衡，促进ⅰ型胶原降解，从而减少ecm的沉积，防止腹膜纤维化的发生和发展。因此，川芎嗪可能具有预防或延缓腹膜纤维化的作用，这对腹膜纤维化的机制及其防治的研究有一定借鉴和应用价值。
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对指导意见的意见和建议范文6
关键词: 检察机关/量刑程序/求刑权/制度构建
检察机关参与量刑程序，是指刑事诉讼活动中，检察机关在向审判机关指控被告人犯罪事实的基础上，参与对被告人进行量刑的庭审程序，依法就其刑罚和执行提出具体的司法请求，并对审判机关作出的裁判进行法律监督的活动。2005年7月最高人民检察院正式下发《人民检察院量刑建议试点工作实施意见》，2009年6月最高人民法院制定了《人民法院量刑指导意见（试行）》和《人民法院量刑程序指导意见（试行）》决定在全国开展量刑规范化试点工作，检察机关的量刑建议权作为量刑改革的重要内容得到进一步明确。借此契机，笔者从探索检察机关参与量刑程序的法理基础入手，对量刑程序的制度构建提出相关建议。
一、检察机关参与量刑程序的法理基础
检察机关参与量刑程序，理论依据在于其作为指控犯罪的机关所拥有的量刑建议权。量刑建议制度在两大法系许多国家已得到广泛建立，但我国还处于起步阶段。而且，关于量刑建议权的内涵和可行性，实务界和理论界都没有达成一致观点。
（一）量刑建议权的概念
目前，国内对于量刑建议权的定义论述的比较多，但观点很不统一，总体可概括为以下几种：1.从刑罚权的角度定义。有观点认为，公诉权或求刑权，是诉讼法上的权力，即检察机关或被害人依照刑事诉讼程序提起刑事诉讼，要求法院对犯罪定罪科刑的权力。 [1] WriteZhu('1'); href="civillaw.com.cn/article/default.asp?id=51572#m1" name=1>[1]
2.从诉讼活动或诉讼阶段的角度定义。有观点认为，量刑建议权是检察机关在公诉过程中，基于刑罚请求权，对具体案件的刑罚提出公诉意见的一种诉讼活动。 [2] WriteZhu('2'); href="civillaw.com.cn/article/default.asp?id=51572#m2" name=2>[2]并认为，量刑建议权是指检察机关在刑事诉讼的最后一个阶段，根据案情向法院提出对案件的具体定罪量刑意见，以确定对被告的适当处理。 [3] WriteZhu('3'); href="civillaw.com.cn/article/default.asp?id=51572#m3" name=3>[3]
3.从诉权的角度定义。有观点认为，量刑建议权是指检察机关在刑事诉讼中就被告人所应判处的刑罚向人民法院提出建议意见的一种权力。 [4] WriteZhu('4'); href="civillaw.com.cn/article/default.asp?id=51572#m4" name=4>[4]并认为，检察机关量刑建议权是指公诉人在提起公诉或出庭支持公诉活动的过程中，根据犯罪的事实和情节，就被告人的量刑问题向法院提出具体意见的诉讼权力。 [5] WriteZhu('5'); href="civillaw.com.cn/article/default.asp?id=51572#m5" name=5>[5]
