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免疫学的定义范文1
【关键词】免费医学定向生；培养管理；激励引导
一、免费定向医学生的现状和特点
（1）免费定向生的特点。目前学校的奖惩制度，培养方式和学籍管理等等已经渐渐偏离了免费医学定向生的学习机制。再加上，他们大都是家境中低下成绩却尤为突出的学生，肩负着国家的期望，亲人的期望和社会的关注，因此对他们的培养社会各界都要求一定要保质保量的完成。但是他们本身对于医学专业的认知并不是很多，更多的人只是倾向于免费和毕业定向分配的关系才选择了这个专业。从而使他们自身对于医学的专注和热爱并不够浓厚，更不用说对自身的目标的培养和学习生涯的规划了。（2）免费医学定向生的管理现状。第一，对于本专业的不了解使得他们没有清楚地学业规划和学习目标。第二，免费医学定向生在进入学校的时候已经与国家签订相关的就业协议，使得他们心理上对学习的紧张出现了懈怠，无所谓等情况，严重影响了免费医学定向生的教育和培训质量。第三，免费医学生享有国家的补助政策和就业协议，但这是建立在学生顺利毕业的基础上。学校的学籍管理制度体现中，学生若是成绩偏差或者其他一些因素会直接留级甚至退学。这些因素使得学生无法履行就业协议，也就与国家培养免费医学定向生的目的相悖了。
二、为了保质保量的完成国家培养目标，提出以下建议
（1）制定全面的培养模式。针对免费医学定向生的特殊情况制定相应的培养模式和管理方式。这样才能对症下药，真正将学生教好。并针对可能出现的一些情况制定相应的配套措施。（2）全面教学，从一而终引导。为了完善学生学习的态度，必须从一入学开始就开设相应的专业引导课程。帮助学生树立正确的医学观。鼓励学生自主学习，引导学生找到学习医疗专业的欲望和兴趣。（3）对于学籍管理制度的改善。学生在校期间如果因为某些原因无法完成学业时，政府部分应该采取一系列的措施对该学生的情况加以弥补和改善。比如由该学生上报申请协议延后一年。在一年内完成留级任务或者由院方对该类学生进行严格的把关从而将其培养成卫生人才。或者鼓励校内学生积极报名，填补因为留级而落下的空缺。从而使得国家的工作计划不会被打乱。延后完成协议的或者无法完成毕业达成协议的必须退回相应的扶持培养的金额。（4）加强与学生的沟通和交流。在学习的过程中班主任以及专业老师都应该定期与学生进行心理沟通。及时了解学生近期内的生活和学习情况。减轻学生对老师的芥蒂和距离感，与学生做朋友。（5）建立免费医学定向学生培养机构。院方应该聘请专业的老师和班主任，有针对性的对学生进行教育和培养。并配合校方的指导根据学生本身的学习进展进行学习教程的编排和指导。对学生学习的课程进行监督、引导和修正。（6）鼓励学生社会实践。“纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行”。对于免费医学定向生来说，专业知识的了解和学习也只是纸上谈兵，并不能够应用到实际中去。学校可以在寒暑假鼓励学生参加医疗实践，让他们亲身体会到治病救人的整个过程以及意识到自己学识的深浅并不能够真正达到治疗的水平。让学生能够在实践中学习，更加巩固自己的医疗知识。另外，学校也可定期组织学生去各大医院义务服务，让学生早一点接触医疗机构，并在回来的时候上交实践感言。鼓励学生多多参加社会实践。
免费医学定向生的培养和管理并不是一日之功。他需要学校，老师，家庭和学生本身各个方面的努力和支持。严格制定相应的培养制度和管理制度，有针对性的给予学习上的鼓励和引导。帮助学生树立正确的医疗观，学习观。给学生最完善的学习保障，让学生学习没有后顾之忧。学校要建立一个完善的教育体制和激励机制，还需要在学生学习的过程中不断的修改和分析。根据学生反映的问题和出现的情况进行合理的改进制。只有这样，才能给免费医学定向生的培养一个坚实有力的基础，才能在不断的学习和管理中，培养一批精干的医疗队伍。
参 考 文 献
[1]李振宇，王金祥，刘洋.高等医学院校加强人文素质教育探讨[J].新乡医学院学报.2011（3）
[2]吴丹桂.医学本科生科研创新能力培养的探讨[J].西北医学教育.2009（5）
免疫学的定义范文2
【摘要】目的 探讨早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系的意义。方法 收集30例早产儿，留脐带血标记后进行分离、诱导、分化、扩增培养，培养前后监测早产儿脐血的CD3，CD4，CD8，CD4/CD8;IgG，IgA，IgM水平。结果培养前：CD3(60.32±5.67)%，CD4(24.88±5.02)%，CD8(18.43±4.07)%，CD4/CD8(1.25±0.25)%; IgG(62.67±5.57)g/L，IgA(1.16±0.36)g/L，IgM(1.20±0.20)g/L。培养后分别为(70.32±5.71)%，(58.88±5.21)%，(26.43±4.08)%，(2.01±0.25)%，(70.65±5.61)g/L，(1.82±0.37)g/L， (1.80±0.23)g/L。t检验， P均
【关键词】早产儿 脐血 干细胞 免疫
新生儿的免疫系统发育不成熟，功能还很不完善，早产儿更是如此。早产儿由于全身各脏器的发育不够成熟，皮肤表层薄嫩，脐部也是一个开放性的伤口，血清内补体含量低，白细胞的吞噬作用差，血浆丙种球蛋白含量低下，故对各种感染的抵抗力极弱，即使轻微感染也可发展成为败血症。如何增强早产儿的免疫功能已成为目前研究的热点。脐带血是指新生婴儿脐带在被结扎后存留在脐带和胎盘中的血液，含有大量的干细胞，是成体干细胞的主要来源之一，在适宜的体内或体外环境下可分化为免疫细胞，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子调节免疫反应 ，从而发挥免疫重建的功能[1]。由此我们进行了早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系的研究，现报告如下：
1 对象及方法
1.1 研究对象
收集30例早产低出生体重儿患者，男19例，女11例，胎龄28-34周，出生体重950-1995g，家属均签字同意接受脐血干细胞定向培养免疫体系的研究。
1.2 方法
产妇及家属对实验知情同意，实验经医院伦理委员会批准。早产低出生体重儿娩出后，立即断脐，消毒脐带侧，行脐静脉套管插管，脐带血借宫缩力及位差重力作用流入血袋内（内含ACD-B液），摇动混匀，直至无脐血流出为止。将采集的脐带血置于4～10℃冰箱中暂存。将采集所得单人份脐血50ml左右，于4h内，用1.077g/ml Ficoll-Hypaque液分离单个核细胞。吸取界面层白细胞洗涤，用IMDM培养液（加入体积浓度为20%的类标准胎牛血清）采用血细胞计数板调整至细胞浓度为2×108L-1。将调好浓度的细胞悬液置于24孔细胞培养板中培养。每孔加入细胞混悬液1ml。将此培养体系置于37℃、体积浓度为5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养7～1d。每4d补充等量的新鲜培养基。检测扩增效率：细胞培养24，48，72h吹打混匀各孔细胞悬液，取适量悬液MTT法测定细胞增殖率。以只加培养液的培养皿为空白对照。计算细胞增殖率。细胞增殖率=实验组A值/对照组A值×100%。培养前后监测早产儿外周血CD3，CD4，CD8，CD4/CD8;IgG，IgA，IgM水平。检查均在我院肿瘤研究所及检验中心进行。
CD3，CD4，CD8，CD4/CD8采用美国进口的流式细胞仪检测，仪器型号为COULTEREPICSXL，试剂由法国免疫公司提供。IgG，IgA，IgM应用透射比浊法，采用日本7170A型全自动生化分析仪检测，试剂由上海玉兰生物技术研究所提供。
1.3 统计方法
采用SPSS13.0统计学软件进行数据统计，用t检验比较差异性。
2 结果
2.1 T细胞亚群CD3，CD4，CD8，CD4/CD8比值
脐血干细胞定向培养免疫体系后较培养前升高(P
表1 T细胞亚群检测(%)(x±s)
2.2 免疫球蛋白IgG，IgA，IgM水平比较
脐血干细胞定向培养免疫体系后较培养前IgG，IgA，IgM均升高(P
表2 免疫球蛋白水平比较(g/L) (x±s)
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3 讨论
早产儿一般未接触过子宫外环境的各种病原，也没有接触过食物蛋白等种类繁多的抗原性物质， 早产儿的血清免疫球蛋白(Ig)中绝大部分为通过胎盘的母亲IgG，而自身IgG的合成能力低下，含量很少，而且出生后随着小儿的生长发育，血循环量的逐渐增加，IgG的浓度迅速下降。早产儿白细胞的生产及储备都比较少，当患有感染及严重疾病时，白细胞消耗增加，吞噬功能和杀菌活性都可能明显降低。早产儿存在着生理性免疫低下，全身各脏器的发育不够成熟，皮肤表层薄嫩，很容易擦伤引发感染；脐部也是一个开放性的伤口，细菌容易在此处繁殖并进入血液；血清内补体含量低，白细胞的吞噬作用差，血浆丙种球蛋白含量低下，故对各种感染的抵抗力极弱，即使轻微感染也可发展成为败血症[2]。
随着免疫生物分子学的开展，发现T淋巴细胞由于其功能和表面标志不同，分为6种不同的亚群，其中最重要的是诱导-辅T细胞(CD4)及杀伤性-抑制性T细胞(CD8)。CD4T细胞亚群能释放多种淋巴因子，如巨细胞移动抑制因子、细胞活化因子、趋化因子、淋巴毒素、皮肤反应因子等，使局部出现以单个粒细胞浸润为主的炎症反应;CD8T细胞亚群通过分泌T细胞因子即TsF，抑制CD4细胞功能。正常情况下，其在免疫应答过程中互相协调和制约，以形成适度的免疫应答，使之既能清除抗原性异物，又能不损伤机体组织。当CD4细胞功能低下或CD4/CD8低于正常时，机体免疫力下降，易发生感染;若CD4细胞功能增强、CD8细胞功能低下或CD4/CD8高于正常时，则机体易发生过强的免疫应答，引起过敏表现。所以在临床上经常检测患者外周血液中T细胞亚群或CD4/CD8比值，以帮助疾病的诊断或发病机制的研究[3]。本研究中早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系前CD4，CD8均低下，且以CD4低下明显，CD4/CD8亦低下，显示患儿细胞免疫功能是低下的。另外CD4细胞还分泌很多因子，如:IL-2，4，5，6，其中IL-4可刺激B淋巴细胞分泌抗体IgG，IgA，IgM等[2]。当CD4功能低下时，IL-4分泌也减少，则抗体IgG，IgA，IgM生成减少，所以早产儿的细胞免疫及体液免疫均低下，容易发生感染，并引起病情反复。
虽然每个婴儿脐带中只有少量的血，但这些血液中含有大量的干细胞，具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下可分化为免疫细胞，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子调节免疫反应 ，从而发挥免疫重建的功能。且来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性[4]。通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能，并且可避免免疫排斥反应。本研究显示早产儿脐血干细胞可定向培养免疫体系，改善免疫功能，为干细胞移植作好准备。
参 考 文 献
[1] Qiu L， Meagher R.， Herzig R.H， et al. Ex vivo expansion of CD34+ umbilical cord blood cells in a defined serum-free medium (QBSF-60) with early effect cytokines［J］. J. Hematotherapy & Stem Cell Res， 1999， 8(6): 609-618.
[2] 董永绥.儿科免疫学.特异性免疫和小儿特点[M].武汉:湖北科学技术出版社，1998，7-19.
免疫学的定义范文3
动机所涉及的是行为的能量和方向，是激发、维持、调节人们从事某种活动，并引导活动指向某一目标的内部心理过程或内部动力。大学生的入学动机将对他们后继的学习能力及行为发展产生不可忽视的影响。学习自我效能感也被称为学业自我效能感，是自我效能感在教育领域中的应用，是个人对自己是否有能力去操作学习行为的期望值。了解免费医学定向生的入学动机和入学后的学习自我效能感，对于提高医学教育水平和医学生的个人发展等都具有重要的意义。
一、方法
（一）对象
以257名免费医学定向生为调查对象。发出问卷325份，回收有效问卷257份，问卷有效率为79.08%。被调查对象的平均年龄为20.21±1.40。男生117人（45.5%），女生140人（54.5%）。
（二）工具
1.医学生入学动机调查问卷：共24个项目，包括个人特性、社会激励、他人影响以及就业职业。
2.医学生学习自我效能感调查问卷：共22个项目，包括学习能力自我效能感和学习行为自我效能感。
二、结果
（一）免费医学定向生入学动机的总体情况
在入学动机的四个维度中，按照得分由高到低顺利排列，依次是就业职业（3.40±0.68）、个人特性（3.29±0.61）、社会激励（3.19±0.56）以及他人影响（2.90±0.89）。
（二）免费医学定向生学习自我效能感的总体情况
总效能感的得分为71.49±10.24。133人（51.75%）的总效能感得分低于均分。学习能力自我效能感和学习行为自我效能感的得分分别为45.99±6.88、25.50±4.34。
（三）免费医学定向生入学动机和学习自我效能的相关情况
个人特性（r=0.444，P
（四）免费医学定向生入学动机对学习自我效能的回归分析
以个人特性、社会激励以及就业职业为自变量，以学习自我效能感为因变量，以通过ENTER回归分析发现，只有个人特性进入回归方程，B=7.96，β=0.47，t =7.19，P
三、讨论
免费医学定向生是一个将来定向在基层工作的医学生群体。医生工作的特殊性决定了人们对医生这个职业的要求非常高。客观地说，医学生学习与成长的过程相当艰辛。因此，他们不仅要保持积极努力的状态，更要不断克服各方困扰。拥有健康的入学动机并逐步提高医学生的学习自我效能感至关重要。本研究通过对免费医学定向生的入学动机和学习自我效能感问卷调查、数据整理、结果分析，得出初步结论，再通过相关分析和回归分析研究二者之间的关系。
本研究发现，影响免费医学定向生入学动机最主要的因素是就业职业。如今，大学生就业形势依然非常严峻。每年都有成百万的大学毕业生涌入社会，选择就业岗位。相对于免费医学定向生来说，他们的学费不用担心，就业也有保障。这最直接地反映了免费医学定向生的入学理由，体现了医学生将就读免费医学定向生作为今后生存的保障。
免疫学的定义范文4
[关键词] 化学发光免疫分析法；地高辛；血药浓度；测定
[中图分类号] R969.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（c）-0104-02
地高辛是从毛花洋地黄叶中提取的一种二级苷，是临床上应用于治疗心脏疾病的强心苷类药物之一，对急慢性充血性心力衰竭、室上性心动过速、心房颤动和心房扑动等病症的治疗效果明显[1-3]。但该药物的作用机制较为复杂，治疗指数不高，有效治疗的浓度范围较窄，且药动学和药效学在不同个体间差异较大，很容易导致中毒。另外有报道显示，地高辛中毒症状和药物剂量不足的临床表现较为相近，监测其血药浓度便显得至关重要[4-5]。本研究采用化学发光免疫分析法对地高辛血药浓度进行检测，旨在为临床监测提供不同的指导。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2011年全年来海南省人民医院行心脏疾病治疗的50例患者，对其进行地高辛血药浓度监测，其中男32例，女28例；年龄18～74岁，其中年龄>65岁者36例，45～65岁者11例，
1.2 仪器与试药
全自动化学发光免疫分析仪（罗氏），复合质控及地高辛诊断试剂均来源于Sigma。
1.3 测定方法
给予患者地高辛（国药准字H33021657，杭州民生药业集团有限公司），口服，剂量0.125 mg，每日1次。共计1周。待药物达到稳态血药浓度时，取末次服药12 h后的血样作为样本采用化学发光免疫法分析患者的血药情况。
1.4 疗效评定
参照《临床内科学》[6]及《实用内科学》[7]进行地高辛中毒症状的确定。
2 结果
2.1 地高辛血药浓度监测结果
参照《中国药典》2010年版二部规定，地高辛血药质量浓度以0.8～2.0 μg/L作为有效治疗范围。监测结果显示，有效治疗浓度范围内37例，占74.0%。具体见表1。
2.2 不同年龄地高辛血药浓度监测
结果显示，随着年龄的增大，血中地高辛的含量浓度出现增大的趋势，提示，可能与老年患者机体代谢弱有关。见表2。
2.4 患者的中毒情况
50例患者中出现中毒症状者9例（18.0%），其地高辛平均血药浓度为（2.41±0.20）μg/L，主要表现为心血管症状：房性传导阻滞、室性早搏、房颤、心动过缓、心肌梗死；消化系统症状：腹胀、腹泻、恶心呕吐，个别患者存在头晕、头痛、视物模糊等神经系统症状。
3 讨论
地高辛血药浓度常用检测方法主要包括放射免疫、酶联免疫吸附分析法、液相-质谱联用分析法、化学发光免疫，这些方法各有特点[8]。放射免疫分析法主要优势在于价格低廉、方法简单、结果可信且灵敏度较高，但由于其放射性污染较大，标志物半衰期短，检测周期长等使得该方法下的地高辛测定结果在动态观察时可比性降低，较难用于临床的即时测定[9]。液相-质谱联用分析法的检测结果较为准确，样品的预处理步骤较为简便，但所需孵育的时间较长，操作中人为干扰的因素占据大部分，酶的稳定性也会因温度、pH值等受到影响。液相-质谱联用分析法具有快速、准确等优点，其所需血量较小，高灵敏度及专属性，交叉反应发生率极低[10]。但由于该类仪器价格较为昂贵，维护费用极高，检测成本大，因此其临床应用受到限制。
本研究采用的化学发光免疫分析法，专属性极强。并且该方法标志物有效期长、试剂稳定性好、反应快速，利用磁场原理进行分离，全自动操作，即便是临床的大量样品，也能在较短的时间内完成，与其他强心苷类药物及内源性地高辛样免疫物质无交叉反应，与其他方法比较优势较为明显。报道显示[11]，有学者分别将不同溶剂的蟾酥提取物加到空白血清中和含微量地高辛血清中，用化学发光免疫法检测地高辛浓度，所测地高辛浓度与真值几乎接近。本研究结果显示，监测结果显示，有效治疗浓度范围内37例，占74.0%。随着年龄的增大，血中地高辛的含量浓度出现增大的趋势，提示，可能与老年患者机体代谢弱有关。具体分析如下：地高辛在体内的转化代谢量较低，较多的以原形由肾排泄，老年人由于其生理功能的特殊性，肾功能较弱，药物在机体内的清除率下降，半衰期延长[12]，导致血药浓度升高。另外，由于地高辛在体内与骨骼肌受体结合，老年人由于肌肉组织减少，相应的地高辛的受体结合量也下降，外周血药浓度随之升高。不同性别间各浓度分布比例差别不大，提示性别可能对地高辛的血药分布影响不大。50例患者中出现中毒症状者9例（18.0%），其地高辛平均血药浓度为（2.41±0.20）μg/L。
综上所述，地高辛安全治疗范围较窄，个体差异较大，年龄越大，体内药物浓度越多，易发生中毒。因此，针对患者的生理状况，结合临床表现及用药情况，合理调整给药方案及剂量。对于老年患者，应给予个体化的给药方案，减少不良反应的发生，以便寻求最佳的治疗效果。
[参考文献]
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免疫学的定义范文5
【摘要】 目的 构建细粒棘球蚴铁蛋白基因的重组表达质粒ferritin/pET-28a，表达、纯化出重组蛋白，并对重组蛋白的免疫学特性进行初步研究。方法 将目的基因亚克隆至表达载体pET-28a，转化入大肠杆菌BL21(DE3)plysS，加入IPTG对其进行诱导表达。通过Ni2+的His-bind树脂柱纯化出重组蛋白，用50μg/100μL免疫ICR小鼠，获得抗血清，通过western-blot及ELISA对重组铁蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果 表达并纯化出分子量约19kD重组铁蛋白，western-blot显示重组蛋白免疫制备的抗血清可识别纯化的重组蛋白及抗原囊液、原头蚴，位置大致相同，约19kD。ELISA结果显示实验组小鼠与对照组小鼠血清中IgG的OD值有统计学意义(P＜0.01)。结论 细粒棘球蚴重组铁蛋白Eg.ferritin具有较好的抗原性及免疫原性，具有成为包虫疫苗候选分子的潜能。
【关键词】 细粒棘球蚴；重组铁蛋白；纯化；免疫特性
铁蛋白(ferritin)是普遍存在于生物体内的一种保守性较高的多功能多亚基蛋白，其作用是储存铁，对生物体内铁含量进行调控，在生物体内铁含量过多时起到解毒作用［1-2］，它的存在保证了生命体的正常活动。本实验中心已构建了重组表达质粒ferritin/pGEX-6p-1，但由于重组蛋白ferritin/GST以包涵体形式存在于细胞中，无法通过亲和层析柱纯化出单一的Eg.ferritin［3］。只能通过切胶纯化的方法获得融合蛋白Ferritin/GST，虽然试验结果说明该融合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性，但影响蛋白特性的因素较多，不能很好的反映蛋白的实际特性，因此本次试验将铁蛋白基因重组到表达质粒pET-28a中，pET-28a是个高效表达载体，能纯化变性及非变性的蛋白，通过表达纯化可获得较纯的Eg.ferritin，以便更好地研究蛋白的特性，为铁蛋白能成为包虫病候选疫苗提供依据。
1 材料与方法
1.1 质粒与菌种 Eg.ferritin/pGEM-T/JM109及E.coli BL21(DE3)plysS由本室保存；pET-28a表达载体购自Novagen公司。
1.2 试剂 T4连接酶、限制性内切酶BamH I、Not I、IPTG、N'N'N'N-四甲基乙二胺、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Promega公司；β-巯基乙醇、二甲基亚砜、弗氏完全(不完全)佐剂、过硫酸铵、Tween-20等试剂购自于SIGMA公司；考马斯亮蓝购自BIOMOL公司；酵母提取物、蛋白提取物购自OXOID公司；蛋白预染Marker购自北京赛百盛；卡那霉素、TMB、4-氯-1-奈酚购自AMRESCO；羊抗鼠HRP-IgG、质粒DNA提取试剂盒等购自北京华美公司；DNA纯化回收试剂盒购自北京赛百盛生物有限公司；标准蛋白分子量Marker 购自中国科学院上海生物化学研究所；含Ni2+的His-bind树脂纯化试剂盒购自Novagen公司；其它常用试剂为国产分析纯。
1.3 实验动物 ICR小鼠，6～8周，(18±2)g，雌性，由宁夏医科大学实验动物中心提供。
1.4 Eg.ferritin/pET-28a重组质粒的构建及鉴定 取Eg.ferritin/pGEM-T/JM109菌株划板接菌［4］，并挑单个菌落进行培养，通过碱裂解法提取重组质粒；同时取适量的表达载体pET-28a，将两者分别用BamH I，Not I进行双酶切处理，用1%的琼脂糖凝胶电泳分离带有双黏性末端的目的片段和表达载体，切胶，经DNA回收试剂盒纯化目的片段及载体。目的片段与表达载体在T4连接酶的作用下，16℃连接过夜。继而将连接产物转化到已制备好的感受态菌BL21(DE3)plysS中［5］，经含卡那霉素终浓度为50μg/mL的LB固体培养基筛选阳性菌株［6］。挑取阳性菌株含卡那霉素的LB培养基中振荡培养，经质粒提取试剂盒纯化重组质粒，用限制性内切酶BamH I，Not I进行酶切鉴定。
1.5 重组铁蛋白的表达、纯化
1.5.1 重组蛋白的表达 将重组菌接种于含卡那霉素(终浓度为50μg/mL)的3mL 的LB培养基中，37℃ 200 r/min 振荡培养数小时，按1∶50接种于50mL培养基中，37℃，220 r/min，培养至OD600=0.5时，加入IPTG至终浓度为0.05mmol/L，继续振荡培养6h，4℃ 4000r/min 离心15min，弃上清，收集细菌沉淀，SDS-PAGE观察表达情况。
1.5.2 表达产物的鉴定 将样本与2×SDS-PAGE样本缓冲液混合，经12% SDS-PAGE，180V电压，电泳至溴酚兰指示剂到胶底为止，用0.2%考马斯亮蓝R250染色2h，用含7%冰醋酸5%甲醇的脱色液脱色至本底无色。
1.5.3 重组抗原的纯化及制备 对细胞进行裂解，发现重组蛋白以包涵体的形式存在，按照Novagen公司His-bind树脂纯化试剂盒说明书中的包涵体大量纯化方法进行纯化，然后将纯化好的包涵体蛋白放入透析袋中，用1×PBS透析去除尿素。
1.6 动物免疫及特异性抗血清的制备
1.6.1 动物免疫 ICR小鼠分两组，即免疫组与对照组，每组10只。1)免疫组每只注射弗氏佐剂与重组抗原Eg.ferritin的乳化剂50μg/100μL。对照组注射弗氏佐剂和PBS的乳化剂100μL。根据Bio-Rad公司的Gel Doc1000凝胶分析系统对纯化的抗原进行定量。2)免疫方法 每组小鼠在0、2、4周各免疫1次，共3次，第1次基础免疫用弗氏完全佐剂，以后2次为加强免疫均用弗氏不完全佐剂。采用背部皮下多点注射免疫，每次注射量为100μL/只。分别于0、2、4、6周断尾采血，共4次，8周眼眶取血并处死小鼠。
1.6.2 特异性抗血清的制备 将血液4000r/min 离心 10min，提取血清，-20℃保存。
1.7 血清特异性识别 纯化的重组抗原Eg.ferritin、天然可溶性抗原囊液、原头蚴通过10%分离胶及5%的浓缩胶，180V电压下进行SDS-PAGE电泳 1h。在30mA下对硝酸纤维膜进行印迹转移1h。然后将硝酸纤维膜浸入5%的脱脂奶粉溶液中，37℃ 封闭1h，以PBS-T(PBS中含0.5‰ Tween-20)溶液洗3次，每次5min。再将硝酸纤维膜剪开分别浸泡于1∶100稀释的Eg.ferritin免疫的特异性小鼠抗血清及对照组鼠血清中，4℃ 过夜。次日将膜用PBS-T溶液洗3次，每次5min，然后与1∶1000稀释的羊抗鼠IgG-辣根过氧化物酶(HRP)结合，37℃反应1h。再以PBS-T溶液洗4次，每次10min。加入新配制的底物液(6mg 4-氯-1-奈酚，2mL冷甲醇，10mL的TBS，12μL的H2O2)37℃显色5min，最后用蒸馏水冲洗终止反应。
1.8 抗血清中IgG的测定 采用ELISA法，用纯化的Eg.ferritin 5μg/mL包被酶标板100μL/孔，4℃过夜。次日，PBS-T洗3次，5％牛奶封闭100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗3次，取0～8周的免疫组及对照组小鼠血清作为一抗，按1∶100稀释，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，羊抗鼠HRP-IgG为二抗，按1∶1000稀释，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，加入显色剂100μL/孔，待对照孔显色时，加入2M H2SO4 50μL/孔 终止反应。以包被抗原及进行牛奶封闭的孔为空白调零，置酶标仪450nm波长处测OD值。
1.9 统计学方法 应用SPSS11.0统计学分析软件，采用两样本t检验的方法对测定的OD值进行分析。
2 结果
2.1 表达质粒Eg.ferritin/pET-28a的酶切鉴定
将构建的重组表达质粒Eg.ferritin/pET-28a 用限制性内切酶BamH I和Not I 双酶切后，经1％琼脂糖凝胶电泳检测到插入片断大小约560bp，与目的基因片段相符。M1.Lambda DNA/HindⅢMarker；1.pET-28a空质粒；2.Eg·ferritin/
2.2 Eg.ferritin 的纯化
含Ni2+的His-bind树脂亲合柱纯化Eg.ferritin/pET-28a表达的蛋白，经SDS-PAGE，根据标准蛋白分子量可知，纯化蛋白的分子量约19kD.
2.3 特异性抗血清识别纯化蛋白和天然抗原
纯化Eg.ferritin免疫小鼠制备的抗血清可特异性识别未纯化的重组Eg.ferritin，纯化的Eg.ferritin 及天然抗原(原头蚴、囊液)，识别蛋白条带的位置大致相同约19kD(见图3)。
2.4 小鼠血清IgG水平变化
根据对小鼠血清IgG水平在0～8周变化趋势的检测及对免疫组和对照组小鼠血清IgG的比较发现，小鼠血清中IgG的水平随着免疫次数及时间的延长呈上升趋势，免疫4周以后同一时期的免疫组小鼠血清中的IgG水平明显高于对照组(P＜0.01)。表1 两组小鼠免疫不同时间血清IgG水平变化
3 讨论
本实验将细粒棘球蚴铁蛋白基因重新克隆到表达载体pET-28a上，主要考虑：① pET-28a表达载体具有高效表达的能力［7］；② pET28a质粒在插入目的DNA后表达的蛋白N 末端含6个组氨酸，它作为His标签蛋白，可与Ni2+鳌合，使得重组融合蛋白在变性或非变性状态下均可被含Ni2+的His-band 树脂亲合柱纯化，即使被纯化的重组蛋白含量很低也能被有效地纯化出来。克服了本中心已经构建的重组表达质粒ferritin/pGEX-6p-1表达的重组蛋白ferritin/GST不能通过GSTTrapTMFF亲和层析柱纯化的弊端［3］；③重组蛋白是标签蛋白His和目的蛋白共同组成的融合蛋白，为获取目的蛋白，本应通过相应的剪切酶将标签蛋白剪切下来，但由于N-末端组氨酸所表达的蛋白分子量很小，它的存在不改变目的蛋白的活性，所以无须去除。这不仅能减少实验步骤，降低纯化蛋白在酶切过程中的损失，同时还可节省用来购买剪刀酶的费用，为后续研究提供了较好的实验材料。基于此我们得到了一个高效表达且易于纯化重组蛋白的基因工程菌株，并得到了较纯的重组蛋白，进行动物实验。通过实验说明Eg.ferritin作为抗原可诱导动物产生较强的的体液免疫应答，证明其有良好的抗原性；免疫血清与细粒棘球蚴天然抗原(囊液和原头蚴)的Western blot实验结果显示，免疫血清能够较好地识别天然抗原中位于19kD处的条带，说明Eg.ferritin具有较好免疫原性，由此推测中国大陆株细粒棘球蚴铁蛋白基因具有作为包虫疫苗候选分子的潜能，为进行重组铁蛋白对宿主的免疫保护性及保护性机制等方面研究的可能性提供了依据。
参考文献
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［3］ 王娅娜，赵嘉庆，丁淑琴，等.细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白基因分子克隆和序列分析［J］.宁夏医学院学报，2005，27(4)：253-255.
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［5］ FM奥斯伯，RE金斯顿，JG塞德曼，等.精编分子生物学实验指南［M］.第4版.北京：科学出版社，2005：27.
免疫学的定义范文6
[关键词] 反复呼吸道感染；免疫指标；微量元素
[中图分类号] R56[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2009）06（c）-011-02
Determination and analysis of serum trace elements and immune indexes of children with recurrent respiratory infection
PANG Yin
(Department of Pediatrics, the First People's Hospital of Ji'ning City, Shangdong Province, Ji'ning 272011, China)
[Abstract] Objective: To investigate the relationship between serum Zn, Cu, Ca, Mg and immune indexes of Children with recurrent respiratory infection (RRI). Methods: The level of serum Zn, Cu, Ca and Mg in 77 children with RRI were measured by atomic absorption spectrophotometry. Meanwhile, the relationship between deficiency of serum Zn, Cu, Ca and immune indexes of children with RRI was analyzed. Results: The level of serum Zn, Cu and Ca in children with RRI was significantly lower than that of normal control group (P
[Key words] Recurrent respiratory infection; Immune indexes; Trace elements
儿童反复呼吸道感染（RRI）是儿科呼吸系统常见疾病，与小儿因营养状况、环境污染、气候变化等因素造成的机体免疫功能状态异常密切相关，其中微量元素的缺乏与其相关性日益受到重视。为了探讨微量元素及矿物质与RRI患儿的关系，笔者2007年1月~2008年2月对77例RRI患者进行了血清锌、铜、钙、镁水平与免疫指标测定，细致地探讨了锌缺乏与RRI患儿免疫功能状态异常的关系，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
观察组77例均为就诊于我科门诊或住院患儿，按1987年4月全国呼吸道成都会议制定的诊断标准[1]确诊为RRI；正常对照组69例，为儿童保健门诊经全面体格检查无疾病的查体儿童，两组在性别、年龄等方面比较，无显著性差异（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1血样采集取被检者空腹静脉血2 ml，1 500 r/min，离心5 min后取血清待测。
1.2.2 实验仪器与分析采用上海精密仪器仪表有限公司出产的WFX-110A原子吸收分光光度计，血清用去离子水稀释适当倍数，用空气-乙炔火焰原子吸收分光光度法分别测定锌、铜、钙、镁，数据自动打印。免疫球蛋白（IgG、IgA、 IgM）测定采用定向扩散法；T淋巴细胞亚群（CD3、CD4、CD8）测定采用SPA法。
1.3 统计学方法
数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 11.5软件进行统计分析，两样本均数比较用t检验，组间差异用方差分析，P＜0.05表示有显著性差异。
2 结果
2.1 血清锌、铜、钙、镁含量测定结果
77例RRI患儿血清锌、铜、钙、镁含量测定结显示，RRI患儿血清锌、铜、钙均有不同程度的降低，与正常对照组比较，有非常显著性差异（P0.05），见表1。
2.2 RRI患儿血清锌、铜、钙、镁含量与免疫指标的关系
经过对RRI患儿血清锌、铜、钙、镁含量与免疫指标检测结果的比较发现，血清铜、钙、镁含量与免疫指标水平变化比较，无显著相关；而血清锌的含量变化与免疫指标水平变化有着密切的关系。观察组RRI患儿与正常对照组比较，免疫指标水平部分降低，而低锌患儿较锌正常对照组免疫指标低下更显著（P
3讨论
微量元素及矿物质与儿童反复呼吸道感染的发生关系密切，本研究主要探讨微量元素锌、铜、钙、镁与RRI的关系，结果提示，RRI患儿血清锌、铜、钙水平明显低于正常儿童，而血清锌的降低对免疫指标的影响更大。
在人体内，锌是具有广泛生理作用的微量元素之一，它可以参与许多重要的生理过程，能影响细胞分裂、生长和再生[2]。锌可以影响免疫系统的调节，明显的锌缺乏可以抑制T细胞的增殖和分化，从而引起T细胞功能损害。有资料表明，锌缺乏患儿的淋巴细胞转化率低于正常，锌不足还可以引起胸腺素活性降低，而胸腺素被认为是人体缺锌的灵敏指标。目前锌缺乏引起的胸腺素活性降低被认为是免疫紊乱的首要原因[3]。
从免疫学指标检测结果对比来看，RRI组患儿IgG较正常对照组明显降低（P0.05），说明严重缺锌不仅造成体液免疫功能低下，而且可以影响人体细胞免疫功能状态，造成人体细胞免疫功能低下。此外，锌缺乏可以促进细胞凋亡，这主要通过防止钙离子内流来实现，反复呼吸道感染时的呼吸道黏膜损伤[4]、纤毛运动障碍是否与其有关，有待进一步研究。
本研究在对RRI患儿血清锌进行检测的同时，还对患儿血清铜、钙、镁三种物质水平进行了测定，并对其变化与免疫学指标检测结果的变化进行了对比分析，结果发现，血清钙、铜在RRI患儿中也有降低，其中钙较明显，但没有锌显著，且与免疫指标水平变化的相关性不大。血清铜也是体内多种酶的构成成分，并在氨传递中起着重要作用。铜缺乏将出现氨传递异常，进而导致转铁蛋白功能受损，引起缺铁性贫血[5]，这也可以解释本研究中发现的缺锌伴随缺铜的患儿病情更易反复且难以控制。
RRI患儿上述快速微量元素及矿物质缺乏均无特异性，不进行微量元素（主要是血清锌、铜、钙、镁）含量测定很难确诊。所以根据本研究结果，笔者建议对于RRI患儿常规检测上述微量元素，一旦发现缺乏，应及时补充，同时加强营养治疗。
[参考文献]
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[2]马丽英,李云,张永亮,等.锌缺乏和锌过量对培养长骨细胞周期和细胞凋亡的影响[J].营养学报,2000,22(2):109-112.
[3]吴水冰,白家驷,午嘉惠.摄入高剂量锌对大鼠免疫指标的影响初探[J].微量元素与健康研究,1995,12(1):5-8.
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