微生物培养基报告范例6篇

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微生物培养基报告

微生物培养基报告范文1

方法:在对微生物检验中,探讨培养基的相关配制、灭菌、性能测试、无菌试验和储存等方面,探讨微生物检验中培养基质量的控制对策。

结果:在微生物检验中,培养基配制所用的容器选用玻璃或者不锈钢等制品较合适,采用离子交换水和蒸馏水;在对培养基进行灭菌的前后要对pH值进行测定;在自行对培养基进行配制的过程中,要严格按照标准规定,对每次的支配做好详细记录;用于配制培养基的电子天平或者酸度剂要每年都进行检定。

结论:微生物检验中要保证对培养基治疗的控制,采取相应的控制对策,才能够保证微生物检验的可靠性和准确性。

关键词:微生物检验培养基质量控制

【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1008-1879(2012)11-0026-02

培养基为微生物的生长繁殖或者积累代谢等提供了所需的营养基质,也是微生物检验工作的基础,微生物检验中最重要的工作环节就是培养基的使用和配制。培养基的配制是否合格,对微生物的鉴定、分离、生长和检验的结果起到很重要的作用,因此对于培养基质量的控制是至关重要的。但是随着商品化的发展,成品培养基和干燥培养基也在迅速发展,由于行业的设备和生产工艺较落后,对于培养基质量控制的方法不够健全,加上市场的监管薄弱,这些因素都严重影响了培养基的质量。保证实验室的环境能够适应培养基的配制,让培养基的质量得到有效控制。现在对控制微生物检验中培养基的质量控制对策进行探讨,报道如下。

1资料和方法

1.1一般资料。自制培养基要严格按照处方的要求,培养基的成分中大多数是生物制品,不同批次产品在质量上也存在差异性,因此要对处方的要求做好详细的记录,注意成分的添加顺序,能够保证分装灭菌前各成分之间能够互溶或者完全均匀。在对微生物检验中,探讨培养基的相关配制、灭菌、性能测试、无菌试验和储存等方面,探讨微生物检验中培养基质量的控制对策。

1.2方法。

1.2.1为了防止离子混入培养基,对微生物的生长造成影响,配制培养基的容器不适合选用铁或者铜,培养基的含铜量不宜超过0.3mg,否则不利于细菌的生长;培养基中含铁量不宜超过0.14mg,否则对细菌毒素的产生会起到妨碍作用。培养基配制所用的容器选用玻璃或者不锈钢等制品较合适,玻璃器皿选择中性硬料的玻璃,防止培养基酸碱度受到影响。

1.2.2对培养基的用水进行配制,应该选用离子交换水或者蒸馏水,因为二者不含杂质。自来水或者井水里面钙和镁等元素的含量较多,经过高压灭菌之后易出现沉淀现象,不符合配制培养基的质量要求。对培养基的pH值进行校准,微生物正常的生长代谢离不开合适的pH值范围。不同的微生物需要的pH值不同,因此在配制的过程中要注意对培养基的pH值进行校准。培养基要求的pH值是经过高压灭菌后的值,经过灭菌后培养基的pH值会下降,能够对pH值进行更好的掌握。

1.2.3培养基一般会采取高压蒸汽式灭菌,按照厂家提供的要求进行灭菌,对已经配制的培养基要立即进行灭菌,避免微生物繁殖消耗养分,让培养基的酸碱度得到改变。自行对培养基进行配制时要严格按照规定标准进行,对每次的支配做好详细记录,能够在出现问题时,通过这些资料对问题原因进行追查。如果使用的是商品培养基,在购买的时候要向通过认证的厂家所要相关检测报告。商品培养基的配制采用的标准要根据使用的目的进行选择。

2结果

在微生物检验中,培养基配制所用的容器选用玻璃或者不锈钢等制品较合适,采用离子交换水和蒸馏水;在对培养基进行灭菌的前后要对pH值进行测定;在自行对培养基进行配制的过程中,要严格对每次的支配做好详细记录;用于配制培养基的电子天平或者酸度剂要每年都进行检定。

3讨论

做好对培养基的灭菌和无菌试验,对于容器较大的培养基,在灭菌时间上要进行适当的延长。对于特殊的培养基,要按照要求进行高压灭菌,高压后进行迅速冷却,避免因为长时间保存影响到营养成分。对灭菌有不同要求的培养基不能够集中灭菌,做好灭菌记录,不能够进行重复式的高温灭菌。对于配制好的培养基,要进行无菌试验,保证灭菌的效果。如果配制大量的培养基,可以采取抽样的方法进行无菌试验,对样本进行观察,没有细菌生长的培养基才能被使用。即使之前做过无菌试验,但是在接种样本时,要对液体培养基的颜色、是否有长菌、有没有脱水干裂的现象进行观察。

对培养基的性能进行测试和贮存,基础的培养基细菌的生长要发育良好,而且能够充分体现出细菌的特征。在对培养基进行选择上,应该选择已知的阳性和阴性菌进行接种培养,保证应该有的一些生化反应的能力。对于商品培养基,没有开封的保质期应该为2到3年,已经开封的保质期为6个月,商品培养基要贮存在阴凉干燥的环境下,避免有强烈的光直射,对于已经过期的培养基进行排除,成品培养基不适合放在冰箱里贮存,应该在保质期时间内使用。灭菌之后的培养基保存的有效期不同,不能够做统一的规定。灭菌后不可以立即就使用,要避光,在干燥的环境下保存。

微生物检验工作的基础就是控制好培养基的质量,关系到检验工作的可靠性和准确性。每年请专业的机构对配制培养基所用的酸度计和电子天平进行检定,对培养箱、高压灭菌器和无菌室紫外线的等进行定期的检查,预防因为忽视环节而导致培养基出现质量问题,让微生物的检验偏离了科学性和客观性。培养基的质量问题能够直接影响到微生物的检验结果,因此要保证对培养基质量的控制,避免出现检验误差。采取相应的控制对策,才能够保证微生物检验的可靠性和准确性。

参考文献

[1]姜海燕.浅谈微生物检测中培养基的质量控制[J].中国现代药物应用,2011,58(01):58-59

[2]张新秀.浅谈微生物检验培养基的质量控制方法[J].医学信息(上旬刊),2011,73(02):73-74

微生物培养基报告范文2

[关键词] 微生物学检验;方法学验证;中国药典;食品安全

[中图分类号] R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)33-0069-02

目前我国食品卫生在保证保健(功能)食品的安全方面,普遍采用的是微生物学检验,按照我国目前的食品卫生管理条例[1],我国保健食品卫生应该采用微生物学检验,因此,为了全面了解国标(GB/T4789—2003)[2]方法验证食品卫生微生物学检验是否具有合理性,研究人员依照《中国药典》(2005年版)[3]微生物学验证的相关要求入手研究,采用大肠杆菌和枯草杆菌在培养基里培养实验并且采取微生物检验方法,对我国生产的一些保健食品进行验证,其中包括各种型号的口服液、药丸、冲剂等等,来探讨保健(功能)食品卫生微生物学检验方法的重要性。通过几种实验的方法,有力地说明采用我国医药国家标准存在不完善的地方,同时对此提出一些合理的建议。

1 实验材料

1.1 实验样品

牙周康胶囊、感冒软胶囊、绅宁宝胶囊、天丹通络胶囊、斯达舒胶囊、白伺丸胶囊、天然培旦陛牌70无蜡蜂胶液、复方芦荟胶囊、清热暗疮胶囊、消炎灵胶囊、独一味胶囊、糖尿乐胶囊、植物降糖胶囊、蝮蛇木瓜胶囊、坤复康胶囊、京都念慈庵灵芝蜜、头孢地尼胶囊。

1.2 实验用培养基

实验用培养基包括酵母膏、葡萄糖培养基、高氏合成一号琼脂、酵母膏、蛋白胨琼脂、醋酸菌培养基、营养肉汁琼脂、固氮菌培养基、玉米粉培养基、乳酸菌培养基Ⅱ、蛋白胨。

1.3 实验用菌种

实验用菌种包括大肠杆菌、沙门氏菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、福氏志贺氏和乙型溶血性链球菌。

2 实验方法及结果

2.1 制备实验用菌液

①先取在36℃环境中培养过的大肠杆菌、枯草杆菌、黑曲霉菌、福氏志贺氏肉汤培养物各3 mL,适当加盐水20 mL,以20倍稀释至(100~200)cfu/mL,用作活菌计数使用[4]。②在26℃环境温度培养19~23 h的白色念珠菌,再取其改良马丁培养液2 mL,缓慢加盐水20 mL,20倍稀释到(100~200) cfu/mL,用作活菌计数使用。③在26℃环境温度培养黑曲霉菌培养物1周左右,然后缓慢加盐水4~5 mL,吸取出黑曲霉菌的菌液,用标准比浊管比浊,当菌液浊度一定时,再取2 mL适当加盐水20 mL逐管20倍稀释至(100~200)cfu/mL,用作活菌计数来使用。

2.2 制备实验用供试液

标准称取样品26 g,适当添加0.15%的氯化钠稀释到230 mL,制成1∶10供试液。

2.3 验证酵母菌和霉菌数计数方法

①采用常规法 取先前配好的1∶10的供试液2 mL,在培养基上分别接种6株菌株60~80 cfu,然后再加16~22 mL的琼脂培养基,等供试液凝固后再放置到规定的条件下培养,然后记录实验结果并且计算菌株的回收率,回收率的计算公式为:S=(W-H)/D*100%。S为加菌回收率,W为实验组的平均菌落数,H为供试品对照组的菌落数,D为液组的平均菌落数。②采用培养基稀释法 每个容器加入供试液0.3 mL,然后接种试验菌株60~80 cfu,过30 min再加上琼脂培养基18~22 mL,等培养液凝固后将其放置在规定的环境下培养。然后记录实验结果并且计算菌株的回收率,菌株的回收率计算公式跟上面采用常规的方法一样[5,6]。

2.4 验证控制菌检查方法

保健类食品通用标准(GB-16740)中明确规定:保健菌应对大肠杆菌[CMCC(B)44102-22]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003-22]、溶血性链球菌[CMCC(B)32210-20]、志贺氏菌和沙门氏菌[CMCC(B)50094]等进行检验。分别取≤100 cfu/mL的菌悬液1 mL加入相应的检验对象的培养基中进行阳性对照,同时应设立不加有阳性菌的菌培养基作为实验对照组与阴性菌作为对照,特别注意的是要对供试品进行验证检验,确保其对检验结果无任何影响[7]。

2.5 实验结果分析

鉴于我国的保健食品微生物污染问题比较突出,而植物降糖胶囊按国标的方法检验菌落数为0,但是采用薄膜稀释却为6000,检测结果千差万别,所以有些保健产品在控制菌检查过程中存在漏检、误检。这就充分说明了我国目前采用的方法验证是不完善的。

2.6 实验的注意事项

2.6.1 对检验人员的素质要求 保健功能的食品微生物检测的工作中充满了实验性,食品微生物检验工作中对仪器和设备的标准也是非常多的,同时仪器和设备的正常运行也是检验工作能够顺利完成的必备条件。因此工作人员在实验室中的仪器设备进行安装、调试、检验和使用过程中都应严格按照规章制度执行,并确保所处环境符合要求。良好运行仪器和设备的同时还应注意对其进行保养,检验人员应定期进行检查和维修,并在使用的过程中应做好监测、维修记录,尤其要注意对仪器和设备的使用年期。

2.6.2 对仪器设备的要求 在食品微生物检验的过程中要保证所有药品、试剂、培养基等符合要求,其药品和试剂的纯度必须在AR级以上,同时药品和试剂的提供厂家必须具备专业素质,确保药品和试剂等符合相关的质量标准,同时在储存过程中应注意防潮、防结块等。

溶剂使用过程中应注意:①溶剂的选取必须符合相关标准。②根据不同试剂的性质不同,应选择不同的盛装容器,对易挥发的试剂选择的试剂瓶必须要带塞,具有易分解性的试剂应选用深色试剂瓶,其中棕色瓶最佳。③对变质溶液应立即停止使用。培养基在配制过程中应注意:①必须在指定的容器中完成培养基制备工作。②培养基的配制过程中应严格按照检验项目的规定进行,不得随意更改药物的剂量。③配制培养基的水使用蒸馏水最佳。④配制培养基时应注意对pH值的调整,不同微生物的pH值情况不同。⑤注意培养基的存放工作,温室条件下的有效期为2周。⑥为了确保使用的培养基符合要求,在使用之前应做无菌培养试验和效果实验。

3 保健食品微生物检验质量及意义

目前,致命菌和微生物引起的安全问题被认为是最重要的食品安全问题。据了解每年发生食物中毒的多达200万人,主要由于食物不干净或者食物中有害的微生物所导致的,因此对食品进行微生物检验是十分必要的。

3.1 食品微生物检验内容

食品微生物的检验主要是指对食品污染程度指示菌检验和食品中致病菌的检测。其中污染程度的检测主要是指食品及生活饮用水的污染程度,方法有两种:①在一定条件下培养食品及饮用水的样本,检验其含细菌菌落个数。②根据人类或畜生的粪便中的大肠杆菌在一定的存活环境,它能发酵乳糖、产配、氧气的革兰染色阴性无芽孢杆菌,根据粪便污染指标来评定生活食品及饮用水的卫生质量。食品中的致病菌包括金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌等,因此也应明确该类微生物的数量[8]。

3.2 实验设施及环境

无菌实验室的建设应符合GB19489的规定,特殊设备应放置在特殊环境下,应符合无回路的原则,在时间和空间上有效隔离各种检测活动,确保检测样品的完整性,同时按操作规定程序应采取预处理措施。

通过以下方法可以有效地减少污染:①紫外线消毒法:用220 V、30 W的紫外线灯垂直照射在1 m高度处,辐射强度应高于70 μW/cm2,确保每立方米不少于1.5 W的紫外线光。②臭氧消毒法:在无人条件下,采用20 mg/m3浓度的臭氧作用30 min以上,使无菌室保持封闭状态,在臭氧浓度≤0.2 mg/m2时再恢复作业。③物理方法:无菌室内应具有光滑的墙面、防滑地面并且墙、地、天花板间应有弧度连接;避免人为差错的出现;防止异物或有毒害物质及微生物污染食品,实行全过程质量监控管理方式[9]。

3.3 生产过程中食品质量的控制措施

①在食品生产过程中应明确控制点、控制限值、监控对象、错误补救措施,不断摸索生产过程中的质量和卫生关键,将关键点做好记录。②生产人员和机械设施应具备对生产环境的适应能力,准确地控制生产过程中关键的环境温、湿度和空气净化程度等指标,适时进行检测并提供报告。③做好审核工作,产品质量监管部门应对产品进行抽查审核,对审核不合格的产品返工重新生产等。同时在生产过程中出现的异常情况应及时做好记录并报告产品监管部门,产品管理部门应对不同的情况进行必要的调查并记录等处理。

3.4 保健食品微生物检验的意义

目前我国保健食品微生物中存在的污染问题日益显著,我们曾经对22中品种的保健品按照GB/T4789-2003食品卫生微生物学检验方法进行检验,发现不合格率已经达到了10%以上。检验结果显示出我国保健食品安全存在很大的问题,检测过程中统计检测结果发现,主要存在菌数超标、致病菌检测不合格的现象。由此可知对保健食品产品的方法验证是十分必要的[10]。

4 总结

通过以上实验,采用传统方法对菌株在培养基中培养模拟保健食品的受微生物污染计数,可以得到以下结论:依据国家建议的保健食品卫生微生物检验方法,与采用培养基稀释法来对保健食品受微生物污染的检测存在很大差别,这就是说目前我国采用的国家标准存在缺陷,从保健食品的安全考虑,应该在食品生产最后阶段添加一项确认保健食品卫生微生物检验方法的有效性工作,确保保健食品没有受微生物污染,以此提高保健食品的质量级别。

[参考文献]

[1] GBl6740-1997. 保健(功能)食品通用标准[S]. 1997.

[2] GB/T4789. I~4789.31~2003,食品卫生微生物学检验[S]. 2003.

[3] 中国药典[S]. 一部,2005:附录X.

[4] 刘如玉,陈守涛. 黄连等8种中药对常引起医院内感染的条件致病菌体外抗菌活性检测[J]. 福建中医学院学报,2004,14(2):26-28.

[5] 苏德模,马绪荣. 药品微生物检验技术[M]. 北京:华龄出版社,2007:3.

[6] 王翠蓉. 薄性康药膜微生物限度检查方法的建立和验证[J]. 中国药事,2008,22(1):74-76.

[7] 肖海龙,钱枫,罗有福,等. 食品微生物检验方法间一致性评价及分析[J].中国卫生检验杂志,2009,(2):58-60.

[8] 宋认,丁绪亮. 中药大辞典[M]. 上下册. 北京:人民卫生出版社,2001:334-336.

[9] 贺燕丽. 中国保健(功能)食品的现状与发展[J]. 中国经贸导刊,2010, (15):45-46.

微生物培养基报告范文3

全自动菌落计数/分析仪激发微生物快检全新创新应用

迅数自动菌落计数仪/分析仪(图1)结合常规微生物培养基,只需操作PC,一台仪器即可实现8大创新应用。

菌落总数的自动计数

在菌落自动计数方面,仪器可以处理传统的倾注法平板,涂布法平板,也可以处理螺旋接种平板和滤膜法平板;这项功能可以促进环境卫生、食品安全检验中“菌落总数”测定项目的自动化实施。自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒,最小可以分辨的菌落直径可达0.01mm:可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境,计数误差控制在10%以内。“迅数”是采用最多的自动菌落计数仪品牌。

显色培养基致病菌菌落自动计数

2010年国家颁布了新标准GB4789.3-2010《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。标准中的第2法――大肠菌群平板计数法,最少只需42小时即可得大肠菌群数。新标准中的大肠菌群平板计数法分两步:VRBA平板计数和BGLB肉汤管复发酵证实。第一步:VRBA培养基培养后,对平板上大肠菌群的典型菌落进行计数,计数的要求是:选取菌落数在30~150的平板,计数典型大肠菌群菌落――“紫红色,有沉淀环,且直径不小于0.5毫米”的菌落。第二步:证实实验,然后将证实实验中的阳性管比例数乘以上一步计数的菌落数,再乘以稀释倍数,即得每克(或毫升)样品中大肠菌群数。

迅数全自动菌落分析仪在GB 4789.3-2010上的快速计数应用:迅数仪器的自动菌落计数能力可帮助实验人员快速准确选取“菌落数在30~150的VRBA平板”;利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件,迅数菌落仪能迅速识别“紫红色,有沉淀环,且直径不小于0.5毫米”的大肠菌群菌落,只需1秒就计算出大肠菌群典型菌落数,实现大肠菌群计数的快速检验。

螺旋接种螺旋平板自动计数

螺旋接种平板计数方法是美国FDA从上世纪80年代开始采用,中国SN行业标准“食品和化妆品中的菌落计数检验方法――螺旋平板法”,于2009年2月1日正式在全国实施。仪器“螺旋接种平板分析模块”根据美国FDA螺旋计数法则和中国SN标准指导进行螺旋平板的自动分析计数。如果企业购置螺旋接种仪,将不必再重复购置螺旋菌落分析仪。

培养基质控检验/菌落形态分析

仪器的菌落形态分析功能可以自动完成对平板上所有菌落的形态分析(直径、面积、圆度等)和直径分布统计,帮助微生物实验室进行培养基质量控制的生物评价(如生长率实验、菌落平均直径/标准偏差计算等)。中国药品生物制品检定所培养基室从2004年底就开始使用迅数菌落仪做培养基质量控制。3M Petrifilm细菌总数测试片自动分析计数

3M Petrifilm测试片法是2008年进入国家标准的菌落总数测定新方法,受到基层食品微生物实验室的极大欢迎。迅数G型菌落分析仪一机多用,支持最新食品卫生微生物学检验国家标准GB4789-2008中“3M Petrifilm细菌总数测试片”的自动分析。

微生物限度检查滤膜平板自动计数

自动完成限度检查实验中滤膜法平板和培养法平板的菌落计数工作,并保留原始实验图象作为最完整的实验记录保存。

管碟法/纸片法抑菌圈自动测量

对管碟法/纸片法平板上的任意位置、多个抑菌圈的自动测量,准确、客观、重现性高。

效价测定:仪器在完成抑菌圈自动测量的基础上进行抗生素的二剂量法生物效价测定。

抗生素残留测定:在抑菌圈自动测量的基础上进行抗生素残留量测定。

药敏分析:仪器在完成抑菌圈自动测量的基础上与自带内置美国CLSl的纸片扩散法(KB法)抗微生物药物敏感性判别标准数据库进行比对,自动完成待测菌的药敏特性判断。

β-内酰胺酶类药物(金玉兰酶)检验:迅数“抑菌圈测量”模块对单碟(每碟含4-12个抑菌圈)测量时间小于1秒,可在自动完成平板上多个抑菌圈准确测量的基础上结合报告“β-内酰胺酶类药物检验结果阳性或阴性”的卫生部新标准规定,轻松实现舒巴坦敏感β-内酰胺酶类物质是否存在的自动化分析。

环境和测试用水质量控制

环境监测:空气、水,实验台表面等的细菌数量定量和实验平板图片保存;

消毒监测:检验手和高压消毒物品的消毒灭菌效果的细菌定量;

测试用水质量控制:支持对含低量微生物的水样进行微生物定量的滤膜法平板计数。

菌落计数器的应用缺点分析

目前,大多数实验室仍采用传统的肉眼结合菌落计数器的计数方法,即借助放大镜的观察,用计数笔点击每一个菌落,计数器计数每一个点击产生的压力电子脉冲得出总数。该方法有以下几大缺点:

识别和记数错漏:所有的计数都依靠对压力脉冲产生次数的记录,不同人员的操作产生的压力不同就难免产生漏记,而且计数的结果也因操作人员对菌落的识别经验不同而产生差异,系统偏差较大。

标记和修正不便:肉眼计数和菌落计数器计数都依靠计数笔在被统计的菌落上留下墨水笔迹来进行标记,因此在存在密集菌落的情况下就标记不便,而且发现误统计时需擦去墨水痕迹导致修正不便。

效率低下:肉眼计数和菌落计数器计数都需要人工用肉眼识别每一个菌落,因此一旦样品较多就会耗费大量的时间,影响研究或是结果报告的效率。

原始结果无法保存:在做完统计后,留下了一个统计数字,而对记录和验证实验结果很重要的培养平板表面菌落生长状况却因为平板的洗掉而无法保存。

菌落计数/分析仪的应用优势

菌落计数/分析仪器的原理是将获取的菌落图片数码化,根据菌落目标和培养基背景间的偏差(颜色和亮度差异)所显示出的数学表达不同,将目标从背景中智能识别出来。

“人工计数模式”保留了菌落计数器的工作原理和工作方式:替代菌落计数器的放大镜软件可以对获取图象做任意比率放大,观察更轻松;替代菌落计数器的压力脉冲计数笔仪器可以让我们用鼠标点击留下标记来替代脉冲笔点击留下墨水点,计数更轻松更准确更卫生;仪器计数完毕自动生成报告。

微生物培养基报告范文4

[关键词] 纯化水;微生物限度检查;薄膜过滤法;检验量

[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2017)06(c)-0004-03

[Abstract] Objective To establish a more scientific and reasonable purified water microbial limit test method. Methods Membrane filtration method (sample quantity: 1 mL and 10 mL) were used to do the test, and nutrient agar, rose bengal agar medium, plate count agar and R2A medium were used to demonstrate the microbiology separately. Results Membrane filtration method (sample quantity: 10 mL) and R2A were better than the routine method and the other medium with a much higher occurrence of total aerobic plate count. The detection rate was 1-2 times higher than the rate of other method and medium. Conclusion The selected testing sample quantity and culture medium are optimal, and the optimized test method will reflect the real quality of the purified water. The study will provide support for the testing improvement and quality control level.

[Key words] Purified water; Microbial limit test; Membrane filtration method; Sample quantity

《中国药典》2010版、2015版纯化水微生物限度检查中要求使用薄膜过滤法进行检查[1-2],但未对薄膜过滤法的检测量等进行明确规定。目前常被采用薄膜过滤法检验量1 mL。已有研究表明,薄膜过滤法1 mL和平板计数法1 mL两种方法的检测结果一致,无明显差异[3],可见采用1 mL检验量并不能体现薄膜过滤法的优势。故薄膜过滤法1 mL的检测方法符合性、严谨性不够。

《欧洲药典》[4-5]、《美国药典》[6-7]和《英国药典》[8-9]对纯化水检测方法有不同的规定和侧重点。目前,大部分出口欧美市场的制药企业,均会按照目标出口国的国家药典要求进行纯化水检测,但对于这些检测方法的样品检验量,国内未见研究[10]。

本试验在分析2010~2012年三个年度纯化水微生物限度检测报告的基础上,拟以自制纯化水为研究对象,基于中国和欧美药典的方法,对比研究了不同方法和培养基的检测效果,明确了最佳检验量,同时明确了更灵敏的培养基,建立了更科学的纯化水检测方法。该方法的建立对于提高纯化水微生物限度检查的有效性、真实性和简便性具有重要的现实意义,并与国际标准接轨。

1 材料和设备

1.1 材料

纯化水(石家庄以岭药业股份有限公司)。

1.2 试剂及培养基

氯化钠(天津大茂化学试剂厂);磷酸二氢钾(天津科密欧化学试剂有限公司);磷酸氢二钠(天津博迪化学试剂厂);蛋白胨培养基(北京三药科技开发公司);营养琼脂培养基(缩写NA,北京三药科技开发公司);玫瑰红钠琼脂培养基(缩写RBA,北京三药科技开发公司);平板计数琼脂培养基(缩写PCA,青岛海博生物技g公司);酵母蛋白胨葡萄糖琼脂培养基(缩写R2A,青岛海博生物技术公司,德国默克)。

1.3 设备

TW-STV3A型薄膜过滤器(瑞安市图班生物技术设备),XGL.GWX-0.36B型脉动真空蒸汽灭菌器(山东新华医疗器械),FD240型干热灭菌烘箱(德国宾德),S20K型pH计(梅特勒-托利多仪器),PL202-S型电子天平(梅特勒-托利多仪器),AVC-4A1型垂直净化工作台(安斯克生物技术设备公司,ESCO),BD240型恒温培养箱(德国宾德)。

2 实验方法

2.1 检验量的对比研究

分别取1 mL和10 mL的纯化水,采用《中国药典》2015年版(CP2015)四部中的薄膜过滤法进行其微生物限度检查[2]。

取少量pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入过滤杯中,以湿润滤膜。湿润滤膜后取10 mL或1 mL纯化水样及20~30 mL的pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,过滤,取出滤膜,薄膜菌面朝上,分别置于营养琼脂培养基和玫瑰红钠营养琼脂培养基表面,细菌35℃,培养3 d,霉菌/酵母菌23℃,培养5 d[2](作者已按照企业操作规程对该方法进行方法学验证)。菌落计数器计数。

2.2 培养基检测效力的对比研究

采用《美国药典》USP-38(USP38)、《欧洲药典》EP7.0(EP7.0)、《英国药典》BP2015(BP2015)和CP2015中规定的薄膜过滤法[4,6,8],设定检测量为10 mL,分别使用营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、平板计数琼脂培养基PCA和R2A培养基进行检测培养。具体操作方法同“2.1”项下方法,取滤过后薄膜,分别置于营养琼脂培养基、玫瑰红钠营养琼脂培养基、平板计数培养基和R2A琼脂培养基的平板表面进行培养,计数。

3 实验结果

3.1 检验量对比研究的实验结果

不同检测量的纯化水微生物检测结果见表1。通过实验可以看出,对于1 mL检验量的薄膜过滤法,19个水点的微生物限度质量均良好,只有2个水点检测出微生物污染,且菌落数少,检出率低(2/19),未发现任何不良趋势。对于10 mL检验量的薄膜过滤法,菌体检出率较高(7/19),是1 mL检验量时菌体检出率的3.5倍,5、10、15、18和19号水点均反映轻微微生物侵染,能够更好地反映纯化水的微生物限度情况。13号水点微生物污染程度接近警戒线,便于发现不良趋势,及时采取针对纯化水系统清洁维护的整改措施。可见,薄膜过滤法具有较好的集菌效果,10 mL的纯化水检测量适合于纯化水的微生物限度检查,样本代表性较好,菌体检出率高,能够更加准确和真实地反映纯化水质量,保证纯化水系统的持续、稳定、有效运行。

3.2 培养基培养效力对比研究的实验结果

使用不同培养基进行微生物限度检测的实验结果,见表2。通过以上实验可以看出,对于相同样本,使用营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基平板检测和使用PCA培养基平板检测的微生物检出率较低(前者共有21个水点未检出菌体,后者共有18个水点未检出菌体),检出情况基本一致,差异量均≤1 cfu/10 mL。并且使用营养琼脂与玫瑰红钠琼脂培养基检测需要制备两张滤膜,工作量较大。而采用R2A琼脂进行菌落计数,操作相对简单,每个水点只需要制备一张滤膜即可,并且菌体检出率较高,共计14个水点微生物限度检出(结果均

4 讨论

USP、EP、BP和CP中均规定采用薄膜过滤法进行纯化水微生物限度检查,但对于纯化水的检验量都未明确规定,要求各单位根据实际用水情况和所安装纯水系统性能自定检验量[10]。纯化水水质是决定检验量的基础,通过本文的系统实验表明当前大多企业为追求操作简单只选定1 mL作为检验量是有所局限的,这个量并不能真实反映纯化水的质量,也不利于纯化水系统的监测和维护。

纯化水微生物限度年度质量回顾和趋势分析是确定检验量的重要依据,本研究基于石家庄以岭药业股份有限公司3年来大量的纯化水分析数据,找到了较合适的检验量,供读者参考应用。

实验中发现使用营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基的培养效果与使用PCA培养基的培养效果基本一致,可能只检出了水样含菌总数的一部分,未能完全反映水样中微生物的存在情况,这与顾孔珍等[11]的报道一致。R2A培养基属于低营养类培养基,其营养成分较广泛,能促进受损细菌的恢复性再生长,更适用于纯化水的检测。这将避免由于培养基灵敏度不够而造成的纯化水质量不良趋势无法被发现的情况,能够及时准确地反映纯化水系统运行情况,及时维护,延长系统寿命。

本文研究所确定的方法可大大提高纯化水微生物限度检测的有效性,有利于生产和检验中纯化水质量的控制。同时,也为其他制药企业建立合适的纯化水微生物限度法提供参考和指导。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:78.

[2] 国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:579.

[3] 陈力奋,刘建国,屈晓萍,等.用平皿法检测纯化水的微生物限度[J].海峡药学,2006,18(1): 88-89.

[4] 欧洲药典委员会.欧洲药典7.0[S].2013:3561.

[5] 欧洲药典委员会.欧洲药典8.0[S].2016:3561.

[6] 美国药典委员会.美国药典38[S].2015:1231.

[7] 美国药典委员会.美国药典39[S].2016:1231.

[8] 英国药典委员会.英国药典2015[S].2015:各论0008.

[9] 英国药典委员会.英国药典2016[S].2016:各论0008.

微生物培养基报告范文5

目的:对比改善实验室质量管理前后临床微生物分析结果,探讨分析实验室质量管理的重要性。方法:回顾分析临床实验室质量管理前50例临床微生物检验结果作为对照组,实行实验室质量管理措施后的50例临床微生物检验结果作为观察组,两组结果进行对比,记录分析数据。结果:实施实验室质量管理措施前,临床微生物检验分析准确率86.00%。实施实验室质量管理措施后,临床微生物检验分析准确率为90.00%,两组检测结果差异具有统计学意义(P

关键词:微生物检测;质量管理;结果分析

【中图分类号】

R249 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763(2014)08-0102-02

近年来,医院不断有新的耐药菌株出现[1],感染病例也不断增加,这对医院的临床微生物实验室不断提出新的挑战和要求。临床微生物检验分析的结果能够为医师临床提供可靠的治疗依据,同时还能提供合理使用抗生素和及时检测医院感染流行情况的依据。因此做好实验室质量管理工作,提高临床微生物检测分析准确性是提高患者治疗效果、降低患者治疗风险的有效途径。具体报告如下:

1 资料和方法

1.1 基本资料:

随机选取本院实行实验室质量管理措施前的50例临床微生物检测分析报告作为对照组,选取实行实验室质量管理措施后的50例临床微生物分析报告作为观察组。

1.2 实验室质量管理措施

1.2.1 形成科学合理的质量管理体系[2]:

参考ISO或国家制定的相关实验室管理的要求和标准,并与实际情况相结合,形成科学合理的质量管理体系,并形成文件,制定相应的程序文件、质量手册和操作手册等,提供给所有参与检验工作者参照和学习。

1.2.2 认真详细编写管理文件[3]:

SOP作为检验工作人员参照的主要指南和依据,它能保证所有检验工作人员的检验操作更标准规范和统一。SOP文件在编写时应当包含微生物标本的采集步骤、采集方法、使用试剂、培养基的制备方法、操作注意事项和相关参考文献。SOP文件编写完成后须有责任科室主任签字生效,不得随意更改。

1.2.3 标本采集方法:

明确采集标本的最佳时机,如应在发热时抽血培养标本,根据不同样本的采集要求明确适当的采集方法、所需要的培养器皿、培养温度、运送时间等,送检标本如不合格,应立即要求检验人员与临床进行联系。

1.2.4 检验人员素质培养[4]:

微生物实验室检验人员在上岗前应经过严格的培训,每一位检验工作人员都必须经过专业知识和实际操作两项测试的考核,考核通过才能从事微生物检验工作。除此之外,每年还应对检验人员进行培训再教育,不断提高检验人员的职业素质。

1.2.5 检验仪器校准:

所有检验仪器必须建立相应的制定校准程序和操作程序,定期对检验仪器进行校准,校准程序应包括校准的方法、可接受范围和期限。每做一次仪器维修和保养都要做好记录,并且在之后做好校准工作。更换过的鉴定板每更换一块都要标准菌株进行质量控制,细菌鉴定仪每次鉴定前都应该进行自动校准,采用化学试剂纸片对高压湿热灭菌器进行灭菌效果监测。

1.2.6 检验试剂及培养基:

所有用于检验的培养基和试剂都应该想进行登记记录,无论是商品化采购,每一样试剂都应该有明确清晰的产品信息,包括品名、批号、有效日期、浓度等。同时试剂在使用前都应该经过仔细的观察和检查,通过试剂颜色、厚度、是否有细菌污染现象、是否存在溶血、是否存在过多气泡等方面来检测试剂的质量。而检验所用的培养基和细菌鉴定板在石永强都应该观察包装是否破裂,是否在使用有效期内。试剂盒染色液的容器上应该明确表明相关信息,过期的试剂和染色剂绝对不能在继续使用。

1.2.7 加强与临床的沟通与配合:

与临床及时有效的沟通,向临床宣传正确的采集标本和运送标本的正确方法,以减少实验前的误差,提高检验分析结果的质量。

1.2.8 准确的检验报告[5]:

患者的检验结果在公布之前必须进行双责任人签字确认,包括检测分析操作者和复核主管签字确认。复核主管必须对检测报告的合理性、准确定进行审核和判断,要杜绝错误报告的产生 ,当出现严重威胁患者生命安全的检验结果时,复核人员要立即通知临床医生注意。

1.3 试验数据处理:

两组微生物检测分析结果采用统计学处理软件SSPS19.0处理,计数数据采用卡方检验,当P

2 结果

对照组50例微生物检测报告中有43例检测报告准确性有效,占总检测报告数量的86%;观察组准确性有效的检测报告为45例,占总检测报告数量的90%。观察组检测报告有效率明显高于对照组检测报告有效率,两组结果差异具有统计学意义(P

3 讨论

一所疾病防疫控制机构的检验水平、管理水平、科研水平的重要标志是实验室的管理和建设状况,这在很大程度上反应了疾病防疫控制机构的综合实力。随着各种关于实验室管理技术规范、管理法规的颁布实施,实验室的设计、建造、验收、检测过程等逐渐走向了规范化、法制化的轨道,这些措施的颁布和实施有效的提高了实验室的实施条件和环境质量,而严格的实验室质量管理体系使得检测试验操作更加规范化,这些因素都直接影响了微生物检测报告的质量结果,最终影响医师对患者的诊断治疗,影响国民的身体健康和生命安全,所以要在临床推广实施实验室管理措施体系。

参考文献

[1] 肖亚玲,康凤凤,王治国. 临床实验室质量管理和患者安全[J]. 中国医院,2014,02:7-9.

[2] 何梦林. 探讨临床微生物检验中质量控制存在的问题与对策[J]. 中国医药导刊,2013,S1:347-348.

[3] 韩淑娥,孟芝君. 临床微生物实验室培养标本不合格的原因分析及解决对策[J]. 山西医药杂志,2013,12:1433-1434.

微生物培养基报告范文6

关键词:水质微生物;实验室;质量控制

随着经济的飞速发展及产业规模的急剧扩大,环境污染问题也随之而来,这也促使社会各界开始关注其生活质量。在饮用水方面,人们也在不断强调水质的标准及水质检测,这就要求必须要确立一个质量保证流程,以便及时获取有效信息,保证水质安全。

环境质量检测质量保证是保证检测数据准确可靠的实施方法之一,现已得到社会各界的认可[1]。环境检测质量控制是环境检测质量保证的重要部分,它主要包括实验室内部质量控制和实验室外部质量控制。实验室的内部控制,是实验室实现自我协调控制的常规程序,它能够及时发现异常情况,并分析其造成的原因,然后采取正确的校正措施,确保实际工作的有序进行,确保其质量检测的准确性及稳定性。

水质微生物实验室由于其特殊性,它需要更专业的人士的熟练操作及分析判断,从采样报告到记录数据的整个过程都要保证其准确性和可靠性,因而做好水质微生物实验室的质量控制尤为重要。实验室的质量控制主要包括以下几个方面。

1 对从事检测工作的专业技术人员的质量控制

1.1要求参加检验的人必须接受过充分的理论知识教育,具备熟练的实际操作经验和准确的分析判断能力,加强其理论知识的学习,不断提高自己的检验能力。

1.2要有良好的职业道德操守和强烈的责任感,能够很好的承担微生物检测工作,完成上级交给的检验任务,并确保检测结果的真实性和准确性。

1.3实验室应该制定规范的检验标准,统一检验方法,按照国家标准实施,制定科学的规章制度,规范各级人员的职责。

2 对培养基的质量控制

2.1培养基的配置和使用时微生物检验中最关键的部分,优质的培养基能够促使细菌快速生长繁殖,有利于对细菌进行分离和准确的判断,在配置培养基时的一般质量要求包括:①培养基应该明确标记和正确的配置日期,培养基要在有效期限内使用,使用时要注意观察培养基是否变质,优质的培养基,其液体应该是清澈的。有倒管时,倒管内的液体应该清澈无气泡;而固体的培养基应该有一定的硬度,在接种前要保持无菌落;②要妥善安放无菌分装的培养基,要置放在36℃的培养箱例,要保持无菌生长,这样才能被使用;③要随机抽查PH值,控制PH值在标准范围内,有指示剂的培养基要随时观察颜色的变化;④倾注琼脂平板的体积要达到要求,一般控制在15ml。

2.2对培养基的质量控制方法有以下几种情况:①要选择信誉度好的产品,购买的时候要根据日常工作的需求量有计划的使用,针对用量少的,尽量少购买,以免造成不必要的浪费;②对购回的培养基按照品名、生产日期、保质期等认真登记,并科学存放;③对每批制成培养基要用标准菌株对其进行质量检测与控制,保障培养基的质量。

3 对标本检验的质量控制

3.1在标本的采集方面,要注意以下几个方面:①选择合适的采集时间,一般选在疾病的早期、急性其或症状突出期前采样;②选在正确的采样方法,根据不同的微生物种类,需选择不同的方法;③要用无菌容器进行盛装样本,取样的容器要用自来水进行彻底的冲洗,然后用10%的盐酸溶液进行浸泡,从而保持容器的无菌性;④要注意控制标本量,水样在容器中应控制在80%以内,采取不同水样的时候不能随意搅动水底的沉积物,并注意容器瓶口的完好性。

3.2在标本的运输方面,要注意以下几个方面:①要保证及时送检,如果现场与实验室的距离很远,要对样本进行冷藏、保温等妥善保存;②标本运输应有专业人士负责,运输过程中药尽量避免晃动,以免瓶子破损。

4 对实验室内环境的质量控制

4.1要保持实验室内良好的通风状态和无尘状态,这样能够减少杂菌的污染,也能够保障培养箱的稳定操作。

4.2要对实验室内的紫外线消毒灯进行定期的检测和擦拭,确保使用的紫外灯的亮度在最初的70%以上。

4.3要保持高标准的空气质量,可以用细菌密度平皿或者拭抹法来检测空气质量及操作台的洁净,并定期对工作台做空白试验,保证台面良好的防止透水性和抗腐蚀性,确保其正常工作。

4.4要用光滑的漆来覆盖实验室的墙壁,这样有利于清洗和消毒,地面材料要保证光滑、易于清洁。

5 对实验室主要使用仪器的质量控制

5.1要保证其温度计处于正常的工作状态,确保培养箱、冷冻箱和干燥箱能够准确的报告操作温度,以便将其控制在最佳状态。

5.2正确使用显微镜和天平,并保持其清洁。

5.3所使用的容器都要保障其完好无损,并在清洁完毕之后进行彻底的检查。5.4经常保持冰箱的清洁,电热灭菌箱和高压灭菌器也要定期采用孢子试跳或孢予悬浮液保障其灭菌的最佳状态。

6 对操作过程的质量控制

要认真落实操作的无菌化,认真记录操作的整个过程,并对空白和平行样品进行认真对比,另外,还要对实验室的环境标准进行控制,保障检测结果的准确性[2]。

7 结束语

对于水质微生物的检查,要把握好各个环节的准确性,实现对实验室内部各个环节的有效控制,才能够确保水质微生物检测结果的准确性和真实性,保障检验工作的质量,才能得到领导的肯定和社会的认可。

参考文献: