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免疫学基本原理范文1
伤寒是由伤寒杆菌经消化道侵入而引起的急性传染病，遍布于世界各地，以热带、亚热带地区为多见，在我国和其他发展中国家仍是一种常见的传染病.。伤寒杆菌经口腔到消化道侵害小肠粘膜而入血，可造成伤寒杆菌菌血症。伤寒病常称“伤寒热”， 其症状包括高烧，可达39°至40°C，其他症状有腹痛、严重腹泻、头痛、身体出现玫瑰色斑等。其中肠道出血或穿孔是其最严重的并发症，其传染途径为粪口途径，传染力很高。所以，伤寒的早期诊断十分重要。现对我中心使用的伤寒杆菌检测实验方法研讨如下。
1 材料和方法
1.1 材料：选取送检伤寒患者137例，其中男性77例，女性60例。年龄8―63岁，平均38岁。
1.2 检测方法：
1.2.1 血清学检测：肥达试验是临床上常用于辅助诊断伤寒的传统方法。其原理是用伤寒杆菌的菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原以及副伤寒甲、乙、丙菌液与稀释的待测血清反应，根据凝集效价判断血清中有无伤寒杆菌的抗体。早期肥达试验需要急性期和大约间隔10天的康复期血清，两份标本之间抗O抗体或抗H抗体滴度升高4倍，更有诊断意义。伤寒杆菌的 O抗原与A群、B群沙门氏菌有部分相同抗原，与甲、乙两种副伤寒杆菌有一定的交叉反应，因此，肥达反应诊断伤寒杆菌常出现假阳性，特异性差，敏感性低，而且抗原抗体结合出现凝集沉淀常需要20 h以上。
1.2.2 免疫学检测：①酶联免疫吸咐试验(ELISA)：根据抗原或抗体特异性免疫反应原理设计，将已知的抗原或抗体结合在某种固相载体上，以辣根过氧化酶为指示剂，标记在另一种抗原或抗体上，加入酶作用底物，酶与底物发生反应后，底物显色，根据底物显色的深浅定性或定量地检测样本中的抗体或抗原。②浸染试验（Dipstick assay）：又称快速试纸法，是近些年发展起来的一种用胶体金作指示剂的快速诊断方法。基本原理是先将特异性的抗原或单克隆抗体固定于试纸条（硝酸纤维薄膜）的一端，检测时将试纸条的另一端浸入待测样品，由于毛细管作用，样品液向前移动，如待测样品中含有相应的抗体或抗原，则当样品液移至固定有抗原或抗体区时会发生特异性结合，在显色系统的作用下，该区域出现一定的颜色。此法具有操作简单，不需任何仪器，20 min即能报告结果，适合现场查病时使用。浸染试验在特异性、敏感性、简单、快速方面优于常规方法。
1.2.3 聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在模板DNA、引物和脱氧核糖核酸存在及DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增。它由变性―退火―延伸三个基本反应步骤构成，是现阶段检测伤寒杆菌的最快速准确的方法。①套式聚合酶链反应：又称二次PCR，在这种技术中，首先用一对外引物进行第一轮PCR，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增。②一次PCR：只设计一对引物用于PCR即完成检测，但一次PCR检测临床血标本容易受到血中大量存在的外周单个核细胞DNA非特异性扩增的影响而使敏感性降低。③多重PCR：多重PCR是在同一个反应管中同时完成多个不同基因扩增的PCR。（4）免疫磁珠分离PCR：免疫磁珠就是将直径0.05 μl～4 μl具有超顺磁性的微粒表面经化学修饰，使之与特异性抗体牢固结合，成为能与特异性抗原结合且有磁性的磁珠。
2 结果
经过我中心对伤寒杆菌检测，132例患者得到了准确的诊断，并且进行了对症治疗；5例患者检测结果不准确，仍需临床进一步观察再送检确诊。
3 讨论
伤寒患者的诊断主要依据病原学的实验室诊断，由于抗生素的广泛应用，导致血培养时伤寒杆菌的检出率明显降低，常规血清学检测患者血清中的特异性抗体，其特异性和敏感性均存在一定的问题，从而影响检测结果的准确性和可靠性。肥达氏试验早期阳性率低，需到第3周、第4周才可达70%，实际上只有回顾性诊断价值，且假阳性较高。免疫学检测的方法具有灵敏度高、特异性好，反应时间短，操作简便，结果易于判断等特点，较肥达氏试验特异、敏感和快速，且价格低廉，一般实验室都能开展，易于普及推广，适用于伤寒的早期诊断，具有较高的临床价值。PCR技术检测伤寒杆菌的方法敏感度更高，但是这类方法操作麻烦、对环境要求较高，且价格昂贵，很难普及。
检测伤寒杆菌的方法很多，各有其优缺点，伤寒杆菌的检测方法将向早期、快速、准确、灵敏、特异等方向发展，特别是免疫学检测方法、PCR等现代分子生物学技术的联用，会使伤寒杆菌的检测方法日趋成熟，为临床诊断提供更加快速准确的科学诊断依据。
参考文献
[1] 杨绍基用聚合酶链反应快速检测血液中的伤寒杆菌中山医科大学学报 1995;16(4):68-71
免疫学基本原理范文2
关键词：Western-blot 综合性实验 教学
中图分类号：G642 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2012）12（c）-0-01
分子诊断学是基础医学与临床医学密切联系的学科，分子诊断学实验课是分子诊断学教学的重要组成，是锻炼学生实验操作能力，分析解决问题能力的重要教学途径之一。蛋白免疫印迹（Western-blot 或 Immunoblot）涉及分子生物学、生物化学和免疫学等综合知识内容，在分子诊断学中开展Western-blot综合性实验，不仅利于提高分子诊断学教学质量，而且能锻炼学生综合技能运用能力。
1 Western-blot 综合性实验在教学中开展的意义
Western-blot实验是根据抗原抗体的特异性结合来检测样品中某种蛋白的方法，现已成为蛋白分析的一种常规技术，在科研和医疗中应用广泛。但本科教学极少开展Western-blot教学，学生对其原理和操作了解较少，缺乏实验机会，相关知识的理解主要停留在理论教学水平。在医学检验专业开设Western-blot g实验课程，已成为一项非常必要的实验教学内容[1]。有助于帮助学生归纳总结相关知识，锻炼学生掌控大型实验的能力，利于提高学生综合素质。
2 Western-blot 综合性实验的原理及实施过程
2.1 Western-blot的检测原理
Western-blot综合性实验一般由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白印迹和免疫学检测三个部分组成。首先是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。然后是蛋白印迹，把凝胶中已分成条带的蛋白质印迹到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。最后是免疫学检测，用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。
2.2 Western-blot在分子诊断学教学中的实施过程
根据笔者的教学情况，本综合性实验约需教学时数12～16学时，具体实施过程如下。
①带教老师讲授Western-blot的实验原理和注意事项。
②播放Western-blot实验演示视频并示教讲解各步骤的实验原理和注意事项，使学生对Western-blot深入理解和熟悉操作过程。
③学生分组，以4人为一个小组，合作开展Western-blot实验。
④Western-blot的基本操作流程包括：⑴提取细胞或组织蛋白、测定含量；⑵SDS-PAGE电泳；⑶电泳转膜；⑷免疫
检测；
⑤各小组学生与带教老师共同讨论分析实验结果。
3 Western-blot 综合性实验的实施效果
3.1 巩固了理论知识、熟悉了实验基本原理和操作过程
Western-blot是一门涉及了分子生物学、生物化学和免疫遗传学等学科的综合性实验，实验原理复杂且难理解。根据往年的教学经验，在Western-blot内容中只开展理论知识的教学，学生理解困难。因此，开展Western-blot的实验教学有助于提高教学质量。
Western-blot是一个综合性实验，不是简单的验证性实验，所以学生每一步的操作都需要认真思考、认真操作。不仅提高学生的学习兴趣，也巩固了学习Western-blot的理论知识，熟悉了实验基本原理和操作过程，加强了学生的自主动手操作
能力。
3.2 利用多媒体与带教老师的双重演示与讲解，加强了学生对实验的理解和熟悉程度
Western-blot是一个复杂性综合性实验，实验步骤繁琐且要求高。如果不熟练实验操作步骤，容易影响实验结果。例如：转移时凝胶与膜之间不能留有气泡，膜和凝胶的位置一定要放正确，同时电源的正负极不能接错[2]。Western-blot的实验操作步骤要求高、步骤多，学生一时不能完全掌握Western-blot其中的重点和要点。在实验课时上利用多媒体资源协助带教老师讲解实验操作，不仅可以帮助学生重复学习和加强记忆，而且学生在课余时间也能够通过观看视频自主复习，对于加深学习有很大的帮助。
3.3 学生在实验过程中注意相互协作，加强了团队合作意识
Western-blot实验所需仪器设备较为昂贵，不太可能每位学生一套器材独立操作，本教学中安排4人1小组，共同完成Western-blot综合性实验。
由于实验时间较长，步骤较复杂。每组学生分工合作，共同学习和互相监督，遇到问题互相讨论，形成了浓厚的学习氛围。在讨论实验结果时，学生们互相查找资料，共同讨论实验结果，积极查找实验中出现的各种问题的原因，有助于提高学生的综合分析问题能力。
4 剖析Western-blot 综合性实验教学中存在的问题及对策
①Western-blot综合性实验需要的试剂多、仪器多，价格昂贵，在本科教学中全面开展有难度，难以给每个学生准备一套完整的设备和试剂。各教学单位可根据实验室条件安排几个同学为一组，基本满足Western-blot综合性实验在本科教学的要求。
②部分试剂有毒性，如丙烯酰胺溶液，NaN3等，易对身体产生毒害[3]，要注意实验室安全。
③本综合性实验耗时较长，连续操作教学不易安排，可将本实验安排在周六日进行，或将本实验切分成几个小实验，每周进行一个小实验，各教学单位可根据自身教学条件合理安排教学进度。
参考文献
[1] 何秋，张春龙，侯敢.医学检验专业开设Western Blotting综合性实验初探[J].卫生职业教育，2007，25（21）：
91-92.
免疫学基本原理范文3
关键词：藏族学生；医学免疫学；实验教学；临床医学专业
医学免疫学是一门不可或缺的医学基础学科，是后续临床课教学的基础。实验课是医学免疫学教学的重要组成部分，实验课教学质量的好坏直接影响本课程的教学质量。我校是自治区高等院校临床医学（全科医生方向）专业教学试点单位，自2010年以来一直承担着为社区医疗服务队伍提供合格人才的任务，藏族学生为该专业的主要生源。几年来的医学免疫学实验课教学实践表明，藏族学生在学习本课程时较为吃力，表现出一定的畏难、厌学情绪，不能掌握实验操作要领等现象也时有发生，直接影响着本课程的教学质量和未来社区医疗人才的培养质量。为激发学生的学习兴趣，提高教学质量，我校医学院免疫学与病原生物学教研室在分析总结2013—2015年实验教学工作的基础上实施了以网络平台为手段的医学免疫学实验教学改革，取得了较好的教学效果，现介绍如下。
1医学免疫学教学存在的主要问题
1.1对医学免疫学实验教学重视不够
医学实验教学效果的好坏直接关系到学生对理论知识的理解和掌握。在医学教学过程中，实验教学在各个学科所占比重很大，有些甚至占总课时的一半以上[1]。我校由于教师数量的限制，医学免疫学教学长期存在着理论和实践不同步的现象，重理论教学，轻实验教学。在医学免疫学总学时中，实验教学仅占20%。对实验教学的不重视不仅表现在数量上，还表现在质量上，教师实验教学方法简单，教学方式也是单一的“板书+教材”，并未与临床疾病进行有效联系，学生不能充分了解此实验在医学上有何具体、实际的意义。
1.2免疫学实验教学环节单调
目前的免疫学实验教学过程主要是：在理论课教学中，教师对实验的基本原理进行简单讲述，实验前进行针对性讲解，然后进行实验操作，最后让学生对比已有的实验结果并写出实验报告。这种传统的实验教学以验证性实验为主，实验过程以教师为主体，学生只需要按部就班地进行重复性操作，过程单调，激发不了学生探求知识的积极性和创新性[2]。
1.3免疫学实验设计比较枯燥
以往大多数的免疫学实验过程是观看已有的切片、滴加试剂、进行无协作的实验操作、与已有实验结果进行对比。这些实验教学内容很难让学生集中注意力在实验操作上，影响了学生继续进行实验的兴趣以及将已有理论知识融会贯通的积极性[3]。
2医学免疫学实验教学的改革探索
针对现有医学免疫学实验教学存在的弊端，结合藏族学生的特点，我校免疫学与病原生物学教研室进行了教学改革，增加了1个验证性实验和1个综合性实验，引入了网络平台作为辅助教学手段，取得了较好的效果。其主要做法包括引入中性粒细胞吞噬实验和巨噬细胞吞噬实验，通过体外实验和动物的体内实验，增加了学生实验技术内容，增强了学生实践与理论联系的积极性[4]。特别是通过QQ讨论组、Web链接、教师自制操作视频和实验相关PPT等网络平台进行实验前指导、实验讨论等，提高了学生参与实验的积极性。
2.1通过网络平台进行实验指导，将实验教学材料和相关视频传送给学生
医学免疫学是医学的基础学科，开设医学免疫学课程时，学生还未具体接触临床实践，但学生对生活中常见的疾病有了一定的感性认识，实验教师可将实验内容与这些常见疾病进行联系，进一步提高学生在医学方面的综合素质。在实验前实验教师通过QQ讨论组将实验课程相关教学材料及视频的Web链接、教师自制操作视频和实验相关PowerPoint（PPT）传送给学生，规定时间让其写好实验预习报告并进行实验设计，进行讨论和答疑，取得良好实验教学效果[5]。
2.2实验结果的网络化应用
医学免疫学实验操作中经常使用显微镜观看切片，现可借助数码系统将切片进行拍照储存。可让学生将实验内容和结果制作成PPT，将实验过程进行整理、解释，发送至实验教师邮箱让教师批改，这样可增强该课程的趣味性和真实性。
3教改效果的验证与讨论
以我校临床医学（全科医生方向）专业2012级和2013级各25名本科学生作为研究对象，所有学生均为藏族生源。其中2012级仍采用传统教学方案，为对照组；2013级采用改革后的教学方案，为实验组。以细菌计数法测定中性粒细胞吞噬实验和细菌计数法测定巨噬细胞吞噬实验的教学效果为例，将两组学生的实验完成情况进行比较。中性粒细胞吞噬实验和巨噬细胞吞噬实验是医学免疫学的两类重要实验，通过实验可以让学生更直观体会到非特异性的固有免疫在机体中的防御功能，提高他们的医学免疫学相关实验操作技术和对实验过程的连续性的认识[4]。两组实验结果表明，对照组学生中性粒细胞吞噬实验与巨噬细胞吞噬实验顺利完成的人数比例均低于实验组学生（P<0.05）。从此次实验结果分析来看，针对学生对实验课重视不足的情况，实验教师应加强对网络平台的运用，多与理论教师互动，有效联系理论与实践，进一步丰富网络平台的实验教学内容，与临床更紧密地衔接在一起。
4结语
实验教学是医学免疫学教学的一个十分重要的环节，本文对医学免疫学实验教学存在的相关问题进行了进一步剖析和改进。临床医学（全科医生方向）专业藏族学生理论基础薄弱，理论联系实际能力有待提高，可以通过提高实验教学数量和质量来激发学生对理论知识的学习兴趣和求知欲，提高实践过程中的创新能力，同时培养学生严谨认真、实事求是的学习态度，提高学生的综合素质。
参考文献：
[1]王梁.病原生物与免疫实验教学中培养学生科学素质的体会[J].广西中医学院学报，2011（3）：118-120.
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[4]朱兆玲，周红，李美玉，等.吞噬细胞吞噬作用实验方法的改进[J].临床医学工程，2012（4）：524-526.
[5]朱敏侠，刘晓丽，李杨，等.从藏族学生生理学考试评价思考考试组卷与试题库建设中的问题[J].卫生职业教育，2014，32（4）：100-102.
免疫学基本原理范文4
报考时间
甘肃张掖2020年4月自考时间安排在：4月11日星期六（上午9:00--11:30；下午14:30--17:00）；4月12日星期日（上午9:00--11:30；下午14:30--17:00），具体开考专业及课程考试时间安排见附表。
附件：2020年4月甘肃省高等教育自学考试开考专业及课程考试时间安排表
一、专科(含基础科段) 时间
专业 4月 星期六(4月11日) 星期日(4月12日) 上午(9:00--11:30) 下午(14:30--17:00) 上午(9:00--11:30) 下午(14:30--17:00) 020203会计 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
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05677法理学 030301行政管理 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论 00292市政学 03706思想道德修养与法律基础 00107现代管理学 00277行政管理学 04729大学语文
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04184线性代数（经管类）
00150金融理论与实务 04183概率论与数理统计(经管类) 00160审计学 00015英语(二)
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00058市场营销学 03709基本原理概论 04184线性代数（经管类） 00198旅游企业投资与管理 04183概率论与数理统计(经管类) 00197旅游资源规划与开发 00053对外经济管理概论
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免疫学基本原理范文5
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甘肃临夏2020年4月自考时间安排在：4月11日星期六（上午9:00--11:30；下午14:30--17:00）；4月12日星期日（上午9:00--11:30；下午14:30--17:00），具体开考专业及课程考试时间安排见附表。
附件：2020年4月甘肃省高等教育自学考试开考专业及课程考试时间安排表
一、专科(含基础科段) 时间
专业 4月 星期六(4月11日) 星期日(4月12日) 上午(9:00--11:30) 下午(14:30--17:00) 上午(9:00--11:30) 下午(14:30--17:00) 020203会计 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
00157管理会计(一) 00009政治经济学(财经类)
03706思想道德修养与法律基础 00146中国税制 00041基础会计学
00155中级财务会计 00020高等数学(一)
04729大学语文
00144企业管理概论 030112法律 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
05679宪法学
00247国际法 03706思想道德修养与法律基础
00245刑法学 00260刑事诉讼法学 04729大学语文
05677法理学 030301行政管理 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论 00292市政学 03706思想道德修养与法律基础 00107现代管理学 00277行政管理学 04729大学语文
00040法学概论 040103小学教育 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
00405教育原理 03706思想道德修养与法律基础
00406小学教育科学研究 00413现代教育技术 00415中外文学作品导读
00417高等数学基础 00012英语(一)
04729大学语文
00416汉语基础
00418数论初步 040109心理健康教育 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
05615心理健康教育概论 03706思想道德修养与法律基础
05618青少年心理卫生 00031心理学
01755人体解剖生理学(教育类) 04729大学语文
02108实验心理学
03584偏差行为辅导与案例分析 050114汉语言文学 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
00024普通逻辑
00535现代汉语 03706思想道德修养与法律基础
00530中国现代文学作品选 00506写作(一) 00532中国古代文学作品选(一) 080701计算机及应用 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
02316计算机应用技术
02318计算机组成原理 02198线性代数 03706思想道德修养与法律基础
04730电子技术基础（三） 00342高级语言程序设计(一) 02141计算机网络技术 00012英语(一)
00022高等数学(工专)
04729大学语文
02323操作系统概论 100701护理学 12656*思想和中国特色社会主义理论体系概论
02997护理学基础
00488健康教育学 03706思想道德修养与法律基础
03179生物化学(三) 03000营养学 02864微生物学与免疫学基础 04729大学语文 03002妇产科护理(一) 03003儿科护理学(一) 二、独立本科段(含本科段) 020104财税 03708中国近现代史纲要
00058市场营销学 03709基本原理概论
04184线性代数（经管类）
00054管理学原理 04183概率论与数理统计(经管类) 00069国际税收 00015英语(二)
00053对外经济管理概论 020202工商企业管理 03708中国近现代史纲要
00151企业经营战略 03709基本原理概论
04184线性代数（经管类）
00054管理学原理
00150金融理论与实务 04183概率论与数理统计(经管类) 00153质量管理(一) 00015英语(二)
00152组织行为学 020204会计 03708中国近现代史纲要
00058市场营销学 03709基本原理概论
04184线性代数（经管类）
00150金融理论与实务 04183概率论与数理统计(经管类) 00160审计学 00015英语(二)
00158资产评估 020210旅游管理 03708中国近现代史纲要
00058市场营销学 03709基本原理概论 04184线性代数（经管类） 00198旅游企业投资与管理 04183概率论与数理统计(经管类) 00197旅游资源规划与开发 00053对外经济管理概论
00152组织行为学 06124旅游文化学 020229物流管理 03708中国近现代史纲要
00151企业经营战略
07725物流规划 03709基本原理概论
00009政治经济学(财经类) 03361企业物流 07006供应链与企业物流管理 00015英语(二)
00152组织行为学 03364供应链物流学 030106法律 03708中国近现代史纲要
00249国际私法
00264中国法律思想史 03709基本原理概论
00246国际经济法概论 00167劳动法 00015英语(二)
00226知识产权法
00233税法 030302行政管理学 03708中国近现代史纲要
00318公共政策
00024普通逻辑 03709基本原理概论
00315当代中国政治制度 01848公务员制度 00277行政管理学 00015英语(二)
00034社会学概论
00144企业管理概论 040102学前教育 03708中国近现代史纲要
00394幼儿园课程 03709基本原理概论 00385学前卫生学 00402学前教育史 00882学前教育心理学 00015英语(二) 040107教育管理 03708中国近现代史纲要
00452教育统计与测量 03709基本原理概论 00455教育管理心理学 00445中外教育管理史 00015英语(二)
00453教育法学
00450教育评估和督导 040110心理健康教育 03708中国近现代史纲要
05626*心理学（一） 03709基本原理概论 04406情绪心理学 05622临床心理学 00471认知心理 00015英语(二) 06059心理学研究方法 040112小学教育 03708中国近现代史纲要
06227大学数学 03709基本原理概论
00465心理卫生与心理辅导 00472比较教育
03330小学数学教学研究 00015英语(二)
00467课程与教学论 050105汉语言文学 03708中国近现代史纲要
00037美学 03709基本原理概论 00538中国古代文学史(一) 00015英语(二)
00537中国现代文学史 050201英语语言文学 03708中国近现代史纲要
00087英语翻译 03709基本原理概论
00831英语语法 00832英语词汇学 00604英美文学选读 050305新闻学 03708中国近现代史纲要
00642传播学概论 03709基本原理概论
00661中外新闻作品研究 00015英语(二)
00658新闻评论写作 080307机电一体化工程 03708中国近现代史纲要
02199复变函数与积分变换
02245机电一体化系统设计 03709基本原理概论 00420物理(工) 02243计算机软件基础(一) 02200现代设计方法
02197概率论与数理统计(二) 00015英语(二)
02238模拟、数字及电力电子技术 080702计算机及应用 03708中国近现代史纲要
02324离散数学
04747Java语言程序设计（一） 03709基本原理概论
02326操作系统 02197概率论与数理统计(二)
02325计算机系统结构 00015英语(二)
00023高等数学(工本) 04741计算机网络原理 080709计算机网络 03708中国近现代史纲要
02335网络操作系统
04747Java语言程序设计（一） 03709基本原理概论 04749网络工程 04751计算机网络安全 00015英语(二)
00023高等数学(工本)
04742通信概论
04741计算机网络原理 080806建筑工程 03708中国近现代史纲要
02439结构力学(二)
02446建筑设备 03709基本原理概论
00420物理(工) 02198线性代数 02275计算机基础与程序设计
02197概率论与数理统计(二) 00015英语(二)
02442钢结构 090102农学 03708中国近现代史纲要
06003作物育种新技术 03709基本原理概论 02678农业推广学 02679种子学 00015英语(二)
02680农产品加工 100702护理学 03708中国近现代史纲要
03202内科护理学(二) 03709基本原理概论 03200预防医学(二) 03201护理学导论 00015英语(二)
03007急救护理学
03004社区护理学(一) 030401公安管理 03708中国近现代史纲要
00369警察*学 03709基本原理概论
00370刑事证据学 00015英语(二)
04729大学语文
免疫学基本原理范文6
关键词 酶联免疫吸附法；植物病毒检测；灵敏度；改进策略
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）24-0137-02
早期植物病毒病的检测一般采用传统的生物学方法，而这种单一的生物学检测病毒的方法需要耗费大量的人力和物力，必须培育大量的接种植物，此法不仅费工费时，而且病毒症状表现的时间也较长。因此，寻找灵敏度高、快速、可靠的植物病毒病检测方法迫在眉睫。自从扇叶病毒向草本寄主转接获得成功后，免疫学技术开始蓬勃发展。免疫学技术包括细胞免疫技术、免疫制备技术、免疫血清学技术，其中以血清学技术应用的最为普遍。血清学方法检测植物病毒是利用血清反应原理实现的。由于每一种植物病毒产生的抗血清都有各自的特性，因此通过已知病毒的抗血清可鉴定病毒种类。酶联免疫吸附法（ELISA）是血清学技术中应用最为广泛的一种方法，并已渗透到各个研究领域，该方法是以酶催化的颜色反应来指示抗原抗体的结合[1-2]。由于其具有灵敏、快速、特异性强、分析率高、花费少等优点，可用于大规模样品调查，因此成为检测植物病毒的关键技术。
1 酶联免疫吸附法的基本原理
ELISA的基本原理是将酶标记同抗原或抗体物理性地吸附于固相载体表面与酶的催化作用结合，并保持其免疫活性。酶标记的抗原或抗体既保留其反的特异性，又保留了酶的活性。在测定时，ELISA用固相载体吸附抗原或抗体，固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤的方式与液体中的其他物质分开，再加入通过酶标记反应而结合在固相载体上的抗原或抗体，酶结合物与相应的抗原或抗体结合后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，此时待测抗原或抗体与有色产物的量呈一定的比例[3-4]。故可根据底物显色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法具有很高的敏感度。
2 酶联免疫吸附法的基本类型
ELISA目前是酶联免疫技术中应用最广的技术。ELISA既可以用来测定抗原，也可以用来测定抗体。在使用酶联免疫吸附法测定时必须具有3种试剂，即固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）、酶标记的抗体或抗原（结合物）、酶作用的底物。从酶联免疫技术建立开始，经过不断的改进，已形成了各种不同类型的检测方法。常用的方法有双抗体夹心法、竞争法和间接法等。这些方法的灵敏度较高、特异性强，已广泛用于病毒的检测。
2.1 双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，适用于检测多价抗原。样品中的被检测抗体分子分别与固相载体上的抗原和酶标记的抗原相结合。包被特异性抗体与固相载体连接，经洗涤加入含抗原的待测样品使其与过量固相抗体结合，保温反应，形成复合物。再加入酶标记特异性抗体，保温反应。抗原与酶标记特异性抗体在固相复合物上相结合，洗涤未结合的。加入底物显色，酶催化底物显色，根据显色程度，求出样品中抗原的量（图1）。
2.2 竞争法测抗原
小分子抗原可以采用竞争法检测抗原。特异性抗体吸附到固相载体的表面，经过洗涤后分为a/b 2种情况：a组加酶标记抗原和被测抗原混合物，经过温育洗涤后加入底物显色；b组仅仅加入酶标记抗原，经过温育洗涤后加入底物显色。a/b 这2组底物降解量的差就是所要测定的抗原的量（图2）。
2.3 间接法测抗体
间接法测抗体也是常常采用的方法之一，酶标记抗体检测各种与抗原相应的抗体。特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原。包被抗原经过洗涤加含有抗体的样品温育反应，再洗涤后加入酶标记抗体，温育洗涤后，加入底物显色（图3）。
3 酶联免疫吸附法的应用
伴随与其他学科新技术的融合和其本身具有的优点，ELISA得以广泛的应用。ELISA可以用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定溶液中的可溶性抗原。目前，国内外在ELISA 检测植物病毒方面做了大量的研究工作。
ELISA在植物病毒中的应用：ElISA技术具有专属性很强的特点，不仅可以测定不同病毒之间的亲缘关系及株系关系，鉴别亲缘关系很近的病毒，还可以对同一种病毒的不同的血清类型区分，有助于测定病毒株系和血清型的分化；可研究植物变异株系的分布情况对植物病毒的流行病学进行研究；ELISA病毒检测是实现无毒化栽培的关键，可以通过对样品的初步检测，筛选脱毒苗木；ELISA可检测植物的真菌和细菌；检测种子的健康，由于灵敏度比较高，可以测定单个种子中的植物病毒抗原，还可以检测未发芽种子内的某一微小部分如种皮、种胚、胚乳上的病毒，提供快速、准确的种子质量认证和植物检疫认证，与传统培养方法相比节约了大量的时间、人力和物力；可以大规模检测果树、葡萄、草莓等经济作物中的病毒；检测传播介体、土壤、播种工具中的植物病毒，对病情的预防和及时采取防治措施都有重要的影响；可以检测自然寄主中的植物病毒；分子生物学中进行样品的筛选，可以用ELISA区分阴阳性样品，再用PCR进一步判断。
4 酶联免疫吸附法的改进提高
4.1 提高ELISA检测灵敏度的方法
酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，ELISA样品的前处理在检测中处于重要地位。不同的前处理方式对检测会产生不同的结果[5]。以植物样品为例，选取不同的阴性对照、阳性对照和抗血清浓度都会影响到检测结果。病毒的检测不仅要选择合适的检测方法，而且样品的取样部位和取样时间都会影响检测结果的准确度。因此，在ELISA分析中样品的前处理至关重要。根据不同的待测样品，选取与之适合的前处理方式是建立高灵敏度的检测方法的首要条件。
抗原、抗体的固相化在ELISA检测系统中有着重要的地位，亲和力常数越高，ELISA方法灵敏度就越高。抗原、抗体的固相化是固相免疫测定的前提。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，物理吸附技术是一种简单的固定技术，但在此过程中会发生折叠，惰性蛋白封闭剂会遮蔽功能部位，进而影响了生物分子的功能，检测的灵敏度就会受到影响。化学共价偶联方法比物理吸附方法的固定强度高、特异性好，可以提高ELISA检测的灵敏度。提高ELISA检测的灵敏度需要采取合适的方法制备出亲和力强的抗体，先进的固相化技术，为抗原或抗体提供适当的环境[6-7]。
4.2 保持ELISA检测的稳定性
稳定剂一般由蛋白质、缓冲液、糖类、防腐剂和其他一些能够起稳定作用的物质组成。商业化免疫检测试剂的酶结合物稳定剂大多不公开，性能也存在着一定的差异，开发出性能较好的酶结合物稳定剂，是维持免疫检测稳定性的关键环节。
4.3 确保ELISA检测的特异性
在选择ELISA检测方法的抗体时，应该避免选用交叉反应严重的抗体以确保检测的特异性。在保证检测灵敏度的前提下，调整好合适的酶浓度控制好检测背景，可确保ELISA检测的特异性。
4.4 ELISA检测的标准曲线
ELISA操作步骤繁复，影响试验结果的因素较多，固相介质表面的吸附能力和抗原、抗体之间的相互作用是直接影响ELISA检测结果的关键性因素。因此在定量测定时，不同的样品用不同浓度的参考标准品在同等条件下制定标准曲线，择适当的检测区域。
一般的信号系统是通过酶催化底物显色，通过显色的情况对被检测的物质进行分析。一些微量待测物质在样品中的含量比较低，在样品的前处理过程中可能存在提取不氐椎仍因，致使ELISA的信号系统对待测物不能准确的定量。可通过使用信号放大系统进行修正。合理的信号放大有利于提高ELISA检测的灵敏度。
5 展望
ELISA方法具有选择性好、灵敏度高、设备价格便宜、折旧损耗小等请多的优点，在人类、动物、植物、微生物、环境检测等领域都有广泛的应用。但是ELISA技术也有其局限性和不足。而生物技术发展迅速，如dsRNA分析、分子杂交、PCR等分子生物学技术的发展应用，使得病毒检测的方法得到补充和完善。相信在各个领域里会有广泛的应用前景。
6 参考文献
[1] 于绍夫.酶联免疫吸附测定法检测果树病毒研究进展[J].落叶树，1995（2）：9-22.
[2] 青玲，刘映红，马丽娜，等.武隆烟区烟草病毒病的病原初步鉴定[J].西南农业大学学报，2005，27（3）：220-221.
[3] 焦奎，张书圣.伏安酶联免疫分析及其在植物血清学检测技术中的应用[J].化学通报，2000，64（10）：50-54.
[4] 魏梅生.植物无性种质材料中病毒的检测与治疗[J].世界农业，1995（10）：30-33.
[5] 陈建军，李培睿，杨向英，等.DAS-ELISA和PAS-ELISA检测GFLV的技术研究[J].河南农业科学，2004（11）：48-51.
