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实验动物学的定义范文1
1动物福利
福利在英语字典中译为material benefits, well being, welfare，这是一个经济学名词，原来主要用于企业管理中。动物福利不是动物权利，它包括动物的生命和健康，虽然各国的文字描述并不统一，但其实质都是指让动物在比较康乐的状态下生存，在无痛苦或尽量减少痛苦的状态下死亡。
在1976年美国人休斯提出了动物福利这一概念，这是指农场饲养中的动物与其环境协调一致的精神和生理完全健康的状态，在详细描述中，休斯将动物的福利定义为两种，包括生理福利和心理福利。而现今国际上所公认五大自由也是这两种福利的体现。
首先生理福利在五大自由的体现即在食物上享有不受饥渴的自由;生活环境应该舒适的自由;同时应享有不受痛苦伤害和疾病威胁的自由。这三者都是动物生存的基本条件，三者的满足是保持动物生理健康的保障。其中不受饥渴的自由，即饲养人员在饲养时或者相关人员在进行与动物相关活动时都应及时补充动物所需的饲料和饮水瓶中的水，不使其感受到饥饿或者干渴;其二，享有生活舒适的自由，即相关人员应该为动物提供舒适卫生，符合其生理特点的生活环境;其三应享有不受痛苦伤害和疾病威肋、的自由。这是基于前两者的基础上，尽量为动物提供干净整洁的环境，减少疾病产生的可能性，同时如果动物感染疾病，相关人员应立即采取措施，减少动物所感受到的痛苦。而相较于生理福利，动物的心理福利难以用仪器来测量，更不用说使用具体的指标进行评测。最主要的原因是人类与动物之间并没有有效而直接的交流沟通渠道，换句话说就是人类不可能理解动物的真实想法和确切需求，因此在动物心理福利的评判上加入了大量人类的主观评测。目前，心理福利在科学家通过多年的研究后总结认为动物应享有生活无恐惧感和悲伤感的自由;同时应享有表达天性的自由。生活无恐惧感和悲伤感的自由，表示在饲养过程中，工作人员应爱护动物，不得随意殴打、虐待动物，或者在工作活动中应尽量注意举止行动，不得发出极大声响惊吓到动物，尤其是像豚鼠之类的实验动物，极易受遭到惊吓，更应该小心。另一点是各种动物都具有各自的天性，如猴有攀爬的天性，鸟有飞翔的天性，当然完全满足其天性是不可能的，但是可以在尽可能的范围内改善他们生存的空间和环境以满足它们的天性;同时要兼顾不同动物的习性，例如拿走一只母鸡的产蛋箱，会使它感到痛苦悲伤，但对于一头阉牛或一只母羊却不会有同样的问题。以上所描述的这些都是动物福利的体现。
2实验动物福利
2. 1实验动物要了解实验动物福利，首先我们需
要来了解什么是实验动物?它与一般动物有何区别? 由欧洲共同体于1986年的《关于使各成员国有关用于实验和其他科学目的的动物的保护法律、法规和行政规章接近的理事会指令》中第2条定义实验动物，是指己经应用于实验或者将要应用于实验的动物。我国原国家科学技术委员会于1988年制定并颁布的《实验动物管理条例》中则明确规定该条例中提到的实验动物是指经人工饲育，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。在其后出版的一些实验动物学教材中也沿用了这一定义。在2004年修订的《北京市实验动物管理条例》第2条将实验动物定义为经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。对三者进行比较可以看出对实验动物定义是渐进的细化，同时我们从定义可以看出实验动物与其他动物存在明显的区别。其一:实验动物的来源。它是由人工培育且具有比较明确的遗传背景和清楚的来源，不同于一般野生动物是在自然中生育成长的;其二:它本身携带的微生物和寄生虫是受到控制的，这与家禽家畜或者其他观赏动物，伴侣动物也是不一样的;其三:它的存在目的。比如伴侣动物是以供玩赏、陪伴之目的而饲养的动物，农场动物则以为人类提供肉质产品及食物为目的，实验动物则是为了生命科学的发展及人类健康的目的而应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
综上所述，实验动物与其他各种动物都是存在极大差别的，从它出生的那一刻起就一直被人类的活动所影响和掌控，它的存活完全依赖于人类，不管是日常的活动和生存环境还是最终的死亡，它存在的价值就是完完全全的贡献于人类。它的生存环境是受到控制，要求非常严格的。基础的环境因素主要包括实验室温度、湿度、光照度、噪声、氨浓度、送风次数等，这些因素更是直接影响到实验动物的生理节律，精神状态和健康状况，从而间接地影响到进行科学实验所获得数据结果的准确性、可靠性。为实验动物创造舒适，尽力满足它们需求的环境条件，一方面是为了避免因为环境因素而造成科学实验不必要的误差，减少个体差异性;一方面也是出于人类文明，公共道德的考虑，实验动物作为人类的替身，为人类医药健康事业献身，我们也应该提倡保护他们的福利。
2. 2实验动物祸利由上文内容可知，实验动物也属于动物，只是在某些方面区别于其他动物，因此，实验动物福利也包括上述所说到的动物福利。同时在动物福利的基础上，实验动物福利还需要遵循3R原则。这一原则由动物学家Russell和微生物学家Burch于1959年提出，现已逐渐被广大实验动物饲养及实验人员接受及广泛应用，3R原则具体即替代(replacement)、减少(Reduction)和优化(Refinement)。替代是指尽量使用无知觉的实验材料代替活体动物，或者使用低等动物代替高等动物进行试验的科学方法，而现在比较先进的做法是编写程序，运用计算机技术进行模拟实验，这在很大程度上是对实验动物福利的一种解放;减少即指在科学研究中进行在动物实验时，使用比较少量的动物来获取同样多的试验数据或者使用一定数量的动物尽量获得更多的试验数据的科学方法;优化则是指在进行实验设计时实验方案及指标选取的优化，以及实验过程中实验技能和实验条件的优化，如今这一原则己获得广大科研工作者的认同，这一观念也越来越深入人心。而在2005年，美国芝加哥的伦理化研究国际基金会还在3R的基础上提出了4R原则，增加了Responsibility(即责任)作为第4个原则，要求人们在生物学实验中增强伦理观念，呼吁实验者对人类和动物都要有责任感。
实验动物作为自然界中存在的独立个体，是与人类一样具有个体的自由的，当人类将实验动物用于科学实验中的时候，其前提其实是己经剥夺了动物的个体自由权利，因此，我们在与之接触过程中更应尽可能的为他们创造环境，保护其应享有的福利。
3动物福利现状
3. 1国外动物福利发展自1822年(Martins act an act to prevent the cruel and improper treatment of cattie《防止残酷和不良对待牲畜法》又被称为《马丁法案》的有关动物福利的法律颁布至今，欧美等国己经在动物福利保护的道路上走过了一百多年，相关的法律法规相对来说己经比较完善，如英国在颁布《马丁法案》后于1849年，颁布了《防止虐待动物法》。该法规定，任何人如果对动物进行殴打、不良对待、过分使用、虐待或酷刑折磨，或者致使上述行为发生，均属犯罪行为。均将受到罚款。另外，法律还规定了执法当局从此有权对此类行为进行指控、起诉。直到1850年以后，动物福利的法律开始关注用于科学实验的动物身上，于是，在1876年英国议会通过了《防止动物虐待法》。到了1911年，英国议会通过了著名的《动物保护法》(Protection of animals act)。该法将英伦三岛当时和之前的各个防止虐待动物的法规进行了整理和补充。2005年，英国议会提出了新的《动物福利法》( Animal welfare act)草案，取代了《动物保护法》，这部法律在2006年年底通过，并于2007年4月6日正式生效。美国在动物福利保护这方面也走在前沿,1963年，美国颁布了《实验动物使用和饲养管理指南》，这是最早的关于实验动物福利的指南，到1966年，美国颁布了《动物福利法》，这是最早的一部与实验动物管理有关的法律，并在1970年、1976年、1985年和1990年先后四次对《动物福利法》进行修订，后又颁布了《饲养管理和使用脊椎动物在检验、研究和教育中的法规》，所有部门都要遵守这一法规。其他如日本、加拿大等国家也相继出台相关法律，保护动物及实验动物福利。
3.2国内动物福利发展我国引入动物福利理念时间较晚，无论是科技条件方面还是在观念方面都与国际上存在较大差距，动物福利制度建设并不十分完善，但我们仍在继续努力。虽然没有专门的法律对动物福利进行规范，但我国在1988年出台了《实验动物管理条例》，对实验动物的饲养、使用等方面进行了规定，在2001年对其进行修改，并首次将动物福利写入法规。1997年，3R原则首次出现在《关于九五期间实验动物发展的若干指导意见》，其它颁布的条例法规有《实验动物质量管理办法》《实验动物许可证管理方法(试行)》等，都提到了动物福利与动物伦理，开始逐步加强对实验动物管理。2006年9月3日，我国了《关于善待实验动物的指导性意见》，这让我国动物福利立法又向前迈出了可喜的一步。且现在越来越多的地方性实验动物管理法规条例都将动物福利的内容增加了进去，如2005年实施的《北京市实验动物管理条例》中就明确规定，任何从事实验动物工作的单位和个人，都应当维护动物福利，保障生物安全;从事动物实验的人员应遵循替代、减少和优化的原则来进行实验设计，要使用正确的方法对待实验动物。同年《湖北省实验动物管理条例》修订后，就明确做出规定，实验者应当为动物创造良好的生存条件。2008年《江苏省实验动物管理办法》将实验动物科普与福利单列为一章，这在国内还是首次，这也充分说明了实验动物福利工作的重要性以及受重视性。2010年10月1日起实行的《广东省实验动物管理条例》中也特别提到了实验动物福利，包括进行替代，减少以及优化实验设计，实验中，对实验动物进行麻醉及最后实行安死术。
而在我国的其他地区，如台湾，动物福利制度己经比较接近国际化。在1990年时台湾夏良宙学者就提出，动物福利可以简述为:善待活着的动物，减少死亡的痛苦，同时在台湾还设有专门的动物福利组织以及网站，在 1998年制定《动物保护法》,2000年1月19日颁布了《动物保护法实施细则》，其中都有相关于实验动物福利保护方面的内容。而在2004年修订的《动物保护法》，对动物保护以及福利进一步做了比较翔实的规定;香港特别行政区在回归后于1999年，颁布了《香港防止残酷对待动物条例》，之后香港特别行政区又针对实验动物颁布了《实验动物照料与使用守则》。
目前我国除了台湾其他地区并未出台明确保护动物福利的法律。虽然现有《野生动物保护法》，但该法仅限于保护珍稀动物，普通的野生动物以及圈养动物并不在它的保护范围之内，而且该法律对伤害野生动物行为的规定也非常少，更多的是针对非法获取野生动物用以盈利行为的制裁和惩罚。因此我国目前应借鉴其他欧美大国的动物福利立法经验，尽早出台明确性的动物福利法。
实验动物学的定义范文2
关键词：耳聋左慈丸；肾虚耳聋；耳蜗；水通道蛋白4；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.019
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0069-03
Abstract：Objective To investigate the effects of Erlong Zuoci Pills on AQP4 expression in cochlear tissue of mice with elderly kidney deficiency deafness；To discuss the action mechanism. Methods Intraperitoneal injection of hydrocortisone method was used to duplicate mice models with kidney deficiency except the normal control group. After the models were established， mice were divided into model group and TCM group， 16 mice in each group. TCM group was gavaged by Erlong Zuoci Pills， model group and normal control group were gavaged by normal saline for 22 d. Cochlear stretched preparation technology was used to observe morphological changes in cochlear inner and outer hair cells， and supporting cells. Immunohistochemistry and Western bolt were used to detect protein expression of AQP4. Results Compared with normal control group， mice in model group missed inner and outer hair cells and supporting cells of the cochlea. Compared with model group， arrangement of cochlear inner and outer hair cells and supporting cells was neat and boundary was clear in TCM group. Compared with model group， protein expression of AQP4 in cochlear tissues in TCM group increased （P
Key words：Erlong Zuoci Pills；kidney deficiency deafness；cochlea；AQP4；mice
中医认为，耳司听觉、主平衡，肾为先天之本、藏精之脏，开窍于耳，耳的听觉灵敏依靠肾精的充沛，髓海的充足。肾气亏虚是老年性耳聋发病的本质所在。耳聋左慈丸是治疗老年肾虚耳聋的经典方剂，用于临床数十载，其疗效得到广泛认可 [1-2]。水通道蛋白（aquaporin，AQP）主要作用在于参与水分子的跨膜转运，且已被证实在哺乳动物内耳有多种亚型的分布，而在内外淋巴循环及听力平衡中的作用至关重要，所以推测AQP对听力功能可能起着重要的作用[3]。本研究通过建立老年肾虚耳聋模型，观察耳蜗组织AQP4蛋白表达的变化，并探讨耳聋左慈丸的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
清洁级昆明小鼠66只，11～12月龄，雌雄不拘，体质量（20±5）g，辽宁中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（辽）2012-0018。自由饮水、摄取标准颗粒饲料，室内温度22 ℃，相对湿度45%。
1.2 药物
耳聋左慈丸汤剂（熟地黄24 g，山萸肉12 g，山药12 g，茯苓9 g，泽泻9 g，牡丹皮9 g，柴胡3 g，磁石3 g），饮片购于辽宁中医药大学附属医院。氢化可的松注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批号20130522。
1.3 主要试剂与仪器
SABC试剂盒（抗兔）、DAB显色液（北京鼎国试剂有限公司），亲和纯化兔抗鼠AQP4多克隆抗体（Proteintech）。动物颅骨钻（成都泰盟科技有限公司），FSH-Ⅱ型高速电动匀浆器（江苏金坛市环宇科学技术仪器厂），PoMini-Protein Ⅲ垂直板电泳装置（美国BIO-RAD），解剖显微镜（日本OLYMPUS 322598）， werPac200电泳仪（美国BIO-RAD）。
1.4 分组与造模
随机抽取50只小鼠，参照文献[4]方法造模。小鼠每日按0.5 mg/只剂量腹腔注射氢化可的松，共9 d。之后进行听力测试：注射10%水合氯醛麻醉，置于隔声屏蔽室内，应用脑干诱发电位仪（丹麦）进行检测。每只小鼠分别测试双耳ABR反应阈。每耳测3次，以至少一耳ABR阈值≥15 dB为耳聋模型制备成功。小鼠出现体毛枯槁无光泽或稀疏脱落，四肢无力、活动少，听力减退（至少一耳ABR阈值≥15 dB）为肾虚耳聋模型制备成功。成功获得老年肾虚耳聋小鼠32只。按随机数字表法将肾虚耳聋小鼠分为模型组和中药组各16只。另16只小鼠作为正常对照组。
1.5 给药
耳聋左慈丸汤剂按照中药水煎液制备，浓缩至0.3 g/mL[5]，按照小鼠的体质量换算得出小鼠的给药量为0.5 mL/只，每日灌胃1次，共22 d。模型组和正常对照组每日给予0.5 mL/只生理盐水灌胃，共22 d。
1.6 指标观察与测定
1.6.1 耳蜗基底膜铺片及形态学观察 采用基底膜硬铺片法[6]。将小鼠断颈处死，取出双侧听泡，行耳蜗铺片，在解剖显微镜下去除镫骨，用细钢针挑破蜗顶骨壳和蜗窗及前庭窗膜，从蜗尖灌注4%甲醛溶液并固定于该溶液中24 h（4 ℃）。固定的耳蜗经0.1 mol/L PBS洗涤，脱钙1周。在20倍解剖显微镜下剥离耳蜗，取全层基底膜于生物显微镜下观察，摄片。
1.6.2 免疫组化法检测小鼠耳蜗组织水通道蛋白4的表达 采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术，即SABC法。兔抗鼠AQP4一抗（1∶100）稀释后滴加，4 ℃冰箱过夜，切片PBS液冲洗3次后滴加二抗，室温放置30 min。经PBS液冲洗3次后滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温放置30 min。DAB显色，苏木素复染，反向梯度脱水，每张切片滴中性树胶1滴，盖玻片封片。在生物显微镜下观察，以胞膜或胞浆有棕黄色染色者为阳性细胞。应用BI2000医学图像分析系统，对采集的图像测定阳性反应物的灰度，每只动物随机取5～6张切片，且各组所选部位相同。
1.6.3 Western blot检测小鼠耳蜗组织水通道蛋白4的表达 将耳蜗组织取出后放入EP管中，加入pH 7.5裂解液，将样品剪碎后匀浆，12 000 r/min离心15 min，取上清液即为总蛋白。兔抗鼠AQP4一抗（1∶1000），山羊抗兔二抗（1∶10 000）抗体稀释液稀释后， O-dianidine、β-naphthyl acid phosphate显色，扫描仪扫描NC膜，分析结果。
1.7 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以―x±s表示，组间比较采用方差分析。P
2 结果
2.1 耳聋左慈丸对小鼠耳蜗基底膜形态学的影响
正常对照组耳蜗内、外毛细胞与支持细胞基本无缺失，排列整齐。模型组耳蜗支持细胞排列混乱，甚至缺失或脱如，外毛细胞缺失严重，波及中回和顶回，在耳蜗底回和中回的内毛细胞亦有缺失，仅见零星残留，残余的内毛细胞静纤毛丛散乱、变短融合、断根。中药组耳蜗内、外毛细胞和支持细胞排列较整齐，外毛细胞缺少并不严重，边界尚清楚。中药组与模型组差异明显。见图1。
2.2 耳聋左慈丸对小鼠耳蜗组织水通道蛋白4表达的影响
免疫组化检测显示，AQP4免疫反应物呈棕黄色，其反应部位位于螺旋神经节细胞及基底膜外侧Cortis'器的Hensen细胞和Claudius细胞等处，染色强度中药组较模型组明显变深，见图2。与模型组比较，中药组AQP4蛋白表达水平上调（P
Western blot检测显示，中药组与正常对照组耳蜗组织AQP4蛋白表达无明显差异，中药组耳蜗组织AQP4蛋白表达较模型组上调（P
3 讨论
由于年龄增长使听觉器官衰老、退变而出现的双耳对称、缓慢进行性的感音神经性听力减退，定义为老年性耳聋。近年来研究发现，11～12月龄小鼠耳蜗底回和中回外毛细胞几乎完全丧失，内毛细胞显著缺失[7]。耳蜗螺旋神经节细胞退变，血管纹老化引起能量转导减少，呈隐性进行性退变是老年性耳聋的关键。本实验中，模型组耳蜗毛细胞与支持细胞排列紊乱，甚至变短或融合，从而与该研究结果相符。1991年，Agre[8]在红细胞克隆了AQP1，证明了该蛋白具有很强的水通透性，从此AQP成为人们研究的热点。鉴于AQP对水分子的高度通透性和内淋巴容积的稳定及内耳内环境的稳定对听力功能的重要作用，人们开始研究AQP与内耳疾病的关系。黄氏等[9]研究发现，小鼠内耳中有多种AQP亚型的存在，而且其分布区域没有重叠性，在内耳环境的调节中起着协调平衡作用，而其中AQP4在小鼠内耳中分布最广泛，而AQP4基因敲除的小鼠出现明显的听力受损（神经性耳聋除外）[10]。听力损失的严重程度可能与耳蜗细胞中AQP4的表达有关。有研究表明，随着年龄的增长，听力损失愈发严重，则AQP4表达呈现下降趋势，而中脑中AQP4 mRNA表达则出现先降后升的波动性表达[11]。
现代医学对肾与耳在研究耳聋方面的资料尚少。本研究采用耳蜗铺片技术更加清楚直观地看到模型组与中药组耳蜗毛细胞与支持细胞的变化。免疫组化和Western blot检测结果表明，模型组小鼠AQP4蛋白表达降低，中药组AQP4蛋白表达增强，提示耳聋左慈丸治疗肾虚耳聋可能是通过上调耳蜗组织AQP4蛋白表达而发挥治疗作用。但肾虚通过何种途径或何种通路影响耳蜗组织AQP4的表达，还有待进一步探讨。
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