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纳米无痕技术范文1
贝佳斯全新推出的“活力亮采系列”，不但继续发扬其原有的矿物、活水成分，更融合先进纳米科技、汉方草本及“细胞能量复合物”，易于吸收，并使肌肤迅速恢复光泽亮丽。活力亮采美肤泥浆，是一款具深层净化、补湿及促进新陈代谢的面膜。能帮助肌肤去除老化干涩的表皮；活力亮采修护露则采用纳米科技配合两种皮质有机肽，加强皮肤底层的紧致度及锁水功能；活力亮采睛凝霜使双目更加紧致、亮丽，其采用先进科技并融入“细胞能量复合物”及人参等；活力亮采极致精华乳能增强皮肤紧致度，更显光泽、明净、色泽均匀。
兰芝雪凝新生精华露滋润如雪肌肤
韩国领先护肤品牌兰芝，特别针对整体抗老化，如细纹、皱纹、老化迹象等，研制出了新款护肤圣品。它通过按摩，能够在15秒内提升面部线条，并通过刺激细胞蛋白质形成预防细纹和皱纹产生的抗老化精华露。即刻提升松弛的肌肤，令肌肤平滑柔嫩。
凝聚植物无限生命力的菁华化妆水
于众人关注目光中全新登场的艾文莉萃籽活颜精粹化妆水，精选具有出色抵御氧化能力的龙眼籽与月见草籽提取物，并配合以精心提炼的纯净日本川芎根水，将蓬勃的生命能量传导至肌肤内部，温润滋养肌肤。予以肌肤及至深层的眷顾，缔造莹润透亮的健康肌肤。每天持续使用，能令干燥的肌肤保持水润，富有莹亮透明感。帮助肌肤战胜因环境而生的各类压力与苦况，使得肌肤时刻展现生机勃勃的生命力，孕育出跃动生命光华的活力肌肤。
宝迪佳亮白祛斑修护精华露闪亮上市
光导致皮肤的过早衰老，是因为结缔组织中胶原蛋白和弹性纤维有了变化和皮肤细胞中的核心物质-DNA（脱氧核糖酸）减少了。在皮肤受到过度的强光照射或者是皮肤自我保护能力很弱的时候，皮肤就会变得粗糟，失去弹性，皱纹也会过早出现。宝迪佳研发队伍注意到这一皮肤问题，从而运用高科技技术研制出创新的修护配方系列产品。独特的活性成分的组合必能帮助并防止皮肤受到阳光的侵害。
法国 魅力匙让完美肌肤轻松拥有
细滑无瑕的肌肤是爱美人士永恒的追求，然而季节更替、细微表情等外界因素均会给完美的肌肤带来冲击，留下难以磨灭的痕迹。法国mATIS魅力匙护肤品牌针对肌肤开始出现松弛、有皱纹和细纹，表情纹明显、肤色不均匀的人士提供一个回复脸上青春神采的方法，配合最新科技创造出特效抗皱系列，其三重革命性专利成分，渗透到肌肤的各个层次，发挥更新、修复、除皱三重高科技力量，加速新生细胞的增殖并向表皮迁移，修复受损的组织使其恢复健康质感，抚平皱纹和细纹的同时，抹去岁月痕迹，呈现光彩照人、匀净无痕的焕新容颜。
SISLEA革新科技新突破, 全方位终极对抗皱纹困扰
作为在全球享有盛誉的著名化妆品牌，Sisley希思黎多年来一直致力于全方位抗老化产品的科技研发，并始终在该领域占据不变的领先地位。Sisley希思黎倾力奉献的SISLEA Daily Line Reducer抗皱活肤修颜精华液，即为SISLEA抗皱活肤驻颜系列产品的最新科技突破，它可全面对抗所有类型的皱纹现象，其独有革命性抗皱配方，可直接作用于肌肤底层，通过“天然充填”而令皱纹减浅，并可迅速帮助肌肤恢复紧致、弹性和自然抵抗力。
朱丽叶・比诺什倾情诠释兰蔻立体塑颜系列
作为一名演技精湛的女演员，朱丽叶・比诺什是为数不多的在法国以及全世界都成为传奇的女性。她勇往直前的演艺生涯让她获得了无数人的喝彩。她精通英语和法语，同时还涉足电影、歌剧、绘画、舞蹈等领域。她的人生信念就是真理、力量和决心。一个值得钦佩和欣赏的女性，多年之后重新成为LANCME兰蔻的代言人。她代言的兰蔻立体塑颜系列，将问鼎东方市场，掀起知性女的魅力热潮。
英国幸福职业排行美容美发业居前
英国伦敦城市行业协会最近公布了一个职业幸福指数排行榜，美容和美发业在最幸福的职业中高居前两位。据报道，来自各行各业的1000人参加了民意调查。在幸福职业排行榜上名列第三位的是军人，接下来分别是厨师长、售货员、教师、营销人员、会计师、秘书、自来水管道工、工程师、建筑师、新闻工作者。在排行榜上垫底的是建筑工人、银行职员和保姆。而美容美发行业以开创时尚先锋的姿态，遥遥领先位居前茅。
纳米无痕技术范文2
抗衰老防晒产品
虽然抗衰老诉求早在2002年就出现在了防晒产品中,但是现在其诉求的市场语言更加具体、更加细化。通常,包装和插页都会提及抗氧化剂或抗自由基保护功效,现在在全球市场中,抗衰老理念已经进入了防晒市场中。
Lancaster为成熟肌肤推出的修色抗衰老多层修护莹彩防晒霜SPF15(Sun Care Mature Skin Tinted Anti-Age Multi Protection SPF15)(35.60)据说专门为成熟肌肤设计,具有紧致、滋润、多层保护等功效。这种用于面部和前胸的略有修色效果的防晒霜具有保湿功效,使人的肌肤在受到中度日晒的时候依旧能够感觉舒适,同时它还可以预防黑斑的形成。该产品含有专利抗氧化合成物RPF(自由基预防剂),可以中和掉80%的自由基,从而减缓表面肌肤的老化。该产品中含有西瓜成分,能够保持肌肤水分,而其中的美黑活化成分则可以使肌肤慢慢变成健康而持久的古铜色
Sisley推出的抗衰老防晒霜(Sunlea Age Minimizing Sun Care SPF 15)(115)据说可以预防衰老现象的产生,并可以保护肌肤不受日晒的伤害,但同时又不会妨碍美黑的效果。其中含有的合成物金酸浆花萼(酸浆属)(Alkekengi's Calyx (physalis))、菱锰矿(rhodocrosite)以及维他命E都可以保护肌肤不受自由基的伤害。
瑞士护肤品牌Transyital在4月份的世界美容展上面向全球市场推出了两种抗衰老防晒产品。抗衰老面霜(Global Anti-Age Face Cream SPF 30)是为面部和颈部设计的保护型液体防晒霜,它含有一种特殊的成分:全球抗衰老防晒系统(Global Anti-Age Sun Protection System)在提供UVA/UVB防晒的同时,还可以保护肌肤不受光老化的影响、预防色素沉淀、并保持肌肤水分平衡。据说该产品尤其适合那些易生红血丝的敏感性肌肤。
Transvital针对男性消费者推出了全球抗衰老面霜(Global Anti-Age Face Cream SPF 20),这是一种针对面部肌肤的保护型液体防晒霜,其中含有小麦胚芽、酵母以及玻尿酸合成物。
New Concepts
美国Luzern Laboratories? Organic Cosmeceuticals宣称将填补药妆、有机产品、以及欧洲奢华化妆品直接的鸿沟。它推出了保护型面霜(La Defense SPF 30+)($50),这种100%的矿物质防晒霜可以保护胶原蛋白,使肌肤不受污染和自由基的破坏。该产品具有一种新型技术,能够使胶原蛋白结合体不被日光分解。该产品含有认证的绿茶和芦荟精华以及大豆和葵花籽油,可以帮助舒缓曝露于日晒的肌肤。其配方不含防腐剂和香精,可以在最大程度上减少肌肤未老先衰的迹象,预防黑斑的形成。
在英国,ZO1推出了运动版的无痕保护棒(Invisible Protection Stick SPF 30+)(10.95),这种手掌大小的保护油带有一个嵌入式的竖钩非常适合山地运动以及活泼的儿童,因为它可以直接使用而不用揉搓。该产品可以提供全波段的UVA、UVB紫外线保护,并含有微粒氧化锌配方ZincClear。该产品涂抹在肌肤上以后变成透明色而不是白色。而且该产品防汗,并可以在高海拔的地方使用,能够防止晒伤以及大风带来的裂纹。这种保护油还可以用于眼部肌肤,并含有维他命A和E。
Sephora推出了可调式紫外线防晒霜(Adjustable SPF Sun Cream)(25),在一个瓶装产品中能够提供三种级别的防晒指数(SPF 15, 30, 50),适合面部肌肤和身体肌肤的不同需求,能够满足不同肌肤颜色、渴望日晒的程度以及/或不同家庭、不同朋友的不同需求。这种防水产品的配方中含有芒果脂和monoi油。
Colorescience推出的防晒霜(Sunforgettable SPF 30 Orb)($40)是一种防水粉末,据说在水中经过80分钟后依旧可以防晒。该产品得到了肌肤癌基金会的推荐,证明其实一种有效的紫外线防晒产品。该产品具有三种颜色可供选择。
天然防晒产品的发展
在2007年夏天,我们看到天然防晒产品中越来越多的使用了物理“矿物质”遮光剂,但是在这个夏季,天然产品中更多的含有有机活性成分而不是固定的物理性配方。
L'Occitane离开了它的起源地普罗旺斯,来到了巴西,打造出它的第一款防晒加美黑系列产品。L'Occitane do Brasil采用了一系列巴西的有机成分,100%使用矿物遮光剂。这款高效防晒霜(High Protection Sunscreen Veil)(19)为面部和眼部肌肤设计,不含化学滤光剂,能够过滤UVA/UVB的紫外线,SPF值为30。这种质地轻薄的哑光色防晒霜非常适合户外使用。其配方中含有来自Buriti棕榈树的有机植物油,富含抗氧化剂β-胡萝卜素。
希腊品牌Apivita在2008年4月的国际美容展上推出了新的防晒系列。防晒身体喷雾(Sunscreen Body Spray SPF 30)的配方中含有有机橄榄叶精华、蜂胶、具有保湿作用的刺梨以及海茴香,可以增强肌肤自身的天然保护能力,并减缓光衰老。该产品不含防腐剂paraben、硅树脂、丙烯成品,它为低变应元产品,并且防水。
Dr. Hauschka推出的防晒喷雾(Sunscreen Spray SPF 15)(22.50)可以提供物理防晒保护,它使用了精细的矿物颜料,不含化学滤光剂。该产品含有温柏树籽保湿精华、冰叶日中花(ice plant)以及鳄梨油。这种防晒喷雾适合敏感肌肤使用,它具有轻薄的乳状质地,富含玫瑰果精华、橄榄籽油以及芝麻籽油,能够柔软肌肤。它不含人工防腐剂、色素或香精。
防晒产品的美好未来预测
明年,美国联邦政府认可的全新防晒产品评估系统将奏效,所以Mintel期望会看到很多防晒产品经过重新配方或/及重新命名。另外,具有防晒功效的化学成分和有益于肌肤健康(滋润、修护等)的天然、有机成分将进一步结合。越来越多的产品将致力于修护DNA,很可能通过口服美妆品实现。纳米技术也有望进一步主宰防晒产品市场。
英敏特国际集团(Mintel International Group)
英敏特信息咨询有限公司(Mintel)是全球领先的快速消费品市场情报趋势分析、消费品市场调查报告、媒体检测、市场咨询等一系列信息咨询服务供应商。
纳米无痕技术范文3
加入了润光系统的柔感控光晶粒,灵活滤光并均匀反射,使肌肤呈现柔滑质感,而长效凝水因子,全天候深凝水分,肌肤即刻充盈水润,能很好地遮盖粗大的毛孔。
Dior迪奥凝脂无瑕防护粉底液SPF15/PA+500元
以纺织的尖端纳米科技为灵感,在肌肤表面编织出清澈透明、轻薄透气的隐形网,改善肌肤质地,同时高效反射光线。即便在皮脂分泌的情况下,也能保留最初色彩长达数小时。SPF指数也恰好能在秋冬季节适当防护。
Givenchy纪梵希感光皙颜粉底液SPF20/PA+++520元/25ml
常春藤萃取物能使肌肤自然恢复其清新柔嫩,皙颜复合物还含有高浓度的皂角苷,能帮助肌肤持续改善微循环,赋予肌肤红玫瑰般的健康光泽,适合秋冬极易干燥的肤质。可以采用手指轻拍的方式上妆。
Sisley希思黎植物轻柔粉底液780元/30ml
含栀子、菩提、欧锦葵等植物萃取物,有保护肌肤作用,更可提供持久、亚光、粉嫩的妆效,多角度反光剂可帮助降低肌肤表面细纹及瑕疵,有效柔化皱纹和细纹,适合偏油性肌肤。
Giorgio Armani阿玛尼纯净持妆粉底液SPF20680元/30ml
因为采用了独家的Micro-fil技术,所以粉质极其细腻,能让色素微粒与虹彩因子长时间附着在肌肤上,妆容清透,而且后续的补妆也不会造成浮粉现象。
Clinique倩碧极致柔润粉底乳液310元/30ml
蕴涵强效保湿剂,超凡滋润能力堪比保湿面霜,虽然质地滋润,但是防水、抗汗的功效也值得期待。乳霜的使用感,能营造肌肤水嫩的舒适感,可以配合粉底刷和手指涂抹均匀。
造型师最爱的粉底工具
造型师评审团
Leo 《华人大综艺》幕后造型师
小葛 台湾知名造型师,擅长欧系美妆
KIKI:擅长日系彩妆造型师&发型师
陈昱燕
黄奕御用造型师
淳子 毕业于东京HOOYLWOOD美容专门学校,经常活跃于《美丽俏佳人》等节目中
最常用――半专业粉底刷
举手支持
支持理由:不管是专业人士还是自己在家化妆,都要准备一款粉底刷!妆效绝对可以媲美专业级化妆师。
最无敌使用方法:刷子一般用于液态粉底,用刷子打底的优点是轻薄均匀;缺点是干性皮肤使用不当容易起屑。可全脸使用,用粉底刷顺着皮肤的纹理横向轻刷,细微处可以稍微逆着毛孔轻刷,帮助粉底铺均。
不建议选择过于柔软的刷毛,很易吸收粉底且涂抹不开较厚的粉底。好的底妆刷毛量比较多,不要选太小号的刷子。毛量厚重的刷子刷粉底才有牵扯力。推荐植村秀、Bobbi Brown的刷具,柔软度适中,毛量也够厚。推荐选择羊毛材质以及尼龙材质的刷具。
M・A・C专业方形粉底刷191#380元
纤维、尼龙和羊毛的混合材质,适合质地较厚的粉底液、粉底霜等底妆产品。方形头设计更有利于刷具在肌肤上的平稳着力。
Bobbi Brown粉底刷350元
软硬适中的刷毛,适合各种粉底液,能打造水润的粉妆效果。
TIPS
化妆师爆料:底妆广告上模特非常通透的妆容,是用特制喷枪喷洒粉底上妆的,程序比较复杂。
最简单――万能手指
举手支持
支持理由:在无法控制粉底刷和海绵的使用方法时,用手指涂抹是最易学的方法。当然,用手也是最方便的选择。
最无敌使用方法:用手指涂抹粉底虽然最简单易学,但是,不要以为仅仅用指腹就能把粉底液涂抹均匀,方法错误的话,很可能反而涂出“搓泥”般的尴尬效果。造型师建议用中指和无名指紧靠,用轻拍的方法使粉底均匀,千万不要单纯来回涂抹,否则只会使粉底在肌肤上产生“拉扯”,底妆根本无法均匀。可以利用手指的温度,将粉底更好地融合在皮肤上,眼部、痘痘、瑕疵使用手指来打底,可以更自然伏贴。取少量的粉底在虎口,然后用中指和无名指指腹在脸部轻轻点按推匀,不要忘记推匀发际线等连接部位,最后可以互相揉搓双手,用温热的双手轻按整个脸部,让粉底更加贴合肌肤。这个方法适合肤质比较好的女性。
不支持理由:个人认为用手指涂抹根本达不到使底妆通透的效果。
TIPS 底妆达人QA
Q 如何化出亚光质感的妆效呢?
A 如果喜欢不泛油光的妆效,可以在面部轻扫一层不含亮光微粒的蜜粉加以定妆。不过亚光妆效其实并不适合亚洲女性偏黄偏黯淡的肌肤。
Q 整脸使用,如何控制粉底用量?
A 一般大半颗黄豆大小就足够了。可以先在手背上挤出合适的量,用粉底刷一点点扫上全脸即可。干燥的肌肤可以搭配保湿性滋润乳液使用。妆前的隔离很重要,要等隔离霜完全被吸收后再上粉底才更均匀。
最细微――尖角海绵
举手支持
支持理由:比起粉底刷来,海绵更灵活,可以照顾到刷子无法企及的鼻翼、嘴角、眼尾等“犄角旮旯”。
最无敌使用方法:海绵在第一次使用时可将表面平剪掉,在使用时用凉水稍微浸泡然后用纸巾挤干,这个时候的海绵柔软度是最好的,因为有水分,所以不会吸收太多的粉底导致浪费。海绵打底会使妆容显得厚重,除非是特殊粉底(比如水粉状粉底)必须配海绵使用外,一般可以在底妆上好的情况下,用海绵轻压面部,这样可以使底妆更加渗透伏贴,让妆容透明感增加。还可以使用海绵来打腮红,也是用轻压的方式,这样可以使腮红由内而外透出来,更加自然。
针对皮肤有瑕疵或者干燥的肌肤,可以先打湿海绵,这样可帮助更好地上妆。海绵的特殊造型,对于脸部凹凸的部分,例如鼻翼等地方,都可以方便地照顾到。
不支持理由:海绵直接蘸取粉底液,会被大量吸收。最好不以它为主要工具,先用刷子涂抹粉底,90%以上涂完后,再用海绵做辅助修饰工作。
Sephora丝芙兰缤纷色彩双面化妆海绵59元
适用于粉底产品上妆时使用。用海棉蘸取粉底产品,并由脸部中心开始缓缓向两颊外侧擦拭即可。
est嫒色菁华美颜海绵(粉底乳/霜专用)60元
具有良好的使用感,厚度、弹性非常适宜,建议使用前先揉捏几下,使海绵更易于使用。
Make up for ever斜型海绵95元
斜角设计,可以使用在鼻翼、眼角等细小部位。
肌肤烦恼,粉底液一扫而过
烦恼1
毛孔&粗糙问题
上妆前可针对特别粗糙的部位,选用遮瑕度高的粉底产品或用液体遮瑕膏局部加强遮盖。毛孔现象很明显的话,上妆前先敷一层保湿或紧致的面膜,使皮肤角质柔软后再上妆前乳。用粉底刷蘸取适量粉底液,沿着皮肤纹理轻刷,在比较粗糙的鼻翼周围,用指腹轻按粉底液使其均匀覆盖。
1. Revlon露华浓光感臻颜粉底液
248元/30ml
巧妙运用光学原理的“柔和焦点技术”修正肌肤瑕疵,光散射配方赋予毛孔真正的隐形遮盖。
2. Chanel香奈儿纯净光采粉底液
475元/30ml
以氨基酸裹覆的色素,能在无粉质感的情况下,有效控制肌肤的泛油现象。完美的亲肤性及抗潮湿性,使粉体色素得以均匀散布,使肤色均匀。
3. Guerlain法国娇兰金钻柔雾粉底液SPF25/PA++520元/30ml
粉底配方中添加了金钻光微粒,就像一面微棱镜漫射光线,使肌肤的毛孔不再明显。
4. Make up for ever清晰无痕粉底液455元/30ml
氨基酸色素使粉底液与皮肤有很强的贴合力,能均匀调节肤色并淡化皱纹,加入了能增加肌肤光泽度的丝胶,使粗糙的肌肤看似均匀光洁。
5. Orbis清亮粉底液169元/30ml
用半透明的浆状美肌面纱将毛孔隐藏起来。无油粉体质感轻薄, 蜂王浆精华的保湿作用也改善了毛孔的粗糙问题。
烦恼2
干燥&细纹问题
最好在保湿滋润功课后上粉底产品。使用保湿效果较好的粉液、粉霜,以少量多次的方法,用粉刷层叠上妆。如果使用蜜粉类定妆,则注意仅在T区、下巴等易出油部位稍微按压一下即可,不必全脸用蜜粉定妆。在眼周不要使用蜜粉定妆,否则干纹现象会很严重。
1. Shiseido资生堂make up水润乳粉膏380元/12g(粉盒另售120元)
虽然是固态,但兼具粉底液的持久保湿效果及粉饼的方便性与自然妆感,水覆型活力DE成分,改善干燥、缺水与粗糙感肤质。
2. Aqua Sprina雅呵雅丝睿凝时无瑕滋养粉底霜SPF16/PA++190元/30g
触感丰盈水润的乳霜质地,调整角质层水分环境,用后肌肤不易干燥、脱妆。
3. L'Oreal Paris巴黎欧莱雅绝配无瑕莹露滋润粉底液170元/30ml
这款富含透明质酸的粉底液能瞬间滋润肌肤,产品中由于融合了精细柔滑微粒,非常容易抹匀,而且它独特的有光感质地和偏粉的色系,尤其适合偏干、暗亚的肤质。
4. Elizabeth Arden伊丽莎白・雅顿丝润粉底液SPF15290元/30ml
延续了凝时定格护肤系列中的“植物休眠素技术”,并采用了微矿柔焦科技,一举消灭细纹的同时,还能保持肌肤光泽。
5. DHC紧致焕肤美容液粉底液(明亮肤色)258元/40g
美容液成分高达73%,浓稠、滋润的质地容易与肌肤融合,适合有瑕疵、细纹的肤质。
烦恼3
色斑&黯淡问题
妆前先使用具有提亮效果的底妆乳增加肌肤的整体光泽度,比如BB霜、带细微亮粉微粒的妆前乳液。先在有色斑且肤色黯淡的部位涂抹均匀后轻拍帮助吸收,再用遮盖度较好的粉底产品或遮瑕粉底进行局部点拍式遮盖。注意用指腹轻拍,不要来回涂抹,易导致花妆。
1. Yue sai羽西美肌柔润粉底液200元/28ml
质地润泽而保湿,适合亚洲女性的肤色,能提亮黯淡肤色,并且和原本肌肤色泽自然结合不显生硬。
2. Laneige兰芝雪纱防晒粉底液SPF26/PA+290元/30ml
触感柔和并高度遮瑕,雪晶焕彩粉粒从不同角度反射光线,保持洁净、明亮的妆容。稍微增加用量可提高遮瑕效果。
3. HR赫莲娜炫彩光润精华粉底乳液SPF15
1180元/30ml
富含“原光反射微球体网络”的光透致亮复合液,萃取稀有Manganese葡糖酸锰,舒缓收紧的血管,深入促进肌肤的微循环,改善憔悴黯淡倦容。
4. La Prairie莱珀妮活肤亮颜粉底乳液SPF15
950元/30ml
能在肌肤表面形成一个即时的“柔光”焦点,淡化面部可见的色斑及细纹,刺激肌肤天然的自我修复能力。
5. Primavista映美焕采保湿粉底凝霜300元/30g
虽然质地偏厚,不过却是一款适合干燥缺水肌肤的粉底霜,精华素一般的滋润感以及专利亮颜粉体,创造光透柔滑质感的肌肤。
粉底液的好搭档――妆前乳
完美的底妆,妆前是否用对隔离产品很关键,很多读者会遇到粉底液“搓泥”现象,造型师的解释是:没有选择正确的底妆产品,所以才会和粉底产生“排斥”反应。妆前乳的关键:易被肌肤吸收、质地柔滑、遮盖毛孔,以及帮助粉底液更好地贴合肌肤。
1. Impress IC印象之美 集中护理活力美肌妆前底乳SPF12/PA+280元/30g
令干燥的肌肤柔滑细腻,提高粉底的附着力与持久度,淡雅芳香营造令人放松身心的愉悦氛围。
2. Shu Uemura植村秀泡沫隔离底妆液SPF30/PA+++(米色)380元/65g
能掩盖红血丝的米色,适合不均匀的肤色,轻薄力不增加后续底妆的压力,新配方中突破性的透明质酸成分,增加肌肤水润感。
纳米无痕技术范文4
关键词：基因组编辑；CRISPR-Cas9；猪；基因功能；网络调控
中图分类号：R34；S828 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）24-6510-07
最新的CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）分类表将其描述为三大类型和多个亚型，结合生物化学与分子遗传学方法揭示了不同CRISPR-Cas（CRISPR associated protein）类型的特征[1]，其中II型系统Cas9比其他更为简便。基于CRISPR-Cas9系统的作用原理，研究人员模拟细菌的成熟crRNA和tracrRNA，在体外人工合成gRNA（guide RNA），同样可以达到特异地切割靶标DNA，从而将该系统简化成核酸酶Cas9和人工合成的sgRNA两个组分，在靶标位点导致所期望的插入、删除或替换，由此开创了新型基因编辑技术，这是该系统的“基因工程功能”。更进一步地，通过点突变得到缺乏核酸酶活性的Cas9突变体，命名为dCas9。突变的dCas9可在gRNA的引导下，实现与DNA结合，但不能切割DNA。而dCas9具有融合异源模块的结构域，利用dCas9这3点特性，将其与一系列具有功能的异源模块融合，实现不同研究目的：转录激活与抑制、探索未知基因及其调控元件的功能、全基因组扫描等，这是该系统的“基因调控功能”。不论是基因工程/基因调控，其工作过程是相同的：gRNA通过序列互补原则将核酸酶带到基因组特定位点，使其与靶标结合。不过，基因工程与基因调控是利用Cas9蛋白的不同形式，包括野生型Cas9与人工突变的dCas9蛋白，以实现各自目的[2，3]。该技术能够快速地构建遗传改造的动物，使得在过去要花费数月或数年的工作现在只需几周完成。CRISPR技术与PCR技术类似，正在给生物工程研究带来革命性的改变，从各个方面影响着生命科学的发展[4]。目前基因组编辑CRISPR-Cas中也主要是应用Cas9系统，下面简称“Cas9系统”。
2013年初以来，Cas9系统的快速创新及其拓展应用，使其成为可替代ZFN和TALEN的第三代基因组编辑工具。2013年Science杂志将Cas9系统选为年度十大突破之一（亚军）；2014年美国加州大学伯克利分校生物化学家Doudna博士和德国的Charpentier博士因此共同获得了美国硅谷“科技突破奖”与“阿尔珀特奖”；2015年被Science杂志评选为年度十大突破之首；2016年具有小诺贝尔奖之称的盖尔德纳国际奖授予了三位科学家：Doudna，Charpentier和麻省理工学院的张锋三位博士。几大公司看好Cas9系统的成果商业化前景。Editas Medicine、Intellia Therapeutics和CRISPR Therapeutics等公司已经收到数亿美元的投资。例如，2015年比尔・盖茨等大佬宣布为促进基因编辑技术的蓬勃发展，共投资1.2亿美元参与基因编辑公司 Editas Medicine的B轮融资，Cas9先驱之一张锋是该公司的联合创始人。Editas Medicine计划于2017年采用基因编辑疗法对先天性黑蒙症进行临床试验，这是一种罕见的视网膜疾病，基因突变可能导致眼睛中的感光细胞逐渐消失。据麻省理工W院Broad研究所网站最新报道，农业生物技术巨头杜邦（DuPont）公司宣布对Caribou Sciences公司进行投资，且将获得其专利在农作物使用的独家授权。而Caribou Sciences是Cas9技术首创之一Doudna博士实验室的附属公司。目前，杜邦公司正在温室中种植Cas9编辑的玉米、大豆、水稻和小麦，期望在5～10年内出售Cas9技术的产品。位于明尼苏达州圣保罗的动物生物科技公司Recombinetics正在开发同类动物，包括无须抑制牛角生长的牛和不需要被的猪。2016年6月底，美国国立卫生研究院（NIH）顾问委员会批准了一项申请：利用Cas9系统强化依赖于患者T细胞（一种免疫细胞）的癌症疗法。由于其易用性和通用性，Cas9已经被世界各地的实验室用来改写基因组和重塑细胞，其在医学和农业领域的潜在应用是无穷无尽的，它将开启该行业新一波的产品浪潮和利益追逐。根据瑞士洛桑附近的咨询机构IPStudies介绍，全球已有超过860项CRISPR专利，平均每天新增加一项专利。世界许多遗传学家和生化学家普遍认为，Cas9系统可对所有的生物进行改造，这是一项可改变生命未来的伟大技术，当然，该技术也面临许多伦理挑战。
1 CRISPR-Cas9系统的拓展性应用研究
最初的Cas9只能实现剪切的基因工程功能（CRISPR1.0版本）。每次只能执行一种功能的dCas9是CRISPR2.0。现在研究人员将突变dCas9蛋白与一系列具有功能的异源模块融合，成为能够执行多重功能的CRISPR3.0。这种平台能够执行复杂的程序，适用于研究基因网络机理和更深入探讨复杂性状/疾病[5]。
1.1 同时激活多基因表达/同时抑制多基因
Chavez等[2]设计了三方转录激活子（VP64-p65-Rta）融入dCas9，可探讨一连串基因回路对生物过程（比如组织发育或疾病发生）的影响，也可以精确指导干细胞分化，生成再生医学所需的移植器官。Konermann等[6]应用改造后的Cas9系统成功激活了十个基因，包括长非编码RNA（LncRNA）。这些基因转录效率得到了两倍以上的增长，该研究的意义在于，人们可以用这一技术在活细胞中有效启动任何基因表达[7]。Cas9系统已被成功地用于同时干扰小鼠2个基因和敲除猴与蚕的两个基因[8，9]。多位点编辑将促进多方面研究，包括上位效应的检测和基因组中物理距离非常接近的多基因操作。Ma等[10]同时靶向基因家族的多成员（多至8个位点），突变率平均为85.4%。Zalatan等[11]应用架RNA（scaffold RNA，scRNA），成功在酵母中重新定向了一个复杂的多分支的代谢通路，其中一些基因被激活，另一些基因被抑制（CRISPRa/i）。多基因的组合控制可以帮助人们灵活操纵细胞中的通路，例如，改写细胞命运或者设计代谢通路。Cheng等[5] 报道其CRISPR 3.0版本是Casilio，该系统可结合多个蛋白模块，包括基因激活、基因抑制、染色体荧光标记、组蛋白乙酰转移酶等，以实现不同的目的。
1.2 运用Cas9实施表观遗传学编辑
Kearns等[12]报道dCas9-组蛋白脱甲基酶LSD1 在鼠胚胎干细胞中靶向转录因子Oct4的远端增强子，抑制Oct4转录并失去多能性。许多酶能以不同的机制催化DNA去甲基化，其中，TET（Ten-Eleven Translocation dioxygenase）双加氧酶家族有3个成员：TET1、TET2和TET3，催化的5-甲基胞嘧啶氧化，可启动DNA的去甲基化。Xu等[13]首先向传统sgRNAs中插入两个拷贝的噬菌体MS2 RNA元件，构建了修饰后的sgRNA2.0，这有利于Tet1催化结构域（TET-CD），与dCas9或MS2外壳蛋白融合，以靶向基因位点。结果证明，dCas9/sgRNA2.0指导的去甲基化系统能有效地将靶基因去甲基化，可显著上调靶基因的转录，包括RANKL、MAGEB2或MMP2，而且这结果与它们启动子中相邻的CpG岛的DNA去甲基化密切相关。类似的工作与结果也由Choudhury等[14]报道于模式抑癌基因BRCA1启动子。这些结果不仅可以帮助我们理解在特定背景中DNA甲基化如何调节基因表达的机制，而且也使我们能够控制基因表达与功能，并带来潜在的临床效益。表观遗传效应模块的汇总详见文献[15]。
1.3 运用Cas9开展高通量全基因组遗传学筛选
全基因组 CRISPR 筛选克服了传统遗传筛选的缺点，可应用于几乎任何细胞系和任何遗传背景下的筛选[16]。应用其进行遗传筛选的基础是蛋白Cas9修饰后的多种形式融合和sgRNA文库。构建Cas9高通量筛选的文库有两种：阵列文库和混合文库。（1）细胞系中开展遗传学筛选。Wong等[17]创建了Cas9与CombiGEM结合的平台技术，可展望，该平台有着广泛的应用前景，加速系统鉴定控制人类疾病表型的遗传组合，并转化到新药物组合的发现。（2）体内开展遗传学筛选。Ma等[18]将活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶（AID）与dCas9融合成为dCas9-AIDx，在慢性粒细胞中靶标BCR-ABL，鉴定了赋予细胞伊马替尼抗性的已知突变和新突变。Zhu等[19]开发了配对的gRNAs（pgRNAs），产生大片段缺失，应用这种高通量方法确定了51条功能性的lncRNAs，并验证了其中的9个。该方法使科学家们能够快速识别哺乳动物非编码元件的功能。
1.4 光遗传学加CRISPR调控基因表达与靶DNA切割
东京大学和杜克大学基于光诱导的CRY2（色素）和CIB1（蛋白），开发出相似的光遗传学+CRISPR系统，其目的是利用光来开启和关闭基因表达，同时赋予时空控制和可逆性[20-22]。
1.5 通过荧光标记的dCas9对DNA实施标记
Deng等[23]w外构建“dCas9/荧光素”复合物作为探针，可视化基因组位点完全没有引起DNA变性，称为Cas9介导的荧光原位杂交（CASFISH）。dCas9/sgRNA能够在近着丝粒区、着丝粒、G富集端粒和编码基因等位点快速而有效地进行重复DNA元件标记，也适用于初生组织切片的检测。这种技术具有快速、有效、破坏性较少与成本低的特征，为基础研究和遗传学诊断增加了一种非常有潜力的工具。
1.6 CRISPR-Cas9系统同时实现基因工程和基因调控的双重功能
Kiani等[24]开发了Cas9系统一个新策略，能够同时实现基因组工程和基因调控的双重功能。其使用经过改造的gRNA和Cas9蛋白，在切割特定基因的同时调控其他基因的表达。这一技术大大增强了基因组编辑和基因调控的功能性，帮助我们进一步操纵细胞，以揭示重要生命过程背后的复杂机理，比如，癌症耐药性和干细胞分化，或者帮我们设计更高级的人工基因回路。更进一步地，双重功能Cas9可以促进基因工程菌株（例如大肠杆菌）大规模生产化合物和燃料。
1.7 多顺反子基因
Xie等[25]将tRNA与gRNA结合起来，开发合成了一个多顺反子基因，以提高Cas9系统的靶向能力和多重编辑效率，能够在水稻中高效实现多重基因组编辑和染色体片段删除（可达到100%）。Qi等[26]设计多个tRNA-gRNA单元，在玉米中的研究表明，该系统不仅增加靶向位点数目，也能更有效和准确地缺失染色体片段，这对基因功能的完全消除特别是lncRNAs的研究很重要。同时还表明，在一个表达盒中可容纳多达四个tRNA-gRNA单元，用来修饰同一基因家族中的不同成员或同一代谢途径中的不同调控基因。
1.8 Cas9系统应用于多能干细胞
诱导型多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）可无限地自我更新，而不会丧失分化成所有细胞类型的能力，且绕过了免疫排斥的障碍。iPSCs在再生医学中具有良好的前景，是用于致病突变原位校正的一种理想细胞群。将CRISPR应用到iPSCs中为纠正遗传缺陷疾病开辟了一条新途径，因为iPSCs很难采用传统的基因打靶策略进行操作，尤其是蛋白质介导的基因组编辑方法[27-30]。
1.9 染色体大片段和lncRNA编辑
Shechner等[31]介绍了以CRISPR-Cas9为基础的基因组靶向技术展示：CRISPR-Display（CRISP-Disp），将gRNA-ncRNA融合，能将大片段非编码RNA带到特定DNA位点，同时不影响dCas9的功能。CRISP-Disp系统可容纳约4.8 kb的RNA结构域，这相当于天然lncRNA的长度。除了lncRNA以外，研究人员还对各种天然和人工非编码RNA进行了测试，表明gRNA可以偶联多个非编码RNA结构域，这些结构域可同时且独立起作用。CRISP-Disp可用来解决如下问题：一个lncRN段是如何调控基因表达的？是这个片段的转录本在起作用，还是它本身的序列在起作用？揭示lncRNA在表观遗传学修饰、染色质重塑或者转录调控中做出的贡献。该系统除了研究非编码RNA机理外，对合成生物学来说，CRISP-Disp的灵活性、模块化和多重化特性是很有吸引力的。用CRISP-Disp招募RNA-蛋白复合体到特定位点，可以设计出复杂的基因调控回路。Yoshimi等[32]开发出了两种基因改造新技术：lsODN（long single-stranded oligodeoxynucleotide）和2H2OP（Two-hit two-oligo with plasmid）），来完成相对较长的DN段，如GFP（Green fluorescent protein）序列的靶向基因敲入，提高基因编辑的效率。第一种方法是利用lsODNs作为靶向供体。第二种方法是共同注射两个gRNAs作为“剪刀”切割基因组DNA和供体质粒DNA中的靶位点，两个短ssODNs作为“浆糊”连接切割位点的末端。利用开发出的两种基因改造方法，该研究小组成功实现了高效、精确敲入GFP基因，导入了近200 kb的大片段基因组区域，这是采取传统方法不可能做到的。并用人源基因替代了大鼠基因，构建出了基因人源化的动物。这两种基因敲入方法将会提高遗传工程改造的效率。研究人员高度期待这些遗传工程生物将用于药物研发、转化和再生医学等广泛的研究领域。
1.10 研究蛋白质工程
Hess等[33]开发了一种称为重利用体细胞超突变的原位蛋白质工程新技术，命名为CRISPR-X。研究人员利用dCas9召集胞嘧啶氨酶（AID）变异体，其携带有经过MS2修饰的sgRNAs，能特异地诱变内源靶标，限制脱靶伤害。它能产生不同点突变的多样文库，同时靶向多个基因组位点，结果从中找到了引发Bortezomib耐药性的已知和新突变。还利用超活化AID变异体，同时诱变了转录起始位点上游和下游的位点。这些结果均表明 CRISPR-X是一种强大的工具，能帮助科学家们创建复杂的原始遗传突变文库，分析完善蛋白质工程。
2 CRISPR-Cas9系统在猪中的研究进展
Cas9系统出现之前，已经有文献报道了其他技术的基因组编辑猪[34]，现在利用Cas9系统的报道层出不穷。这里重点综述Cas9系统在猪研究中的进展，因为猪不仅提供肉食，同时其在生理学、免疫学和基因组学上与人高度相似，器官大小也比啮齿动物有优势。
2.1 功能基因研究
Su等[35]合成sgRNA时用猪U6启动子代替人U6启动子，获得更佳的打靶效率；Wang等[36]显微注射Cas9 mRNA和sgRNA至猪原核期胚胎，筛选出打靶效率最高的sgRNA；He等[37]将携带GFP和红色荧光蛋白（RFP）的Cas9质粒先后转染猪胎儿成纤维细胞，通过双重荧光筛选提高打靶成功效率；吴金青等[38]应用SSA（Single-strand annealing）报告载体，使Cas9系统对猪胎儿成纤维细胞的打靶效率提高5倍左右。八聚体结合转录因子4（OCT4）是参与调控胚胎干细胞自我更新和维持其全能性的重要转录因子之一。Kwon等[39]研究表明Cas9系统可针对孤雌胚胎实现基因OCT4的敲除和敲入。Lai等[40]构建了一个猪OCT4的报告系统，其内源性OCT4启动子可直接控制RFP，因此荧光能准确地显示内源性OCT4的激活，并获得了在内源性OCT4基因启动子下游具有tdTomato基因敲入的猪胎儿成纤维细胞（PFF）系。Cas9系统编辑的PFFs被用作体细胞核移植（SCNT）的供体细胞，在SCNT胎儿的囊胚和生殖嵴中检测到了强大的RFP表达，并制备了两头有生命力的基因编辑猪。
2.2 提高生产性能
肌肉生长抑制素（Myostatin，MSTN）基因对肌肉生长发育具有重要调控作用。Crispo等[41]、Cyranoski[42]、Wang等[43]和张冬杰等[44]利用Cas9系统获得了MSTN基因的双等位基因敲除猪。湖北省农业科学院畜牧兽医研究所Bi等[45]应用Cas9系统制备了无选择标记的MSTN基因敲除克隆猪。首先，利用Cas9系统介导的同源重组敲除猪初生细胞中MSTN的一个等位基因。然后，用Cre重组酶来切除选择标记基因，有效率为82.7%。免疫印迹显示，克隆猪MSTN大约有50%的降低，同时肌原性基因在肌肉中的表达有所增加。组织学显示，肌纤维数量增加，但是肌纤维大小保持不变。超声波检测显示，最长肌大小增加，背部脂肪厚度降低。该研究提供了一种可靠的途径用于家畜良种生产，也提出了一种策略来减少潜在的生物学风险。中国农业科学院北京畜牧兽医研究所的李奎教授领导研究团队，首次利用Cas9系统获得了位点特异性的基因敲入猪模型[46]，得到一个新的基因组“安全港”位点：pH11位点，通过Cas9系统分别在细胞、胚胎和动物体内的该位点插入了大于9 kb的基因片段，实现了稳定高效的基因表达。
分化簇 163（Cluster of differentiation 163，CD163）被认为是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的受体基因，分化簇1D（CD1D）是一类抗原递呈因子。Whitworth等[47]利用Cas9系统分别敲除CD163和CD1D的基因编辑猪；经过蓝耳病毒株攻毒后CD163双等位基因敲除猪未表现出临床症状，具有良好的抗蓝耳病能力。中国农业科学院北京畜牧兽医研究所利用Cas9系统进行抗PRRSV和抗猪传染性胃肠炎（PEDV）的CD163和CD13双基因编辑猪的制备，正在开展相关验证鉴定工作。这些研究在养猪业引起了高度关注。
2.3 研究人类疾病的动物模型
猪是人类医学研究极佳的动物模型。vWF（von Willebrand factor）的基因是引起人血管性血友病的主因。Hai等[48]应用Cas9系统靶向猪vWF外显子，目的基因插入/缺失突变效率达到 68.8%（11/16）；单等位基因突变和双等位基因突变的vWF抗原水平均极显著低于野生型个体（P
再如，去除所有主要淋巴细胞的猪是研究人X-染色体连锁的严重联合免疫缺陷（SCID）患者病毒感染和免疫受损发病机理的理想动物模型。破坏IL2RG的猪比啮齿动物敲除IL2RG模型更接近于SCID表型。Lei等[50]利用Cas9系统快速生成双基因RAG2/IL2RG敲除猪，成功建立了人诺如病毒（HuNoV）感染的免疫缺陷的猪模型，因为RAG2/IL2RG缺陷猪缺乏B细胞、T细胞和自然杀伤细胞。Yu等[51]成功地通过Cas9系统在滇南小型猪产生人类DMD疾病动物模型。
2.4 医学生物反应器
猪除了作为人类疾病模型外，也可作为生产人类需要的产品反应器。例如，赖良学课题组利用精确Cas9系统对猪胰岛素基因进行了无痕定点修饰，3头可以分泌人胰岛素的克隆猪，其中2头完全分泌人胰岛素，而不含猪胰岛素；另一头既分泌人胰岛素也分泌猪胰岛素。牛泌乳量大、乳汁活性蛋白的产量高，因此其乳腺是理想的生物反应器，Peng等[52]通过CRISPR技术建立了人血清白蛋白的生物生产器。人成纤维细胞生长因子2（hFGF2）是一种多功能生长因子，在促进组织生长发育、新血管形成和参与组织修复过程中起着重要的作用，但其在人体内的表达量较低。Jeong等[53]借助Cas9系统将该基因导入到牛成纤维细胞的β-casein基因内含子中，为获得表达hFGF2蛋白的基因编辑牛奠定了基础。谷氨酸棒杆菌是工程化应用传统方法（同源重组）批量生产氨基酸的重要生物机体。Cleto等[54]采用CRISPRi降低该菌的基因PGI和PCK的表达高达98%，降低基因PYK高达97%，从而大大增强了L-赖氨酸和L-谷氨酸产品滴度的比率。这种新谷氨酸代谢工程方法只需要3 d时间，表明CRISPRi可用于快速且有效地代谢途径改造，而不需要对基因缺失或突变。
2.5 异种器官移植
据不完全统计，全世界大概有200万人需要器官移植，而器官捐献的数量远远低于需求数量[55]。尤其是老龄化和慢性疾病的多发，更加导致供体器官严重不足。猪被认为是人体异种器官来源的首选动物，因为猪与其他哺乳动物比较，无论从器官大小、生理结构和基因组相似度都更接近于人，因此，上世纪90年代应用猪生产人类器官项目一度在全球受到追捧，但受阻于猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovi-ruses，PERVs）造成的重大医疗风险。哈佛大学利用Cas9系统对猪肾细胞系PK15中所有62个拷贝的PERV pol（多聚酶）基因敲除，使内源性病毒传递给人的风险降低了1 000倍以上[56]。该研究扫除了猪器官用于人体移植的安全障碍，为全世界亟需器官移植的上百万病人带来希望，也重新燃起了大家对异种器官移植的信心。
免疫排斥反应是猪器官移植另一障碍。α-1，3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因与异种器官移植后的超急性免疫排斥反应显著相关，Sato等[57]在猪胎儿成纤维细胞中通过Cas9系统获得了GGTA1双等位基因敲除的细胞系。Li等[58]针对3个与免疫排斥相关的基因GGTA1、胞苷单磷酸N-乙酰神经氨酸羟化酶（CMAH）和异红细胞糖苷酯合成酶（iGb3S）基因，共转染靶向这2个或3个基因的CRISPR/Cas9-PX330构质粒，最终获得了敲除单个基因及同时敲除2个或3个基因的胎儿或仔猪。利用类似的方法，Estrada等[59]对猪肝脏细胞分别敲除GGTA1、GGTA1/CMAH和GGTA1/CMAH/β4GalNT2（β-1， 4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶2）基因。
3 CRISPR-Cas9系统的前景
CRISPR-Cas9系统在如此短的时间内极大地推动了生物学的各个方面研究，例如基因功能解析、基因治疗、人类疾病动物模型、生物生产反应器和农业动植物优质遗传育种。该技术生成的产品，定向改变但不含外源基因/片段，在验证其安全性的基础上，这种经过“基因组编辑”的产品更容易被消费者接受。理论上它不会带来健康或环境方面的风险，但是否应该受到转基因相关法律的约束，美国和欧盟的态度不一致。作为新兴的基因组编辑技术，有必要进一步完善其特异性、脱靶效应和输送方法，以及如何更好地激活细胞自身的同源重组，并探索新型基因组编辑技术及其应用，例如，新CRISPR-Cpfl系统[60]、新型NgAgo系统[61]；无序列限制的DNA编辑新工具[62]、纳米颗粒技术[63]等等。
r业动植物改良从来都是一个漫长而繁琐的过程，而如今，科学家因为有了CRISPR技术能够快速而轻松地实现。近两年，许多实验室将这种工具应用在动植物和微生物中，以期获得更高产、更适应环境和更优质的品种。有理由相信，CRISPR-Cas9系统将更好的服务于人类，包括动植物育种。
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