专题教育笔记范例6篇

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专题教育笔记范文1

关键词：高校体育；田径必修课；问题；对策；研究

中图分类号：G807

1研究对象与研究方法

1.1研究对象

西北地区、南方地区共30所师范院校体育系2009级学生150人（其中男生120人，女生30人）及部分田径教师。

1.2研究方法

1.2.1问卷调查法：针对目前田径必修课程教学的现状及课程设置，共发出问卷150份，回收145份，回收率为96.7%。 通过网络媒体进行问卷调查，总结分析，得出结果。

1.2.2文献资料法：查阅有关学校田径课程教学大纲、教学标准、课程改革的资料，了解体育教育改革领域的研究动态。

1.2.3书面访谈法：笔者对本校及周边大学、在全国第一届大学生传统运动会期间对部分田径教师及参赛运动员进行了书面访谈。

1.2.4逻辑分析法：对教学实践成果及以上问题进行分析讨论。

2 结果分析

2.1教育观念因素

2.1.1 教师教学观念落后。我国的体育教育模式是从前苏联引进的以运动技术为核心的模式，虽然现在教学改革不断深入，理论与实践有了很大的发展，但很多教师在观念上并没有更新或者改变，用这种旧观念指导教学就会落伍，影响田径教学工作及教学目标的实现。

2.1.2领导者的观念落后。目前领导对整个田径教学的主导思想、目标规划还是以传统的竞技观念为主，在教学上就体现为以传统项目为主，没有正确地引导教师开展多元化田径课程教学思想。

2.2教师的因素

2.2.1田径教师的队伍的整体素质参差不齐，基本上沿袭了竞技体育教学的模式，在学生的问卷调查中可以看出，体育教师只是充当着一名教练的角色。

2.2.2有一些田径教师虽然是优秀教师，但由于受科研环境因素的影响，导致科研能力薄弱，没有及时接受新的教学理念，没有把科研和实践有机地结合起来，导致自己落伍。

2.3学生因素

从表中可以看出，学生中学训练时间短，训练2-3年以上的学生所占比例较小。通过网上调查、学生访谈了解到学生中学训练时间还要略低于问卷调查的结果。造成这种现象有多方面的因素，大多数体育考生学习较差，就是为了上大学获张文凭而参加体育训练，所以在中学训练时间短，参差不齐，以甘肃为例，2009年-2012年的体育考生连续4年都在5500人以上。招进来的一部分学生体育素质较差，很难完成规定的技术动作、技术原理及相关田径专业知识体系。

2.4教学目标因素

由于受传统思想的影响及社会上人们对田径项目的偏见，尽管国家宣布新的体育教学目标及人才培养目标有十年时间，但通过问卷调查，可以看出有些高校对学生培养目标定位不够准确，直接影响到田径教学目标不够准确。目标定位偏重学生对田径运动技术，技术原理及运动技能的培养。忽视了对学生田径文化意识兴趣的培养，忽视了对学生对田径运动知识的应用能力、分析能力、解决问题能力的培养，忽视了对学生心理健康教育及适应社会能力的培养。

2.5教学内容

2.5.1田径教学内容单一，结构不合理

从表中可以看出，田径教学内容设置中还是以传统的竞技项目为主，新兴的田径类课程、大众化的田径健身项目却很少。这样的教学内容忽视了学生基本应用能力，综合素质教学的培养。

2.5.2 对抽样的145名学生所喜欢的田径项目进行问卷调查统计结果

现行的田径教学项目中，短跑、中长跑、竞走、跳高等主要竞技项目有60%的学生不喜欢，这些田径教学内容竞技性强、难度大，学习起来枯燥无味。而学生喜欢的项目如爬山、攀岩等田径健身项目，由于受条件限制又无法开设。

2.6教学评价因素

从表中可以看出，学校只重视绝对性评价，即终结性评价。绝对性评价占问卷总人数的100%，这就说明只重视技术机能、理论的考核评价，未能体现对学生的学习过程、实践机能、学生创造、创新能力的评价。相对评价占问卷总人数的13.79%和10.34%左右，这说明只有及少数院校即重视学生运动技术、运动技能的评价，又重视学生学习步骤、技术技能转化为实践机能过程的评价。这种单一的评价方法，在理论上过于强调书本上的死知识，学生考前死记硬背，考后不知所云，造成学生分数不低而能力不强。

2.7 教学设备条件欠完善

从问卷调查可以看出，个别学校教学设备较差，不能满足教学的需要。例如目前与大众田径类联系紧密的建身路径等新兴田径拓展项目，大部分高校都未开展。教学场地老化，器材规格与规定标准不符，无风雨操场，这些问题都影响了正常的田径教学，达不到预期教学效果。

3 对策及建议

3.1更新田径教学理念

3.1.1必须摆脱竞技体育教学思想的束缚，正如前苏联教育学家马亚科夫斯基所讲：“你要让学生成为什么样的人，首先教师要朝着这个方向努力，成为这样的榜样。”首先要改变以教师为中心、以课堂为中心、以书本为中心，充分发挥学生的主体作用，树立教师一切活动都是为了便于学生掌握田径知识技能服务的思想。

3.1.2田径教师要树立培养新的人才观、质量观，要有超前意识，要了解对未来人才的要求。

3.1.3教师要打破田径竞技教学模式，要有意识地把教学重点转向传授田径健康知识、田径健康技能、健身法则及培养学生的创新、创造能力上来。

3.2培养学生的学习兴趣及价值

3.2.1从上面分析可以看出，我们相当一部分学生都是为了上大学而选的体育专业，他们一进校就对体育教育专业没有兴趣，对田径更是如此，因此，教师要从思想教育入手，让学生真正了解田径专业，田径专业在未来人们健康锻炼的作用，田径专业在未来社会发展中广阔的前景。

3.2.2根据新课程标准的指导精神，淡化竞技项目多开发田径类健身项目，提高学生对知识掌握应用能力，提高学生对田径文化知识的欣赏能力。

3.2.3改变传统的教学方法，吸收与田径相关的体育运动项目的教学方法，让学生进行探究性教学，培养学生对田径课程的学习热情，从而激发学生对田径项目的学习积极性。

3.3教学培养目标定位要准确

培养合格的体育师资是高等师范院校体育教育专业的重要目标，学生毕业大多数是以教学为主，他们将来面对是中小学生，根据中小学的《体育课程与健康标准》的主要目标和任务，将他们培养成社会主义现代化的健康人才，教学能力是培养师资的主要教学的内容，扎实的理论知识较完善的运动 技术是当好体育教师的一个必要的条件，因此，制定田径课程教学目标与中小学《体育课程与健康标准》接轨，能够真正培养出教学能力强、基础知识扎实的人才。

3.4教学内容与中小学培养目标接轨，应多元化

3.4.1田径教学内容选择应与中小学培养目标接轨，新课程标准里“田径类”命名意义在于拓宽视野，改变清一色“奥运项目”，所以，在田径必修课的教学内容应选择上应将田径教学竞技性、娱乐性和健身性融为一体，这样做才能符合学生的心理特点，能激发学生的学习兴趣，有效提高教学的可行性。

3.4.2项目应以多元化开展，目前都是以竞技化项目为主，多元化田径拓展项目，开拓学生知识面，增加理论课学时。

3.5教学方法，教学手段应多元化

3.5.1在教学中，应打破讲解—示范—练习的传统教学方法，要充分发挥学生的主体作用，要充分考虑到学生的个体差异，要充分考虑到单位的教学设备条件，做到因人施教，因材施教，使不同水平的学生都有所得，都有所成。

3.5.2 从教学的设计到教学的过程，方法要多元化，充分调动学生学习的积极性，使学生的个性特征能够得到充分发挥，探究式及媒体技术的教学方法，让学生能够对项目学懂、学会、学乐，教师教学的方法的选择重点要培养他们的技能知识的应用能力、创新能力、教学能力及社会适应能力。

3.6完善评价体系，加强评价过程

3.6.1打破重技术、轻能力的评价模式，在评价体系过程中，能体现出学生的创造创新能力、机能和技能知识的转变能力。

3.6.2在评价中，关注个体差异和不同需求，确保每个学生都能受益。

3.6.3在评价中，应把相对评价，形成评价（即过程评价）和绝对评价三者有机结合起来，形成一个全面的评价体系。

3.6.4通过完善评价体系，给学生搭建一个公平、公正地提高自己田径知识的良好平台，从而培养学生学习田径的兴趣。

3.7改善田径教学条件

3.7.1由于田径课大都在室外进行，应努力改善办学条件，给田径专业教师提供一个相对良好的教学环境。

3.7.2完善场地器材、各项田径教学设备，尤其是多媒体技术教学设备，让学生能够充分发挥教学资源，来提高田径知识、田径文化素养。

3.8开发环境资源及人脉的利用

3.8.1多请社会及高校田径专家给教师及学生定期讲座，让师生能够及时接受新的田径知识、田径信息及新的教学理念，来完善充实自己。

3.8.2田径专业教师应定期外出学习培训，提高教师田径课程设计能力；通过专项或专项探讨，提高体育教师的田径教学设计能力；通过专题交流，提高体育教师课程资源开发利用能力。

3.8.3领导要解放思想，转变观念，支持田径教学工作。

3.8.4 充分开展校地联合，多参与社会田径活动，应和当地中小学接轨，观摩中学田径课，以便调整自己的教学目标、教学计划、课程目标。

参考文献：

[1]曲宗湖，杨文轩主编.学校体育教学探索[M].北京：人民体育出版社，2001.

[2]陈作松，季浏.新体育课程改革的实施对体育教师提出的新要求[J].北京休育大学学报，2004（03）.

[3]宋亚炳.对广东省体育与健康教学内客的体系评价[J].体育学刊，2003（06）.

专题教育笔记范文2

关键词：工程教育认证；毕业设计；教学质量；评价指标体系

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）12-0195-02

由于工程教育认证将“质量保证和质量改进”作为基本指导思想和出发点，重视对学生学业成就的评价，更多突出“培养质量”，故教育部自2006年起启动工程教育认证试点以来，其认同度不断提高，越来越受到各高校的认可[1]。目前很多高校的交通运输专业都在积极申请通过工程教育认证，以使专业办学质量得到提升。在工程教育认证标准中，对毕业设计（论文）（以下简称“毕业设计”）标准为“要结合本专业的工程实际问题，培养学生的工程意识、协作精神以及综合应用所学知识解决实际问题的能力”。毕业设计是本科学生完成教学计划全部课程后必须进行的一项重要实践性教学环节，是学生综合运用本学科基础理论、专业知识和基本技能，提高分析与解决实际问题的能力，进行科学研究的实践过程[2，3]。这与工程教育认证所给出的标准相同，即实现了毕业设计的初衷也就能够满足工程教育认证的标准。然而，近年来毕业设计环节存在一些问题，这些问题出现的原因既有客观因素，又有主观因素；既有个人问题，又有管理问题；本文认为，这些问题很大程度上由于指导教师本身所造成。因为这个环节不同于理论授课，理论授课面对的经常是超过60个人的教学班级，教师很难做到对学生进行一对一了解，对学生的学习动态无法及时掌握。但毕业设计不同，在这一过程中，指导教师和学生经常是一对一沟通、交流，只要指导教师能够在每一个阶段对学生进行严格要求和认真辅导，学生可以高质量地完成毕业设计。那么如何对指导教师在毕业设计环节的教学质量进行客观、综合的评价，从而增强指导教师的责任感，保证毕业设计质量，使交通运输专业顺利通过工程教育认证，对交通运输专业办学具有非常重要的意义。本文首先分析目前毕业设计环节存在的问题，然后针对问题提出评价指标体系，最后对指标体系进行分析。

一、目前毕业设计环节中存在的问题

1.部分指导教师思想上不够重视。教师普遍存在重视课堂教学，轻视毕业设计的现象。认为毕业设计就是给学生出个题目，完成过程就是在学校各种规章的要求下对学生进行相应的催促和检查，进入最后阶段重点要求学生一定要格式正确，至于内容和完成质量则不是非常重视。很多情况下由于指导教师和学生的双重原因出现毕业设计环节存在“前松后紧”现象。在开始阶段学生为了就业、考研或其他原因不能集中精力做毕业设计，且指导教师也未能及时地进行督促和检查；后期面临严峻的毕业形势学生才紧张起来赶任务，但由于时间紧，且准备工作不充分，导致毕业设计草草收场，其质量很难不能保证。在答辩阶段，很多答辩小组的老师为了同事之间的面子或其他主观因素对学生在答辩过程中表现出来的问题也是睁一只眼闭一只眼，提出的问题也非常简单，没有深度。总之，在这一过程中很多指导教师对自己或同事指导的学生给人情分等，表现不够不严肃。这些都是因为思想上重视不够所造成。

2.毕业设计选题本身存在问题。①毕业设计选题质量不高。现在很多选题都要考虑如何应对日后进行的各种检查和评估，为更简单地应对检查和评估，很多院校都对各种教学资料的格式进行了硬性规定，比如：试卷的内容按照统一格式、毕业设计按照统一格式等，很少考虑学科差别。就像每年毕业设计检查时注重检查论文的格式，而对毕业设计本身质量较少涉及。为应付各种检查，某些指导教师在选题时为方便只出一些东拼西凑就可完成的综述性题目。那些真正付出很多，进行认真撰写的毕业设计却仅仅因为一些格式的不正确而必须重新修改或装订，从而给指导教师和学生带来一种冷水泼头的感觉。其实，并不是说这些格式检查不应该，而是更应该在保证毕业设计内容的基础上要求这些。那么如何要求内容呢？只有从评价指标中来要求指导教师尽可能做到。②毕业设计选题缺少新颖性和可行性。现在很多指导教师都会采取一些以前选题，尽管很多高校也允许选择一些非更新选题，其初衷是希望新一届的学生能够在以前的基础上将这个题目完成得更加合理和完善，比如我校每年就允许有40%的非更新选题出现。但学生的实际结果却是和往年的成果一般无二，鲜有创新；这样带来的结果必然是毕业设计中的恶性循环，质量很难保证。还有一些指导教师在选题时题目过大，带来的好处是学生查找资料相当方便，因为很多资料都会与该选题相关；但是哪些是重点，该怎么写，作为本科生心理未必就清楚。所以让其良好地完成这些题目也就勉为其难。③毕业设计选题数量不够多。随着学生数量的增加，一名指导教师指导10人以上学生做毕业设计并非新鲜事情。很多指导教师不能给出足够多的题目，只能出现多人共做一题的事情，加之指导教师不能在学生内容不雷同方面做出有效的规定和区分，从而导致学生毕业设计雷同的现象更是存在。上述现象在很多人看来有些言过其实，但必须承认，部分指导教师并未认识到毕业设计的严肃性与重要性。从思想上产生了麻痹、糊弄，答辩结束就算了事的认识。尤其是在扩招后，一名指导教师需要指导10个以上的学生时，上述现象就有了存在的借口。但随着工程教育认证的到来，指导教师必须正确面对毕业设计的质量问题。

二、评价指标体系的构建

为了对指导教师在毕业设计中的教学质量进行客观和全面的评价，我们根据自身指导毕业设计的亲身体会和对毕业设计的全过程的认识，从选题、组织、撰写、答辩四个阶段共19个指标进行评价。具体评价指标体系见表1。

三、评价指标体系的分析

由表1可知，对教师评价的重点在毕业设计的选题和组织阶段。只要指导教师在这两个阶段工作到位，剩下就是和学生交流和沟通。学生在一个好的选题和进度合理、资料完备的基础上再加上指导教师严格要求和良好沟通，顺利完成毕业设计的撰写就绝非难事，那么顺利通过答辩更是水到渠成。在选题阶段，很多高校都采取由该学科的专家或者高级以上职称人员组成的选题评审委员会对选题进行审核或指导教师汇报、答辩的形式决定选题是否通过。在选题阶段的8个指标中，有些指标应该一票否决，比如不符合大纲要求；多人共做一题，而指导教师又不能保证内容不雷同；选题难度过大；选题工作量过小。有些指标要有一定制约措施才可通过。比如选题若为非更新题，则该选题学生的成果若和以前成果一般无二或区别不大，则学生的成绩最多为及格或者不及格，从而就要求指导教师在给出该选题时一定要在任务书中给学生的要求和以前有较大变化，而且在撰写过程中时刻加强对该学生的检查和督促；所以指导教师在决定是否采用以前的题目时也会认真考虑。若选题为综述题，则该学生的毕业设计一定要在结构或思路上有所创新，如果内容仅仅是多篇资料的东拼西凑，则在评定该生成绩时应着重考虑。这些制约措施的目的是使指导教师尽量少用非更新题和少出综述题，多出一些有一定创新性和与工程相结合的且工作量和难度适中的题目，这也是为了培养学生在最后环节中分析和解决问题的能力。毕业设计组织阶段给出的三个指标可以说是指标“指导教师对选题的了解和掌握程度”的细化，也是在论文开始之前对毕业设计的质量再次进行一次保证。设计撰写阶段的五个指标主要是对指导教师的工作态度、职业道德和业务素质进行的考核。这些指标应该由被指导的学生或者相关同学进行反馈。设计答辩阶段的三个指标主要是对答辩过程中的综合表现进行考核，应该有答辩委员会和参加答辩的学生共同掌握。

四、结论

交通运输专业为迎接工程教育认证，在毕业设计质量控制上提出了一些措施，较以前使毕业设计质量有了较大提高。尽管本文所构建的评价指标体系是一家之言，是建立在交通运输专业实际情况与毕业设计经验和教训基础之上，但本文的部分指标可以为其他高校或专业在评价毕业设计质量时提供参考。

参考文献：

[1]林健.工程教育认证与工程教育改革和发展[J].高等工程教育研究，2015，（2）：10-19.

专题教育笔记范文3

【摘要】

目的：比较三种不同荧光标记的短双链RNA(siRNA)体外转染特性. 方法：利用脂质体LipofectamieTM2000转染三种荧光标记siRNA入小鼠胚胎成纤维细胞系NIH 3T3，流式细胞仪观察转染效率，普通倒置荧光显微镜观察其淬灭情况，激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的分布情况. 结果：相同转染条件下三种荧光siRNA进入细胞的速度，细胞内的定位不同，转染效率不同，三种荧光标记的抗淬灭能力也不同. 结论：荧光标记siRNA可以起到良好的示踪作用. 用荧光标记siRNA作为无荧光siRNA的分布和转染效率参照时，要考虑到所选用荧光标记siRNA与无荧光标记siRNA的差异.

【关键词】 荧光标记；siRNA；转染

【Abstract】 AIM: To compare the transfection character of three different fluorescently labeled small interfering RNA (siRNA) in vitro. METHODS: Three fluorescently labeled siRNA were transfected with LipofectamieTM2000 into NIH 3T3 cells for monitoring their transfection efficiency with flow cytometry， tracking their delivery with confocal microscopy and checking their photostability with fluorescent microscope. RESULTS: These three fluorescently labeled siRNA varied in intracellular distribution， transfection efficiency and quench speed. CONCLUSION: The fluorescence labeled siRNA helps to tracking the delivery of siRNA in cells. The difference between fluorescently labeled siRNA and unlabeled siRNA should be considered when the fluorescently labeled siRNA is used to study the distribution and transfection efficiency of siRNA.

【Keywords】 fluorescence label；small interfering RNA；transfection

0 引言

化学合成的siRNA可以高效特异地抑制靶基因的表达，不仅是分析基因功能的有力工具且有望成为新型药物［1］，但递送效率低和体内有效性问题仍然是其应用的瓶颈，因此，深入研究其在体内的分布和动力学过程已逐步受到重视［2］. 利用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等方法检测荧光标记siRNA［3］，观察其摄取、分布及代谢情况，借以推断无荧光标记siRNA的转染效率和分布. 然而目前虽有多种商品化无沉默效应的荧光标记siRNA可供选择，但它们的分布和转染效率是否一致尚少见报道. 本研究比较三种常用荧光标记siRNA利用脂质体转染时转染效率、荧光淬灭情况和细胞内分布特点，以探讨应用荧光标记siRNA时需注意的问题.

1 材料和方法

1.1 材料

三种荧光siRNA分别为：BLOCKiTTM荧光寡聚物(序列未公开)购自Invitrogen公司；FAM notarget siRNA(正义链5′UUCUCCGAACGUGUCACGU3′，FAM标记于5′端)购自广州锐博公司；Alexa Fluor 546阴性对照siRNA(靶序列 5′AATTCTCCGAACGTGTCACGT3′，正义链3′端3标记Alexa Fluor 546)购自Qiagen公司. 前两种为即用型，后一种按照说明书方法加入退火缓冲液，90℃变性并退火，分装后避光保存于-20℃. 三种荧光siRNA的储备液浓度均为20 μmol/L. 小鼠胚胎纤维细胞系NIH3T3由中山大学实验动物中心细胞库冻存；高糖DMEM培养基和DPBS购自Gibco BRL公司；胎牛血清购自杭州四季青工程材料研究所；脂质体LipofectamineTM 2000，OptiMEM低血清培养基购自Invitrogen公司；Hochest33342购自美国Sigma公司，其他生化试剂均为进口或国产分析纯试剂.

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与转染

NIH3T3细胞常规培养于含100 mL/L胎牛血清无抗生素高糖DMEM培养基，每孔4×104个细胞接种24孔板，24 h后细胞的汇合度达40％. 用LipofectamineTM 2000转染荧光siRNA，按照说明书操作进行. 不同浓度转染效率时siRNA各组终浓度分别为0.5，5，40，120 nmol/L，LipofectamineTM 2000均为1 μL. siRNA进入细胞速度时转染复合物孵育时间分别为1，2，4，6和24 h，siRNA浓度均为40 nmol/L，每组不同时间重复3次；观察淬灭情况和共聚焦观察细胞内分布时采用40 nmol/L，观察时间为4 h.

1.2.2 流式细胞仪检测

荧光siRNA转染效率各组细胞用DPBS冲洗2次，0.25 g/L胰蛋白酶消化，用DPBS制成150 μL单细胞悬液，冰上运输，BD FACSAria流式细胞仪检测，CellQuest软件记录分析.

1.2.3 普通荧光显微镜观察淬灭情况和细胞内分布模式

转染后6 h后将24孔板直接置于倒置荧光显微镜(Leica DMIRE)载物台上观察，cold CCD数码相机Leica Qwin软件照相. 拍第一张照片时间记为0 min，分别于3 min和5 min后不改动成像参数同一位置再拍摄两张，观察荧光淬灭情况.

1.2.4 激光共聚焦显微镜观察［4］细胞铺板时24孔板中放灭菌圆形盖玻片，转染后6 h培养液中加入Hoechst 33342(终浓度5 mg/L)孵育10 min染核，用DPBS洗3遍后，取出爬片，-20℃预冷丙酮固定10 min，PBS洗3遍，抗淬灭水性封片剂封片. Zeiss LSM 510 META共聚焦显微镜40倍物镜下观察，BLOCKiTTM荧光寡聚物和FAM notarget siRNA使用488 nm激发光和515～540 nm滤片检测；Alexa Fluor 546阴性对照siRNA使用568 nm激发光和575～640 nm检测滤片.

统计学处理： 采用SPSS 13. 0统计软件处理，χ2分析转染效率差异，P

2 结果

2.1 FCM检测荧光siRNA转染效率

每一样品收集2×104个细胞，设定一个单细胞区域P1用于荧光分析. 以未转染的细胞作为空白对照，设定阳性细胞区(P2区)使阴性对照P区细胞数不超过0.1%(图1A). 40 nmol/L siRNA转染4 h时转染效率Alexa Fluor 546阴性对照siRNA的转染效率为(62.7±2.4)%， BLOCKiTTM荧光寡聚物的转染效率为(85.1±5.2)%， FAM notarget siRNA的转染效率为(69.4±3.6)%. χ2分析示Alexa Fluor 546阴性对照siRNA的转染效率显著低于BLOCKiTTM荧光寡聚物(P=0.037)，BLOCKiTTM荧光寡聚物的转染效率显著高于FAM notarget siRNA的转染效率(P=0.017)，Alexa Fluor 546阴性对照siRNA的转染效率低于FAM notarget siRNA BLOCKiTTM荧光寡聚物(P=0.000). 随着siRNA浓度增加(图1B)和转染复合物孵育时间延长(图1C)，三种荧光标记siRNA的转染效率增加， 6 h和24 h转染效率相差不大， 唯FAM notarget siRNA 24 h转染效率为(59.3±2.5)%. BLOCKiTTM荧光寡聚物在0.5 nmol/L和5 nmol/L浓度时，转染效率就达FAMsiRNA (27.9±2.5)%和(77.3±3.7)%，孵育1 h和2 h转染效率达(54.1±4.9)%和(78.2±3.6)%，高于其它两种(P=0.000).

2.2 普通荧光显微镜观察淬灭情况和细胞内分布模式

三种荧光siRNA在普通荧光显微镜下的荧光模式不同. Alexa Fluor 546阴性对照siRNA倾向于以较大颗粒分布在核周胞浆内(图2A， B， C， D)；BLOCKiTTM荧光寡聚物胞浆、胞核中都有，在胞核中的荧光强度很高(图2E， F， G， H)；FAM notarget siRNA为细小点状荧光信号，分布于胞浆和胞核中(图2I， J， K， L). 用荧光显微镜照射3 min(图2C， G， K)和5 min(图2D， H， L)发现Alexa Fluor 546阴性对照siRNA抗淬灭能力最高，BLOCKiTTM荧光寡聚物居中，FAM notarget siRNA最低，3 min已几乎完全淬灭. BLOCKiTTM荧光寡聚物胞浆中的荧光信号先淬灭，而后是胞核中的. 无siRNA只加LipofectamineTM 2000转染试剂的细胞未见荧光(结果未显示).

2.3 激光共聚焦显微镜观察三种荧光siRNA细胞内定位40 nmol/L各种siRNA转染后4 h，Alexa Fluor 546阴性对照siRNA为点状的荧光，多数位于近核胞浆中(图3A，D)；BLOCKiTTM荧光寡聚物(图3B，E)和FAM notarget siRNA(图3C，F)的模式相似，在核内和胞浆中都可见，部分呈荧光颗粒.

3　讨论

脂质体转染是体外导入化学合成siRNA的标准方法，siRNA体外转染实验报道中使用最多的转染试剂是LipofectamineTM 2000，对许多细胞可以获得很高的转染效率和基因沉默效率［3］，所以本研究也选用该试剂作为转染试剂比较三种荧光标记siRNA的体外转染特性.

本实验发现在相同的转染条件下，三种荧光siRNA的转染效率不同；BLOCKiTTM荧光寡聚物更易进入细胞，原因可能因为它的核糖骨架经过磷硫酰化修饰［5］，所以其进入细胞的速度明显增加. 转染6 h和24 h的效率相差不大，可见LipofectamineTM 2000推荐4 h和6 h更换转染复合物比较合理，但注意到Alexa Fluor 546阴性对照siRNA 4 h和6 h的转染效率相差仍比较明显，所以6 h更换转染复合物更加合适. FAM notarget siRNA 24 h转染效率降低为59.3%，原因可能是荧光素淬灭而非转染效率低.

关于淬灭情况：标记siRNA的荧光物质有许多种，最早有荧光素(fluorescein，FAM)，后来的藻红素(cy系列)，alexa系列的荧光稳定性和可选择波长更进了一步. 本研究三种荧光siRNA中荧光素FAM notarget siRNA采用的是FAM标记，BLOCKiTTM荧光寡聚物采用的FITC，似乎都为荧光素，但后者经磷硫酰化修饰，稳定性增强，所以其抗淬灭能力也有所增强. Alexa Fluor 546阴性对照siRNA采用的是Alexa fluor546，其中Alexa fluor546标记的siRNA的抗淬灭能力最强.

关于细胞内的定位：脂质体转染情况下，siRNA脂质体复合物首先沉积并粘附于细胞表面，然后通过胞吞作用进入细胞形成内含体，在胞浆中通过动力蛋白驱动定向运送到核周区，并迅速在核周区聚集［6］， 最后siRNA从脂质体复合物中释放出来才能发挥作用. 本研究中用共聚焦显微镜观察发现Alexa Fluor 546阴性对照siRNA几乎只以颗粒状分布于近核胞浆中，与Chiu等［3］报道的用LipofectamineTM 2000转染cy3标记的siRNA结果一致，而BLOCKiTTM荧光寡聚物和FAM notarget siRNA在核内和胞浆中都有，在胞浆中核周区可见大的荧光颗粒. 其中BLOCKiTTM荧光寡聚物的核定位考虑与其磷硫酰化修饰有关，而FAM notarget siRNA为正义链5′标记，其核定位可能为与其复合物中混合有单链siRNA有关. Ohrt等［7］显微注射荧光标记的siRNA入Hela细胞的胞浆中，发现双链siRNA不能进入细胞核，而单链siRNA有明显聚集于核内的倾向. 而Alexa Fluor 546阴性对照siRNA未于见核中可能因为siRNA还未从脂质体复合物中释放. 而siRNA从复合物中释放是与基因沉默效果相关的，是否说明荧光标记影响基因沉默效果还有待分析.

综上所述，选取合适的荧光标记siRNA作为转染效率评估指标和用于细胞内分布研究时，要注意荧光标记物对siRNA的影响，以及靶向目的基因的siRNA与所选用荧光标记的对照siRNA在化学修饰等因素方面的相似性.

参考文献

［1］Dykxhoorn DM， Lieberman J. Running interference: Prospects and obstacles to using small interfering RNAs as small molecule drugs［J］. Annu Rev Biomed Eng， 2006， 8:377-402.

［2］Corey DR. RNA learns from antisense［J］. Nat Chem Biol， 2007， 3(1): 8-11.

［3］Chiu YL， Ali A， Chu CY， et al. Visualizing a correlation between siRNA localization， cellular uptake， and RNAi in living cells［J］. Chem Biol， 2004， 11(8):1165-1175.

［4］Akita H， Ito R， Khalil IA， et al. Quantitative threedimensional analysis of the intracellular trafficking of plasmid DNA transfected by a nonviral gene delivery system using confocal laser scanning microscopy［J］. Mol Ther， 2004， 9(3):443-451.

［5］Fisher TL， Terhorst T， Cao X， et al. Intracellular disposition and metabolism of fluorescentlylabeled unmodified and modified oligonucleotides microinjected into mammalian cells［J］. Nucleic Acids Res， 1993， 21(16):3857-65.

专题教育笔记范文4

各区、县劳动局，各企业主管局、总公司劳动处：

现将劳动部《转发财政部〈关于提高国营企业职工福利基金提取比例调整职工福利基金和职工教育经费计提基数的通知〉的通知》（劳险字〔1992〕17号）转发给你们，请遵照执行。

为了搞好企业劳保医疗制度改革，推动我市大病医疗统筹试点工作，各区、县、局、总公司要积极开展大病医疗费统筹试点，并不断扩大试点面，可将按（92）财工字第120号文件规定提高的3％福利基金作为职工大病医疗费统筹基金的部分来源。

附件：劳动部《转发财政部〈关于提高国营企业职工福利基金提取比例调整职工福利基金和职工教育经费计提基数的通知〉的通知》（略）

专题教育笔记范文5

本学期学校要求每位教师每月完成2000字的自学笔记，每月我都是保质保量的按时完成，并上交到领导手中接受检查。通过本学期自学笔记的完程过程中，我感悟到：做为前线教师，不仅要及时更新自己的教育教学理念之，还需要结合个人情况及教学环境和特色来很好的贯彻和应用它们。这个过程也是一个自我发现和自我完善的过程，除了需要不断客观的看待“过去的我”，我们更需要一份持久的热情，一份对教育、对学生、对社会的神圣信仰与追求！

二、岗位大练兵

为了适应现代的教育工作，学校带领全校教师进行了教师岗位大练兵培训活动，来提高教师的基本功。通过学习练兵内容《师生和谐沟通能力专题》和《处理生成性教学资源能力专题》，树立了我科学的教育观念，并提高了我的创新能力。懂得了身为教师必须具有新的教育教学观念，才能在教学中不断进行改革和创新，才能以优异的素质去主动适应并深入开展蓬蓬勃勃的素质教育，才能培养出新世纪所需要的创造性人才。今后也将向着这样的方向去努力。

三、政治笔记

通过积极参加学校组织的政治培训，在政治觉悟上有了很大提高，更坚定了全心全意为人民服务的信念，更加热爱教学事业。本学期继续深入贯彻了政治思想，详细地做了相关的笔记，并有意识地将理论联系到实际，运用到教育教学之中，工作上有了明确方向。

四、其它

专题教育笔记范文6

摘 要： “双十教研”模式研究与实践，大面积启动了教育行动研究，有效地打造了高效优质课堂，提高了教育教学质量，本文对“双十教研”模式做了较全面细致的分析。

关键词：双十教研，研究，实践，教学

传统教研活动，教与学的各环节相对独立，前后衔接不够紧密，问题研究多停留在建议和预设状态，很难推向深入。该校创新教研模式，教与学同步研究，把教和学各细化为十个环节，整体构建“双十教研”模式，各环节相互衔接，形成有机统一的“动车组”，逐节推动，提高教和学的实效性，并对各环节进行深化研究，走向有效的教与学。

一、教研“十环节” 研究

包括备课、上课、检测、评课、磨课、反思、案例、专题研讨、学习创新、成果共享十个环节研究。

该校创新听评课方式，把听评课建立在集体备课的基础上，课前把教案印发到每个参加活动的教师，使听评课更有针对性。设计专门成绩统计量表，课堂及时测试分析。评课重评学，注重用检测数据说话。为深化研究，采用“同课异构”或“同构异课”反复磨课，反复实证教研问题。在反复磨课基础上设立磨反思环节，克服以往教学反思表面化、机械应付的问题，推动了反思深入和反思矫正。通过深度反思，进一步形成精品课例、案例、论文或金点子，近两年，在各级刊物160多篇。为进一步深化研究，把反思中发现的普遍性问题进行专题研讨。该校还成立校本培训学校，加强学习，创新各学科教学流程，发挥骨干示范作用，以点带面，辐射到全体教师，实现成果共享。该教研流程，用备课推动上课，用测试推动评课，用评课推动反思，用反思推动专题研讨，用专题研讨推动学习创新，围绕一个研究专题，用一个完整流程，来反复实证教研问题，有效的构建了教研活动“动车组”。同时，反复精细打磨每一个教研环节，向教学研究的纵深推进。

二、学习“十环节” 研究

包括计划、预习、听课、笔记、复习、练习、作业、测试、课外学习、总结十个环节研究。

为克服学生学习的盲目随意，指导学生用日、周、月、学期计划调控学习全过程。研究了多种有效的预习方法，教给学生读、画、议、查、列的预习程序。把听课与笔记同步研究，用11种方法来提高听课的效果，指导学生通用的笔记方法和8种具体的笔记方法。研究了各科通用的复习方法，并通过教研组长学习方法报告会，教会各科具体复习方法。研究了有效的练习形式，教会学生科学的练习方法。研究了学生完成作业的方法，以及多种作业批改的方式。在测试研究中，注重分层达标，引导学生由关心考试分数到关注学习过程。在课外学习研究中，设置课外学习评价量表，明确目标，细化过程，养成习惯。注重总结研究，以优化调整学习各环节。该校通过举办学习方法报告会和主题班会，印发学习方法校本教材，进行学情、学法调查问卷等多种方式，教会学生全面优化学习。