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医学影像技术技能范文1
[关键词]智能仪器 项目驱动 项目设计
引言
智能仪器是含有微型计算机或者微型处理器的测量仪器，拥有对数据的存储、运算、逻辑判断及自动化操作等功能。智能仪器凭借其体积小、功能强、功耗低等优势，迅速地在家用电器、科研单位和工业企业中得到了广泛的应用。在信息技术的高速发展和人工智能应用的推动下，智能仪器必将有更大的进展。因此，学习智能仪器的工作原理、掌握其主要技术和设计方法是十分重要的。智能仪器技术课程是测控仪器与技术专业本科生重要的一门专业课，全国许多高校仪器仪表类专业开设的主干课之一。智能仪器技术课程在教学过程中存在如下难度：①本课程内容涉及“电子、传感器、信号处理、计算机软硬件”等多门前导课程知识和技术，学生掌握程度和兴趣趋向差异很大;②课程体系逻辑性和系统性不强，而灵活性高，相关领域新技术引入快。本课程在教学过程中只有激发学生的学习兴趣，引导学生协作学习、自主学习才能很好的达到教学目标。项目驱动教学法正是引导学生团结协作，提高学生学习兴趣，调动学习积极性的一个比较成功的教学方法，在智能仪器技术课程的教学中被引入后，收到了较好的教学效果。
一、项目驱动教学法的内容和特点[1]
项目驱动教学法是师生通过共同实施一个完整的项目工作而进行的教学活动，在教学过程中将教学内容设计为一个完整的项目，在教师的指导下，学生以小组协作方式制订计划，团结协作完成整个项目，从而达到学习知识，培养分析和解决问题的能力的一种教学方法。在项目教学中，学习过程成为一个人人参与的创造实践活动，注重的不是最终的结果，而是完成项目的过程。学生在项目实践过程中，理解和把握课程要求的知识和技能，体验创新的艰辛与乐趣，培养分析问题和解决问题的思想和方法。
项目驱动教学法最显著的特点是“以项目为主线、教师为主导、学生为主体”，改变了以往“教师讲，学生听”被动的教学模式，创造了学生主动参与、自主协作、探索创新的新型教学模式。具体表现在：①开放性。学生在完成项目的过程中，可以自由探索完成项目的各种方式、方法。②综合性。项目的内容应比较综合和完整，学生完成项目需要运用多个学科的专业知识，更需要学生具有相应的多方面的能力，因此，项目驱动教学法对学习的培养是多方面的，甚至包括学习能力、解决问题的能力和团队合作能力。③实践性。项目设计注重社会需求，因此，项目驱动教学法的内容更具有实用性。
二、项目驱动教学法的实施步骤
项目教学的流程为[2]：
图1：项目驱动教学法的教学流程
三、项目驱动教学法在教学过程中的具体实施
（一）项目的确定
选择的项目的好坏、难易、是否能突出所学知识等几个问题是项目驱动教学过程的关键。要选择一个适合本课程教学目标的项目需要从以下几个方面考虑：
①授课对象的层次。针对本校学生基础知识薄弱、学习较被动的特点，在设计项目时不宜太难，太难会打消他们继续学习的积极性[3]。因此，在项目设计时尽量选择使用比较常见的传感器、显示器等元器件来实现。如温湿度控制器这个项目，选用DHT11温湿度传感器，其使用方法和注意事项在书本上、网络上介绍的比较多，学生很容易查到，自学门坎低，有利于学生开展自主学习。
②授课的内容。智能仪器技术课程在讲述智能仪器工作原理的基础上，介绍智能化仪器的设计方法，主要内容有智能仪器的输入输出通道、外设及其控制技术、通信接口、典型功能及数据处理技术、抗干扰措施、软件设计方法[4]。在进行项目设计时需综合考虑项目的统筹设置、项目间的联系和层次递进[5]。如每个项目都包含硬件电路设计和软件设计的内容，而针对输入输出通道的设计，先开展一个开关量输入输出的项目，再进行一个模拟量输入输出的项目，通过这种先易后难的设计树立学生的自信心，使学生逐步掌握智能仪器信号输入信道的设计要点。
③授课的目标。智能仪器技术的教学目标是“使学生建立仪器整机系统的概念，掌握智能仪器软硬件相结合的基本工作原理、主要技术和设计方法，结合实际仪器项目开展系统设计。着力培养学生运用所学知识与技术开展综合设计和创新实践的能力。增强学生灵活性和创新意识。”因此，项目的设计要具有综合性，既要与书本的知识紧密结合，又要能够充分体现现实中的应用情况，还要有一定的创新空间，让学生既能运用学过的知识，又可以创造发挥。
基于以上三点考虑，在智能仪器技术课程中从易到难共设置了如表1所示5个教学项目，每个项目逐渐增加新的知识点，使学生在项目的实施中逐渐掌握教学内容。
表1：智能仪器技术课程教学项目设置
（二）项目的实施
项目教学实施方案分为确定项目任务、项目实施、项目验收及综合评价3个过程。
1.确定项目任务
首先进行项目分组，每个项目都涉及到硬件电路设计、电路搭建和调试、软件程序设计、项目报告编写四方面内容，据此将学生分成4人一组，每人负责一个内容。然后教师将所提供的项目的任务、目标及相关知识点进行讲解和分析，让小组根据他们的知识结构和能力进行选题。项目确定后，根据项目的不同部分和要实现的功能，进行小组讨论，自行进行任务分工，查阅相关数据，提出合理可行的设计方案。
2.项目实施
下面以“光电脉搏测量仪”为例说明项目教学的实施过程。
1）项目描述：
（1）项目概况：通过检测透过手指的光强间接测量人体的脉搏信号并显示。
（2）项目的难点：本项目实施过程中，学生们会遇到的难点问题有：①消除环境光对脉搏传感器测量的影响。光敏器件接收到的光信号不仅包含脉搏信息的透射光的信号，而且包含测量环境下的背景光信号，即环境光和在测量过程中引起的二次反射光，只有消除背景光的干扰，才能获得准确的脉搏数，如何消除背景光，是在项目实施过程中的难点之一。②微弱信号的处理。通过光电转换得到的包含脉搏信息的电信号一般比较微弱，极易受到环境噪声和肢体运动的干扰，需对采集到的这个微弱信号进行放大、整形。③软件的编制，要求学生对单片机非常熟悉。
2）教学目标：要求学生根据学过的传感器、单片机、信号处理等知识，设计合理的信号采集电路、放大整形电路和单片机处理单路，实现脉搏的测量和显示。具体包括设计出合理较合理的脉搏测量电路;能正确利用面包板及相应芯片完成硬件电路的搭接、调试;能编写程序使系统工作起来;能够撰写设计报告。
3）实施步骤：
（1）系统需求分析、确定设计任务。在本阶段，教师指导学生从实际出发，分析光电脉搏测量仪应达到的性能和功能要求，如在性能上，测量精度达到±2/min，显示精度为±1;在功能上，系统具有①测量功能，能准确测量人体脉搏信号;②显示功能，测量的脉搏能正确显示;③存储功能，被检测人的基本信息和测量结果能存储下来;④通信功能，测量结果能远程传送至计算机终端，以实现对采集的数据的及时存储和分析;⑤上位机软件实现，用合适的工具开发上位机软件，以对采集的脉搏信息进行接收、存储、显示和处理等。
（2）拟定总体设计方案。根据系统的性能和功能要求，确定光电脉搏测量仪的硬件结构图，如图2所示。并确定关键组成部分，如微处理器、传感器等的具体型号。
图2：光电脉搏测量仪结构框图
（3）硬件电路的设计与调试。确定本项目的硬件结构后，再分模块设计出具体的电路接线图。这是项目实施过程中的一个难点。在这一过程中，教师要引导学生依据微处理器原理、模拟及数字电路原理、测量、控制电路的原理，所用元器件的功能、性能指针绘制详细的电路接线图并进行参数计算。
项目组设计出的电路接线图，经教师认可，即可由接线图列出所需元器件清单，根据接线图进行硬件电路的搭接与调试。硬件电路的调试过程是考验学生动手能力的一个重要环节，这个过程不但要用到开发系统，还要用到一些测试仪器，如万用表、示波器等。在这个过程中教师可以引导学生熟练掌握一些测试方法和技巧，为他们以后的工作打下坚实的基础。
（4）软件设计。在软件设计思路上，教师引导学生学会模块化设计，即根据项目中软件承担的任务，掌握硬件中各I/0信道与外界的联系，设计合理的软件结构。本项目中，系统初始化之后， 进行定时器中断、外部中断、显示等工作，主程序流程图如图3所示。因此，可将任务分解成初始化、定时器中断、外部中断计数、液晶显示四个相对独立的子任务由项目组成员分担完成。这是整个项目的另一重点，同时也是培养学生独立思考、分析问题、解决问题、进行创造性思维的过程。
图3：光电脉搏测量仪主程序流程图
（5）仪器联调与性能测试。软硬件设计时对各个硬件电路和软件模块进行了初步调试，还必须进行硬件和软件联调，以检验设计是否到达目标。在调试过程中，教师应引导学生分析、模拟仪器使用过程中会出现的各种情况，对仪器的所有功能进行反复操作，增强学生的观察力、感知力，培养悟性和洞察力。当程序运行出现问题时，教师及时引导学生分析问题，修正错误。例如，某些学生对外部中断的工作过程一知半解，在程序设计中缺少对数值处理的指令，因而程序运行时，发现不能按控制要求实现工作。这时教师不直接给出答案，而是让学生自己去思索，不断调试运行，主动分析、发现错误，经分析、修正，直至运行成功。在反复的运行调试实践中，学生始终处于主体地位。
（6）编写仪器文件。在完成仪器的研制后，还必须完成设计文档的编写。内容包括：①设计任务和仪器功能及性能指针说明;②设计方案的论证、性能测定和现场使用报告;③使用操作说明;④硬件数据，包括硬件结构框图、电路原理图、元器件布置图和接线图等;⑤软件数据，包括程序总框图、各模块框图、程序列表等[6]。
3.项目的评估总结
项目的评估总结是项目驱动教学法的重要环节。学生在项目实施过程中会遇到各种各样的问题，先由学生对出现的问题和工作的结果进行自我评估，再有教师进行评估总结，指出问题的所在及解决的方法，总结比较各组的特点，引导他们学习别人的长处来改进和提高自己的能力，使学生的各种能力在评估中得到提高。
（三）教学过程中的注意事项
1.所有的项目，教师要先期实施完成过。这样，一方面对项目有个全面的了解，便于更好地指导学生;另一方面当项目提出的时候就能拿出明确而具体的成果展示，使学生有明确的目标和感性认知过程，知道实施该项目要解决哪些问题，关键在哪里。
2.坚持以学生为主体。在项目的实施过程中，教师不要直接给学生提供答案，而是要求学生通过自己的观察和学习，找到解决问题的方法。当他们通过努力最终成功时，自信心和创造力得到提高，而解决问题的能力也在实践中潜移默化地发展。
3.发挥好教师的引导作用。在教学过程中，教师要深入了解学生的进展，在学生遇到问题时，及时进行指导，帮助解决难题，以使学生保持对项目的兴趣和积极参与的热情;在学生学习不够主动时，给学生提出问题，引导学生去探究;在学生完成基本项目后，调动学生的创作欲望，进一步完善项目创作;在项目完成后及时做好评价工作。
四、结束语
项目驱动教学法改变了传统的被动的教学模式，不再是简单的让学生按照教师的安排和讲授去得到一个结果，而是在教师的指导下，学生去寻找得到这个结果的途径，最终得到这个结果，并进行展示和自我评价，学习的重点在学习过程而非学习结果，他们在这个过程中锻炼各种能力。近些年的教学实践证明，项目驱动教学法激发了学生的自信心和积极性，锻炼了学生的综合能力，在智能仪器技术课程的教学中收到了良好的效果。
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医学影像技术技能范文2
[关键词] 脑发育；缺碘；大鼠；学习记忆功能
[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）07（b）-0008-04
[Abstract] Objective To explore the influence of iodine deficiency in brain development on rat′s learning and memory functions. Methods Iodine deficiency models of rats in different periods of brain development were induced by drinking tap water containing 0.3 g/L thiamazole.Iodine deficiency of model rat in embryonic period was classified into E1 group，iodine deficiency of model rats 1 to 50 d and 30 to 50 d after birth were named as P1 group and P30 group respectively，and normal control group was set as N group.Change of behavioristics in offspring rats was observed.Serum free triiodothryonine （FT3） and free thyroxine or tetraiodothyronine （FT4） was determined by radioimmunoassay respectively.Morphological change of rat′s brain tissue was observed by HE staining and TUNEL. Results The level of serum FT3 and FT4 in P30 group was lower than that in E1 group and P1 group，with significant difference（P
[Key words] Brain development；Iodine deficiency；Rat；Learning and memory functions
碘是合成甲状腺激素的必需原料，而甲状腺激素对神经系统发育有重要作用，尤其是对大脑发育，是非常重要的一种激素。如果在脑发育时期碘缺乏或不足，将发生严重的脑功能障碍；如果孕妇孕期缺碘或婴儿出生后母乳、饮食缺碘可出现感觉迟钝、步态异常和智力减弱等症状，而早发现、早诊断、早治疗是防治的关键[1-3]。调查研究显示，脑发育期碘缺乏可引起学习记忆功能障碍及智力低下[4-5]。目前，大多数研究认为这一现象的发生与脑组织细胞凋亡增多密切相关[6]。本研究通过观察脑发育不同时期缺碘大鼠模型学习记忆功能及脑组织形态学的不同变化，探讨缺碘对大鼠学习记忆功能形成及发育的影响，旨在为甲状腺功能减退患儿的临床防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
①实验动物：SD大鼠20只（雌雄比为3∶1），由省医学实验动物中心买进。在实验室常规饲养1周，待其适应环境后，雌雄大鼠按3：1合笼。②主要试剂：甲硫咪唑从美国Sigma公司官网邮购，TUNEL试剂盒由国内南京凯基生物科技发展有限公司提供，放免试剂盒从天津九鼎医学生物工程有限公司邮购。
1.2 方法
1.2.1 缺碘大鼠模型制备[7]及分组[8] 本实验共分4组，具体分组如下。第1组（胚胎期缺碘模型组）：怀孕母鼠从怀孕的第1天开始至仔鼠出生，饮用含质量浓度为0.3 g/L的甲硫咪唑自来水，母鼠在仔鼠出生后的1～21 d（母乳喂养期）饮用正常自来水；仔鼠在出生后21 d断奶，直至出生后50 d的这段时间内饮用正常自来水；雌雄仔鼠分开饲养，简写为E1组。第2组（出生后1～50 d缺碘模型组）：母鼠在仔鼠出生后的1～21 d（母乳喂养期）饮用含质量浓度为0.3 g/L的甲硫咪唑自来水，仔鼠在出生后21 d断奶，直至出生后50 d的这段时间内饮用含质量浓度为0.3 g/L的甲硫咪唑自来水；雌雄仔鼠分开饲养，简写为P1组；第3组（出生后30～50 d缺碘模型组）：母鼠在仔鼠出生后的1～21 d（母乳喂养期）饮用正常自来水，仔鼠在出生后21 d断奶，在出生后30～50 d饮用含质量浓度为0.3 g/L的甲硫咪唑自来水；雌雄仔鼠分开饲养，简写为P30组；第4组（正常对照组）：母鼠和仔鼠均饮用正常自来水，直至仔鼠出生后50 d。
1.2.2 血清游离FT3和FT4的测定 N组出生后第1天和第50天取血，E1组出生后第1天取血，P1和P30组出生后第50天取血。心脏取血经离心后保存，样品全部收集后统一拿到华侨医院核医学科，在专业人员协助下完成测定。
1.2.3 “Y”迷宫实验 本研究选用固定次数随机不休息法[9]，“Y”迷宫实验中的正确、错误判定标准如下：实验大鼠受到电击后，迅速从起步区直接逃到安全区记录为“正确反应”；若是逃到其他无灯光的任何一臂，则记录为“错误反应”；若是实验大鼠转身向所在的起步区反方向逃窜也记录为“错误反应”。各组大鼠在出生后的第45～50天由专人负责实验，每天于相同时间、相同地点，固定训练20次，测试结果分为以下两种：①20次测试中连续正确反应次数≥9次；②20次测试中总的正确反应次数≥18次。如果①和②满足一个，则记为达标。本研究选用正确反应率、达标所需天数、24 h记忆保持率3个指标反映被测大鼠的学习记忆功能。
1.2.4 脑组织形态学检测 各实验组大鼠在出生后的第50天灌注取脑，本研究选用的麻醉方法为腹腔注射350 mg/kg的水合氯醛，首先剪开心包，暴露大鼠的心脏，然后在心尖部位插管到升主动脉，再用止血钳把针头固定，接着再剪开右心耳，快速注入温度为37℃的生理盐水200 ml，再缓慢注入温度为4℃、体积分数为4%的多聚甲醛溶液200 ml。灌注、固定实验步骤完成后，手术取出完整脑组织，将大鼠的大、小脑分别装于盛有体积分数为4%多聚甲醛溶液的容器中浸泡、固定24 h以上，然后做石蜡包埋，常规石蜡切片，每片厚约4 μm，部分切片做HE染色，观察大鼠脑组织的细胞形态学变化。另外，部分切片采用TUNEL法检测细胞凋亡，具体操作方法参考原位细胞凋亡检测试剂盒说明书。各组大鼠随机选取不同脑区的5个视野拍照并计数。
1.3 统计学处理
采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，均数间两两比较采用单因素方差分析，以P
2 结果
2.1 各组血清游离FT3和FT4水平的比较
P30组的血清游离FT3和FT4水平显著低于N组，差异有统计学意义（P
2.2 各组“Y”迷宫实验结果的比较
P1和P30组的正确反应率显著低于N组，差异有统计学意义（P
2.3 各组HE染色结果的比较
光镜下N组大鼠的脑组织HE染色结果显示，脑组织分层清晰，细胞数量较多，细胞界限清晰，多有突起，胞质丰富，胞核大而且圆，核仁清晰可见。与N组比较，P1组大鼠的脑组织HE染色结果显示，凋亡细胞皱缩，细胞体积缩小，可见细胞外空隙、胞核固缩、深染（图1）。
P1组和P30组的皮质细胞凋亡数显著多于N组，差异有统计学意义（P
3 讨论
地方性克汀病又称地方性呆小病，是胚胎期和新生儿期严重缺碘的结果。本病病因比较明确，主要是由于缺碘影响甲状腺激素合成而导致。某些以神经型表现为主的地方性克汀病就是由于胚胎早期严重的宫内碘缺乏损害神经细胞生长发育所致，其临床表现为身高低于正常，其中甲状腺肿大者占15.3%，多数为轻度肿大，智力呈中至重度减退；表情淡漠、聋哑、精神缺陷、痉挛性瘫痪、眼斜视；膝关节屈曲、膝反射亢进，可出现病理反射，如巴宾斯基征阳性；无明显的甲状腺功能减退表现。亚临床型甲状腺功能减退患者尤其是儿童患者，其认知功能损害比较明显，表现为分类、领悟、编码、知识、言语等各项指标均低于对照组[10]。相关研究显示，在脑发育期，缺碘导致的甲状腺功能减退患者记忆能力明显降低[11-12]。先天性甲状腺功能减退大鼠在水迷宫实验中的逃避潜伏期、游泳路程延长，游泳速度减慢[13]。出生后50 d的甲状腺功能减退仔鼠在避暗实验中达标所犯次数明显增多，24 h记忆潜伏期明显缩短[5-6，14]。本研究结果显示，P1组和P30组缺碘大鼠在“Y”迷宫实验中的正确反应率显著降低，P1组缺碘大鼠在“Y”迷宫实验中的达标所需天数显著延长，记忆保持率显著降低，提示甲状腺激素在脑功能发育中尤其是在学习记忆功能的发育和形成过程中有重要作用。
海马一直被认为是认知功能形成和发育的重要解剖结构基础，其参与学习记忆功能的形成。海马中的CA1区域和大脑空间学习记忆功能相关，记忆在这个区域编码、存储。研究显示，有几种重要基因参与学习记忆功能的形成，即早基因在长时记忆形成中发挥重要作用，这一作用和神经元的可塑性有关。甲状腺功能减退时，海马组织中的即早基因表达降低[15-16]，印证了这一观点。缺碘导致的甲状腺激素合成减少可导致海马功能受损，尤其是对学习记忆功能的损害表现更为明显，如水迷宫实验结果更差，而且受损的严重程度和体内甲状腺激素降低或不足的程度、持续时间及发生年龄有密切关系[17]。相关研究显示，即使从母鼠怀孕第6天开始直至仔鼠出生后第30天，母鼠口服较低剂量甲状腺激素合成抑制药物（丙基硫氧嘧啶）引起的甲状腺激素缺乏也可导致仔鼠海马CA1区和锯齿状脑回的突触传递混乱，即突触的可塑性混乱，严重者可引起海马学习记忆功能损害[18]。脑发育期甲状腺激素合成不足或减少可明显导致海马CA1区以及齿状回区LTP的表现和特性出现异常改变[17，19]。相关研究显示，甲状腺功能减退大鼠海马CA3区的LTP明显降低[20]。本研究结果显示，P1组缺碘大鼠的脑组织海马HE染色镜下可见凋亡细胞皱缩、细胞体积明显缩小以及细胞外空隙、细胞核固缩、深染；TUNEL染色可见阳性细胞（凋亡细胞）数明显增多，提示海马发育障碍是脑发育期缺碘导致大鼠学习记忆功能障碍的重要生理病理基础之一。
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医学影像技术技能范文3
【关键词】 恩氟烷 小鼠 记忆 跳台实验 避暗实验
Abstract: Objective To investigate the effect of enflurane on memory in mice. Methods The mice were randomly pided into 4 groups （n=10 each）: normal saline group （NS group）and enflurane 0.1 ml·kg-1， 0.2 ml·kg-1 and 0.4 ml·kg-1 groups （En0.1， En0.2 and En0.4 groups）. The number of error and the length of latency were recorded one day， two days， three days and five days after the drug administration in the step-down and step-through tasks. Results As compared with the NS group， on the first day， the number of error was increased and the latency was decreased in the step-down and step-through tasks （P
Key words: enflurane; mice; memory; step-down task; step-through task
全麻状态意味着患者意识缺失，但患者有可能出现术中知晓（awareness）和术后回忆等情况。全麻术中知晓是指全身麻醉手术期间患者对周围环境或声音存在着一定程度的感知与记忆，属于全身麻醉并发症［1］。若手术中不当的谈话或疼痛刺激等存留于记忆中，则可能对其以后的精神行为或术后疼痛带来负面影响［2］，避免术中知晓是目前全球麻醉学界关注且尚未解决的问题。恩氟烷是常用吸入麻醉药，由于其诱导和苏醒迅速，而在临床广泛使用。国内外研究恩氟烷对小鼠学习记忆的影响鲜有报道。因此我们研究其对记忆的影响对于解决术中知晓的难题具有重要意义。
1 材料和方法
1．1 实验动物 昆明种小鼠，体重20～25 g，雌雄各半，由徐州医学院实验动物中心提供。实验前2天使小鼠熟悉实验室环境，自由摄食饮水，每日9：00～12：00进行实验。
1．2 实验药品 恩氟烷为雅培制药有限公司生产，批号：20050099。
1．3 主要仪器 YLS-3T型跳台仪和ZH-500型小鼠避暗仪（安徽淮北正华生物仪器设备有限公司）。
1．4 动物分组及处理 按分层随机区组设计将小鼠分组，使各组小鼠雌雄比例、平均体重基本相同。在跳台实验和避暗实验中均将小鼠分为4组（n=10）：生理盐水（10 ml·kg-1）组（NS组）、恩氟烷（0.1 ml·kg-1、0.2 ml·kg-1、0.4 ml·kg-1）组（En0.1、En0.2、En0.4组）。训练前10 min，各组按照上述剂量腹腔注射生理盐水或恩氟烷。
1．5 跳台实验［3］ 先将小鼠放入反应箱内适应3 min，然后底部铜栅通以0.05 mA电流，小鼠受到电击即会跳上平台躲避电击，如此训练5 min。用药后第1、2、3、5天将小鼠再次放在平台上，记录第1次跳下平台的时间（潜伏期）和3 min内跳下平台的次数（错误次数），如果3 min内小鼠未跳下平台，错误次数记为0次，潜伏期记为180 s。
1．6 避暗实验［3］ 实验装置分为明暗两室，两室之间有一直径为3 cm的圆洞，暗室底部铜栅通电。训练时先将小鼠放入反应箱中适应3 min，然后暗室底部铜栅通以40 V、50 Hz交流电，将小鼠背对洞口放入明室，小鼠进入暗室即受电击。训练时潜伏期大于180 s者弃去不用。用药后第1、2、3、5天将小鼠再次放入明室，记录第1次进入暗室的时间（潜伏期）和5 min内进入暗室的次数（错误次数）。如果5 min内小鼠未进入暗室，错误次数记为0次，潜伏期记为300 s。
1．7 统计学处理 错误次数及潜伏期均用±s表示，用SPSS 11.5统计软件进行数据处理，采用单因素方差分析LSD检验。检验水准：α=0.05。
2 结 果
见表1、2。表1 恩氟烷对小鼠记忆的影响（跳台实验，n=10，±s）表2 恩氟烷对小鼠记忆的影响（避暗实验，n=10，±s）
组别用药后第1天错误次数潜伏期（s）用药后第2天错误次数潜伏期（s）用药后第3天错误次数潜伏期（s）用药后第5天错误次数潜伏期（s）NS组0.2±0.4295±120300±00300±00300±0En0.1组0.2±0.4292±190300±00300±00300±0En0.2组0.9±0.6*179±95**0.1±0.3296±140300±00300±0En0.4组1.3±0.7**47±67**0.2±0.4278±570.1±0.3291±280.1±0.3300±1
与NS组比较：*P
与NS组相比，用药后第1天， En0.2、En0.4组跳台错误次数增多（P
吸入麻醉药通常是经气道吸入给药，这将使动物身上连接一些管道，以致很多实验难以进行。根据吸入麻醉药的体内过程及我们的实验证实，吸入麻醉药经腹腔注射给药后同样能够达到麻醉作用［4-5］。在本实验中为了避免动物出现明显的中枢抑制而影响实验结果，选择了亚麻醉剂量腹腔注射。
人和动物的内部心理过程是无法直接观察到的，只能根据可观察到的刺激反应来推测脑内发生的过程。因此，对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔一定时间，测量它们的操作成绩或反应时间，其中跳台实验和避暗实验是常用的研究动物记忆的实验方法［3］。
在本实验中，与NS组相比，用药后第1天，En0.1组跳台、避暗错误次数和潜伏期均无明显差异，说明恩氟烷未对小鼠记忆造成损害。En0.2、En0.4组跳台、避暗错误次数增多，潜伏期明显缩短；避暗错误次数增多，潜伏期缩短。说明恩氟烷对小鼠的记忆造成损害，这可以有效避免术中知晓的问题。而用药后第2、3、5天，在跳台实验和避暗实验中，错误次数和潜伏期各组均无显著差异。说明恩氟烷对于小鼠的记忆损害是暂时性的，不会造成持久的记忆障碍，这可能是药物经过4～5个半衰期，已基本消除之故。至于恩氟烷损害小鼠记忆的机制，尚需进一步的研究。
参考文献
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［3］ 刘少林，张均田.学习、记忆实验法［M］∥徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第3版.北京：人民卫生出版社，2002：826－834.
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[基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（2015ZX09501004-001-002） ；中国中医科学院基本科研业务费自主选题项目（ZZ0808016）；中国中医科学院博士研究生创新人才培养基金项目
[通信作者]*杨薇，博士研究生，研究方向为中医临床评价方法学，Tel：13693376265，E-mail：
[作者简介]郝腾腾，硕士研究生，Tel：18813084816，E-mail：
[摘要]为了解真实世界中舒血宁注射液对肝功能的影响，选取来源于全国20家大型三甲医院的医院信息系统（hospital information system， HIS）中使用舒血宁注射液的患者信息（5 353例）作为暴露组，与未使用舒血宁注射液的患者信息（4 683例）作为非暴露组进行对比研究，以谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）是否发生异常变化作为结局指标，采用分层分析、经典logistic回归分析分析、GBM倾向评分加权的logistic回归，以及generalized boosted models （GBM）倾向评分加权结合协变量调整的logistic回归对混杂因素进行控制后，分析舒血宁注射液对肝功能的影响。通过对舒血宁注射液对ALT分析发现，倾向评分前经典logistic回归分析中回归系数-0.232（P=0.017），倾向评分后回归系数-0.150（P=0.370）；对AST异常变化影响分析中，倾向评分前经典logistic回归分析中回归系数-0.034（P=0.767），倾向评分后回归系数-0.091（P=0.538）。由于倾向评分对大量混杂进行了控制，其结果更接近临床，因此基于现有的电子医疗数据，未发现使用舒血宁注射液对ALT及AST有影响。
[关键词]舒血宁注射液；谷丙转氨酶；谷草转氨酶；电子医疗数据；倾向性评分；队列研究
临床中活血化瘀类中药注射液临床应用越来越广泛，但不良反应的数量亦在增长[1]。舒血宁注射液为临床常用的活血化瘀药之一，其主要组成为银杏叶提取物，主要有效成分为银杏叶总黄酮、银杏内酯等。《中国药典》2010年版记载：银杏叶可活血化瘀，通络止痛，化浊降脂等；用于瘀血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，高脂血症等。近年来关于舒血宁注射液不良反应的报道增多。舒血宁注射液的严重不良反应表现主要以全身性损害、呼吸系统损害为主[2]，而对肝功能影响仅有少数报导。曾有报道使用舒血宁注射液治疗期间，3例出现谷丙转氨酶轻度升高：未减药、停药而自行恢复[3]。当肝细胞发生坏死时，胞浆内的ALT及线粒体内的AST释放入血，其中ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标，故选用AST及ALT作为检测指标。本研究基于HIS数据，旨在回顾性观察活血化瘀药舒血宁注射液对肝功能的影响，为舒血宁注射液在临床实践中的安全应用提供参考。
1材料与方法
1.1数据来源
数据由全国20家大型三甲医院的医院信息系统中为来源，数据由患者一般信息、诊断信息、医嘱记录、实验室理化指标检查信息等组成。
1.2数据的标准化
由于医院信息系统（hospital information system，HIS）及laboratory information system（LIS）数据库结构较为复杂，收集和存储的数据庞大且结构不完全统一，故需要对数据整合、清理、转换和标准化[4-5]。
1.3结局指标
由于不同医院使用检验制剂的不同，故理化指标的正常范围也略有不同，因此以ALT，AST是否发生异常变化作为结局指标。将ALT与AST检测值高于正常范围上限的200%定义为异常变化。将其用药前7 d内的最后一次理化指标值定义为“用药前理化指标值”，停药后7 d内的最早一次理化指标值定义为“用药后理化指标值”。无论用药前AST或ALT正常或者异常，如果用药后异常或者更加异常定义为“发生异常变化”；如果用药后指标正常或者指标异常程度减轻，则定义为“无异常变化”。
1.4数据纳入排除标准
1.4.1纳入标准患者年龄在18～80岁，使用舒血宁注射液前后间隔≥7 d有至少2次ALT与AST检测者，若该时间段内有多次检测则取距开始用药前最近的1次检测与停止用药后最近的1 次检测[6]。
1.4.2排除标准年龄>80岁或者
1.5病例筛选流程
筛选流程见图1。
1.6统计方法
采用分层分析、经典logistic回归，generalized boosted models（GBM）加权倾向评分logistic回归、带协变量的GBM倾向评分加权logistic回归；统计软件为SAS软件9.20，R软件2.15。
2结果
2.1患者一般信息
符合纳入及排除标准的具有治疗前后ALT记录的共5 919例，其中暴露组4 108例，非暴露组1 811例。其中男性3 603例，女性2 316例，男女比例为1.56∶1（P=0.53）；年龄分布暴露组平均年龄为60.74岁，非暴露组平均年龄为60.76岁（P=0.86）。
符合纳入及排除标准的4 217例有治疗前后AST的记录中，暴露组1 345例，非暴露组2 872例。其中男性2 459例，女性1 758例，男女比例为1.40∶1；年龄分布暴露组平均年龄为60.78岁，非暴露组平均年龄为60.698岁（P=0.38）；入院病情危的病例为103例，急的病例为599例，一般的病例3 318例（P=0.85），见表1。
2.2ALT及AST分析结果
2.2.1主要混杂因素及其影响程度根据倾向性
评分的GBM算法，得到各混杂因素对处理组分配的相对影响程度，相对影响程度越大，表示该协变量作为混杂因素对分组的随机分配影响越大。2组人群中对ALT随机分配影响程度比较大的是薯蓣皂苷片、肠内营养、甘草酸和腺苷钴胺等。对AST随机分配影响程度最大的是薯蓣皂苷片、门冬氨酸钾镁、地塞米松和甘草酸等，见表2。
2.2.2倾向性评分效果采用倾向性评分方法对暴露组与非暴露组之间协变量进行平衡，具体效果见图2。
图2显示了倾向评分加权前后的P。加权前，许多协变量在2组间有显著的差异，P接近于0，故拒绝原假设。加权后，大多数协变量在2组间的差异不显著。总之，经过加权后，已经可以假设患者被随机分配到暴露组和非暴露组。由于篇幅限制，在此仅展示对于ALT分析影响的重要性因素基线、倾向性评分加权后的协变量特征、K-S检验统计量和相应的P，见表3。
分别采用经典logistic回归、GBM倾向评分加权后logistic回归和GBM倾向评分加权结合协变量调整logistic回归分析舒血宁注射液对ALT，AST的影响，见表4。
表4显示了3种估计方法估计出来的平均处理效应（即回归系数）及对2个肝功能指标的分析结果。在对ALT检测指标分析中，将未被平衡的薯蓣皂苷片、心通口服液、益心舒胶囊3个重要协变量纳入倾向评分加权结合协变量调整的logistic回归模型进行分析，可以看出经典logistic回归分析显示使用舒血宁注射液对ALT异常变化有显著影响（回归系数-0.232，P=0.017），但使用倾向性评分的方法后则无显著差异（回归系数-0.150，P为0.370），即用舒血宁注射剂比未用舒血宁注射剂导致谷丙转氨酶发生异常变化的可能性要小，但是统计学差异不显著。在对AST检测指标分析中，将未被平衡的薯蓣皂苷片、心通口服液、阿托伐他汀、益心舒胶囊、氯化钾5个重要协变量纳入倾向性评分加权结合协变量调整的logistic回归模型进行分析显示，倾向性评分前后均未发现使用舒血宁注射液对AST异常变化有明显影响。
由于方法二倾向性评分加权的logistic回归，通过倾向性评分的加权，平衡了大部分混杂因素。方法三带协变量调整的倾向性评分加权logistic回归，为了获得更稳健的处理效应估计，把一些协变量也加入到logistic回归模型中。从统计的角度可以认为，方法二和方法三可能更可信，所以认为使用舒血宁注射液与不使用舒血宁注射液相比，导致谷丙转氨酶及谷草转氨酶发生异常变化的可能性要小。
2.2.3敏感性分析由于模型中的变量太多，在不影响分析结果的情况下，部分重要变量分别对ALT，AST的敏感性分析结果见表5。结果表明，大多数协变量的都不大，且它们对应的都很小，则说明倾向性评分法基本上平衡了所有的混杂因素。
3讨论
3.1未发现舒血宁注射液对肝功能有影响
基于现有HIS数据显示，使用舒血宁注射液对肝功能无明显影响。药物由静脉进入体内，经血液循环后分布全身，而机体内的物质代谢主要在肝脏，多数药物在肝脏要经过不同程度的结构变化，故可能对肝功能有一定影响，但本文未发现使用舒血宁注射液对肝功能有显著影响。且相关研究显示未发现其用药剂量在20～50 mL时对ALT，AST的异常变化有显著影响[6]。舒血宁注射液提取物具有对缺血心肌、受损肝脏再灌注以及缺血区脑组织的保护作用，可改善肠缺血再灌注，而肠缺血易影响多脏器功能，其中肝脏受损发生较早，持续时间较长[7]，故考虑舒血宁注射液对肝功能无明显影响可能与其药理作用有关。但是临床用药应注意合理用药，以避免不良反应的发生[8]。
3.2电子医疗数据分析需控制混杂因素
本研究为观察性研究，电子医疗数据库记录的各种信息数据之间存在较广泛的关联性，但数据各组之间又存在多种因素影响下的不均衡性。采用传统方法分析，由于混杂因素太多，分层分析会使得分组过多，而logistic回归分析存在着共线性等问题，从而使统计效能过低，倾向性评分法可以减少或避免分层分析中的分层过小问题和logistic回归分析中的共线性问题[9]。倾向性评分法可以在分析和设计阶段有效平衡非随机对照研究中的混杂偏倚， 使研究结果接近随机对照研究的效果[10]。该方法可以自动根据数据利用自适应算法去估计所关注的处理变量和大量协变量之间的非线性关系，特别是当模型中协变量很多协变量与处理变量之间线性非线性或交互效应等函数形式无法确定时，此方法优势较大[11]。故选择倾向性评分法来均衡各组间数据，能够清晰的展现电子医疗数据库中使用舒血宁注射液对肝功能的影响。
3.3研究的局限性与不足
本研究数据来源于HIS及LIS数据库，为未经随机处理化的数据，不同于随机对照实验，未进行前瞻性的设计研究及长期的临床随访，仅限于患者住院期间的观察。而各个单位电子医疗数据库数据结构不统一，存在不同的偏倚及各种复杂的混杂因素。另外，由于分析方法有限，研究过程中可能还存在一些未被发现的混杂因素，而倾向性评分不能平衡任何未被观察到的混杂因素，从而影响研究结果。但本文尽量控制了可能的混杂因素，选择倾向性评分法将事先明确的可疑混杂因素进行了均衡处理。而且本文严谨的选择统计方法，故结果具有一定的真实性。
4小结
本文是基于全国20家三甲医院电子医疗数据库中使用舒血宁注射液的病例而进行的回顾观察性研究，分析了临床使用舒血宁注射液对肝功能异常变化的影响。研究结果提示使用舒血宁注射液对肝功能的异常变化无明显影响，为临床舒血宁注射液使用的安全性研究提供了方向。由于本研究为回顾性研究，故不能做因果关系的判断，即不等于舒血宁注射液对肝功能没有损害。本研究未纳入其他地区及其他等级医疗单位的数据，具有一定的局限性，对于基层医院的推广仍需谨慎。且临床推广中，仍需进行临床前瞻性大样本的试验研究来进一步探索。
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关键词，阿尔茨海默病；学习记忆能力；安神益智方；实验研究
老年痴呆症(AIzheimer's disease，简称AD)是老年人的常见病、多发病。其首要症状是智力、记忆力、感官定向能力、判断力、语言思维能力不可逆的进行性退化，并常伴有性格改变。有资料表明，5％-15％的老年人有不同程度的痴呆症状。AD目前已成为继心脏病、肿瘤和中风之后的第4位死亡原因，由于其隐匿性和不可逆性，给家庭和社会带来很大负担与危害。现代医学对本病尚缺乏理想的治疗方法，而中医对老年痴呆的治疗却有其独到之处。安神益智方已运用临床多年，疗效确定。现将其对AD模型小鼠学习记忆能力和脑组织SOD、MDA及LF含量的影响总结如下。
1 材料
1．1 动物
2月龄NTH清洁级小鼠，雌雄各半，体重18―22g，由湖南中医药大学动物实验中心提供(合格证号：湖医动字第20-001号)。
1．2药物及试剂
1．2．1药物安神益智方：人参6g,熟地9g，当归9g，炒白术5g，炙甘草3g，酸枣仁6g，制远志5g等。取药5剂，煎成1500mL。浓缩成750mL备用。批号：20060321。脑复康(吡拉西坦片)，批号：20051001，每片400mg，由威海亚太药业有限公司生产。取30片配制成600mL的药液，浓度为20mg/mL，备用。Alcl3，批号：20050513，天津市大茂化学试剂厂生产。取25.2g配制成2520mL，10mg/mL，备用。亚硝酸钠，批号：20041226，如皋市华瑞试剂厂生产，用蒸馏水配制成2.4mg/mL。氢溴酸东莨菪碱，批号：T05N531，杭州民生药业集团有限公司生产，5mg/片。用蒸馏水配制成1.5mg/mL。
1．2．2试剂超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)脂褐素(LF)、考马斯亮兰测定试剂盒购均自南京建成生物工程研究所，批号分别是20060510、20060513、20060515、20060515。
1．3主要仪器
u-3010紫外分光光度计，日本日立公司：DT-200跳台自动测试仪，成都泰盟科技有限公司。
2 方法
2．1动物分组及造模
取2月龄NTH清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重(20.33±2.32)g[雌性(20.19±2.06)g，雄性(20。46±2.57)g]，按照完全随机设计，遵照均衡性原则，先将动物雌雄分开，再按体重分层，然后查随机数字表将动物随机分成Ⅰ空白对照组，Ⅱ模型组，Ⅲ模型+中药组(5.59u/kg)，Ⅳ模型+脑复康对照组(0.42g/kg)共4组，每组30只。用Alcl3灌胃造模正常对照组以蒸馏水灌胃，每天1次，连续9周：模型组每天以Alcl3200mg/kg灌胃，上午给药，每日1次，连续9周；治疗组，自Alcl3灌胃第7天起上午给予Alcl3灌胃外，每日下午给予相应的药物，每日1次，连续8周。灌胃体积为0.4mL/10g体重。
2．2观测指标
2．2．1 AD病模型小鼠记忆功能测试小鼠跳台试验，包括记忆获得(东莨菪碱)、记忆巩固障碍(亚硝酸钠)和记忆再现障碍实验(乙醇)。方法：于实验的63天进行跳台试验，训练前1h灌胃给药，即进行本试验。各组再按随机数字表法分成3区，每区10只，分别接受3个试验。试验方法参照徐淑云等文献记载进行。利用小鼠对电击的记忆能力进行实验，采用DT-200跳台自动测试仪(成都泰盟科技有限公司)。每批实验各组分别有1只小鼠给药，平行操作。10min后再给第2只小鼠注射，以此类推。
①记忆获得实验：每组各取第1区10只，I组按10mL/kg腹腔注射生理盐水，Ⅱ～Ⅳ组分别给予氢溴酸东莨菪碱3mg/kg腹腔注射。注射后15min进行跳台训练(各组小鼠平行操作)。实验分为训练和测试口训练前让小鼠置于跳台仪中，先适应环境5rain，轻放于平台上，当动物从跳台上跳下四肢接触铜栅时，即给予24V电压刺激，使小鼠受电击3次，小鼠受到电击后的正常回避反应为逃避到平台上，记录小鼠逃避至平台上的潜伏期，并记录5min内的触电次数(错误次数)，以此作为学习成绩。24h后进行测试，记录小鼠第一次跳下受电击的时间(潜伏期)及其3min内受电击的次数(错误次数)，以此作为记忆功能的评价指标。②记忆巩固障碍实验：每组各取第2区10只。学习能力测试方法同前。训练完后除对照组外各组立即腹腔注射NaN02 120mg/kg，以复制记忆巩固障碍模型。24h后进行记忆能力测试口方法为将小鼠放在平台上，箱底通电，小鼠从台上跳下为错误反应，记录从放上平台到跳下的时间为潜伏期。并记录3min内的错误次数。③记忆再现障碍实验：每组各取第3区lO只，测试学习能力。于训练后24h，记忆测试前20min，除对照组外，各组灌胃40％乙醇10mL/kg复制记忆再现障碍动物模型，然后测试记忆成绩。记录潜伏期及5rain内的错误次数。
2．2．2脑内自由基代谢指标的影响 (1)组织匀浆制备：末次给药后1h，各组动物脱臼处死，取脑，冷生理氯化钠溶液冲洗残血，拭干。精确称取脑组织，剪碎，置超声波组织匀浆器中，加入9倍预冷的生理氯化钠溶液或根据需要加入蒸馏水，制取10％的水相组织匀浆待测。
(2)测试方法：①考马斯亮兰蛋白测定试剂盒测定法：(测定SOD，MDA、LF指标需先测定此蛋白后才能进行计算)取制成的10％组织匀浆0.05mL，混匀，室温静置10min，于595nm处，1cm光径，空白调零，用U-3010紫外分光光度计测各管吸光度。注意点：此法灵敏度高，所以标
准蛋白含量及蛋白含量必须用生理盐水稀释至1.3g/L(1.3mg/mL)以下，此范围内呈线性关系。蛋白含量高的样品请用双缩脲试剂进行测定，测试范围为1―15mg/mL。②超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测试法(羟胺法)：取10％的脑组织匀浆液再稀释10倍，制成l％的脑组织匀浆。与试剂用旋涡混匀器混匀，置37℃恒温水浴40min，室温静置10min，于550nm处，1cm光径，蒸馏水调零，用u-3010紫外分光光度计测各管吸光度。③丙二醛(MDA)测定试剂盒测试法(硫代巴比妥酸TBA法)：取10％的脑组织匀浆液0.2mL与试剂旋涡混匀器混匀，试管口用薄膜扎紧，刺一小孔，95℃水浴40min，取出后流水冷却，然后3500―4000r/min，离心10min。取上清，532nm处，1cm光径，蒸馏水调零，用u-3010紫外分光光度计测各管吸光度值。④脂褐素(LF)测定(荧光比色法)：取水相组织匀浆1mL，在1mL匀浆中加入经500C预热后的氯仿甲醇混合液2mL：在旋涡混匀器上抽提30s间歇10s，共抽提3次。30000r/min离心10min，此时样品分3层，上层为水相，中层为组织沉淀层，下层为氯仿甲醇相。吸取上层水相，再用带长麻醉针头的针筒沿管壁穿透中层，吸取下层氯仿甲醇液。向氯仿甲醇提取物中加人0.1mL的试剂，轻轻摇匀，使之澄清透明。将上述液体置紫外灯下放置60S，倒入石英比色杯中，用取有机相用u-3010紫外分光光度计(日本日立)测其荧光强度。以0.1μg/mL的奎宁标准液，氯仿甲醇混合液为空白，发射波长420nm，激发波长360nm测定荧光强度。
2．3统计学方法
本实验全部数据采用SPSS12.0版统计软件包处理。潜伏期及5min内的错误次数结果均用x±s表示，组间比较用单因素方差分析，两两比较用q检验，检验水准：a=0.05。
3 结果
3．1 中药对东莨菪碱所致小鼠学习记忆获得影响
结果表明，中药可使小鼠错误次数低于模型组，可使潜伏期明显延长(P＜0.01)，提示中药对东莨菪碱所造成的记忆获得均有明显的改善作用，而与脑复康组比较差异无显著性(p＞0.05)，见表1。
3．2 中药对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍的影响
模型组测试潜伏期缩短，错误次数增多，与正常组比较差异显著，说明模型组小鼠学习记忆巩固出现障碍。与模型组比较，中药组小鼠测试潜伏期均明显延长，错误次数有一定程度的减少(P＜0.01)。脑复康组小鼠测试潜伏期明显延长，测试错误次数显著减少(P＜0.01)。结果表明，中药对亚硝酸钠所致小鼠学习记忆巩固障碍有明显的改善作用，但弱于脑复康，结果见表2。
3．3 中药对乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响
结果显示，在灌乙醇之后，与模型组相比，对照组、脑复康组，中药组的潜伏期明显延长(P＜0.01―0.05)，错误次数明显减少(P＜0.05)，而中药组与脑复康组比较差异无显著性。说明中药具有拮抗乙醇所致小鼠学习记忆再现障碍的作用，结果见表3。
3．4脑内自由基代谢指标的影响(SOD MDA LF)
模型组小鼠SOD活性明显降低，MDA及LF含量明显升高，与正常组比较差异显著(P＜0.01)，说明模型组抗氧化作用明显减弱，自由基明显增多。与模型组比较，中药组SOD活性明显升高，MDA及LF含量明显下降(P＜0.01)；与脑复康组比较差异无显著性(P≥0.05)。实验结果表明，中药有明显升高小鼠痴呆的抗氧化能力，降低氧自由基对机体的损伤。阻抑了LF堆积，结果见表4。
4 讨论
祖国医学将AD病归属于呆病、文痴、善忘、郁证、癫证等范畴，认为其病位在脑，与心肾肝脾关系密切。其主要病机分为虚实两端。虚证以肝肾阴亏、心脾气虚及阳虚为主；实证以痰、瘀、火、郁为主。临床治疗多以补肾填精、活血通窍、益气养血、清热涤痰开窍等为治疗大法。安神益智方由人参6g，熟地9g，当归9g，炒白术5g，炙甘草3g，酸枣仁6g，制远志5g组成，具有补气养血，安神益智作用，临床运用多年，疗效显著，本次实验研究也证实了其治疗AD病的良好作用。
医学影像技术技能范文6
【关键词】 紫草素;D-半乳糖;老年性痴呆模型
老年性痴呆(AD)是一种严重危害老年人群身心健康的慢性神经退行性疾病,其发生机制与自由基过载造成的氧化应激反应密切相关,后者可引起痴呆模型动物脑内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量增高、超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,是AD发生的重要影响因素。新疆软紫草有效成分紫草素具有体外抗氧化及抗衰老等多种药理活性,对氧化应激损伤具有较好的拮抗作用,但其是否具有脑内抗氧化及改善AD患者学习记忆的作用尚未见明确报道。本研究采用AD大鼠模型,通过观察其脑内MDA和SOD含量的变化,初步探讨紫草素对AD的防治作用。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 30只雄性Wistar大鼠,体质量230~270 g,购自新疆实验动物中心,合格证号XJLA-2008-04。动物
基金项目:石河子大学高层次人才科研基金项目(项目编号:RCZX200664)
作者单位:721000宝鸡市人民医院(景富春);石河子大学药学院药本05级1班(高建波 刘冬);石河子大学药学院药理系(许玉华 王振华); 石河子大学药学院中药系(谭勇)
被随机分为对照组、模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和紫草素低剂量组, 5只/组。
1.2 药物和试剂 D-半乳糖(批号080120)和考马斯亮蓝G250购自上海蓝季公司、超氧化物歧化酶(SOD,批号20080515)及丙二醛(MDA,批号20080407)试剂盒为南京建成生物工程研究所提供,软紫草有效成分紫草素(20070806)购自中国生物制品检定所,其他试剂均为国产分析纯,水为超纯水。
1.3 仪器 Thermo 多功能酶标仪,Morris水迷宫(中国医学科学院药物研究所),德国IAK-R104组织匀浆机,湖南凯达TGL20M高速冷冻离心机。
1.4 造模及给药方法 模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和紫草素低剂量组大鼠均腹腔注射D-半乳糖300 mg/(kg•d),对照组同样方法注射0.9%氯化钠注射液2 ml/(kg•d),连续6周。于第6周末次给药结束后开始进行水迷宫实验,将筛选合格动物纳入后续实验,水迷宫试验方法参照文献[1]。其中,阳性药组给予灌胃给药哈伯因0.008 mg/100(g•d),紫草素高剂量组和低剂量组分别灌胃给药紫草素0.7 mg 和0.35 mg/100 g•d,连续1周。对照组及模型组灌胃给药等容积生理盐水。给药结束后先行水迷宫实验,然后进行脑匀浆SOD和MDA测定。
1.5 脑匀浆SOD和MDA含量测定 对照组、模型组、阳性药组、紫草素高剂量组和低剂量组均于末次给药后迅速置0℃冰面断头处死,冰浴下快速匀浆,继以低温高速离心,设定速度3000 r/min,离心时间10 min。取上清液备用。SOD和MDA试剂的配制均参照试剂盒相应说明书。脑匀浆中蛋白含量测定用考马斯亮蓝G250法。
1.6 统计学方法 所获数据均采用x±s表示,用SPSS for Windows 10.0统计软件作单因素方差分析(ANOVA),以P
2 结果
2.1 紫草素对D半乳糖损伤所致老年性痴呆模型大鼠的行为学影响 见表1。与对照组大鼠相比,模型组大鼠在Morris水迷宫中的游泳持续时间明显延长,搜索策略多为随机式或边缘式。两种指标的组间差异具有统计学意义(P
表1
紫草素D半乳糖致老年性痴呆模型大鼠在Morris水迷宫中的游泳时间(x±s,n=30)
组别剂量(mg/kg)游泳时间(s)
Day1Day2Day3Day4Day5
空白2.0092.71±22.6771.81±43.0654.42±45.0928.01±25.3425.22±25.46
模型150.00106.33±36.992.23±39.94*84.24±43.84**52.78±48.27*48.74±46.40*
阳性药0.0898.56±27.7281.76±41.1266.92±41.1140.91±24.6531.47±27.52
紫草素高剂量7.00102.85±29.5483.23±38.6172.67±39.8842.35±26.4337.08±23.32
紫草素低剂量3.50104.53±30.6386.30±45.2382.79±40.3751.33±27.9047.55±33.12
注:与空白组比较,*P
2.2 紫草素对D半乳糖损伤所致老年性痴呆模型大鼠脑匀浆中SOD和MDA含量的影响 见表2。模型组大鼠各时间点的SOD浓度均明显低于对照组,而阳性药组和紫草素高剂量组在各时间点则显著高于模型组,两两比较差异具有统计学意义(P
表2
紫草素对D半乳糖致老年性痴呆模型大鼠脑匀浆中SOD和 MDA含量的影响(x±s,n=6)
组别剂量(mg/kg)SOD(NU/mg•prot)MDA(nmol/mg•prot)
空白2.00471.98±12.16**49.74±11.53**
模型2.00439.92±8.1286.82±18.47
阳性药0.08467.18±10.74**59.87±6.69*
紫草素高剂量7.00458.55±7.30*59.31±16.40*
紫草素低剂量3.50451.78±0.0661.55±7.90*
注:与模型组比较,*P
与SOD不同,MDA的浓度在各组呈现出相反的变化,其差异亦有统计学意义(P
3 讨论
老年性痴呆(AD)是一种严重危害老年人群身心健康的慢性神经退行性疾病。近年来,随着全球人口老龄化步伐的加快,该病的患病率呈现上升趋势。据国内外有关调查显示,西方发达国家60岁以上老年人的痴呆患病率达2.3%~11.9%,我国在北京、上海、西安和成都等四个中心城市对年龄≥55岁人口进行的调查表明痴呆患病率为2.7%~7.3%。
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研究表明,AD的发生与多种因素导致脑内学习记忆相关神经元损伤有关[2],其中氧化胁迫反应是主要病理改变之一。氧化胁迫可引起痴呆模型动物脑组织胆碱能神经和多巴胺能神经功能受损,胆碱乙酰化酶活性降低,单胺氧化酶活性(MAO-B)升高,造成脑内与学习记忆和认知功能相关的神经递质乙酰胆碱(ACh)及多巴胺等的水平降低。还可导致衰老神经元胞浆中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量明显增高,后者呈帽状结构围绕脂褐素沉积,并成为老年斑的组成部分。氧化胁迫尚能造成其顶下小叶中表达超氧化物歧化酶(SOD)及在海马中表达谷光甘肽(GSH)的mRNA基因转录水平降低,促进了神经元变性和痴呆的发生。
新疆软紫草提取物具有抗氧化和抗衰老等多种药理活性[3],其抗氧化能力相当于2,6-二叔丁基对甲酚的42%和维生素C的35.5 %[4],对D-半乳糖所致急性氧化性肝损伤具保护作用,对超氧阴离子(O-2)、羟自由基(•OH)和单线态氧(1O2)等有较强清除能力,对氧化胁迫损伤具有较好的拮抗作用[5],同时尚可延长果蝇寿命并呈现出一定的量效关系[6]。这些研究结果表明,软紫草可能具有抗AD患者神经元氧化胁迫损伤作用。
本研究发现紫草素具有一定的抗脑内氧化胁迫作用,能明显改善D半乳糖痴呆模型大鼠脑匀浆中的SOD 和MDA的活性及含量变化,改善其学习记忆能力,提示以紫草素为研究靶点有可能开发出新的抗老年痴呆药物,开展紫草素抗老年性痴呆作用研究具有重要基础及临床研究价值。
参 考 文 献
[1] 丛伟红,刘建勋,徐立. 脑维康对D半乳糖致脑老化模型大鼠学习记忆的影响. 中药药理与临床,2007,23(5):155.
[2] 刑宏义,孙圣刚. Alzheimer病的胆碱能系统研究进展.国外医学神经病学神经外科学分册,2000,27(5):262-264.
[3] 肖培根. 新编中药志. 化学工业出版社,2002:976-986.
[4] 王威. 天然紫草素的研究. 食品科学, 2002, 23(6):56-58
[5] 买尔旦•马合木提, 刘燕 , 尼加提•热合木. 新疆紫草提取物对 D2氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用. 中国中药杂志,2006,31(19):1646-1649.
