前言:中文期刊网精心挑选了法律刑事案例范文供你参考和学习,希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感,欢迎阅读。
法律刑事案例范文1
食品安全事件的频发,使食品安全问题成为我国经济生活及社会发展所面临的重大难题之一。2013年5月4日,《最高人民法院、最高人民检察院关于办理危害食品安全刑事案件适用法律若干问题的司法解释》(以下简称《解释》)正式施行,本文以该司法解释为切入点,试论危害食品安全刑事犯罪的法律适用问题。
一、办理危害食品安全刑事犯罪的法律依据
(一)《刑法修正案八》对食品犯罪刑事立法的修正。《刑法修正案八》对食品犯罪立法做了较大的修正,严密了刑事法网,加大了处罚力度。具体表现为:一是对相关犯罪的构成要件做出了修改。如取消了刑法第141条生产、销售假药罪 “足以严重危害人体健康”的构成要件,使该罪由状态犯变为行为犯;对刑法第143条的修改将“不符合食品卫生标准的食品”改为“不符合食品安全标准的食品”;将“食源性疾患”修改为“食源性疾病”。二是对刑罚部分进行了完善。如第141条、第143和第144条都取消了单处罚金刑和比例式的罚金刑适用标准。另外,针对第141条、143条增加了适用较重刑罚的条件。除“对人体健康造成严重危害”以外,增加“或者有其他严重情节”的作为第二档加重处罚情节之一,除“致人死亡”以外,增加“或者有其他特别严重情节”的作为第二档加重处罚情节之一。同时,在刑法第144条中的基本量刑档中删去了“拘役”的规定,第二档情节条件中删除了“造成严重食物中毒事故或者其他严重食源性疾患”, 降低了处罚的门槛。三是增加了食品监管渎职罪。《刑法修正案八》在刑法中增加了一条作为408条之一,即“负有食品安全监督管理职责的国家机关工作人员,或者,导致发生重大食品安全事故或者造成其他严重后果的,处五年以下有期徒刑或者拘役;造成特别严重后果的,处五年以上十年以下有期徒刑。
(二)《解释》对危害食品安全刑事犯罪的完善。《解释》明确了相关罪名的定罪量刑标准,提出了相关罪名的司法认定标准,统一了新型疑难案件的法律适用意见,主要体现在以下六个方面:明确界定了生产、销售不符合安全标准的食品罪和生产销售有毒、有害食品罪的定罪量刑标准;从严惩处食品滥用添加行为;严厉打击食品非法添加行为;首次明确生产、销售不符合安全标准的食品添加剂、食品相关产品行为的定罪处罚标准;依法惩治非法从事生猪屠宰、经营行为;依法严惩危害食品安全犯罪的共犯以及食品虚假广告犯罪。
二、我国食品安全刑法保护的缺陷
《刑法修正案八》及《解释》对食品安全犯罪做出的调整,是对近年来食品安全犯罪严峻形势和公众要求严惩食品安全犯罪呼声的回应,也是实现了与《食品安全法》等法律的有机衔接,但是,现有的危害食品安全犯罪的刑事立法与我们“切实保障广大人民群众生命健康安全,维护社会主义市场经济秩序,促进社会和谐稳定”的需求还是存在差距的,仍有一定的缺陷。
(一)刑法调控范围过窄。我国现行《刑法》的食品安全犯罪仅规定了两种行为方式即生产和销售,我国《食品安全法》第四章规定的却是生产和经营,两者规定并不一致。其他法律形式对食品安全的保护只能起到补充作用,而刑事法律却为我们守着食品安全的最后底线。因此,我们要根据食品的分类管理来确立刑事保护的范围和程度,而不是一味地放纵,让昧心的生产经营者逍遥法外。
(二)与行政立法衔接不畅。由于目前我国涉及食品安全的执法部门多且行业标准不一,给不法分子造成了可趁之机,故应该统一执法部门及力度,减少真空区域及部门之间的互相推诿。食品安全标准的不统一,也给司法鉴定带来一些困扰。
(三)将食品安全犯罪的主观方面设置为故意不利于全面打击犯罪。食品安全犯罪的主观方面要求故意,主观过失则不构成相应罪名。《刑法修正案八》中也未涉及到食品安全犯罪的过失犯问题。事实上,在食品生产领域,由于生产、经营者等相关人员安全意识的淡薄及能力上的原因,难免会因业务过失引发食品安全事故。比如在食品原材料采购领域,采购者可能因懈怠、人情等原因不尽职履行查验义务。再如在食品生产、运输、储存过程中,由于责任人的疏忽可能导致食品变质、过期、混入有毒有害物质,都可能导致食品药品安全事故的发生。食品安全关涉民生和社会稳定,因此从业者应该被赋予更高的注意义务。过失犯罪由于缺少立法规制,不能以生产销售假药等相关罪名惩处,而只能按重大责任事故等罪名处理,这样一来,刑罚相对就较低了,这不利于全面、有效打击食品过失犯罪。
三、我国食品安全刑法保护的完善
如果在刑法分则中设专节规制危害食品安全犯罪,那么应当在现行基本犯罪和延伸犯罪的基础上增设相关罪名等,以此完成罪名设置层面的完善。
(一)增设新罪名。现行危害食品安全犯罪的罪名设置之所以滞后,主要原因在于与《中华人民共和国食品安全法》的不匹配。例如:《食品安全法》为了保障食品安全而对系列主体规定了如召回不安全食品等系列义务,但刑法未在危害食品安全犯罪中将不作为规制为犯罪,更未将造成重大损害后果的行为进行定罪量刑,故应当增加拒不召回不安全食品罪等不作为型犯罪,以促使生产者在发现不安全食品后积极召回,防止、减少危害结果的发生。
法律刑事案例范文2
“钱宝”非法吸收公众存款案
据江苏省南京市公安机关立案侦查,2012年以来,张小雷等人依托钱宝网网络平台,以完成“广告任务”可获取高额回报为诱饵,向社会公众吸收巨额资金,涉嫌非法吸收公众存款犯罪。目前,检察机关已对主要犯罪嫌疑人批准逮捕。
“中晋公司”集资诈骗案
据上海市公安局立案侦查,2012年7月以来,徐勤等人利用中晋资产管理(上海)有限公司及关联公司,通过投放广告等方式进行公开宣传,以“中 晋合伙人计划”名义设立虚假股权私募基金产品,非法吸收公众资金,涉嫌集资诈骗犯罪。为规避查处,有关涉案公司支付业务员高额返佣,由业务员向投资人承诺 10-25%的年化收益。目前,法院已对该案开庭审理。
“龙炎公司”非法集资案
据浙江省杭州市公安局萧山分局立案侦查,2015年2月以来,杭州龙炎电子商务有限公司法定代表人黄定方等人在自有资金短缺并且明知返利模式必 然亏损、无法持续履约的情况下,以高额返利为诱饵,并以虚夸投资项目、虚假宣传公司上市等方法骗取投资人信任,向社会不特定人员骗取资金,涉嫌集资诈骗犯 罪、非法吸收公众存款犯罪。2018年1月8日,杭州市中级人民法院对该案作出了一审宣判。
“京金联公司”非法吸收公众存款案
据湖北省武汉市公安局武昌区分局立案侦查,2014年6月以来,王灿等人利用京金联武汉网络服务有限公司及关联公司,以高额回报为诱饵,以借款项目和基金为名非法吸收公众资金,涉嫌非法吸收公众存款犯罪。目前,检察机关已对主要犯罪嫌疑人批准逮捕。
“臻纪文化传播公司”非法吸收公众存款案
据重庆公安机关立案侦查,马永彤等人利用重庆臻纪文化传播有限公司及关联公司,向社会宣称其在全国范围内签约艺术家为其提供字画等艺术品,鼓吹 这些艺术品的增值潜力大,打着购买后委托公司销售分红、第三方公司团购增值等幌子,以支付“预付定金”方式定期分红、到期回购返本等高额回报为诱饵向社会 公众非法吸收公众存款,涉嫌犯罪。2017年8月,重庆市人民法院对该案作出了宣判。
“善心汇”组织、领导传销活动案
据湖南等地公安机关立案侦查,2016年5月以来,张天明等人利用广东深圳善心汇文化传播有限公司及关联公司,以“扶贫济困、均富共生”为名,以高额回报为诱饵,通过“拉人头”等方式发展会员,涉嫌组织、领导传销活动犯罪。目前,该案已开庭审理。
“五行币”组织、领导传销活动案
2017年5月,按照公安部统一部署,全国公安机关依法对宋密秋及其控制的“五行币”系列传销犯罪团伙进行查处,潜逃境外4年多的宋密秋被缉捕 回国。经查,2012年以来,宋密秋等人长期在境内外从事传销犯罪活动,先后推出“云数贸联盟”、“中国国际建业联盟”、“云讯通”等十余个传销平台,假 借“爱国、慈善、扶贫”的旗号,以销售“原始股”“虚拟货币”等为名,以动态、静态收益为诱饵,采取“拉人头”方式不断发展人员加入,涉嫌组织、领导传销 活动犯罪。目前,该案已移送检察机关审查起诉。
“一川币”组织、领导传销活动案
据广东省珠海市公安机关立案侦查,吴宗霖等人利用一川(澳门)国际有限公司及“幸福100云购在线”平台,以投资“一川币”并进行虚拟积分交易 可获“静态奖金”、发展人员可获“动态奖金”等为诱饵,引诱人员参加,涉嫌组织、领导传销活动犯罪。目前,该案已移送检察机关审查起诉。
“中国人际网”组织、领导传销活动案
据辽宁省沈阳市公安机关立案侦查,孟儒等人利用“中国人际网”,以兜售“人际网-国网-GK卡”为手段引诱人员加入,要求加入者缴纳3900元 获得一个“GK”卡编号,并谎称加入者每年可获得不低于15万元的收益及诸多额外福利,涉嫌组织、领导传销活动犯罪。目前,检察机关已对主要犯罪嫌疑人批 准逮捕。
法律刑事案例范文3
关键词:碘胺酮;心力衰竭;室性心律失常;老年性
心力衰竭患者的死亡通常都是并发室性心律失常导致的,而症状性室性心律失常则有着更高的复发率,只要心力衰竭患者出室性心律失常症状,就会成为心源性猝死疾病的高危个体,心源性猝死约占心力衰竭总死亡的35%~70%[1]。我院在通过采取抗心力衰竭措施的基础上,采用胺碘酮对老年性心力衰竭并发室性心律失常患者进行治疗,取得了较为满意的效果,报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料 将我院2010年1月~2012年10月收治的47例老年性心力衰竭并发室性心律失常患者作为研究对象,其中男33例,女14例,年龄62~81岁,平均(70.4±5.6)岁,病程8个月~9年。47例患者中,冠心病30例,扩张型心肌病6例,高血压性心脏病11例;所有患者病情均符合心脏学会左心室射血分数
1.2方法 对所有入院患者采取积极的抗心衰治疗措施,待患者病情稳定后进行超声心动图与常规动态心电图监测,符合条件的患者,在停用原抗心律失常药物(5个半衰期以上)的基础上并行胺碘酮口服治疗[2]。给予患者口服胺碘酮0.2 g/次,3次/d,连续服用6~7 d,剂量改为0.2 g/次,2次/d,连服7 d,之后剂量调为0.1~0.2 g/次,1次/d,疗程为10 w。治疗阶段依据患者QT间期与心率的变化适当调整剂量,QT间期≥0.45 s或心率
1.3观察指标 本组患者在服药前服药10 w后需要观察的指标分别有:①室性心律失常疗效。根据全天动态动态图监测结果进行判定,显效:频发室性早搏数量完全消失或平均减少>90%;有效:频发室性早搏数量平均减少70%~90%;无效:频发室性早搏数量平均减少
1.4统计学处理 采用SPSS 15.0软件进行统计学分析处理,计量资料用(x±s)表示,采用t检验,P
2结果
2.1临床疗效 治疗后患者心功能变化,有效25例(53.19%),无效22例(46.81%);频发室性早搏治疗总有效率为78.72%,其中显效18例(38.30%),有效19例(40.42%);8例阵发性室性心动过速被终止,窦性心律患者的心率从(97.34±13.68)/min降至(63.82±8.03)/min,差异十分显著(P
2.2不良反应 对本组患者治疗前后的胸片、外周血像、甲状腺功能、肝肾功能等变化不明显。其中3例服药第6 d后出现窦性心动过缓,实行减量及停药处理后逐渐恢复正常,2例服药7 d后后出现双手震颤症状,采取停药处理后症状消失。
3讨论
胺碘酮属于III类抗心失药物,其在治疗心力衰竭患者心律失常及顽固性心律失常方面具有良好的效果。胺碘酮也是该类药物中唯一不存在逆频率依赖现象的抗心失药物,它可以起到一定抗交感神经、血管扩张及抗心肌缺血作用,并且对激活心力衰竭患者的神经内分泌具有一定的调节作用[4]。相关临床研究证明,胺碘酮对治疗心力衰竭并发室性心律失常疾病效果显著,其不仅能够有效改善心功能、抑制心律失常,还能有效降低心源性死亡的发生率,尤其对心功能不全的患者比较适用,对改善患者的生存质量与生活状况有很大好处。同时,胺碘酮在促心律失常及抑制心功能方面的作用较小,如果不存在禁忌症的话,该药物是治疗严重性心力衰竭并发室性心律失常患者的首要选择[5]。本次研究结果显示:47例患者接受治疗后,心功能提高1级占53.19%,室性心律失常治疗总有效率为78.72%,患者QT间期延长,心率明显降低。综合本次研究可见,采用胺碘酮治疗老年性心力衰竭并发室性心律失常患者时,应当给予小剂量用药的方法,并依据个体病情的不同,采取有效而长期的治疗。同时注意对老年患者存在的不良反应进行观察,并及时采取减量或停药措施。
综上所述,采用胺碘酮治疗老年性心力衰竭并发室性心律失常患者时,要首先对心力衰竭进行积极的纠正,将各种诱因去除后采取胺碘酮治疗的效果较为显著,并且不良反应较小,值得临床推广[6]。但治疗前后应当对患者心率、电解质、甲状腺功能及肝肾功能等进行检查,以便对可能产生的毒副作用采取尽早的治疗措施。
参考文献:
[1]刘晔.心力衰竭并发室性心律失常71例临床疗效观察[J].中国医药指南,2014,12:240-241.
[2]王伟才,黎敏如,袁瑞豪.厄贝沙坦联合胺碘酮救治心力衰竭并发室性心律失常的临床体会[J].中国实用医药,2014,19:14-15.
[3]袁瑞亭.胺碘酮治疗心力衰竭合并室性心律失常的疗效观察[J].实用心脑肺血管病杂志,2012,04:587-588.
[4]刘丽辉.心力衰竭并发室性心律失常的疗效分析[J].中国医药指南,2012,26:582-583.
法律刑事案例范文4
河南省高级人民法院:
你院豫法(告)请(1991)38号《关于不服工商行政机关的查封、划拨通知书能否按民事或行政侵权案件受理的请示》收悉。经我院审判委员会讨论,同意你院请示报告中的第二种意见,即:开封市工商局1988年对开封市曹门经销部作出冻结划拨酒款通知书,并以“白条”为收据提走其1653件川曲酒替开封市豫川副食品联营公司冲抵货款的行为,是行政侵权行为,但案发在行政诉讼法施行之前,当时的法律没有规定法院受理此类案件,因此,人民法院不能受理。曹门经销部应向有关行政机关申请解决。
此复
法律刑事案例范文5
关键词:孔雀石绿;隐性孔雀石绿;抗体;ELISA
中图分类号:O657.7+3 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2017)07-1340-05
DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2017.07.036
Preparation of Antibody of Amino-Leucomalachite Green
and Development of ELISA Method
CHANG Chao, ZHANG Jia-yan, CHENG Shi-jie, WU Jin-e
(College of Food Science and Technology, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China)
Abstract: With N,N-dimethylanilin and p-nitrobenzaldehyde as raw materials,the hapten of amino-leucomalachite green (NH2-LMG) was synthesized and then was identified with ultraviolet,infrared and mass spectrum. The results showed that the artificial antigen of NH2-LMG was successfully synthesized by diazotization method and was identified by ultraviolet spectrum,which indicated the success of the coupling protein. The antibody of NH2-LMG was prepared with immune New Zealand white rabbits,and the antibody titer reached 6.4×104. The ELISA method was developed, with the limit of detection of 0.1 μg/L.
Key words: malachite green; leucomalachite green; antibody; enzyme-linked immunosorbent assay
孔雀石绿(Malachite Green,MG)是合成的三苯甲烷类染料,因具有高效广谱杀菌作用而曾广泛应用于水产养殖行业。然而,孔雀石绿在水生动物体内会被代谢成隐性孔雀石绿(Leucomalachite Green,LMG),其代谢产物被视为残留标示物,孔雀石绿(图1)和隐性孔雀石绿(图2)具有致畸致癌致突变的毒性[1-4],包括中国在内的许多国家都已严禁使用。但由于其价格便宜,违禁使用的事件屡有发生,给人类的健康带来巨大的隐患。目前,国内外对三苯甲烷类物质的检测主要运用色谱技术,如HPLC、LC-MS等[5-10],中国颁布的检测标准SN/T 1479-2004和GB/T 20361-2006[11,12]也主要采用仪器方法。仪器方法虽然灵敏度高、准确性好,但需要昂贵的仪器,样品处理复杂,不适合大量样品的筛选。酶联免疫吸附测定法(ELISA)因具有快速、灵敏、高效等优点,用于大批量药物残留筛选越来越广泛。国内外已经开始研发隐性孔雀石绿ELISA方法,但在半抗原改造时大多数是在苯环引入羧基[13-18]。为了能够筛选出更灵敏的抗体,本试验设计在苯环上引入硝基,并运用紫外、红外和质谱对半抗原改造进行鉴定,采用重氮化法合成人工抗原,并对抗体进行筛选,建立了隐性孔雀石绿ELISA方法,为开发更灵敏的隐性孔雀石绿试剂盒奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物 2月龄雄性健康新西兰大白兔,体重1.5±0.5 kg,购于湖北省疾病预防控制中心。
1.1.2 试剂 对硝基苯甲醛、N,N-二甲基苯胺、二甲基亚砜等,国药集团化学试剂有限公司上海分公司;弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)等,Sigma公司;羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶偶合物(GaR IgG-HRP),碧云天生物技术研究所。
1.1.3 仪器 NEXUS670型傅里叶红外光谱仪(美国Nicolet仪器公司);LTQ XL型高效液相色谱-质谱联用仪(美国Thermo Fisher Scientific公司);Eimer Lambda25型紫外可见吸收光谱仪(美国Perkin Eimer公司);MagenllanCE 2.5型酶标仪(瑞士SUNRISE公司等)。
1.2 方法
1.2.1 硝基化[性孔雀石绿的合成及鉴定 硝基化隐性孔雀石绿(NO2-LMG)合成路线见图3。称取对硝基苯甲醛3.63 g,N,N-二甲基苯胺15 mL,无水ZnCl2 8.00 g,无水乙醇150 mL于圆口烧瓶中,氮气保护100 ℃下回流24 h,反应结束旋转蒸发掉溶剂后将其置于冰箱中,24 h出现沉淀,抽滤后得到黄色沉淀,用丙酮和水的混合溶液对NO2-LMG粗产物作重结晶。产物经紫外、红外、质谱鉴定,液相色谱测定其含量。液质联用仪的色谱条件:柱温20 ℃;进样量10 μL;流速0.2 mL/min;流动相为乙腈+0.05 mol/L乙酸铵缓冲液(pH 4.5,75∶25)。质谱条件:离子源ESI(+):喷雾电压4.5 kV;毛细管电压16.5 V;毛细管电流温度300 ℃;鞘气30 arb;辅助气反吹气流量0 arb;源内碰撞电压8.0 V;毛细管透镜电压55 V。
1.2.2 氨基化隐性孔雀石绿的合成及鉴定 称取0.75 g硝基隐性孔雀石绿,2.24 g铁粉,浓盐酸2 mL,去离子水10 mL于80 ℃下回流反应8 h。反应结束后趁热过滤掉铁粉,母液置于冰箱中,3 h内出现浅绿色沉淀,抽滤,水洗3次,真空冷冻干燥后得到氨基隐性孔雀石绿粗产物(NH2-LMG)。产物经紫外、红外、质谱鉴定。质谱鉴定条件同“1.2.1”。
1.2.3 人工抗原的合成及鉴定 使用重氮化法将NH2-LMG上的氨基与蛋白质上的羧基进行偶联。取氨基隐性孔雀石绿34.5 mg溶于10 mL预冷的浓盐酸中,充分溶解。在4 ℃的条件下逐滴向其加入0.1 mol/L的亚硝酸钠溶液,期间用碘化钾试纸检验,变为深蓝色终止滴加。用浓度为0.01 mol/L的氢氧化钠溶液调节上清液pH至7,为A液。将135 mg BSA溶解于10 mL的PBS缓冲液当中,为B液。4 ℃磁力搅拌下,将A液缓慢倒入B液中,反应过夜, 4 000 r/min离心10 min,取上清液于pH为7.4的PBS缓冲液中透析,产物经紫外光谱鉴定。
1.2.4 动物免疫试验 6只2月龄体重1.5±0.5 kg 的雄性健康新西兰大白兔,用NH2-LMG-BSA免疫,设计两个剂量(0.5 mg/只、1.0 mg/只),每个剂量各3只,免疫时间间隔均为1个月。基础免疫用弗氏完全佐剂,加强免疫用弗氏不完全佐剂。从第三次免疫开始,每次免疫后7~10 d耳静脉采血,直接ELISA测定各抗体效价。间接竞争ELISA测定IC50。
1.2.5 方法的建立 采用方阵滴定法和间接竞争ELISA法优化抗原包被浓度、抗体工作浓度。在上述最佳条件下,将LMG母液稀释成0、0.1、0.4、1.6、6.4和25.6 μg/L,按间接竞争ELISA方法进行测定,以LMG溶液浓度的对数为横坐标,抑制率为纵坐标,绘制标准曲线,其中抑制率=100%×B/B0, B0和B分别为零标准孔和含药物孔所对应的吸光度。
2 结果与分析
2.1 硝基隐性孔雀石绿结构表征
KBr压片,测得目标化合物的红外光谱见图4。图谱显示1 340、1 690、1 600~1 400 cm-1处有强吸收峰,1 340 cm-1为NO2的伸缩振动峰,1 690 cm-1为C=O的伸缩振动峰,1 600~1 400 cm-1为苯环上的C=C的伸缩振动峰,与硝基隐性孔雀石绿的官能团一致。
目标化合物液相色谱图(图5)显示出峰时间为3.11 min,质谱鉴定显示一级质谱图(图6)中得到一相对分子质量为376.02的离子峰,该相对分子质量与硝基隐性孔雀石绿相对分子质量一致。以母离子m/z 376.2进行二级质谱鉴定(图7):m/z 361.04(M+-CH3),m/z 239.09(M+-NO2-C6H4-CH3),多级质谱分析显示硝基隐性孔雀石绿合成成功。
2.2 氨基隐性孔雀石绿结构表征
KBr压片,测得目标化合物的红外光谱见图8。图谱显示3 433、3 353、1 690、1 600~1 400 cm-1处有强吸收峰,3 433 cm-1与3 353 cm-1为NH2的伸缩振动峰,1 690 cm-1为C=O的伸缩振动峰,1 400~600 cm-1为苯环上的C=C的伸缩振动峰,与氨基隐性孔雀石绿的官能团一致。
目标化合物液相色谱图(图9)显示出峰时间为1.938 min,质谱鉴定显示一级质谱图(图10)得到一分子量为346.12的离子峰,该分子量与氨基隐性孔雀石绿分子量一致。以母离子m/z 346.1进行二级质谱鉴定(图11):m/z 331.13(M+-CH3),多级质谱分析显示氨基隐性孔雀石绿合成成功。
2.3 人工抗原结构表征
免疫原NH2-LMG-BSA紫外图谱见图12。BSA最大吸收波长为280 nm,NH2-LMG-BSA最大吸收波长为259 nm,载体偶联半抗原后最大吸收波长发生明显改变,初步证明NH2-LMG与BSA偶联成功。
2.4 抗体质量
免疫4次后,直接ELISA 测定各免疫组效价,间接竞争ELISA测定IC50,结果见表1。结果显示除了低剂量组(0.5 mg)中免疫兔Rab-3没有免疫反应,其他免疫兔均有反应。免疫兔Rab-2产生的抗体灵敏度更高,建议选择该抗体。通过测定交叉反应率,显示该抗体除了对隐性孔雀石绿(100%)以及原型药孔雀石绿(30%)有反应,对其他药物没有交叉反应(
2.5 方法的建立
2.5.1 抗原最佳包被浓度 方阵滴定确定抗原包被浓度结果见表2。OD值在1.000左右的包被抗原浓度为500 μg/L,以500 μg/L为中心浓度,包被300、400、500、600、700 μg/L 5个浓度作间接竞争ELISA,测定IC50。见表3。结果表明,包被400 μg/L的抗原,IC50最小,抗体反应最灵敏。
2.5.2 抗体最佳工作浓度 方阵滴定确定抗体工作浓度结果见表1。OD值在1.0左右的抗体工作浓度为3.2×104,以3.0×104为中心浓度,设计2.0×104、2.5×104、3.0×104、3.5×104、4.0×104 5个浓度作间接竞争ELISA,结果见图4。结果表明,抗体稀释2.5×104,IC50最小,抗体反应最灵敏。
2.5.3 标准曲线 以抑制率为纵坐标,LMG浓度的κ作为横坐标作标准曲线,结果见图13。曲线在0.1~25.6 μg/L趋近直线,线性关系好。
3 小结
建立小分子化合物免疫化学最为关键的技术是获得高质量的抗体,而高质量的抗体取决于小分子半抗原的改造和人工抗原的合成。孔雀石绿的残留标示物是其代谢产物隐性孔雀石绿,隐性孔雀石绿结构本身不含有羧基和氨基等活性基团与蛋白质偶联,因此必须对隐性孔雀石绿半抗原进行结构改造引入羧基或氨基。已报道的孔雀石绿半抗原改造大多数是引入羧基,本研究选择N,N-二甲基苯胺、对硝基苯甲醛,合成了氨基隐性孔雀石绿半抗原,并通过紫外、红外、质谱进行鉴定,重氮化法将氨基隐性孔雀石绿与蛋白偶联,通过紫外和动物免疫试验显示隐性孔雀石绿半抗原和人工抗原合成成功。选择最优的抗体建立了间接竞争ELISA,检测范围0.1~25.6 μg/L,检测能力0.1 μg/L,为进一步开发隐性孔雀石绿检测试剂盒提供了技术支撑。
参考文献:
[1] CULP S J,BLANKENSHIP L R,KUSEWITT D F,et al.Toxicity and metabolism ofmalachite green and leucomalachite green during short-term feeding to Fischer 344 rats and B6C3F1 mice[J].Chemico Biological Interactions,1999,122(3):153-170.
[2] MAJANATHA M G,SHELTON S D. Carcinogenicity of malachite green chloride and leucomalachite green in B6C3F1 mice and F344 rats[J].Food and Chemical Toxicology,2006,44(8):1204-1212.
[3] MITTELSTAEDT R A,MEIN W,SHADDOCK J G,et al. Genotoxicity ofmalachite green and leucomalachite green in female Big BlueB6C3F1 mice[J].Mutation Research,2004,561(1-2): 127-138.
[4] CULP S J,BELAND F A,HEXICH R H,et al.Mutagenicity and carcinogenicity in relation to DNA adduct formation in rats fed leucomalachite green[J].Mutation Research,2002,506-507(2):55-63.
[5] MITROWSKA K,POSYNIAK A,ZMUDZKI J. Determination of alachite green and leucomalachite green in carp muscle by liquid chromatography with visible and fluorescence detection[J]. Journal of Chromatography A,2005,1089:187-192.
[6] TARBIN J A,BARNES K A,BYGRAVE J,et al. Screening and confirmation of triphenylmethane dyes and theirleucometabolites in trout muscle using HPLC-vis and ESPLCMS[J]. Analyst, 1998,123(12):2567-2571.
[7] VALLE,CECILIA D,ANTONIO L Z,et al. Determination of the sum of malachite green and leucomalachite green in salmon muscle by liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionisation-mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2005,1067(1-2):101-105.
[8] GERALDINE D,PATRICK P J,CONOR D,et al. Confirmatory analysis of malachite green, leucomalachite green, crystal violet and leucocrystal violet in salmon by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta,2007, 586(1-2):411-419.
[9] LEE K C,WU J L,CAI Z W.Determination of malachite green and leucomalachite green in edible goldfish muscle by liquid chromatography-ion trap mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B,2006,843(2):247-251.
[10] VANDERIET J M,MURPHY C J,PEARCE J N,et al. Determination of malachite green and leucomalachite green in a variety of aquacultured products by liquidchromatography with tandem mass spectrometry detection[J].J AOAC Int,2005,88(3):744-749.
[11] SN/T 1479-2004,M出口水产品中孔雀石绿残留检测[S].
[12] GB/T 20361-2006,水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法[S].
[13] YANG M C,FANG J M,KUO T F,et al. Production of anti-bodies for selective detection of malachite green and the related triphenylmethane dyes in fish and fishpond water[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2007,55(22):8851-8856.
[14] XING W W,HE L,YANG H,et al. Development of a sensitive and group-specificpolyclonal antibody-based enzyme-linkedimmunosorbent assay(ELISA) for detectionofmalachite green and leucomalachite greenin water and fish samples[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture,2009,89: 2165-2173.
[15] OPLATOWSKA M,CONNOLLY L,STEVENSON P,et al.Development and validation of a fast monoclonal based disequilibrium enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of triphenylmethane dyes and their metabolites in fish[J].Analytica Chimica Acta,2011,698:51-60.
[16] 王 权,李 健,郭德华,等.无色孔雀石绿免疫原的合成与鉴定[J].中国兽医科学,2007,37(6):534-538.
法律刑事案例范文6
[文献标识码]B
[文章编号]1005-0019(2009)7-0212-02
[摘要]目的:观察稳心颗粒与小剂量胺碘酮合用对充血性心力衰竭并发室性心律失常的疗效及安全性。方法:选择心脏功能(NYHA)Ⅲ级或Ⅳ级并发室性心律失常的患者70例,随机分为两组:A组(服用稳心颗粒+胺碘酮组)和B组(单独服用胺碘酮组)。观察4周,比较两组的治疗效果及不良反应发生情况。结果:A组对室性心律失常的控制与B组基本相同(P>0.05),但不良反应发生率明显减少(P
[关键词]稳心颗粒;胺碘酮;充血性心力衰竭;室性心律失常
充血性心力衰竭(CHF)是一种临床综合征,是各种心脏病的终末阶段,合并室性心律失常(VA)是患者心脏性猝死的主要原因。CHF患者VA发生率达70%以上,心脏猝死约占CHF病死率的30%~70%,主要与CHF合并快速VA有关[1],但临床上药物防治效果不佳,除对严重患者可考虑选用对心功能抑制及促心律失常作用较小的胺碘酮外,其他可供选择药物不多[2]。因此,在纠正心力衰竭的同时,能否有效地治疗室性心律失常很重要。本文报道步长稳心颗粒冲剂对充血性心力衰竭伴室性心律失常治疗的效果。
1资料与方法
1.1临床资料:选择我院2006年10月至2008年10月住院的CHF并VA患者70例。除外有严重肺部疾患、肝、肾功能不全、甲状腺功能异常、严重酸碱失衡电解质紊乱及药物引起的心律失常,无病态窦房结综合征及房室传导阻滞。心脏功能(NYHA)Ⅲ级或Ⅳ级,超声心动图检查左室射血分数≤40%。频发室性早搏56例,阵发性室性心动过速14例。病因为冠心病34例(陈旧性心肌梗死20例),高血压性心脏病12例,扩张型心肌病10例,风湿性心瓣膜病14例。男42例,女28例,年龄36~81岁,平均(63.26±11.38)岁。随机分成两组,两组年龄、性别、病因及心功能比较差异无统计学意义。
1.2方法:治疗前停用其他抗心律失常药物至少5个半衰期,入院后均接受积极的抗心力衰竭治疗(强心、利尿、扩血管、改善心肌细胞代谢等),行常规12导联同步心电图、24h动态心电图、超声心动图、肝肾功能、电解质、甲状腺功能、胸片检查。随机分成两组,A组:给予稳心颗粒9g/次,3次/d,胺碘酮02g/次,2次/d,见效后胺碘酮减量为1次/d,1周后胺碘酮停用,服药4周为1疗程。B组:给予盐酸胺碘酮片0.2g/次,3次/d,服用5~7d,然后逐渐减量至0.2g/次,1次/d,观察时间4周。
1.3观察指标:治疗前及治疗后第4周末进行心脏超声和常规心电图及24h动态心电图检查,测左室射血分数(LVEF),记录心律失常、心功能变化情况及药物毒副作用。
1.4疗效评定标准:根据治疗前后24h动态心电图检查结果及NYHA心功能分级标准:①显效:频发室性早搏数量平均减少≥70%;成对室性早搏数量减少≥80%;短阵室性心动过速减少≥90%;心功能改善2级或达到心功能I级,症状、体征基本消失;②有效:频发室性早搏数量平均减少≥70%或连发室性早搏减少≥90%;心功能改善1级或未达到心功能I级,症状、体征有所改善;③无效:达不到以上标准。
1.5统计学分析:计数资料用χ2检验,P
2结果
2.1两组临床疗效比较,见表1。
2.2不良反应:A组患者者对稳心颗粒耐受性良好,未出现与药物有关的不良反应,坚持全程服药。B组出现2例窦性心动过缓,1例QT间期明显延长,而需要停药或减量。不良反应发生率两组比较差异有显著性(P