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人生就像一场戏范文1
[关键词]肝细胞生长因子；超长任意皮瓣；血管内皮细胞；存活率
[中图分类号]R622[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）03-0430-04
Experimental study on effect of hepatocyte growth factor on the survival rate of random ultra-long skin flap on the rat back
WANG Jia-rui,LIU Da-en,NONG Qing-wen,LI Shun-tang,LIANG Kun-lan,LI Kai-tong
（Department of Burns and Plastic Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi,China）
Abstract： ObjectiveTo investigate the angiogenesis function of hepatocyte growth factor (HGF) to random ultra-long skin flap on the rat back and its effect on the survival rate of the skin flap.MethodsMaking a 8.0cm×2.0cm animal model from a random ultra-long skin flap on the rat back, injected directly with 50ng/ml HGF solution, after 7 days observing the color of the skin flap, texture, capillary return, necrotic area, bleeding condition of the cut flap etc.; Calculating the survival area of the flap; After immunity staining, counting blood capillary with a 400 optical microscope. Making results through comparing the disparity between the before-experimental flap and that of after--experiment., And also comparing with the saline control group.ResultsComparing the survival rate (81.45%±2.74%) of the HGF skin flap with the control group (42.82%±7.03%), the differences are statistically significant (P 0.05); After experiment, the quantity of capillary of the experimental group and the control group are respectively （39.67±4.83) and (21.50±1.87), The difference between the two is of statistic significance (P
Key words: hepatocyte growth factor (HGF)；random ultra-long skin flap； vascular endothelial cells；survival
皮瓣修复是创伤（烧伤）、整形外科常用的治疗手段，传统的任意皮瓣的长宽之比为（2.0～1.5）∶1，超过此比例皮瓣远端常常会发生坏死导致手术失败而需要再次手术，给病人及家属带来痛苦和经济负担。目前临床上常用丹参注射液、低分子右旋糖酐及前列腺素E1、罂粟碱等通过疏通微循环方式或增加皮瓣血流量的方式来增加皮瓣血供，但临床应用中发现均缺乏唯一特异性。因此，预防和治疗皮瓣远端的坏死一直是皮瓣修复创面研究的热点及有待于解决的难点。研究表明[1]肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF)是继血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后第三种能够促新生血管生长因子。Taniyama等[2]在体内外试验研究均表明其促进血管生成的活性比前两者更强大。但既往对HGF的研究主要集中于在肿瘤组织中的表达及缺血性疾病的血管再生的研究，经查阅国内文献，未见有关促进皮瓣血管生成的报道。本实验通过免疫组化染色后计算毛细血管密度、观察皮瓣存活面积，探讨HGF对大鼠背部任意皮瓣血管生成的作用及对皮瓣存活率的影响，为寻找预防和治疗皮瓣远端坏死提供一种的新思路和新方法。
1材料和方法
1.1 实验试剂及器械：健康标准成年S-D大鼠，体重300～350g、雌雄不限（广西医科大动物实验中心提供）。肝细胞生长因子（美国PeproTech公司）,鼠抗人单克隆CD+34抗体MAB-0034（福州迈新生物技术开发技术有限公司），快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（福州迈新生物技术开发技术有限公司），DAB显色试剂盒（上海蓝基生物科技有限公司）。显微镜及病理图像分析仪DMR+Q550（德国LEICA公司），实验在广西医科大学动物实验中心及一附院完成。
1.2 实验方法
1.2.1HGF溶液的稀释配制：启用前离心，用Hanks液配制成2 000ng/ml的原液后分装于10个分装瓶中。加10%FBS溶液及Hanks液配制成50ng/ml贴上标签，在-20℃冰箱保存备用。
1.2.2动物模型制备及实验分组：健康标准成年S-D大鼠20只，体重300～350g，随机分成A、B两组，每组10只，A组：HGF；B组：生理盐水组。10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，将动物俯卧位固定，背部用硫化钠脱毛后温水洗净。于大鼠背正中掀起8.0cm×2.0cm任意皮瓣，其纵轴与大鼠脊柱平行，且以之为对称轴，蒂位于双侧髂嵴连线上。在距离蒂部3.6cm、4.8cm、6.0cm处分别作为蒂部平行的直线，与顺皮瓣长轴的三等分线相交于六点，这六点为注射位点[3]。切开皮肤及皮下，于筋膜浅层掀起皮瓣，结扎基底部活跃出血点。皮瓣掀起后即刻以1ml微量注射器于皮下进针，A组皮瓣下每一注射位点给予50ng/ml HGF溶液0.5ml，B组皮瓣下每一注射位点给予生理盐水0.5ml。4-0丝线将皮瓣原位间断缝合。术后切口涂四环素软膏，单笼喂养。所有手术均由同一人完成。
1.3 检测指标
1.3.1术后大体观察：观察动物术后的饮食、活动及创面愈合情况。
1.3.2皮瓣大体观察，存活率的检测：术后7天处死大鼠，皮瓣存活区与坏死区已明确。皮瓣坏死标准：皮肤颜色变黑、组织回缩、弹性差、质地变硬、切割组织不出血。用透明纸绘出皮瓣形状及坏死皮瓣大小，将坏死区域涂成黑色，数码相机拍照并输入计算机，使用病理图像分析仪DMR+Q550计算出坏死面积。存活面积=设计面积一坏死面积，按(存活面积/坏死面积)×100%计算出存活面积比。
1.3.3组织学观察：术后7天，切取皮肤标本(在存活区，距存活与坏死交界处0.5cm)，10%甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色，光镜200倍下观察其组织学变化、毛细血管管腔情况。
1.3.4 免疫组织化学染色进行微血管分析：10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片；融蜡后用纯二甲苯中浸泡；不同浓度酒精梯度水化后冲洗；3% H2O2甲醇溶液封闭内源性过氧物酶的活性后冲洗；柠檬酸组织抗原修复液工作液高压抗原修复；滴加鼠抗人单克隆CD+34抗体MAB-0034后4℃恒温箱过夜；37℃复温后冲洗；滴加即用型IgG抗体-HRP多聚体，室温下孵育后冲洗；滴加新鲜配置的DBA显色剂，控制染色后自来水冲洗，终止显色反应；苏木素轻度复染后1%盐酸酒精水化，自来水冲洗；PBS冲洗返蓝；梯度酒精脱水，二甲苯透明后中性树胶封片。所有切片均按照试剂盒的要求在相同条件下染色。镜下随机选取4个视野，以单个血管内皮细胞或成簇的血管内皮细胞作为一个毛细血管，单个高倍镜视野下微血管的数目，取其平均值。测出每个高倍镜视野面积，并计算单位面积下微血管数目(个/mm2)，作为评价微血管密度的指标。
1.4 统计学处理：数据均用(x±s)表示，采用SPSS16.0统计软件进行分析。两组间比较采用完全随机两样本均数比较t检验，两组数据经正态检验。
2结果
2.1术后大体观察：大鼠到实验结束均存活，饮食、排便正常，没有术后感染、化脓、体液渗出等不良反应。
2.2皮瓣大体观察：存活率的检测 A、B两组皮瓣远端均出现不同程度的皮肤颜色变黑、质地变硬、切割组织不出血，出现明显的坏死迹象。A组皮瓣成活区域皮肤的颜色、弹性及质地与正常皮肤组织更相似，坏死区域面积比B组少。A、B两组皮瓣成活面积分别为(81.45%±2.74%)、(42.82%±7.03%)，两组间皮瓣存活率差异有统计学意义(t=16.192，P=0.000)。
2.3组织学观察：术后7天，A、B两组大鼠皮瓣均有毛细血管腔出现，真皮层内有大量的血管内皮细胞。A组管腔数量明显多于B组，且管腔的结构好，管腔壁变薄富有弹性，管腔内可见红细胞。B组虽然有大量内皮细胞存活，但呈现无序排列，红细胞沉积较少（如图1～3）。
2.4免疫组织化学染色分析：术前及术后7天两组大鼠背部皮瓣CD+34免疫组织化学染色计算毛细血管的平均密度：A组分别为12.70±1.35、39.67±4.83；B组分别为12.31±1.22，21.50±1.87。实验前A组、B组差异无统计学意义(t=0.667，P=0.513)，实验后A组、B组差异有统计学意义(t=11.100，P=0.000)，A组实验后与实验前差异有统计学意(t=16.253,t=0.000)，B组实验后与实验前差异有统计学意义(t=13.992，t=0.000)。（如图4～6）。
3讨论
3.1 HGF是Michal Lopoulos等[4-5]在部分肝被切除后的大鼠血浆中发现能够刺激肝细胞DNA合成的多肽因子，后经提取纯化并命名的一种具有多功能的间质源性细胞因子。它是由分子量75kD的重链(亦称α链)和分子量30kD的轻链(亦称β链)通过二硫键构成的二聚体。其主要来源于肝脏枯否氏细胞、内皮细胞、成纤维细胞、贮脂细胞、肺脏内皮细胞以及恶性肿瘤细胞。
3.2 任意皮瓣移植后，其血运主要靠蒂部的不知名的血管、真皮下血管网、筋膜血管网等周围血管束的侧支供血，同时皮瓣远端的毛细血管的快速形成对预防及治疗远端缺血也起重要的作用[6]。新生血管的形成是一个非常复杂的过程，首先血管扩张及通透性增加，后经过血管基底膜酶解，血管内皮细胞活化、增殖、迁移、血管腔形成，周边细胞及平滑肌细胞的作用等多个步骤协调有序地完成，最后形成新生血管网。国内外在心脏缺血性动物模型的研究[7-8]均表明HGF能够促进缺血性心肌的微小血管再生，增加内皮细胞的数量及心肌的血流量。等[9]在体外培养牛的视网膜血管内皮细胞实验也证明HGF能够促进血管内皮细胞的增生和移行，且呈剂量依赖关系，当加入HGF质量浓度为100ng/ml时达到最大促血管内皮细胞增生和移行效果。其机制可能为：
3.2.1 HGF通过其受体c-met直接作用于血管内皮细胞，刺激血管内皮细胞移行、增生、生长、产生蛋白酶、促进组织侵袭和机化，内皮细胞在细胞外基质间隙扩散,伸出胞浆芽并延长,使毛细血管样的导管形成。Nakamura等[10]在于大鼠血管的平滑肌细胞和内皮细胞中的局部发现了HGF/c-Met系统。唐博[11]等有研究表明HGF通过促使血管内皮细胞超微结构的改变，线粒体和粗面内质网增多，常染色质增多。能有效地促进血管内皮细胞的有丝分裂过程，细胞周期中S期、G2／M 期细胞增多，尤其能促使细胞进入M期，这些都说明HGF是一种强的有丝分裂原。
3.2.2 HGF可通过诱导VEGF的表达而促进的血管内皮细胞的生成、生长和转移，且二者具有协同作用。HGF可通过PI3激酶通路诱导VEGF的分泌和表达，从而间接促进血管的生成[12]。由此，罗泊涛等[13]在研究鼻咽癌中HGF和VEGF的表达意义的结果时提出了通过抑制HGF靶分子表达和活性来抑制肿瘤细胞中VEGF的表达，从而抑制肿瘤血管生成，达到抑制肿瘤生长和转移的目的设想。
3.2.3 HGF可促进血管内皮细胞的发生、生存和再生，抑制细胞凋亡。周一军等[14]通过HGF抑制糖基化终产物诱导在体外培养人脐静脉内皮细胞研究结果表明：HGF可显著降低内皮细胞凋亡率，抗凋亡的bcl-2基因表达明显升高，而促凋亡Bax基因表达无明显变化,caspase-3活性显著降低。Gopalkr Ishnapilla等[15]研究发现在高糖环境下HGF能够抑制内皮细胞的程序性死亡，促进血管内皮细胞再修复。
3.3 本实验采用直接皮下局部注射质量浓度为50ng/ml，每只大鼠注射总量为150ng，术后7天皮瓣存活率HGF组（81.45%±2.74%）高于生理盐水组的（42.82%±7.03%），减少皮瓣移植后远端的坏死；免疫组化染色计算毛细血管密度HGF组（39.67±4.83）高于生理盐水对照组（21.50±1.87），促进了皮瓣血管的生成。以上证据提示HGF可促使皮瓣血管内皮细胞再生、增生和新生血管的形成，减少皮瓣远端的坏死，提高皮瓣的成活率。其机制可能为HGF直接作用于血管内皮细胞，刺激血管内皮细胞移行、增生、生长、产生蛋白酶、促进组织侵袭和机化，内皮细胞在细胞外基质间隙扩散,伸出胞浆芽并延长,使毛细血管样的导管形成，具体的机制有待于进一步的研究。
3.4 本实验结果显示：HGF通过促进皮瓣内血管再生、新生血管形成，提高皮瓣的成存活率，具有一定的应用前景。但该研究还处在初始阶段，取得的资料及经验还不多，如HGF的剂量、效应时间、在体内易被蛋白酶分解、半衰期短、局部一次使用生物学效应不能充分发挥和远期安全性、分化的机制及新生血管的稳定性缺乏足够的认识，许多实际问题有待进一步研究。
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人生就像一场戏范文2
人的一生就像一场戏，你的一生掌握在你的手上，不管人生的命运是怎样的，都是你自己在掌控你的一生。
人生就像小学生在课堂上举手发言一样，不论是有没有都要去争取，才会有结果。
你是生活上的主角，命运由你来控制的，小主角，你是怎样掌控你的人生的，不如，给我们讲讲吧。
知行小学六年级：王思怡
人生就像一场戏范文3
人生就像一场戏，
戏中的你我好比小丑，
伪装自己的心灵。
如果人生是尘埃，
那人生没有梦想，
自己也飘忽不定，
你也成为岁月的尘埃。
假如世界是由梦想组成的，
那你的梦想又会是什么，
梦想就像天空的繁星点点，
闪烁着自己的青想，
成长中的你我他谁会一样，
不一样的梦想无需掩饰，
让自己的内心发挥出光芒，
让世界见证自己的奇迹。
沉迷在自己的情感中，
无需再为这种而苦恼，
只是你没有看到自己的内心，
解开心房展现自我，
让自己的心灵飞跃，
人生就像一场戏范文4
——题记
有一种生活在冰雪中的花
人们叫她雪莲花
清纯的花瓣
书写着纯洁
冰冷的环境
诠释着她
坚强不屈的品格
她就像一朵雪莲花，清纯而高雅。虽然幼小的身心饱受命运的折磨，却懂得在苍天对自己的考验中不断完善自己，能够在痛苦中成长。
可怜她，一次次的被命运捉弄；
可怜她，小小年纪，就挑起了沉重的担子；
更可怜的是，14岁，她失去了她亲爱的父亲！
她伤心过、痛苦过、失落过。上天跟她开了一个玩笑——一个并不好笑的玩笑。整整两天，她没有来学校，我打电话给她时，她的声音是沙哑的，大概是哭的。
难得她，没有在命运面前屈服；
难得她，没有被肩上的担子压倒；
更难得的是，在失去慈父的痛苦中，她以坚强的意志站了起来！
是的，她难过，但她并没有放弃自己。她仍旧开朗，仍旧活泼，她爽朗的笑声仍旧萦绕在同学们的耳际。可是，从那笑声中，我分明听到了辛酸，从她稚气的眼睛中，我分明看到了成熟。我明白，她的心好苦，但是她不想让同学们觉得自己很可怜，她不想在同学们面前掉眼泪。她长大了，稚气未脱的身躯中有一颗已长大的心，所以，她懂得了忍，她懂得了隐藏自己的痛苦，只是一个人默默地承受......
其实，人生就好像一场戏，而每一场戏都在演绎着一种人生。生命是如此的复杂，让人捉摸不透，却又是如此的美丽。现在的她，就像一朵正在绽放的雪莲花，坚强、纯洁，用微笑去迎接她花样的年华。
有一种信念
叫做坚强
无论是在平原
还是高山
都激励着人
勇往直前；
有一种感情
叫做感动
无论是在天堂
还是人间
都诉说着
人性的伟大；
无论是在海角
还是天涯
我都将祝福她
人生就像一场戏范文5
那是一场悲哀，没有后来，没有结果。
枫叶零落，再美再红再繁茂，也终推不过点缀大地的义务；也终要和枝干分开。“落红不是无情物，化作春泥更护花”。失去了意味着得到吗？谁能告诉我，失去了友情又得到了什么？失去了信任又得到了什么？逢场作戏，人生便是这么悲哀。流逝的时光，不能再重新开头；失去的真情，不能再重新开头。那注定是一场悲哀，友情的欺骗，我无可奈何。笑看世间，坎坎坷坷，浮现的只有无奈，嘲弄。
时间可以改变一切。
四季交替，时间在变化，景色在变化，友情的质量也在发生改变。朋友间的密度发生改变，体积不变，质量自然保不住。时间冲淡了一切，过去的过去，曾经的曾经，只有埋藏在心底慢慢回忆。
时间改变了一个人，它快的让人头昏眼眩，变得让人目瞪口呆，笑得让人心烦意乱。无奈啊无奈，谁也无法阻止时间。人生又何尝不是无奈二字！
转眼间，时间变了，生活变了。由每日的幸福生活变成了厌倦。每日漫无目的的等待、等待。心里空荡荡的，恨时间，时间觉得委屈；恨友情，心里隐隐有些不忍。
人生就像一场戏范文6
初三下学期就这样平淡地结束，这意味着我们要永远告别陪伴我三年的学校，告别三年来朝夕相处的同学。而迎接我们的是一个未知的世界。
在以前总是听父母说珍惜美好青春，时间不等人之类的话，心里总是不以为然，。到了现在，我才深深的体会到时光如水的含义。夜里无人，四周一片寂静，学校的一幕幕经常会浮现在我的的眼前。锦州军训、五里河运动会、沃尔玛岗位体验、参观海城少管所……这一切还向刚刚发生过那样清晰。但是已经离我们很遥远了。过去的用换不回再回来，正如张老师说的一样，不会有人两次同时踏入同一条河里。能留给我们的也仅仅是回忆。每当回忆起那些和我一起哭、一起笑过的同学，那一件件学校中发生的小事，再想到这些永远也不会再回来，不禁让我为之落泪。
人生就像一场游戏。游戏又何尝不能组成一个人生。游戏，走出了一个童年；游戏，走出了一个未知；游戏，迎来了一个青春；游戏，迎来了一个深邃。游戏中，我们渐渐长大从“少年不知愁滋味，为赋新词强说愁”到“而今识尽愁滋味，欲说还休，欲说还休”；从“少年不识何游戏”为寻快乐就游戏”到“难寻快乐味，为了游戏而游戏”人生就是一个偌大的游戏场？是人在游戏，还是游戏在游戏人？我们将要踏上新的征途。我们要突围，成为游戏的主宰。
高中生或即将开始，对将要来到的高中，我常常有一种恐惧，不只是拒绝自己成长，还是对未知事物的一种担心。
