前言：中文期刊网精心挑选了凝胶渗透色谱范文供你参考和学习，希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感，欢迎阅读。
凝胶渗透色谱范文1
概 述
凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography，简称GPC）技术是一种相对分子质量及其分布的快速测定方法，其分离原理基于体积排阻，按照化合物的分子量不同从大到小顺序出峰。GPC应用范围逐步从生物化学、高分子化学、无机化学向其他领域渗透，目前已成为国际公认的农残分析中有效的净化手段，被列入多项标准中，如《AOAC Method No.984.21 动物脂肪中的有机氯农药残留检测》、《EN 12393食品中农药多残留检测 气相色谱法》、《GB/T 19650-2006 动物肌肉中478种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》等。GPC技术对于含大分子油脂、色素的样品净化十分有效，并且易于实现自动化操作，可大大缩短样品前处理操作时间和减轻繁杂的手工劳动[1]。
目前，GPC净化技术在有机磷、有机氯、拟除虫菊酯以及农药多残留分析中的应用十分广泛[2～8]，商品化全自动GPC净化仪器也已经得到发展，但是在实际应用中往往受到限制，除仪器设备成本之外，溶剂用量大是GPC应用的最大问题[9]。在常规GPC净化方法中，为获得足够灵敏度，往往采用较大规格净化柱（柱直径一般在2.5cm左右），以承受更大的进样量（一般为5mL）。获得洗脱液之后，再经过浓缩步骤，才得到待测样品溶液。虽然增大进样量有助于提高检测方法灵敏度，但洗脱溶剂量消耗也大大增加。一般来说单个样品处理时间约为40min（其中净化收集时间约为18～20min），按流速5mL/min计算，需消耗200mL洗脱溶剂。本文针对以上实际问题，采用小型化净化柱，优化洗脱条件，建立一套更为经济合理、环保的净化方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
JMS-Q1000GC气质联用仪，配有电子轰击源（EI）（日本电子株式会社）； FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；T25分散机（德国IKA）；TGL-16-A离心机（上海安亭科学仪器有限公司）；MTN-2800D氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；GPC样品前处理设备（自制）。
乙腈：色谱纯；环己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；无水硫酸钠：分析纯；氯化钠：分析纯；农药标准品：敌敌畏、β-六六六、毒死蜱、丙草胺、溴氰菊酯、环氧七氯（J&K Scientific Ltd.）。
1.2 样品提取
称取20g试样（精确至0.01g），放于烧杯中，加入40mL乙腈-乙酸乙酯（1：1）混合溶液，用均质器在15000r/min均质提取1min；加入5g氯化钠和5g无水硫酸钠，再均质提取1min；将提取液转移至离心管中，放入离心机，6000r/min离心5min；取上清液20mL，氮吹浓缩至5mL，待净化。
1.3 GPC净化条件
净化柱：Shodex CLNpak EV-200（2.0mm×150mm）；检测波长：254nm；流动相：环己烷-乙酸乙酯（1：1）；流速：0.1mL/min；进样量：20μL；开始收集时间：2.9min；结束收集时间：4.9min。得到样品体积200μL，加入5μL环氧七氯内标液（300μg/mL），作为待测样品溶液。采用GC-MS进行后续分析检测。
2 结果与讨论
2.1 测试样品选择
由于GPC净化是基于体积排阻原理，因此在测试净化效果时，选取分子量差异较大的农药品种，包括敌敌畏（分子量220.98）、溴氰菊酯（分子量505.24）。为验证该方法对不同类型农药残留的净化效果，选取测试样品：有机氯类农药（β-六六六）、有机磷类农药（敌敌畏、毒死蜱）、拟除虫菊酯类农药（溴氰菊酯）、除草剂（丙草胺），涵盖GC-MS能检测的绝大部分农药类型。
2.2 提取溶剂优化
在多农残检测中，最常用的溶剂是乙腈；GPC净化所使用的溶剂通常为环己烷-丙酮或环己烷-乙酸乙酯，两者极性差异大。为此，对提取溶剂进行优化。比较乙腈和乙腈-乙酸乙酯（1：1）提取效果，对于选取的5种农残，两者没有显著差异（见表1），乙腈-乙酸乙酯（1：1）提取回收率稍微高于乙腈提取回收率。考虑到后续净化GPC所用溶剂的兼容性，选用乙腈-乙酸乙酯（1：1）作为样品提取溶剂。
2.3 净化柱选择和条件优化
常规使用净化柱内径为2.5cm，流速5mL/min，收集时间22～40min，每个样品消耗溶剂至少200mL，处理1个样品的时间在40min以上，不仅耗时，且溶剂消耗量大，还需要进行后续浓缩处理。而GPC净化柱规格为2.0mm× 150mm，可在流速0.07～0.1mL/min下使用，收集时间为2～8min，净化每个样品所需时间在10min以内。除提高工作效率、缩短净化时间以外，还可达到节省溶剂、环保的效果（见表2），检测限也能满足目前国家标准[10]，可用于日常检测。
GPC净化常用流动相为环己烷-乙酸乙酯和环己烷-丙酮，对这2种混合溶剂的净化效果进样考察，均获得较好效果。考虑到与提取溶剂的兼容性，选择环己烷-乙酸乙酯作为净化流动相。流动相比例对杂质和目标物的分离有一定影响，提高乙酸乙酯比例可缩短目标物出峰时间，减小收集馏分体积，有利于达到较低的检出限。所以选择环己烷-乙酸乙酯（1：1）作为流动相，得到的样品溶液经GC-MS分析。净化前后的效果（见图1）。
2.4 方法重现性及加标回收率
在已知含量的样品中添加一定量标准品，按上述前处理方法制备，平行制备3份，GC-MS分析，计算加标回收率和相对标准偏差（见表3）。
2.5 检测限
按2倍信噪比计算最低检测限，以苹果样品为例，检测限分别为：β-六六六0.0105mg/kg，敌敌畏0.0042
mg/kg，毒死蜱0.0062mg/kg，溴氰菊酯0.0367mg/kg，丙草胺0.0113mg/kg。
2.6 实际样品测定
从市场上购买菠菜和胡萝卜，采用本方法进行分析检测，含量测定及加标回收率的结果（见表4）。
3 结论
本方法采用自制GPC净化设备，净化处理单个样品时间在10min以内，溶剂用量不到常规GPC消耗量的10%，样品处理效率提高2～4倍，解决常规GPC净化应用中溶剂消耗量大的实际问题，可达到更为环保的效果。自制GPC净化设备运用于农残检测前处理中，并对其在农残检测中实际应用的效果进行考察，效果令人满意。
参考文献
[1] 易军， 李云春， 弓振斌. 食品中农药残留分析的样品前处理技术进展[J]. 化学进展， 2002， 14（6）：415-424.
[2] 潘灿平， 王丽敏， 孔祥雨， 等. 凝胶色谱净化-毛细管气相色谱法测定黄瓜、番茄和青椒中15种有机磷农药[J]. 色谱， 2002， 20（6）：565-568.
[3] 张伟国， 高金山， 陈姗姗， 等. 凝胶渗透色谱-气相色谱-质谱测定玉米中3种农药的残留[J]. 分析化学， 2005， 33（10）：1442-1444.
[4] 吴刚， 鲍晓霞， 王华雄， 等. 加速溶剂萃取-凝胶绳头色谱净化-气相色谱快速分析动物源性食品中残留的多种有机磷农药[J]. 色谱， 2008， 26（5）：577-582.
[5] 于胜良， 杨桂朋， 付萌. 凝胶渗透色谱净化-气相色谱/串联质谱分析蘑菇中的36种农药残留[J]. 色谱， 2007， 25（4）：581-585.
[6] 方敦煌， 师君丽， 宋春满. 凝胶渗透色谱净化烟叶有机磷、拟除虫菊酯类农药残留的研究[J]. 中国农学通报， 2011， 27（5）：269-273.
[7] 祁彦， 占春瑞， 张新忠， 等. 高效液相色谱法测定大豆中13种三嗪类除草剂多残留量[J]. 分析化学， 2006， 34（6）： 787-790.
[8] J. Engebreston， G. Hall， M. Hengel， et al. Analysis of pendimethalin residues in fruit， nuts， vegetables， grass， and mint by gas chromatography[J]. Agric. Food Chem. 2001， 49：2198-2206.
凝胶渗透色谱范文2
【关键词】红外光谱；凝胶色谱；聚羧酸减水剂
The application of micro equipments in analysing polycarboxylate high preformace water reducer
Wang Lei,Chi Pei-yun,Yang Pei-dong,Niu chang-hui
(School of Architecture and Civil Engineering, Qingdao Technological UnivercityQingdaoShandong266033)
【Abstract】High performance water reducing agent especially polycarboxylate water reducer has increasingly been come under recognition because of its remarkable water-reducing ability and slump retention ect. And micro test methords lay an important foundation and server a supporting power for exploring new kinds of polycarboxylate water reducer. In this paper, detailed discription has been made about the priciple of infrared spectorscopy technology and its application in detecting functional groups of polycarboxylic acid, and priciple of Gel permeation Chormtography techonlogy and its using in calculating molecular weight and molecular weight distribution of polycarboxylate water reducer is also been systematically introduced.
【Key words】 Infrared spectorscopy;Gel permeation Chromtography technology;Polycarboxylate water reducer
1. 红外光谱分析（infrared spectrum analysis）
1.1红外光谱分析原理
当PC样品受到频率连续变化的红外光照射时，分子会吸收与其振动频率一样的红外光波使其从振动――转动能级的基态跃迁到激发态，相应与这些区域的投射光波强度就会降低，记录百分透过率他T%对波数或波长的曲线即可得到PC样品的红外光谱。由于聚合物中的官能团的红外光谱特征吸收峰总是在一定范围之内变动，因此通过分析PC样品的红外光谱即可得出该聚合物所含有的官能团。下表1为PC减水剂中常见官能团的特征吸收峰。
1.2实验及分析。
1.2.1实验仪器和样品制备。
（1）实验仪器。
傅里叶交换红外光谱仪，德国bruker公司，分辨率优于0.09cm-1，光谱范围12500～50cm-1。
（2）试样制备。
采用薄膜法制样，样品先经过异丙醇和丙酮的分离，然后将PC溶液倒入到低沸点（5～8倍）溶剂中反复沉淀，在60℃浓缩一定时间后再真空抽滤，除去水分然后涂抹在NaCl盐片上成膜。
1.2.2图谱分析。
下图1为两种聚羧酸减水剂MPC-1和MPC-2的红外图谱，通过分析红外光谱结合减水剂中各基团特征峰的位置，可以看到MPC-1和MPC-2有相似的结构 3300，2850，1725，1575，1460，1350，1280，1107，951，845，622及523cm-1等波数附近都有 吸收峰，可见这两种减水剂分子结构上具有磺酸基，羧基，聚氧化乙烯基，酯基和羟基等基团。由于MPC-1比MPC-2具有更长的聚氧化乙烯基长链，因此其在 1120～1110 cm-1之间有更宽阔的吸收峰，随着环氧乙烷加成数增加，在1105 cm-1的吸收带也随之增强，O-H基团的伸缩振动在3300～2500 cm-1范围处出现，酯基的吸收峰出现在了1725 cm-1处，羧酸衍生物的水解羧基C=O对称伸缩振动吸收峰在1563 cm-1和1430 cm-1处生成，硫酸酯吸收峰可以在1230 cm-1处找到，而磺酸基S-O伸缩振动的吸收峰出现在1220 cm-1，1105 cm-1和1045 cm-1处出现。
图1聚羧酸减水剂MPC-1和MPC-2的红外光谱
2. 凝胶渗透色谱分析
聚合物分子量具有多分散性，不同的聚合方法、聚合工艺会使聚合物具有不同的分子量和分子量分布。分子量和分子量分布对PC减水剂的性能有十分密切的关系，因此测定其分子量和分子量分布就显得尤为重要。通过人们不断探索，改进和创新测定分子量和分子量分布的方法，凝胶色谱法在60年代末应运而生并成为现今最有效的分子量和分子量分布的测试方法。
2.1凝胶渗透色谱原理。
凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography，简称GPC）是对同一聚合物种不同分子量的高分子组份进行分离。当样品中不同分子量的各组份的分子量和含量被确定后，就可得到聚合物的分子量分布，然后可以很方便地对分子量进行统计，得到各种平均值。一般认为，GPC是根据溶质体积的大小，在色谱中由于体积排除效应即渗透能力的差异进行分离。高分子在溶液中的体积决定于分子量、高分子链的柔顺性、支化、溶剂和温度，当高分子链的结构、溶剂和温度确定后，高分子的体积主要依赖于分子量。
凝胶渗透色谱的固定相是多孔性微球，可由交联度很高的聚苯乙烯、聚丙烯酸酰胺、葡萄糖和琼脂糖的凝胶以及多孔硅胶、多孔玻璃等来制备。色谱的淋洗液是聚合物的溶剂。当聚合物溶液进入色谱后，溶质高分子向固定相的微孔中渗透。由于微孔尺寸与高分子的体积相当，高分子的渗透几率取决于高分子的体积，体积越小渗透几率越大，随着淋洗液流动，它在色谱中走过的路程就越长，用色谱术语就是淋洗体积或保留体积增大。反之，高分子体积增大，淋洗体积减小，因而达到依高分子体积进行分离的目的。
图2是GPC的构造示意图，淋洗液通过输液泵成为流速恒定的流动相，进入紧密装填多孔性微球的色谱柱，中间经过一个可将样品送往体系的进样装置。聚合物样品进样后，淋洗液带动溶液样品进入色谱柱并开始分离，随着淋洗液的不断洗提，被分离的高分子组份陆续从色谱柱中淋出。浓度检测器不断检测淋洗液中高分子组份的浓度响应，数据被记录最后得到一张完整的GPC/SEC 淋洗曲线。
图2GPC的构造
淋洗曲线表示GPC对聚合物样品依高分子体积进行分离的结果，并不是分子
量分布曲线。实验证明淋洗体积和聚合物分子量有如下关系：
lnM = A -BVe （1）
式中M为高分子组分的分子量，A、B与高分子链结构、支化以及溶剂温度等影响高分子在溶液中的体积的因素有关，也与色谱的固定相、体积和操作条件等仪器因素有关，因此（1）式称为GPC的标定关系。（1）式的适用性还限制在色谱固定相渗透极限以内，也就是说分子量过高或太低都会使标定关系偏离线性。一般需要用一组已知分子量的窄分布的聚合物标准样品（标样）对仪器进行标定，得到在指定实验条件，适用于结构和标样相同的聚合物的标定关系。
2.2用凝胶渗透色谱法计算聚羧酸高效减水剂的分子量。
2.2.1实验方法。
2.2.1.1所用仪器和试剂。
组合式GPC/SEC 仪（美国Waters 公司），电子天平，13mm 微孔过滤器；配样瓶，注射针筒等。
四氢呋喃（AR）（淋洗液）；聚羧酸减水剂（被测样品）；窄分子量分布的聚羧酸减水剂（标准样品）；
2.2.1.2标定标准样品的GPC，求得A、B的值。
选取5个不同分子量的单分散标样，按分子量顺序1、2、3、4、5，分别称取标样2mg，混在一个配样瓶中，用针筒注入约2ml 溶剂，溶解后，用装有0.45 微米孔径的微孔滤膜的过滤器过滤。在配样瓶中称取约 4mg 被测样品，注入约2ml 溶剂，溶解后过滤。
待仪器基线稳定后，用进样针筒将混合标样进样，进样量为 100 微升，等待色谱淋洗，最后得到完整的淋洗曲线。作logM- Ve 图，得GPC/SEC 的标定关系，得A，B值。
2.2.1.3计算样品的Mn和Mw。
GPC的数据处理，一般采用“切割法”。在谱图中确定基线后，基线和淋洗曲线所包围的面积是被分离后的整个聚合物，以横坐标对这块面积等距离切割。切割的含义是把聚合物样品看成由若干个具有不同淋洗体积的高分子组份所组成，每个切割块的归一化面积（面积分数）是高分子组份的含量，切割块的淋洗体积通过标定关系可确定组份的分子量，所有切割块的归一化面积和相应的分子量列表或作图，得到完整的聚合物样品的分子量分布结果。因为切割是等距离的，所以用切割块的归一化高度就可以表示组份的含量。切割密度会影响结果的精度，当然越高越好，但是一般认为，一个聚合物样品切割成20 块以上，对分子量分布描述的误差已经小于GPC/SEC 方法本身的误差。当用计算机记录、处理数据时，可设定切割成近百块。用分子量分布数据，很容易计算各种平均分子量。
式（2）、（3）、（4）分别是多分散高分子的数均分子量，重均分子量和其多分散系数。
3. 结论
红外光谱用于分析聚羧酸高效减水剂的官能团种类的作用是巨大而显著的，凝胶渗透色谱技术为计算聚羧酸减水剂的分子量和分子量分布提高了精确的结果。这两种现代化微观分析设备的使用大大提高了新型聚羧酸减水剂的研发力度，极大的提高了新型减水剂的研制速度。
参考文献
［1］何曼君等. 高分子物理. 复旦大学出版社.
He Manjun ect. Polymer physics. Shanghai, Fudan University Press.
［2］殷敬华等. 现代高分子物理学. 科学出版社.
Yin Jinghua ect. Modern polymer physics. Science Publishing House
［3］J.F.RABEK著，吴世康译. 高分子科学实验方法―物理原理与应用. 科学出版社.
J.F.RABEK. Wu Shikang. Experimental methods in Polymer Science. Science Publishing House.
［4］张兴英等. 高分子科学实验. 化学工业出版社.
Zhang Xingying ect. Experiments of Polymer Science. Chemical Industry Publishing House.
［5］polymer. 2003. 44(23):7209～7220.
［6］J.CHROMATOGR. A. 1997. 782: 105～122.
［7］J.CHROMATOGR. A. 2001. 905: 223～232.
凝胶渗透色谱范文3
【摘要】 目的：建立多花黄精多糖的分子量与分子量分布分析方法。方法：应用高效凝胶渗透色谱法，色谱柱为Shodex OHPak SB803HQ（8 mm×300 mm），流动相为0.71%硫酸钠溶液（内含0.02%叠氮钠），柱温：35 ℃，示差折光检测器（检测器温度35 ℃），流速0.5 ml·min-1。结果：根据建立的方法测定，得到多糖的高效凝胶色谱图，计算出多花黄精多糖的重均分子量及其分布。结论：所用方法简便、快速、准确，可用于多花黄精多糖的质量控制。
【关键词】 高效凝胶色谱法； 多花黄精多糖； 分子量及其分布
多花黄精多糖是从传统中药百合科植物多花黄精中发现并分离出一种低分子量活性多糖，为新药(中药)原二类，全国第一个治疗病毒性角膜炎的中药。多花黄精多糖抗单纯疱疹病毒I型的体外细胞培养试验结果结果表明，多花黄精多糖有明显的抗单纯疱疹病毒I型的作用。多糖为单糖的天然聚合物，多糖的性质和药理作用与其分子量大小，分子量分布及其结构密切相关。多糖的分子量不是均一的，具多分散性，需要用统计方法表征其平均分子量及其分子量分布。高效凝胶色谱法测定多糖的分子量及其分布，具有快速，重现性好等优点，在国内外得到了广泛的应用[1]。多花黄精多糖为水溶性多糖，针对其单糖组成和空间结构与葡聚糖相似，在色谱柱的选择上倾向于更适合于水溶性多糖分离测定用的Shodex OHPak SB803HQ系列（对葡聚糖的排阻极限为1×105）。有关多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布尚未见相关报道，本文应用凝胶渗透色谱（GPC）法测定多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布[2]，为考察生产工艺的稳定一致性及控制产品质量提供了科学依据，为多花黄精多糖分子大小和药理作用的相关性研究打下了一定基础。
1实验部分
1.1仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪（自动进样器），示差折光检测器。Shodex OHPak SB803HQ凝胶色谱柱。北京龙智达公司提供GPC专用软件。
供分子量测定用右旋糖酐分子量标准对照品（中国药品生物制品检定所提供，D0、D1、D2、D3、D5、D6、D8、D2000分子量依次为180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000）；其余试剂均为分析纯；高纯水用MilliporeQ超纯水系统制得。
试验用样品多花黄精多糖由四川泰华堂制药有限公司提供。
1.2方法与结果
1.2.1色谱条件色谱柱为Shodex OHPak SB803HQ，流动相为0.71%硫酸钠溶液（内含0.02%叠氮钠），柱温：35 ℃，示差折光检测器（检测器温度35 ℃），流速0.5 ml·min－1，取供试品溶液及对照品溶液各20μl注入液相色谱仪。
1.2.2溶液的制备取多花黄精多糖适量，加流动相制成每1 ml中约含10 mg的溶液，振摇，室温放置过夜，作为供试品溶液。另取D0，D2000及4～6个已知分子量的葡聚糖对照品，同法制成每1ml中各含10 mg的溶液作为对照品溶液。
1.2.2.5系统适应性试验取葡萄糖对照品溶液（D0），按1.2.1的色谱条件进样，纪录色谱图，按葡萄糖峰计算理论塔板数n=5.54×tRW1/2=16083；另取D2000对照品溶液，1.2.1的色谱条件进样，纪录色谱图，计算分配系数，kd=tRt0tTt0=0.52，Kd在0～1之间，符合中国药典2005年版的要求。式中tR为供试品峰保留时间，t0为蓝色葡聚糖（D2000）峰保留时间，tT为葡萄糖（D0）峰保留时间。
1.2.3标准曲线的制备及样品测定
取上述右旋糖酐系列对照品溶液分别进样，记录洗脱峰的保留时间，由GPC专用软件绘制标准曲线，以标准分子量的对数值为纵坐标，以相应色谱峰的保留时间为横坐标进行线性回归，得回归方程。该方法的标准校正曲线线性良好，相关系数达0.9997。根据GPC专用软件绘制的标准曲线及供试品的保留时间采用GPC专用软件计算样品各组分的重均分子量及其分子量分布。 表1 右旋糖酐分子量标准对照品保留时间及其相应的对数值
1.2.4 精密度试验取供试品溶液20 μl，按“1.2.1”项下色谱条件，连续测定5次，根据GPC曲线计算重均分子量（Mw）分别为5018，5009，5009，5028，5017，RSD为0.16%，表明该系统测定样品分子量的精密度良好。
1.2.5重复性试验取批号为060701的样品，按“1.2.2”项下方法分别制备供试品溶液5份，按“1.2.1”项下色谱条件测定分子量及其分子量分布，根据GPC曲线计算重均分子量（Mw）分别为5020，5028，5044，5054，5053，RSD为0.30%。表明该分析方法测定样品分子量精密度良好。
1.2.6稳定性试验取同一供试品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件，在0h、2h、4h、8h、12h和24h分别进样，测定分子量及分子量分布，根据GPC曲线计算重均分子量（Mw）分别为5055，5090，5100，5126，5160、5046，RSD为0.84%。表明供试品溶液在24小时内稳定。
1.2.7样品的测定取不同批号的多花黄精多糖样品，按“1.2.2”项下的方法制备供试品溶液，然后按“1.2.1”项下的色谱条件测定分子量及分子量分布，结果见表2。表2 3 批样品重均分子量及其分布情况表
2讨论
根据以上测定结果可见，测定的三批多花黄精多糖的重均分子量分布在2500～7500之间，分布宽度小于2.0。用本方法测定多花黄精多糖的分子量与分子量分布，准确可行，简便快捷，精密度好。
分布宽度的引入，使多花黄精多糖的分子量分布更具可控性，能够通过检测该指标反映生产该样品的工艺的变化以及样品质量的变化，使得样品的质量更具有可控性。
参考文献
凝胶渗透色谱范文4
关键词：凝胶渗透色谱（GPC）；PL-GPC50；PUMP；双检测器；autosampler
中图分类号：TH17
文献标识码：A
文章编号：1009-2374（2012）23-0080-04
独山子石化公司乙烯厂新区化验室现有英国PL公司产PL-GPC50常温凝胶色谱仪5台，主要用于18万吨/年SSBR/SBS橡胶装置的胶液分子量及其分布分析，另外亦用于13万吨/年PS装置抗冲级聚苯乙烯（HIPS）及通用级聚苯乙烯（GPPS）粒料分子量分析。通过凝胶渗透色谱（GPC），能够给出可靠的工艺调整参考数据，因此PL-GPC50常温凝胶色谱仪的正常运行直接关系到以上两套装置的平稳生产。笔者通过安装、调试、维修PL-GPC50常温凝胶色谱仪的工作实践，总结出了一些实践经验，希望能给此仪器的使用者和维护者起到一定的指导作用。
1 仪器简介及操作和注意事项
1.1 仪器结构
此仪器由溶剂贮器、在线过滤脱气装置、Data stream数模转换器、高压输液泵、自动进样装置、色谱柱系统、RI和UV双检测器、自动记录及数据处理系统几大部分构成。
图1 原则流程图
1.2 基本操作及注意事项
1.2.1 溶剂准备。将过滤、超声脱气后的新鲜THF溶剂加入试剂瓶，同时在每4升溶剂瓶中加入1克的抗氧剂（常用的抗氧化剂为BHT），以防THF在使用过程中氧化。
1.2.2 仪器开机。开机前检查泵头处的“Purge”阀的旋钮是否处于正常流路（旋紧为正常流路），并检查自动进样器的各条连线是否理顺；打开主机和Data stream后面板的电源开关，仪器各部分进行自检，等待完成后打开计算机运行 PL Instrument Control软件，进行仪器和计算机之间的通讯，使GPC50进入计算机软件控制状态。此时溶剂输送泵处于停止状态，状态显示为红色的叉号，其余为绿色的圆圈。
1.2.3 泵条件化和排气。若机器初次使用或长期停用或更换溶剂时需做排气操作，点击软件界面左侧PUMP处，可在右侧见泵操作界面，设定流速为工作流速（常规流速为1mL/min），设定工作压力范围0～20MPa（Min Pressure和Max Pressure）和流速改变梯度（Flow Ramp），点击Update，参数即发送至仪器并开始执行。泵的流量允许范围为0～10mL/min，正常工作和进样时的流速必须为1mL/min，闲置时的流速可以是0.1mL/min，只有当“Purge”旋钮松开时才能使用大于1mL/min的流速；流速的改变不能太快，必须逐步地升高或降低，如从1mL/min降到闲置时的0.1mL/min时应按照每次0.2mL/min的频率逐步降低；当泵压力异常时应及时检查“Purge”阀的状态且用滤纸对柱接头处检漏。排气操作时，可打开“Purge”阀，观察气泡从溶剂废液管中的流出情况（此时泵压力为零）。在确认泵流出溶剂已无气泡的条件下，并闭泵“Purge”阀。
1.2.4 柱温箱条件化。点击软件界面左侧oven处，在右侧界面设定柱箱温度（oven temperature），并点击Update发送至仪器。在仪器到达设定参数前，oven处绿色圆圈处于闪动状态；当仪器达到设定参数并稳定后，则绿色圆圈会稳定点亮。柱箱的温度在分析过程中必须恒温40℃。
1.2.5 RI和UV检测器条件化。在仪器升温和平衡过程中，可以随时对RI和UV检测器操作。如检测器基线不稳，可点击左侧Purge处显示操作界面对检测器进行操作。点击Start Purge可对参比池进行冲洗；点击Auto Zero进行自动调零。（RI参比池Purge后应该给予充分的稳定时间，通常2小时以上，基线平稳后方可，基线可通过Data stream monitor查看）。允许通过RI检测器池体的最大允许流量为5mL/min，因此即使“Purge”阀处于打开态时，冲洗RI检测器参比池的流速亦不应超过5mL/min，因为RI检测器的池体仅8微升，所以每次大流量冲洗时间均无需太长，一般设定60秒即可。进样前最好将UV和RI检测器全部调零。
1.2.6 样品制备。根据MMPP1方法要求将大约50mL的聚合溶液加入大约200mL乙醇中，在一个500mL的玻璃烧杯内搅拌，用力挤压凝聚物使部分干燥，然后在烘箱中烘干凝结物，直到完全脱除溶剂。在一个50mL容量瓶内，称出0.075±0.001g的聚合物，加入约30mL含内标溶液的THF溶解直至样品完全溶解。将样品经0.45mm的PTFE过滤器过滤后准备进样分析（过滤步骤绝不可省略，否则形成的凝胶会造成系统堵塞）。
1.2.7 数据分析。
（1）创建工作簿：运行GPC Online，选择
Create a New Workbook。以后可多次调用此Workbook。键入文件名并选择保存路径，同时可在Experiment Tile和Comment中作注释。完成后点击确定。在Conditions界面下，可填写所用溶剂、溶剂RI值、流速、温度、色谱柱信息以及检测器信息。Data Collection界面下，可设定自动进样器、定量环、进样方式、数据采集时间及采样速率，在Instruments下可添加设备信息。
凝胶渗透色谱范文5
【摘要】 目的评价消痛贴膏中润湿剂的透皮促透作用。方法选择消痛贴膏中主药独一味所含木犀草素为模型药物，采用离体扩散池法，以高效液相色谱测定接受液中木犀草素的含量。含量测定采用Platisil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，迪马公司)；乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）为流动相；检测波长为350 nm；流速1.0 ml·min-1。结果木犀草素进样量在0.040 88～2.044 μg范围内与峰面积线性关系良好，r＝0.999 8。与对照组渗透系数0.373 2相比，加润湿剂组渗透系数3.97，渗透系数增加10.63倍。结论该润湿剂能增加消痛贴膏中木犀草素的渗透速率和累积透过量。
【关键词】 消痛贴 润湿剂 促透 木犀草素
中药等传统医药中的外用制剂中的有效成分一部分在体表起消除皮肤炎症、杀菌等作用外，另一部分可以透过皮肤角质层进入皮下及肌肉组织局部，吸收进入体循环，产生全身或局部治疗。传统的中药透皮给药制剂有散剂、软膏剂、硬膏剂等。近年来，随着制药技术的进步和药用高分子药用材料的应用，诸如涂膜剂、巴布剂、凝胶剂等新剂型也多有应用。为了促进处方中有效成分的透皮吸收，通常会在制剂中加入一定的透皮吸收促进剂。透皮吸收促进剂的加入量、加入方式以及和基质的相容性成分为中药透皮给药制剂的处方设计和制备工艺的难点。经过检索，在我国批准上市中药品种中，消痛贴膏（国药准字：Z54020113）中促透剂的加入方法很有特点：将促透剂（润湿剂）与主药分开，使用时将药贴的塑料薄膜揭除，将小袋内的润湿剂均匀涂在中间药垫表面，敷于患处或穴位。本研究采用扩散池评价消痛贴膏中润湿剂的促透作用。
1 仪器与材料
HP8453E紫外可见光谱仪（Aglient公司）； Aglient 1100型高效液相色谱仪（Aglient公司）；Platisil C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱；RYJ－6A型药物透皮扩散实验仪（上海黄海药检仪器有限公司）。消痛贴膏（奇正藏药有限公司，批号070632）。木犀草素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111520-200504）。木犀草素单体（南京青泽医药科技开发有限公司，批号QZM07110， HPLC检测含量大于90%）。甲醇为色谱纯（Merck公司）；其他试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；双蒸水，自制。昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g（普通级，许可证号SCXK 2003-0003，上海斯莱克动物有限公司，饲养于上海中医药大学实验动物房二楼）。
2 方法与结果
2.1 木犀草素体外透皮实验分析方法的建立
2.1.1 HPLC测定色谱条件及系统适用性实验检测波长的选择： 参照《中国药典》［1］独一味含量测定项下方法，吸收波长选择为350 nm。
色谱条件：色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Platisil C18， 5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相，乙腈∶0.1％磷酸（35∶65）；检测波长350 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温30℃。理论塔板数按木犀草素计算应不低于3 000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。结果见图1～2。
图1 木犀草素对照品HPLC图（略）
图2 样品HPLC图（略）
2.1.2 木犀草素HPLC测定方法学考察供试品溶液的制备：将消痛贴膏药粉用10倍20%的乙醇提取3次，60 min/次，收集提取液，回收乙醇至干，得提取物。取消痛贴膏药粉提取物35 mg，加入10 mg木犀草素单体，实验组溶于2 ml的奇正润湿剂，稀释组溶于2 ml润湿剂稀释液（润湿剂∶水＝1∶1）中，对照组溶于2 ml 的蒸馏水中，超声30 min。
接受液比例：聚乙二醇400∶生理盐水 = 20∶ 80
木犀草素线性关系考察［2，3］：精密称取木犀草素对照品10.22 mg置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含木犀草素102.2 μg的对照品储备液；精密吸取该液0.2，0.5，1，2，4，5，10 ml置10 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含木犀草素2.044，5.11，10.22，20.44，40.88，51.1，102.2 μg的系列对照品溶液，分别精密吸取上述系列对照品溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，记录色谱图，测定结果见表1，并以对照品浓度X（μg/ml）为横坐标，峰面积值Y值（mAU）为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程：Y=86.275X，r=0.999 8。结果表明，木犀草素在0.040 88 ～2.044 μg范围内线性关系良好。
转贴于
表1 木犀草素线性关系考察（略）
精密度实验［4］：①日内精密度
配置低、中、高3个浓度的木犀草素对照品溶液，1 d内注入液相色谱仪测定3次，测定木犀草素峰面积积分值，求出相对标准偏差。结果见表2。②日间精密度：以上低、中、高3个浓度的木犀草素对照品溶液，测定1次/d，共测定5次。结果见表3。
表2 木犀草素日内精密度（略）
表3 木犀草素日间精密度（略）
稳定性实验：精密吸取浓度为5.11 μg/ml的对照品溶液20 μl，按上述色谱条件，分别于0，1，2，4，6，8，12，24 h进样，峰面积平均值为 438.9，RSD=1.15%。
回收率实验：精密吸取浓度为0.2 mg/ml的木犀草素对照品溶液5，1，0.5 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用空白的透皮接受液（比例为PEG400∶NS＝1∶5）定容至刻度，配制成高中低3个不同浓度的溶液。取20 μl进样，测得峰面积，进行方法回收率实验。结果见表4。
表4 木犀草素回收率实验（略）
2.2 润湿剂的透皮促透作用研究
2.2.1 皮肤的选择和处理取雄性小鼠，断颈处死，即刻用电动剃毛刀剔出腹部鼠毛，取下皮肤，将取下的皮肤平铺于干净的玻璃板上，角质层朝下，用镊子剔除皮下的脂肪组织及黏连物后，用生理盐水反复冲洗干净，密封冷冻于-10℃冰箱中保存，于1周内使用，每次实验前目视检查鼠皮的完整性，如有破损则不得使用。
2.2.2 实验分组加润湿剂组、加润湿剂1∶1稀释组、对照组（不加润湿剂）。
2.2.3 实验方法向体外透皮吸收仪中加入适量水，开启电源和恒温槽磁力搅拌，设定温度为（37±0.5）℃，将新鲜离体去毛小鼠的皮肤固定于改良Franz扩散池进行体外透皮吸收实验，真皮面向接受液。将供给药物放入供给池中，向接受池内注入5 ml接受液，放入透皮吸收仪中，设定接受池搅拌速度为400 r/min。15 min后开始计时，记为0 min，分别于1，2，3，4，6，8 h取样，每次取样的同时需向接受池中补充等量的接受液，样品通过0.45 μm 微孔过滤膜，测定。结果见表5。
表5 透皮吸收实验结果（略）
3 小结
透皮吸收促进剂的加入方式以及与基质的相容性是中药透皮给药制剂的处方设计和制备工艺的难点。将促透剂（润湿剂）与主药分开，使用时润湿剂加入的给药方式回避了透皮给药制剂处方设计和制备工艺的难点，同时，类似于利福平滴眼液，这种给药方式也避免了一些天然活性成分在溶液中稳定性差的不足。
本研究是为了评价润湿剂的促透作用，但由于消痛贴膏中的可测成分木犀草素含量较低（仅为0.084 %），研究中在消痛贴主药提取物中加入木犀草素单体作为模型药物，这样增加了透皮吸收的成分检测的可行性；同时，较单独用化学单体为模型药物，更好模拟了制剂中其他成分存在的情况下的透皮吸收行为。
研究表明消痛贴膏的润湿剂中含有樟脑、冰片等成分，正是由于这些成分的存在，使润湿剂具有了皮肤促进作用。实验结果表明与对照组渗透系数0.373 2相比，加润湿剂组渗透系数3.968 1，渗透系数增加10.63倍，说明润湿剂能增加消痛贴膏中木犀草素的渗透速率和累积透过量。同时实验中将润湿剂稀释1倍，结果稀释组比对照组渗透系数增加4.18倍，说明润湿剂的促透作用与樟脑、冰片等起促透作用的成分有一定的量-效关系。
研究中还以消痛贴膏主药等剂量制备成凝胶剂，同法测定，结果在接受液中很难检测到木犀草素。实验中还考察过氮酮及润湿剂在凝胶剂中的促透作用，仅加氮酮组6 h后能检测到目标峰，但峰面积很小，在标准曲线的检测下限附近。说明木犀草素可能被凝胶剂中的大分子基质包裹，不宜释放。提示外用透皮吸收制剂在进行剂型改革时，需要进行皮肤渗透实验的比较研究。对于需要透皮吸收的成分，凝胶剂可能不完全适用。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 人民卫生出版社， 2005: 184.
［2］ 刘兰生， 宋 阳， 扬 锡，等. 高效液相色谱法测定奇正消痛贴膏中木犀草素的含量［J］.中国药事， 2006， 20 (7): 418.
凝胶渗透色谱范文6
关键词：农药残留；检测；前处理技术
近年来，由于农业生产过程中忽视农药的正确、合理使用，农药污染问题经常发生，农药残留量超标现象相当严重，并呈现逐年加剧的趋势。为保障人民的身体健康、有效控制农药在农产品生产中的使用和对其残留量进行监控，大力开展农药残留检测技术特别是相关的前处理技术的研究是非常必要的。农药残留测定之前要有适合于各种样品的理化性质的萃取、净化、浓缩等前处理步骤，这些前处理过程往往对农药残留分析的准确性、精确程度有重要影响。由于农药残留检测技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂多变、样品物理形态范围广泛，对农药残留测定构成的干扰因素特别多，所以需要选择科学有效的处理方法。据统计表明[1]，大部分农药残留检测实验室中用于农药残留检测样品前处理过程的时间约占整个分析时间的2/3。为了提高分析测定效率，改善和优化农药残留检测样品制备的方法和技术是一个重要问题。在现代农药残留分析中，有些提取方法已经能够达到部分净化或完全净化的效果。因此，提取和净化方法的界限已十分模糊。这些新技术的共同特点是节省时间，减轻劳动强度，节省溶剂，减少样品用量，提高提取或净化效率以及自动化水平。目前，得到广泛应用的新技术主要有超临界流体提取、固相微萃取、微波辅助萃取技术、胶渗透色谱、基质固相分散萃取、固相萃取等。
1超临界流体萃取（supercritical fluid extraction，sfe）
超临界流体（supercritical fluid，scf）是指处于临界温度和临界压力的非凝缩性的高密度流体。这种流体介于气体和液体之间，兼具二者的优点。超临界流体萃取（sfe）是指利用处于超临界状态的流体为溶剂对样品中待测组分的萃取方法。lehotay等[2]首次报道了应用sfe技术检测蔬菜中五氯硝基苯残留，样品无需进一步净化即可通过气质联机（gc-ms）检测。随后lehotay等再次使用sfe，gc-ms检测了蔬菜、水果中46种农药残留，除甲胺磷和乙酰甲胺磷外，其他农药的回收率都在80%以上。为提高sfe的萃取效果，常在超临界流体co2中加入少量的极性溶剂。rhan通过在洋葱、胡萝卜前处理过程中加入甲醇，有效地提高了被检农药的回收率。刘瑜等[3]应用此技术对苹果中5种氨基甲酸酯农药进行检测，其结果支持了这一观点。sfe技术的优点是可进行选择性萃取，萃取物不会改变其原来的性质，萃取过程简单易于调节；缺点是萃取装置较昂贵，不适于分析水样和极性较强的物质[4]。
2固相微萃取（solid- phase microextraction，spme）
固相微萃取是 20世纪80年代末由加拿大waterloo大学pawliszyn和arhturhe教授提出的，它是在固相萃取技术基础上发展起来的一种兼样品制备的前处理技术。spme的原理是利用待测物在基体和萃取相之间的非均相平衡，使待测组分扩散吸附到石英纤维表面的固定相涂层，待吸附平衡后，再以气相色谱或高效液相色谱分离和测定待测组分。spme技术具有简便、快捷、无需萃取溶剂的特点，非常适用于挥发或半挥发农药残留分析。影响固相微萃取结果的因素包括萃取头类型、萃取时间、离子强度、解吸附温度和解吸附时间等。陈伟琪等[5]利用100 μm聚二甲基硅氧烷萃取头浸入匀浆液的萃取方式，由gc-fpd测定了茼蒿中的甲拌磷等 4种有机磷农药残留量，讨论了搅拌速度、离子强度、平衡时间等影响因素对测定结果的影响；lambropoulou等采用100 μm聚二甲基硅氧烷萃取头、顶空-固相微萃取（hs-spme）方式，用gc-ms方法测定了草莓和樱桃中的乙硫磷、对硫磷、倍硫磷等 7种有机磷农药残留量；sakamoto等发展了一种采用85 μm聚丙烯酸酯萃取头、顶空-固相微萃取测定水中的158种农药残留量的gc-ms方法，探讨了不同种类萃取头、盐浓度、ph值和萃取温度等参数的影响。固相微萃取的优点是操作简单快速，价廉实用，适用于现场检测；缺点是因固定相吸附容量有限，定量结果误差相对较大，主要用于定量测定。
3微波辅助萃取技术（microwave aided extraction，mae）
微波辅助萃取是1986年匈牙利学者ganzler等人通过利用微波能萃取土壤、食品、饲料等固体物中的有机物，提出一种新的少溶剂样品前处理方法
。微波辅助萃取技术是对样品进行微波加热，利用极性分子可迅速吸收微波能量的特性来加热一些具有极性的溶剂，达到萃取样品中含目标化合物，分离杂质的目的。akhtar等[6]先用mae法从精饲料中萃取出盐霉素，而后用hplc法测定其浓度。hummert等[7]用mae法萃取后用gc-ecd测定了海洋哺乳动物脂肪组织中的有机氯化合物，经该方法与索氏提取方法萃取的样品中类酯的含量相似。微波辅助萃取技术的优点是快速节能、节省溶剂、污染小；缺点是不易自动化，且一般仅用于有机氯类农药的提取。
4凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography，gpc）
凝胶渗透色谱技术是根据溶质（被分离物质）分子量的不同，通过具有分子筛性质的固定相（凝胶），使物质达到分离。凝胶渗透色谱法最初主要用来分离蛋白质，但随着适用于非水溶剂分离的凝胶类型的增加，凝胶渗透技术应用于农药残留量净化得以发展。balinova采用gpc提纯步骤，用hplc检测了5种gc无法检测的农药（杀虫隆、氟虫脲、四螨嗪、噻螨酮、除虫脲），方法灵敏度高，准确度及精密度好，数据线性范围宽（2~40 ng），能够很好地分离共萃取基质。该方法的操作难度相对较高，初学者不易掌握。
5基质固相分散萃取（matrixsolid-phase dispersion extr-action，mspd）
基质固相分散萃取由barker于1989年首次提出。这项技术的优点是不需要进行组织匀浆、沉淀、离心、ph调节和样品转移等操作。mspd的原理是将c18等固相萃取吸附剂与固体、半固体或黏性的样品一起研磨，得到半干状态的混合物并将其作为填料装柱，然后用不同的溶液淋洗柱子，将各种待测物洗脱下来。mspd多应用于从动物组织、蔬菜、水果中分离药品、除草剂、杀虫剂和其他污染物，barber s a和王运浩等认为影响mspd效果的因素包括吸附剂的粒径、键合相的性质、样品基质的性质以及基质的修饰、淋洗剂的性质以及加入的顺序等。kristenson等发展了一种简便快速的mspd/gc-ms方法测定水果中的氯菊酯和倍硫磷、马拉硫磷等10种有机磷农药残留量。选择c8作为吸附剂，每次分析仅需25 mg样品和100 μl溶剂；pico等利用c18做分散吸附剂、硅胶柱净化、gc-npd和gc-ecd测定的方法检测了水果和蔬菜中的克菌丹、灭菌丹等8种杀菌剂；morzycka建立了一种简便的多残留分析的mspd/gc-npd方法测定蜂蜜中的乙硫磷、毒死蜱等12种农药的残留量，采用florisil和硅胶作分散吸附剂，氧化铝和硅胶作为净化吸附剂，达到了较好的净化效果和良好的回收率。该方法仅适用于一类化合物的分离。
6固相萃取（solid phase extraction，spe）
固相萃取（spe）是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。与液/液萃取相比，固相萃取有很多优点：固相萃取不需要大量互不相溶的溶剂，处理过程中不会产生乳化现象；采用高效、高选择性的吸附剂（固定相），能显著减少溶剂的用量，简化样品的预处理过程，同时所需费用也有所减少。一般来说，固相萃取所需时间为液/液萃取的1/2，而费用为液/液萃取的1/5。固相萃取实质上是一种液相色谱分离，其主要分离模式也与液相色谱相同，可分为正相（吸附剂极性大于洗脱液极性）、反相（吸附剂极性小于洗脱液极性），离子交换和吸附。目前，用于hplc的填料几乎均可用于spe。但spe柱的填料粒径大于hplc填料，spe柱效会远低于hplc色谱柱。因此，该方法适于分离保留性质差别很大的化合物，主要用于处理样品。
固相萃取主要用于复杂样品中微量或痕量目标化合物的分离和富集。例如生物体（如血液、尿等）中药物及其代谢产物的分析、食品中有效成分或有害成分的分析、环保水样中各种污染物（可挥发性有机物和半挥发性有机物）的分析等，都可以使用固相萃取将目标化合物分离出来，并加以富集。
该文将近年来发展迅速的固相萃取前处理技术与先进的气质联用检测技术结合起来，期望能探索出一种快速方便、准确可靠、用于实验室内的农药残留（包括有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯、除草剂、杀菌剂）检测前处理方法，进一步完善农药残留检测方案，为制订覆盖面广、快速、有效的新标准方法提供技术支持。
7参考文献
[1] 陈燕清，颜流水.食品中农药残留前处理技术进展[j].江西化工，2004（3）：17-23.
;
[2] lehotay s j，eller k i.development of a method of analysis of 46 pesticides in fruits and vegetables by supercritical fluid extraetion and gas chromatography /ion trap nlass spectrometry[j].j.aoac int.1995（78）：821-830.
[3] 刘瑜，庄无忌，邱月明.苹果中五种氨基甲酸酯农药的超临界流体萃取及其气相色谱法测定[j].色谱，1996（6）：45-47.
[4] 曹明霞，徐溢，赵天明，等.超临界萃取在天然植物成分提取中的应用进展[j].广州化工，2010（8）：23-25，37.
[5] 陈伟琪，候小凤，张珞平.spme/gc联用测定蔬菜中有机磷农药的方法研究[j].厦门大学学报：自然科学版，2000，39（4）：509-515.
[6] akhtar m h，crotea u l g.extraction of salinomycin from finished layers ration by microwave solvent extraction followed by liquid chroma-tography[j].analyst，1996，121（6）：803-806.