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中药提取物范文1
中药提取物是指以中国传统中草药（不包括动物药和矿物药）为原料，利用现代植物化学提取分离技术提取分离所获得的单味植物提取物。在化妆品的研究和开发过程中，中药提取物作为功能添加剂，是制备具有特殊功效化妆品重要的物质基础。目前，国内市场上销售的中药功效化妆品中应用的中草药添加剂品种已超过百种以上。根据这些提取物成分及含量的不同，大体上分为三类：
一是以单一化合物成分为主的提取物，纯度达到95％以上。其结构清楚、药效明确、药理学研究资料全面。国内一般称其为天然药物或植物化学药物，如大豆异黄酮、人参皂甙、茶叶儿茶素、白藜芦醇、石杉碱甲等均属此类。
二是通过现代分离工艺如柱层析分离、沉淀分离、萃取分离等过程所获得的有效部位或多组分提取物，有效部位尚需具有公认和明确的含量测定指标，其活性成分含量一般在20～50％之间，如银杏黄酮、三七总皂甙、积雪草提取物等。
三是经过水或乙醇提取但未加以分离的单一植物浸膏粉或流浸膏，这些提取物的部分成分明确，一般均有明确的质量控制标准，如枳实、当归、黄芪、五味子、灵芝、蒺藜、厚扑、刺五加、贯叶连翘、红车轴草、银杏叶等提取物。
在过去的几年中，国内许多化妆品生产企业随着“回归自然”风潮在全球范围内的兴起，应用上述部分中药提取物，开始对中药功效化妆品进行研究和开发，目前已有包括美白、防晒和抗皱等多个特殊功效作用的化妆品应市，在国内化妆品市场占有一定的市场份额并享有一定的知名度。但是，无论在市场占有率还是在知名度方面，中药功效化妆品，包括一些知名品牌，由于产品大多科技含量较低，缺乏市场竞争力，因而导致国内品牌的产品与国外知名品牌的天然植物化妆品在竞争中明显处于“尴尬”地位。甚至有部分业内人士认为，国内市场销售的所谓“中药功效化妆品”或“绿色化妆品”，从某种意义上讲只是一种商业概念的炒作，并无什么实际内容。研究结果表明，目前中药功效化妆品市场状况的成因与目前国内生产制备中草药添加剂的提取工艺落后和有效成分缺乏定性定量研究有直接的关系。因此，提高我国这类产品的科技含量和市场竞争力就必须从添加剂这一源头抓起，深入开展对中药化妆品添加剂的研究和开发是我们当前必须解决的首要问题。
国内中药功效化妆品中采用的中草药添加剂与国外“绿色化妆品”采用的植物添加剂相比，主要有以下几个方面的不足：
1. 生产工艺和生产设备方面
西方发达国家大多采用水提结合动态温浸工艺并辅以先进的设备；而国内采用的多为水煎提取工艺，而且设备大多较为落伍。
2. 质量控制方面
国外天然植物添加剂开发研究比较发达的国家如德国、日本等，特别注重天然植物添加剂研究和开发走标准提取物的路子，许多生产企业均已建立了相应天然植物添加剂的行业质量标准体系；而国内还没有相应的中草药添加剂行业质量标准规范和要求。
3. 在中药功效化妆品应用方面
国外同行研究开发的功效化妆品所用的天然植物添加剂以活性部位、单体化合物或所谓的“植物精油”居多，而国内大多数企业研究和开发的中草药添加剂则多以单味中药提取物或浸膏为主。
如上所述，国内研究机构或企业在中草药添加剂研究和开发方面与国外同行相比存在诸多的差距，然而，我们也具有许多方面的优势。近年来，特别是在中国加入WTO后，这些优势更趋明显，主要表现在以下几个方面：
1. 资源优势：我国拥有丰富的自然药物资源，据悉，我国现拥有天然药用植物11146种、人工栽培药用植物400种，其有种类占50％以上。
2. 文化优势：指我国作为中药的发祥地，被国际社会认为有"正宗"的中药，这些是包括邻国日本和韩国在内均不具有的优势。
3. 经验积累优势：我们的祖先在过去的几千年里，为我们做了大量的研发工作，奠定了宝贵的知识基础。
4. 政策优势：中国政府已经意识到中医药产业对国家的重要性，并对这一产业给予大力支持。
5. 环境优势：我国有多个相对集中的中药产业基地，因而也具有相对的人才集中、信息的丰富和竞争意识强等所谓的环境优势。
二、 中草药添加剂标准体系建立及其意义
随着现代科技，特别是近代医药的发展，各种天然药物繁杂的化学结构和多个有效成分逐渐被揭示出来，为中药功效化妆品研究及开发朝着天然型、安全型、疗效型的健肤美容方向发展，奠定了理论基础。以中药提取物作为化妆品添加剂制备的化妆品具有作用温和、效果明显持久、副作用少等特点。然而，一直以来，中药添加剂的质量不可控、功效不稳定、缺乏现代基础理论支撑等关键问题依然存在，并严重制约着新型中药功效化妆品的研究和开发工作。
在经济全球化和经济发展一体化的今天，一个企业或是一个国家如果控制了一个产业中的关键技术，而让整个产业以其为标准，就会有巨大的竞争优势，如微软的视窗和英特尔的芯片就是如此。在竞争激烈的市场环境条件下，标准即财富，拥有标准就拥有财富。目前，国内只有少数中草药提取物生产企业初步建立了植物提取物企业技术标准体系，但还没有国家标准或行业标准，这就使得绝大多数生产缺乏相应的技术依据和可靠的产品质量检测方法，而商业企业又多以合同中的质量条款作为产品交付的依据，因此，非标准化给生产经营设置了障碍，同时也制约了产业的发展。基于上述情况，国内化妆品科研机构和企业正在积极开展中草药添加剂质量研究和相关标准体系建立工作，这将对进一步拓展国内外市场作用巨大，意义深远。
在对中草药添加剂质量研究的基础上，建立相应的质量标准体系，使中草药添加剂在质量方面具备安全、有效、稳定、可控等必备特点，以满足当前国内中药功效化妆品企业生产及科研的需要。因此当务之急应是尽快在企业或行业内部建立中草药添加剂的标准规范体系，实现中草药添加剂产品的标准化；同时应强化标准国际化意识，并力图最终实现产品标准的国际化。
在企业或行业内部建立中草药添加剂的标准规范体系，必须首先确立中草药添加剂的研究方向，从其质量研究入手，开展系统和规范性研究工作。中草药添加剂质量研究的主要内容包括以下几个方面：
1. 中草药添加剂质量稳定性、可控性和均一性的研究
对中草药添加剂的有效成分或标识成分采用定量分析的方法进行研究；对多组分成分采用指纹图谱的方法进行研究。指纹图谱是进行药物特征性分析的主要手段，近年来，国内外普遍开展了此项工作，有许多成功的经验可以借鉴。
2. 工艺的可重复性和可控制性研究
现代工艺技术的提高，为最大限度地将中草药添加剂中的目标成分和其它组分分离提供了可能。柱层析分离技术、膜分离技术以及二氧化碳超临界萃取技术等的综合利用，是实现生产制备中草药添加剂工艺可重复性和产品质量稳定的重要保证。
3. 功效的可评价性和安全性的研究
对中草药添加剂在化妆品应用中的功效评价以及安全性的总体评价，是现代药物应用的基础。传统中草药评价主要是根据化妆品的使用感觉和经验进行评价，缺乏量化指标导致功效和剂量的难以评价。因此，必须加大对中草药添加剂有效成分的研究工作。
4. 质量保证体系的研究
中草药添加剂具有植物药的质量特性，因此在对中草药添加剂质量标准研究基础上，应借鉴植物药管理系列规范，如药品研究开发管理规范（GRP）、药品生产管理规范（GMP）等，建立一个切实可行的中草药添加剂质量保证体系。
三、 中药添加剂在化妆品中的应用展望
根据国外药用植物提取物在化妆品中的应用现状并结合过去十几年我国中药提取物在化妆品中研究及应用方面所做的工作，多数人认为，中草药添加剂在化妆品研究及开发中应走中医药基础理论与现代化科学相结合之路，建立有中国特色的中草药添加剂研究和应用规范。鉴于目前的研究现状，在对中药化妆品研究和开发中需要注意以下几个问题。
1. 提高质量检测水平。目前，我国化妆品企业对各种产品功效成分的分析和产品质量标准的检测手段还相当落后，不解决这些矛盾，不可能真正提高产品的科技含量。
2. 突出自身特色的研究模式。除日本外，西方发达国家对植物提取物的研究是建立在化学成分学之上并进行药理评价。国内化妆品生产企业和科研机构对中草药添加剂的研究应以传统中医药学理论为基础，结合现代化科学技术，建立既要体现中医药基本理论特色，又要符合现代药物标准评价体系的中草药添加剂研究模式。
3. 联合攻关。国内化妆品企业及科研机构应通过将包括精细化工、医药生产、生物工程技术等方面的优秀人才组合起来，进行跨学科的联合攻关模式，开展对中药功效化妆品生产工艺的研究和开发。
中药提取物范文2
[关键词]瘢痕疙瘩;中医药;成纤维细胞
[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2010)05-0701-03
Effects of extractant from self-made traditional Chinese drug on proliferation of keloid-derived fibroblasts
ZHAO Qing-li,MENG Ru-song,YANG Qing-qi,CAI Rui-kang
(Department of Dermatology,Air Force General Hospital of Chinese PLA,Beijing 100036,China)
Abstract:ObjectiveTo study the effects of the extractant from the self-made traditional Chinese drug on the proliferation of keloid-derived fibroblasts (KFB).MethodsKFB and normal fibroblasts (NFB) were cultured in vitro. The aqueous or alcohol extractant in various concentr ation from the self-made traditional Chinese drug was added to the culture media. Inverted microscope, CCK-8 and biochemistry analysator were applied to observe or detect fibroblasts appearance, proliferation, growth and lactate dehydrogenase (LDH) activity.ResultsWithin certain concentration, after the extractant from drug taking action, KFB appearance was altered, the proliferative activity was decreased, the LDH activity was increased. In addition, the alcohol extractant inhibited the proliferation of KFB more efficiently than the aqueous extractant,KFB were more sensitive to drug than NFB. Conclusions The self-made traditional Chinese drug may produce a therapeutic effect by inhibiting the proliferation of KFB,cytotoxicity,etc.
Key words:keloid, traditional Chinese drug, fibroblast
我们将全蝎等六味中药配制成软膏外用瘢痕疙瘩皮损处,经采用随机、对照试验方法进行临床观察,获得比较满意的结果(待发表)。本研究检测自制中药提取物对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,旨在为瘢痕疙瘩临床治疗提供实验依据。
1材料和方法
1.1 实验材料:自制中药由全蝎、蚤休、丹参、生乳香、浙贝母、生甘草组成,其水提物、醇提物由中国中医科学院广安门医院制剂中心陈贤师制备。体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid Fibroblasts, KFB)6株、人正常皮肤成纤维细胞(Normal Fibroblasts, NFB)3株由中国医学科学院整形外科医院王春梅教授赠送。主要试剂及仪器包括CCK-8试剂盒(碧云天生物技术研究所)、倒置显微镜(日本OLYMPUS)、酶标阅读仪(450型 美国BIO-RAD)、全自动生化分析仪(日本 日立)。
1.2 实验方法
1.2.1 药物的配制:称取适量的自制中药水提物细粉加PBS溶解,高压灭菌;量取适量的醇提物液水浴蒸干,加二甲基亚砜及PBS溶解,微孔滤膜滤过除菌。水提物、醇提物均用细胞培养液(含DMEM、新鲜小牛血清、青霉素、链霉素)倍比稀释为31.25、62.5、125、250、500、1 000、2 000、4 000、8 000、6 000μg/ml。
1.2.2 成纤维细胞形态学观察及增殖活性的测定:人KFB、NFB传代3～7代,加0.25%胰蛋白酶消化,制成5×104/ml细胞悬液,以100μl/孔(5×103细胞/孔)加入96孔板,培养箱中孵育48h。吸除原培养液,中药组KFB、NFB孔中分别加入31.25～16000μg/ml间10个浓度的中药水提物、醇提物培养液100μl/孔,阴性对照组KFB、NFB孔中加入培养液100μl/孔,每组均设3个复孔,培养箱中继续孵育48h。倒置显微镜下观察细胞形态并摄像。向各培养孔中加入CCK-8溶液10μl,培养箱中作用1h,在酶标仪上测定450nm处光密度值(OD值)。抑制率(%)=阴性对照OD值-中药组OD值/阴性对照OD值。
1.2.3 成纤维细胞生长状况的测定:根据增殖实验结果,设定抑制率为50%左右的自制中药醇提物浓度为本实验浓度。细胞接种同前。中药组KFB、NFB孔中加入2000μg/ml中药醇提物培养液100μl/孔,阴性对照组KFB、NFB孔中加入培养液100μl/孔,每组均设3个复孔,于培养箱中孵育24h、48h、72h、96h、120h时取出培养板,在相应孔中加入CCK-8溶液10μl,培养箱中作用1h,在酶标仪上测定450nm处OD值,将在各时间点测得的OD值绘制出生长曲线。
1.2.4 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定:KFB、NFB以2ml/孔(3×105细胞/孔)接种于6孔板中,方法同前。中药组KFB孔中分别加入31.25～16 000μg/ml间6个浓度的中药醇提物培养液2ml/孔,NFB孔中加入500μg/ml中药醇提物培养液2ml/孔,培养箱中继续孵育48h。收集上清,用全自动生化分析仪测定LDH活性。
1.3 统计学分析:将所有资料输入数据库,采用SPSS 13.0统计软件进行统计处理,检测指标用x±s、率表示,统计分析方法为t检验。P
2结果
2.1 药物对成纤维细胞形态的影响:倒置显微镜下可见阴性对照组人KFB、NFB贴壁生长,形态狭长,多平行排列。在自制中药水提物、醇提物16000μg/ml作用下,KFB、NFB全部裂解成碎片;在4000～8000μg/ml作用下,部分细胞碎裂,部分贴壁生长,形态短粗,部分呈圆形漂浮于培养液中;在1000～2000μg/ml作用下,部分短粗细胞贴壁生长,部分为圆形漂浮细胞,并呈浓度依赖性,无碎裂细胞;在31.25～500μg/ml浓度下,细胞以狭长贴壁生长为主,见少数短粗贴壁细胞及圆形漂浮细胞,对浓度依赖性不明显。药物各个浓度水提物与醇提物间比较,KFB与NFB间比较,碎裂细胞、短粗贴壁细胞、圆形漂浮细胞无镜下可见的差异(图1)。
2.2 药物对成纤维细胞增殖活性的影响:自制中药水提物在2 000～1 6000μg/ml、醇提物在1 000～1 6000μg/ml对KFB增殖具有抑制作用,水提物及醇提物在4 000～16 000μg/ml对NFB增殖具有抑制作用,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P
2.3 药物对成纤维细胞生长状况的影响:从生长曲线中可见,阴性对照组KFB、NFB数量随时间的延长而增多,至96h细胞数达高峰,至120h细胞数稍减少。2 000μg/ml自制中药醇提物作用24h后,KFB、NFB数量均减少;随着时间的延长,NFB数量逐渐增多,呈现出细胞数量稍少于阴性对照组的持续生长状态;在24～120h间 5个时间点,KFB数量均显著减少, 呈现出持续地被明显抑制状态(图2)。
2.4 药物的细胞毒性作用:KFB在2 000～16 000μg/ml自制中药醇提物的作用下,培养液上清中LDH活性增高,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)(表3)。
3讨论
以往的研究表明,瘢痕疙瘩的发生与成纤维细胞生物学功能异常有关,主要表现为成纤维细胞活性增高及耐受性增强;KFB在离体时可继续产生高水平的胶原蛋白、纤维粘连蛋白、弹力蛋白、蛋白多糖等细胞外基质,在低浓度血清生长因子培养液中仍能持续生长[1]。藉此,检测药物作用后体外培养的KFB增殖性能,已成为多数学者探讨瘢痕疙瘩治疗药物作用机制的基本手段[2]。近年来,关于中药对KFB生物性状的影响已引起国内学者的重视,但所测定的中药多为单味药提取物或活性成分,关于复合中药的实验室研究为数有限[3-4]。
成纤维细胞是贴壁生长细胞,其形态并不固定,当培养条件发生改变、自身生理功能出现变化时容易在形态方面表现出来[5]。Aggeler等[6]认为,凡是能导致成纤维细胞变圆的试剂或条件,都能增加其胶原酶的合成。我们在倒置显微镜下观察到,当自制中药水提物、醇提物在浓度31.25～8000μg/ml范围内,KFB、NFB均有不同程度的细胞形态改变,这说明药物影响着成纤维细胞的正常生理功能,可能包括增加胶原酶的合成。
本研究的成纤维细胞增殖活性的测定结果显示,自制中药醇提物对KFB增殖的抑制浓度偏低,对KFB、NFB增殖的抑制呈浓度依赖性,而水提物的抑制浓度偏高,在较低浓度时其抑制作用明显降低,甚至有促进增殖作用。因此,我们认为自制中药醇提物对成纤维细胞增殖的抑制作用较水提物更有效,这可能与醇提法能更多地提取中药的有效成分有关,故在后续实验中我们仅采用醇提物进行检测。将成纤维细胞增殖活性测定与生长状况测定结果结合起来分析,我们发现KFB在中药醇提物、水提物作用下其增殖均被抑制,且药物浓度偏低,而NFB增殖的药物抑制浓度偏高,且对31.25～62.5μg/ml水提物的刺激呈现出增殖增强反应;在2 000μg/ml中药醇提物作用120h时,KFB增殖显现出持续地被明显抑制状态,而NFB增殖虽亦被抑制,但细胞增殖仍显现出逐渐增加的趋势。因此,我们认为自制中药具有较强的针对性,对KFB增殖的抑制作用更明显,即KFB对自制中药抑制的反应比NFB更敏感。
本研究还发现,当自制中药醇提物≥2000μg/ml浓度时,KFB培养液中LDH活性显著增加,这表明存在有细胞膜受损、LDH外释的现象,这提示我们本药物有可能是通过杀伤、破坏KFB而发挥作用的[7],同时也提醒我们盲目地增加本药物的浓度并不安全。
[参考文献]
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[6]Aggeler J, Frisch SM, Werb I. Changes in cell shape correlate whit collagenase gene expression in rabbit synovial fibroblasts[J]. J Cell Biol,1984,98(5):1662-1671.
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中药提取物范文3
【摘要】
目的筛选抗龙胆叶枯病菌活性的中药。方法以龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）为供试菌种，对9种中药乙醇提取物进行抗龙胆叶枯病菌活性实验，采用有限稀释法，测定最低抑菌浓度。结果9种中药乙醇提取物均有抑菌作用，其中蛇床子、川楝子提取物14 d的最低抑菌浓度MIC100小于0.1 g/ml。结论蛇床子、川楝子具有较强的抗龙胆叶枯病菌作用，可进一步开发为防治龙胆叶枯病药物。
【关键词】 中药杀菌剂 抑菌作用 活性筛选 龙胆叶枯病
Abstract:Objective To screen the antifungal activity against Alternaria sp. of TCMs. MethodsThe antifungal activity against Alternaria sp. for the ethanol extracts of nine speices of TCMs was tested on Alternaria sp. Use limiting dilution to test the minimum inhibitory concentration.ResultsAll the ethanol extracts of TCMs exhibited inhibition on Alternaria sp.. The minimum inhibitory concentration of Fructus Cnidii， Fructus Tossendan was under 0.1 g/ml. Conclusion The antifungal activity of Fructus Cnidii， Fructus Toosendan against Alternaria sp.. is much stronger and can be developed.
Key words:Fungicides of TCMs； Inhibition； Screening； Rough gentian
龙胆叶枯病（Alternaria sp.）是龙胆生产中的重要叶部病害，发生普遍。在龙胆及其它药材生产中对病害的防治大量使用化学药剂，导致环境污染、农药残留，影响药材的质量。我国中药资源丰富，许多中药含抑菌活性物质［1～3］，从中寻找抑制植物病原菌活性物质，研制植物源新型杀菌剂，防治药用植物病害，对生产符合GAP标准中药材具有重要意义。
目前，国内外学者在中草药抗真菌实验方面已做了大量的工作 ［1～5］，而从中筛选抗药用植物病原真菌的研究较少。本研究根据以往中药抗真菌文献报道，选出9种中药，研究其对龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）的抑制作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 中药
地肤子、苦参 、知母、川楝子、蛇床子、大风子、苍耳子、白鲜皮、土槿皮购于哈尔滨市同泰大药房，经鉴定为正品； 95%乙醇（天津泰达化工有限公司），葡萄糖（沈阳市试剂三厂），琼脂（青岛水产品加工厂）。
1.1.2 供试菌种
龙胆叶枯病菌，从黑龙江北安栽培的粗糙龙胆Gentiana scabra Bunge中分离纯化得到，采用从病组织分离培养，将分离得到的菌种接种到PDA培养基上培养［6］，待产生孢子后，采用单孢分离的方法对菌种进行纯化。应用柯赫氏证病法则（Kochˊs postulate）证明为龙胆叶枯病病菌，通过对分生孢子梗、分生孢子等的观察鉴定为Alternaria sp.。
1.1.3 培养基
用PDA培养基。
1.2 方法
1.2.1 样品的制备
将中药样品于60℃烘干，经粉碎过20目筛，加5倍量的95%乙醇回流提取两次，2 h/次，滤过，滤液减压浓缩至1 g/ml（即每毫升含1 g生药）。浓缩液于冰箱（0～4℃）冷藏备用。
1.2.2 菌种活化
将保存的菌种接于PDA培养基上培养4d备用。
1.2.3 抑菌实验
在无菌操作条件下，以1 g/ml生药的药液为原液，用灭菌PDA培养基稀释，分别 稀释为原液的50% ，40% ，30% ，20%，10% ，5%，1% ，0.8%，0.6%，0.4%，0.2%，0.1%（相当于每毫升含0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002，0.001 g生药）12个浓度的药基，对照为70%乙醇代替药液配制，并控制药基中的乙醇含量在15%以下（在配制高浓度的药基前，对加入的药液挥去部分乙醇），每管接种新培养的真菌菌落边缘2 mm2的真菌菌丝块，重复3次，25℃培养。每天观察接种菌落生长情况，凡生长的菌落记为“+”，凡完全不生长的菌落记为“-”。
1.2.4 MIC100的确定
MIC100为杀真菌剂(fungicide)的最低抑菌浓度，菌种接种在每种药物系列梯度浓度培养基上，恒温箱中培养7 d 和14 d，用肉眼观察，接种菌块未扩大，无细胞生长，取完全不生长管最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
2 结果
抗菌实验结果见表1。表1 9种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）的抑制作用（略）
由表1给出各中药乙醇提取物的最低抑菌浓度，结果见表2。表2 中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（略）
结果表明，9种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病病菌（Alternaria sp.）均有不同程度的抑制作用，随着培养时间的延长，抑菌作用逐渐减弱，培养7 d最低抑菌浓度MIC100≤0.2 g/ml有地肤子、蛇床子、白鲜皮、川楝子、大风子，最低抑菌浓度MIC100≤0.1 g/ml有蛇床子、白鲜皮、川楝子；培养14 d最低抑菌浓度≤0.2 g/ml有川楝子、蛇床子、大风子，培养14 d 最低抑菌浓度MIC100为0.1 g/ml有川楝子、蛇床子。将药基上的菌种转接到无药PDA培养基上仍不能生长，表明真菌已被杀死，川楝子、蛇床子乙醇提取物有较强抗龙胆叶枯病菌（Alternaria sp.）作用，其次为白鲜皮和大风子，可进一步作田间实验。
3 讨论
用乙醇提取抗菌活性物质优于水提法［4，7］。本实验采用乙醇回流提取法，有利于生物碱等生物活性物质的提取，同时减少了提取液中蛋白质、多糖等杂质。
本实验采用在药基上接种菌丝体的方法测定药物抗真菌活性，属于固体琼脂筛选抗真菌药物，并采用有限稀释法测定MIC100，该法操作简便。前人实验多采用培养基与药物同时灭菌的方法，本实验在药基配制时，仅对培养基进行高温灭菌，冷却至70℃左右用微量移液器加入药物，药物有效成分不被破坏，在经长时间培养未滋生杂菌，实验方法可靠。
由真菌引起的病害防治困难，只要有部分真菌细胞不被杀死，在适宜条件下就能生长繁殖，因此本抗菌实验以真菌生长完全受到抑制来评价抑菌效果，即在较长时间(14 d)仍能保持对真菌生长的抑制，才是理想的抗菌药物。9种中药经长时间抑菌试验观察，川楝子、蛇床子乙醇提取物对龙胆叶枯病菌抑菌作用强而持久，是理想的抗龙胆叶枯病真菌的中药。白鲜皮在培养7 d时抑菌作用最强，虽然到14 d时抑菌作用有所下降，也是一个较理想的抗真菌药物。有待对其抗菌机理进一步研究。
【参考文献】
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中药提取物范文4
【关键词】 中药提取液; 药材吸水量; 相对比重; 固含量; 黏度
中药提取液是中成药制药过程中重要的物料形态，在各工艺过程中主要经过的过程包括化学物质自药材中的溶出扩散、液体在管道内的流动、液态物料水分的蒸发(浓缩)和固态半固态物料水分的蒸发(干燥)。相关的物理性质主要有反映提取液中物相比例的固体含量(含固量，浸出物量)、表示浓缩状态的相对比重和与运动性质有关的黏度等。了解中药提取液的主要物理性质之间的相关性，可以提供对提取液本身的深入认识;在进行浓缩干燥的时候可以利用提取液本身性质的相关性简化研究因素，可以更广泛深入研究提取液性质与其它工艺参数之间的关系，为提供更有效控制浓缩干燥过程的参数设置提供理论基础[1]。本研究就中药提取液的常见物理性质进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料
药材：薄荷等40种常用中药饮片(上海养和堂中药饮片有限公司)、丹参(饮片，上海康桥中药饮片厂)。
主要仪器：液体比重天平(pzb5，上海精密科学仪器有限公司天 平仪器厂);黏度计(brookfield viscosmeter ldi+，brookfield engineering laboratories，inc. us);真空干燥箱(zk82b，上海实验仪器厂);上皿电子天平(fa1004，上海天平仪器厂)。
1.2 方法
1.2.1 提取液的制备 取饮片以常水(视药材被充分浸泡)于室温(20℃)浸泡12 h，倾倒读取滤液，以加水量与读取量差值为饮片吸液量。以此量的5倍为浸提量加热煮沸后，保持微沸2 h，120目滤布滤过，浓缩至不同相对含量(g药材·ml-1)。同一提取液在浓缩过程中连续取样，放置于同一温度，分别测定其相对比重、含固量(浸出量)和黏度;对同一浓度提取液进行加热，测定不同温度条件下黏度。
1.2.2 相对比重的测定[2] 以液体比重天平法进行。
1.2.3 含固量的测定[2] 参考浸出物含量测定法进行。
1.2.4 黏度测定[2] 用旋转式黏度计测定不同温度、相对比重、含固量同一提取液的运动黏度。
1.2.5 相关性考察 分别考察以上考察指标之间的相关性，进行回归分析。数据处理、分析及绘图使用excel软件。
2 结果
2.1 饮片吸水量
饮片的吸水性考察结果见表1。结果表明常见中药饮片的吸水量倍数在0.8～2.9之间，一般浸提加水量在5～10倍，为平均吸水量的2倍以上。这个数值可以做为浸提条件研究中加水量的计算基础。
表1 常用中药饮片的吸水量/mlo(50g)-1,20℃
饮片名称吸水量饮片名称吸水量/mlo(50g)-1生白芍50金银花130 生甘草70夏枯草200 葛根75100 柴胡110诃子70 桂枝40北五味子50 生黄芪60枸杞子80 知母90桃仁30 当归120栀子30 川芎60桑寄生70 熟地85麻黄70 钩藤60益母草140 忍冬藤90茯苓30 黄柏95猪苓s50 丹皮55乳香- 陈皮100没药40 番泻叶130生牡蛎- 枇杷叶110丹参105 大青叶90阿胶 -
依据药材入药部位的不同，计算相同入药部位的饮片吸水平均倍数，进行比较后得到不同入药部位药材饮片的冷浸(20℃)吸水顺序为：花>叶>全草>皮>茎木>根及根茎>果实种子>菌类>树脂，见表2。表2 不同入药部位药材饮片的平均吸水量/倍(20℃)
2.2 含固量与相对比重
薄荷水提取液的含固量与相对比重关系见表3。以线性回归考察薄荷水提取液相对比重与含固量的关系得到一条直线，线性关系良好，见图1。同法得到丹参片提取液相对比重与含固量的直线关系，见图2。提取液的含固量与相对比重之间正相关，具有良好的直线回归关系。表3 薄荷水提取液的含固量与相对比重
2.3 相对比重与黏度
测定不同相对比重丹参水提取液的黏度，结果见表4。直接回归考察两者相关关系，相关系数r2=0.9197。对黏度值做数学变换，取自然对数再后进行回归，得到较好结果r2=0.9912，见图3。表4 丹参提取液的相对比重与黏度(25℃)
2.4 黏度与温度
丹参提取液的相对比重、黏度与温度的关系见表5。当rpm=50时(图4)，回归曲线按照提取液浓度从大到小的顺序依次是：
y=151729x-1.9504，r2 = 0.9871;
y =4734.4x-1.4023，r2 = 0.9806;
y= -0.0594x + 7.4098，r2 = 0.9500。
当rpm=100时，回归曲线按照提取液浓度从大到小的顺序依次是：
y=213130x-2.0244，r2 = 0.9918;
y =2304.6x-1.1962，r2 = 0.9862;
y =-0.0626x + 9.037，r2 = 0.9669。
提取液在低浓度时候，温度与黏度成直线关系;随着浓度的增大，温度与黏度之间呈现出指数关系，温度越高黏度越小;如果温度足够，不同浓度提取液黏度值有接近趋势。
在黏度计不同转速下，曲线的系数有差异，说明了提取液的动力学性质属于非牛顿流体，黏度随着受力的改变而改变。表5 丹参提取液的浓度、黏度与温度
2.5 含固量与与黏度
含固量表现为一定体积提取液的固体总量，如果以该固体为目标物质，那么含固量就等于提取液的浓度。因此，从上节内容可知，含固量与黏度是正相关关系。图5是70℃时浓度与黏度的回归关系。
图5 提取液浓度与黏度的关系
3 讨论
本研究显示不同植物部位来源药材的吸水量具有规律性。贺福元等建立了中药材吸水膨胀动力学数学模型并对大黄进行了研究，结果表明中药材吸水膨胀服从一级线性动力学量变,可用线性模型表达[3]。
中药提取液提取液代表总固体物质含量的浓度(含固量)、浓缩程度的比重和动力学性质的黏度之间多具备良好的相关性，因此，在进行中药浸提液的处理过程中，可以利用这些指标进行工艺控制。在浓缩干燥过程中，如果建立质量控制成分与提取液的含固量的联系，那么就可以将干燥的过程控制与制剂质量连接起来，提高中药制剂全程控制的水平。其中，提取液的含固量与相对比重之间正相关，具有良好的直线回归关系。其关系式可以归纳为：含固量=a(相对比重-1)，其中a是一个接近2的数字[1]。该公式与实际生产的经验比较吻合，可以作为经验公式应用，并可以进一步探讨其理论上的规律性。
中药制剂技术研究应关注提取物的物理性质[4]。中药提取液同样是广义“中药提取物”的表现形式之一。中药提取液的这些性质不仅可以用于浓缩干燥过程控制，还可以向中药制剂的上游工序延伸，用于提取过程的监控。例如，提取达到平衡时，其行对比重应该达到一个平衡数值，直接监控该参数就可以判断提取进行的程度。中药制药过程中物料相关物理性质的相关性研究将有利于对中药制药过程的理解和控制，相关研究已经有所开展，如文献[1，3～6]。在这一方面，相关行业(如食品、饮料、化工领域)对物料的物理性质包括其过程动力学研究的比较深入，中药制剂值得借鉴，使生产过程的认识和控制水平得以提升。
【参考文献】
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4 刘怡,冯怡,徐德生. 中药制剂技术研究应关注提取物的物理性质.2007,29(10):1495～1498.
中药提取物范文5
【摘要】 目的 研究5种中草药对致病弧菌的抑菌活性，为水产品的安全用药提供参考。方法 采用纸片法和试管法，以溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鲨鱼弧菌 (Vibrio carchariae)为供试菌株，测定中草药不同极性萃取部分的抑菌圈和最小抑菌浓度。 结果 夹竹桃叶、芒果叶、苦楝叶和羊蹄甲叶4种中草药乙酸乙酯萃取部分对供试弧菌有很好的抑菌作用；苦楝叶和羊蹄甲叶石油醚萃取部分对副溶血弧菌有抑菌作用；芒果叶的水溶性部分对塔氏弧菌有很强的抑菌作用；枇杷叶提取物对4株弧菌均无抑制作用。结论 除枇杷叶外，其他4种中草药可不同程度的抑制致病弧菌的生长，其抑制致病弧菌的活性成分有待于进一步研究。
【关键词】 中草药；弧菌；抑菌活性；最小抑菌浓度
Abstract:Objective To study the antibacteria activities of five herbs， to provide references for the safe drugs of aquaculture. Methods Using Vibrio coralliilyticus， Vibrio tubiashii， Vibrio parahaemolyticus and Vibrio carchariae as the tested bacteria， the inhibition zone and the minimal inhibitory concentration（MIC）were measured. Results The extracts， extracted with ethyl acetate from the leaves of Nerium indicum Mill.， Mangifera indica Linn.， Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea could inhibit vibrio. And the extracts， extrated with petroleum ether from leaves of Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea can inhibit Vibrio parahaemolyticus， too. The remainder extracts of Mangifera indica Linn.showed strong inhibition effect on Vibrio tubiashii. While the extracts of Eriobotrya japonica showed no inhibition effect. Conclusion Four of the five herbs show antibacteria activities and the study on active compounds should be done in future.
Key words:herb；Vibrio；antibacteria activity；minimal inhibitory concentration
随着现代集约化和规模化水产养殖的发展，养殖中水产动物感染细菌的几率大大增加。为了预防水产动物疾病，大量抗生素类药物被用作水产药物。滥用抗生素使致病菌的耐药性增加，药物的有效性降低，同时也加剧了环境污染，残留药物降低了水产成品的品质，引发了市场对水产品安全性的质疑，降低了水产商品在国际贸易中的竞争力。因此，开发替代抗生素的高性能、无毒副作用、安全高效的抑菌药物引起了广大科研人员的关注。
本研究以夹竹桃（Nerium indicum Mill）、芒果（Mangifera indica Linn.）、苦楝（Melia azedarach L.）、羊蹄甲（Bauhinia purpurea）和枇杷（Eriobotrya japonica）等5种中草药为研究对象，选取对水产品危害较大的4株致病弧菌为实验菌株，旨在通过抑菌活性的筛选研究，获得安全有效的天然抑菌药物。
1 材料与方法
1. 1 仪器及试剂
主要仪器有DFT200型摇摆式高速中药粉碎机（温岭市大德中药机械有限公司）、RE52CS型旋转蒸发器（上海亚星生化仪器厂）、LDZX40CI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）、150A生化培养箱（金坛市迅生仪器厂）、SWCJ1D型洁净工作台（苏州苏洁净化设备有限公司）。所用试剂均为分析纯。使用的培养基为2216E培养基。环丙沙星纸片为杭州天和微生物试剂有限公司产品。
供试菌种：溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鲨鱼弧菌 (Vibrio carchariae)由南海水产研究所提供。
1. 2 供试药材及预处理
供试药材为广东常见的5种植物的叶，供试的5种植物分别是夹竹桃（Nerium indicum Mill）、芒果（Mangifera indica Linn.）、苦楝（Melia azedarach L.）、羊蹄甲（Bauhinia purpurea）、枇杷（Eriobotrya japonica）。5种供试植物均采自广东药学院药用植物园，原植物均经药用植物教研室严寒静副教授鉴定。供试植物叶片阴干后粉碎成粗粉备用。取供试药材粗粉各20 g，用60%（φ）乙醇回流提取90 min后滤过，滤液减压浓缩至50 mL后，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯萃取。将3种萃取液分别减压浓缩至1 g/mL（以生药计），即得石油醚萃取部分（Ⅰ）、乙酸乙酯萃取部分（Ⅱ）和水溶部分（Ⅲ）。
1. 3 病原菌的分离和菌悬液制备［1］
将4株供试菌分别划线接种于平皿培养基中，于28 ℃培养24 h后，挑选单个菌落转接于斜面培养基中，28 ℃培养24 h后，用2 mL 0.9% NaCl溶液进行洗脱即制得所需菌悬液。
1.4 纸片法抑菌试验
按无菌操作规程［2］，吸取4株供试菌悬液各0.1 mL，分别加到平板培养基上并涂布均匀。将预先灭菌烘干并浸蘸定量药液的滤纸片（直径为5 mm）平贴在含菌培养基上。同时用浸有相应溶剂的滤纸片做对照。每份样品做3份，结果取平均值。28 ℃倒置培养，并于12 h和24 h观察抑菌效果，测定抑菌圈的直径。以环丙沙星为阳性对照。
1.5 试管稀释法测最低抑菌浓度
采用试管稀释法，以相应溶剂作对照，测定有抑菌活性的药液的最低抑菌浓度(MIC)。每种提取物为一组，每组取无菌试管12支，于第1管中加入1.0 mL浓度为2×105 CFU(colony forming units)/mL的菌液，在2～10管中每管加入1.0 mL 浓度为1×105 CFU/mL菌液，在第1管内加入中药浓缩液1.0 mL，充分混匀后取1.0 mL放入第2管，混匀后再取1.0 mL放入第3管，第1管内的药物浓度为原液的1/2，第2管为第1管的1/2，其余类推，直至第10管，每种药物的第11管作菌液对照（仅加菌液不加中药），第12管作药物对照（仅加中药不加菌液），以能抑制细菌生长（培养后培养基仍清亮）的最小药物浓度为其MIC。
2 结果与分析
2.1 纸片法抑菌试验结果
见表1。由表1数据可知，阳性对照环丙沙星对4株菌均有抑制作用，而中草药提取物只对溶珊瑚弧菌、副溶血弧菌和塔氏弧菌3株菌产生抑制作用。其中，夹竹桃叶、苦楝叶和羊蹄甲叶对副溶血弧菌和溶珊瑚弧菌有抑制作用；芒果叶对溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌有抑制作用；枇杷叶对4株供试致病菌均无抑制作用。比较不同提取部位抑菌作用可知，乙酸乙酯提取部分的抑菌活性较明显，苦楝叶、芒果叶、夹竹桃叶和羊蹄甲叶乙酸乙酯萃取部分均产生抑菌圈；石油醚萃取部分的抑菌结果显示，苦楝叶、羊蹄甲叶石油醚提取部分能产生抑菌圈；水溶性部分只有芒果叶产生抑菌圈。分析不同供试菌敏感性发现，副溶血弧菌和溶珊瑚弧菌两株供试菌对夹竹桃叶、苦楝叶和羊蹄甲叶提取物均敏感，能产生不同大小的抑菌圈；塔氏弧菌只对芒果叶的水溶性部分敏感；鲨鱼弧菌对中草药提取物则完全不敏感。表1 5种植物不同萃取部分的抑菌圈（略）注：石油醚萃取部分简称为I，乙酸乙酯萃取部分简称II，水溶部分简称III。
2.2 试管稀释法测定最低抑菌浓度结果
见表2。由MIC数据可知，芒果叶提取物对溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌的MIC最低，表明芒果叶提取物在质量浓度为12.5 mg/mL（以生药计）时即可完全抑制两菌的生长。苦楝叶和羊蹄甲提取物对溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC均为50.0 mg/mL（以生药计），夹竹桃对溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC为25.0 mg/mL（以生药计）。其他组分的MIC均大于200 mg/mL。表2 5种植物不同萃取部分的最小抑菌浓度（略）注：“+”表示MIC＞200 mg/mL
3 讨 论
弧菌（Vibrio）因菌体有一个弧状弯曲而得名，广泛分布于自然界中，水环境中较多，对人、鱼、蛙及其他动物均有致病性，其中霍乱弧菌和副溶血弧菌是引起人类细菌性食物中毒的首要食源性致病菌。目前，从海水、淡水和养殖水体中分离鉴定出弧菌（Vibrio）共有100多种，其中多数是致病菌，严重危害人类的食品安全。本研究所用供试菌鲨鱼弧菌和副溶血弧菌也是《美国临床微生物手册》记载的人类致病菌。通过研究发现，鲨鱼弧菌对5种中草药均不敏感，而其他3种致病弧菌均有敏感中草药，说明该菌具有对抗普通抑菌药物的生长机制，应对其机理展开进一步的研究。
本研究所选5种中草药是我国岭南地区资源丰富、广泛易得的药材。本研究结果表明，除枇杷叶外，其他4种均有抑制致病弧菌的作用。比较文献结果发现，夹竹桃粗提物对大肠杆菌、粪肠球菌等的MIC为0.5 g/mL［3］，本研究结果表明夹竹桃乙酸乙酯萃取物对溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC仅为25mg/mL。MIC结果差异的产生可能与以下2个因素有关：①菌种不同，敏感性不同。本研究采用的是水产养殖中的致病弧菌，而文献所用供试菌为杆菌和球菌；②药材的提取方法不同，本研究采用粗提后再萃取的方法处理药材，一定程度上精制了样品，去除了干扰，而文献中药物的处理方法仅为水提处理。本研究中，芒果叶的乙酸乙酯萃取物和水溶性部分分别对溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌有较好的抑菌作用，说明萃取法可以有效地将不同活性的成分分开，比较文献所用的水煎煮法［4］，萃取法的优势在于将不同极性的成分进行了粗分，为进一步研究活性成分提供了依据。实验结果表明，苦楝叶和羊蹄甲叶分别对溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌具有较好抑菌作用，苦楝叶的抑菌功效与其清热燥湿的作用相符合，而羊蹄甲根的抗菌活性成分已被分离获得［5］。
此外，本研究采用环丙沙星为阳性对照药，实验发现环丙沙星对4株弧菌有广泛且明显的抑菌作用，说明该4株菌对环丙沙星较敏感且没有产生耐药性。虽然环丙沙星对4株弧菌的抑菌作用优于中草药提取物，但由于其成分和作用机理单一，临床上已有耐药菌出现。因此，不宜在水产养殖过程中长期用药。相比之下，中草药提取物由于成分复杂，作用机理不统一，较难产生耐药菌，有较高的实际应用价值，有必要进一步开发。
【参考文献】
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中药提取物范文6
关键词: 天然提取物；抗氧化活性；DPPH法
中图分类号:R931
文献标识码:A文章编号:1672-8513(2010)03-0204-03
On the Efficiency of Six Natural Extracts as DPPH Radical
Scavenger and Their Antioxidant Activity
LIN Shiyun1，WANG Jiong1，FENG Guiquan1,2，HUANG Xiangzhong1，YANG min
(1. School of Chemistry and Biotechnology, Yunnan University of Nationalities, Kunming 650500, China; 2. The Acetic Acid Branch Company, Daqing Oil-field Chemical Co. Ltd., Daqing 163411, China)
Abstract:
Using the antioxidants in lilac, honeysuckles and other four natural extracts, this experiment determined their antioxidant activity by virtue of DPPH method. And by comparing them with ascorbic acid and thiourea and using the DPPH clearance rate as the evaluating indicator to evaluate the sample’s ability to clear free radicals, this experiment also compared each extract’s ability to clear the free radicals. It proves that these natural extracts are capable of clearing DPPH, among which the lilac extract is the most effective.
Key words:
natural extract; antioxidation activity; DPPH method
天然药物对人体的疾病往往具有很好的治疗、预防等药理作用和保健功能，自然界中的蔬菜、水果、花和谷物中存在具有多种生物活性的天然产物，特别是一些天然药物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表现，这对预防疾病和治疗疾病，提高人民身体健康都产生着积极的作用［1-2］.研究表明，自由基与机体的许多功能障碍和疾病的发生密切相关.因此,研究自由基的检测方法并探讨物质对自由基的清除作用具有重要意义［3］.
目前对自由基清除剂的研究方法［4-8］主要有2类,一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH是体外模型中最常用的方法.本文用DPPH法研究6种药物提取物的抗氧化性和对自由基的清除活性.
1 材料与方法
1.1 仪器、试剂与材料
仪器:UV/VIS2802PCS型分光光度计（尤尼柯仪器有限公司）；7230G紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；E01140型电子分析天平.
试剂：DPPH溶液(日本东京化成株式会社生产,AR,紫色结晶)；无水乙醇；磷酸二氢钾, 氢氧化钠、抗坏血酸、硫脲等均为分析纯.
材料: 芦荟、丹参、黄芩、金银花、甘草、丁香提取物（巨邦植物原料有限公司）.
1.2 实验方法［9-10］
准确称取DPPH试剂0.035g,用95%乙醇(分析纯)溶解,并定量转入500mL容量瓶中,用95%乙醇定容,摇匀得浓度为0.1777mmol/L DPPH贮备液,置于冰箱中冷藏备用.
在10mL比色管中依次加入4.0mL 0.1777mmol/L DPPH溶液和4.0mL pH=6.88标准混合磷酸盐缓冲溶液混匀, 再加入一定量抗氧化剂溶液,蒸馏水补充体积至10.00mL 刻度，充分混匀，10min后用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，分别加了不同抗氧化剂量反应后吸光值记为Ai，不加DPPH只分别加了不同抗氧化剂量及缓冲溶液反应后吸光值记为Aj，不加抗氧化剂只加DPPH及缓冲溶液反应后吸光值记为Ac.按式(1)计算自由基清除率(K)：
K（%）=1-Ai-AjAc×100%.（1）
2 结果与分析
2.1 不同种类的天然药物提取物与DPPH反应的时间关系［11］
选取2种天然药物提取物:丁香和金银花提取液稀释成0.5,1,2mg/mL与DPPH溶液反应，与实验室常用的抗氧化物质：抗坏血酸，硫脲作对照，测定不同时间DPPH剩余量.实验中 DPPH初始浓度为0.07108mmol/L.
从图1~4中，我们可以得出结论：4种药物对DPPH的消除作用时间确定在10min以内，因为在10min以内，不管抗氧化剂加入量多少，DPPH的剩余率呈大幅度下降，4min后接缓；在清除DPPH的效果中，清除率最大的药物是抗坏血酸，其次为硫脲，最后为丁香，这主要是由于抗坏血酸、硫脲为纯药品，而且纯度是分析纯，效果要好于一般的提取物，本实验所用丁香、金银花为天然药物，成分相对于前2种药物成分复杂，因此抗氧化作用不如前二者好.
2.2 不同药物清除DPPH自由基效果比较［12］
从图5可以得出结论：各药物对DPPH的清除率与各药物的加入量均呈近似线性关系.随着药物加入量的增加，药物对DPPH的清除率K不断增大；从图5中可以看出这几种物质单位质量清除DPPH自由基能力的大小顺序为：抗坏血酸、硫脲、丁香、金银花、芦荟、甘草、丹参、黄芩.
3 结语
通过测定芦荟、丹参、黄芩、金银花、甘草、丁香6种天然药物和抗坏血酸、硫脲2种纯药对DPPH自由基的清除率，并比较清除率曲线可以得出：抗坏血酸、硫脲、丁香3种药物对DPPH自由基的消除效果要好于其他药物，丁香因其为天然药物，可以作为一种安全、无毒的抗氧化剂来使用.
参考文献:
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