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历史传奇故事范文1
传媒实施股权激励的难点
从我国传媒目前的现状来看,媒体实行股权激励有一定难度。
首先,传媒属性决定了媒体不能完全实行股权激励。我国媒体的定位是“事业性质,企业管理”,从所有权上来看,报纸、广播、电视等媒体属于国有资产,所有权属于国家,不允许私人拥有。从传媒的根本性质来看,媒体是“党和人民的耳目喉舌”,这就决定了媒体的新闻采编部门必须遵守党的新闻报道方针,坚持党性原则。所以,媒体的采编部门不能实施市场化运作,不能进行股份制改革,显然也无法实施股权激励。
其次,从法律角度讲,我国绝大多数传媒尚不具备实施股权激励的条件。虽然我国目前部分传媒已经进行了股份制改革,但这部分媒体属于国家指定的试点媒体,首先国家要绝对控股,其次它们所占比例微不足道。另外,这部分改制媒体只是经营部门可以实施股份制改革,其采编部门仍然是。虽然去年4月18日,我国出现了全国首家整体实施股份制的新闻媒体――中国保险报股份有限公司,股权结构中国有资产占51%。但这家报纸是一份行业报,其采编部门不涉及新闻舆论的宣传。
再次,股权激励是一种风险性较高的激励,股票价格的变动是市场多种因素共同作用的结果。媒体经营效益良好,并不一定能保证其股价的上涨。宏观经济疲软仍然会造成股价的低靡。同时,股票市场上还可能存在操纵市场的行为。这些因素都导致了股价的非理性。股价的非理性使得股权激励的有效性大大降低。
虚拟股权激励的作用分析
作为股权激励的一种方式,与薪酬激励和精神激励相比,虚拟股票期权激励比较特殊,它既可以看作是物质激励,也可以看作是精神激励。
虚拟股票期权激励作为物质激励的一面,体现在享有一定股权的员工可以获得相应的剩余索取权,传媒员工以分红的形式享有虚拟股票的现价与签约时的原价的差价。虚拟股票期权激励作为精神激励的一面,体现在享有一定股权的员工可以享有特定的产权,以所有者身份出现的员工在工作中,会减少道德风险和逆向选择的可能性,这时,股权激励起到的是精神激励的作用。
另一方面,媒体应事先确定虚拟股票运用的范围,是对全部传媒员工进行激励,还是对部分核心员工进行激励。电广传媒实施的股权激励对象包括公司的董事、监事、其他高级管理人员以及公司的骨干等;新加坡报业控股的雇员认购权计划,一开始仅限于7级以上的高级员工。后来,报业控股才扩大了股票认购权的范围,让公司各级职员参与。笔者认为,为了保证虚拟股票在精神激励方面的效果,虚拟股票只宜在核心员工中展开。这可以让所有传媒员工明确认识:虚拟股票是对优秀传媒人才的激励,它代表了一种“特权”,如果传媒员工想获得这种特权,就必须努力工作,取得高绩效。
实施虚拟股票期权的四个步骤
媒体在运用虚拟股票的激励手段时,可以按照以下四个步骤进行:
一、每年从年度利润中提取一定的资金作为专项激励基金。
媒体从每年的经营利润中拨出专项资金。在确定激励基金时,应注意激励基金的提取比例不能影响到媒体的扩大再生产,媒体应该在满足下一年度的预期增长率的前提下,提取一定数量的资金。
二、确定每股虚拟股票的初始价格。
最简单的方法,就是在确定了发放虚拟股票的数量后,用激励基金的总额除以股票数量,从而得出初始价格。下一年度虚拟股票价格的确定,则应该与媒体的财务指标挂钩。这里可以使用经济增加值(EVA)的方法,来计算出每股净收益。虚拟股票期权就是把EVA(经济增加值)的思想融入股票期权制度中。经济增加值(EVA)的定义可用下列公式来表达:
EVA=税后利润-所有资本成本=NOPAT-WACC×投入资本=(ROIC-WACC)×投入资本
NOPAT为税后净经营利润 ,ROIC 为税后投入资本回报率,WACC 为加权平均资本成本。
当EVA>0时,媒体创造了价值;反之,媒体则亏损。依据EVA每年的增长率来确定激励基金的增长率,在股票数量确定的情况下,每股净收益的增长率和EVA的增长率就相同。在这种情况下,享有虚拟股权的员工就和媒体的利益一致。
三、与被激励的传媒员工签定契约,约定给予虚拟股票的数量、兑现时间、兑现条件,明确双方的权利和义务等。
实施股权激励的媒体会明确规定享有股票权利的员工所享有的权利。虚拟股票作为一种账面上的反映,媒体实施时更要明确享有虚拟股票的员工的权利和义务,以及兑现虚拟股票的条件,使虚拟股票和真实股票一样能够发生激励作用。
最后,被激励的传媒员工根据现期和预期媒体的收益,获取股权的增值收益。
一般企业对经理人的业绩评价根据经济增加值(EVA)来计算:
第t年:EVAt=(ROICt-WACCt)×投入资本
第t-1年:EVAt-1=(ROICt-1-WACCt-1)×投入资本
EVA=EVAt-EVAt-1
作为某一时段被激励员工的业绩考核的基础。其报酬计算公式可以根据一般公司的虚拟股票分红计算方式,即
红利=目标红利+y%(EVA-EI)
EI即预期EVA增量,(EVA-EI)即超额EVA增量。
这个公式依据EVA增量值计算出来的红利,可以提高“激励效果/成本”的比率,与EVA相比,EVA增量值可以与超额回报建立更直接的联系,适用于所有企业。依据这个计算公式,媒体的激励基金可以转换为经济增加值(EVA),其每年的增量就可以转换为EVA增量值,这样,传媒员工就可以以分红的形式享有虚拟股票的现价与签约时的原价的差价,获取其虚拟股权的增值收益。
历史传奇故事范文2
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历史传奇故事范文3
关键词:蒙古族 手工艺 历史 梳理 保护 展望
蒙古高原独特的自然地理环境和蒙古族与其自然环境和谐的生产生活方式决定了蒙古族手工艺的形成和发展。蒙古民族自古崇尚自然,顺应大自然,创造出适合其生存环境的,符合其生存规律和习惯的、表现共同思维和审美趋向的手工艺产品。
一、蒙古族手工艺历史发展
(一)蒙古族手工艺发展探源
“从众多历史资料里看,蒙古人用木材、泥土、骨骼、皮、毛、铜、铁和金银珠宝石来制作生活用具、化妆用具以及熟练锻造兵器可追溯到2000多年前。”
在古代,蒙古民族的手工艺水平达到了一定的高度,手工艺产品分类众多。出现木都沁(木匠)、铁木尔沁(铁匠)等手工艺工种。《蒙古秘史》中记载“……扎日其古代老人背着‘活日格’(冶炼用鼓风机),领着名为者力么的孩子……”。这段记载里我们不难看出当时出现了专门炼铁或者做金银器的工匠。
服饰工艺方面的记载:“……戴着旱獭冒、穿着鹿皮靴子和鹿皮绣边的袍子的孩子……”。《蒙古秘史》中还记载了领养“喜黑胡多”时对他的描述:戴了金耳环和鼻环,身穿貂皮做里子的绸子坎肩。
礼器或玩具(骨雕)方面,“铁木真在十一岁时与札木合结拜兄弟时,札木合给了铁木真黄羊‘沙噶’,铁木真用铜绣铸的啥‘沙噶’了札木合……”
这些表明在成吉思汗时期或之前就有了熟练的冶炼工艺,熟练制作出金银铜器和饰物,在制作木雕、服饰、皮具、骨雕,并用于生活中。
此外,制作“查干易得”工艺和制作他的器皿也达到很高的水平。如《布鲁布克东方行记》中写到:“酸马奶的制作方法如下。在两根插到地里的椿上,他们把一根绳子拉紧,上午九点钟左右时,他们把想要吃奶的马驹栓到这根绳子上……就这样,集聚了新鲜时与牛奶同样甜的大量马奶后,他们把马奶灌倒大牛皮或大罐子里,开始适用的木棒来撞击它,……由于他加有新鲜葡萄的酒那样地使舌头感到灼痛,而当人停止喝时,他在舌头上留下了扁桃仁乳的滋味,使人的内脏感到很舒服,衰弱的头脑甚至会陶醉……”。
(二)蒙古族手工艺行业经营模式
历史文献中,虽然有过统治者组建的手工业作坊,而手工艺者主要分散在个体形式的手工艺作坊。
“10-12世纪的蒙古汗国不仅以畜牧业为主导,还有在他们生活中显著地位的的人们日常生活所需的小型工艺产品,虽然城池的手工业规模不大,但生产着日常必需品。”
在成吉思汗时期,曾有过由统治者组织的服饰加工点。《蒙古秘史》中写到“大汗选12000大臣,每个人鉴赏13件服饰并这十三件衣服颜色都不同。服装上镶嵌珍珠、宝石和其他珍贵物件,显得十分华丽尊贵。大汗也有13件服饰,但更尊贵……;这是动物皮毛里最为珍贵的……
“大汗还拿出上供的羊皮、丝绸、麻、线等物体的十分之一,给穷人做衣服,在下令设置加工部,编制各种布料。”
“窝阔台汗在蒙古地区增设许多手工工场,在那里工作着蒙古地区内外的2万多工匠。”窝阔台汗支持发展手工艺、工场。当时有手艺的俘虏有着比其他俘虏较高的地位,赦免他们并安排在各个手工作坊。
“清朝时期家庭为经营方式的手工业进一步得到了发展,主要生产日常生产生活用品,得到了牧民欢迎的商品”。“如多伦铜佛、器物,察哈尔的毡子,哈拉哈大库伦蒙古工匠做的马鞍、马车、木碗、蒙古刀、帽子、靴子等得到了当地人的欢迎”。
历史上曾存在过官方组织的制作兵器、生活器皿、服饰、冶炼等手工艺工场,满足当时的政治军事生活需要,同时存在着家庭为单位的手工作坊很普及。
历史上曾出现过官方经营的手工业工场,但纯粹蒙古族传统手工艺而言,还是小规模的团体经营模式和个人作坊的形式发展和传承。
家庭为单位的手工作坊的生产方式为传承手艺而言,有一定的积极意义,它能够整套的手工艺制作流程和技艺完整的传授下去。就制作服饰而言,制作者一般都掌握设计、裁剪、缝纫、纽扣等全套制作工艺。如果分工太细反而可能会使部分技艺丢失失传。
二、蒙古族民族手工艺保护展望
(一)保护好生态环境是蒙古族手工艺得以传承的物质前提
保护蒙古族手工艺,首先要保护她生成发展的土壤――蒙古高原的自然条件和生产生活方式。因为环境的变化直接影响蒙古族的生活方式,生活方式变了,思维方式也随之变化。历代蒙古人爱护草原,制定了众多保护草原的法规,在家庭教育中也有很多关于保护环境的教育。很多手工艺材料就地取材,和蒙古高原自然生态构成了良性循环的态势。
成吉思汗的《大扎撒》就有保护草原的水草、节约资源、保护动物等法律法规。诸如:保护水源,不得在河流中洗手,不得溺于水中。保护马匹,春天的时候,战争一停止就将战马放到好的草场上,不得骑乘,不得使马乱跑。 打马的头和眼部的,处死刑。保护草原,草绿后挖坑致使草原被损坏的,失火致使草原被烧的,对全家处死刑。
诸多法律法规,对于保护草原生态环境起到了关键作用,同时对民族手工艺的发展,提供了发展平台。如:蒙古族手工艺原材料一般从他们生存生活环境地域里取材,用牛角和羊等动物骨骼做的酒杯、梳子、火柴盒、烟盒、刀柄、奶嘴、鼻烟壶……等。蒙古族手艺中,木雕、皮具加工、做毡子等方面,大多为巧妙的应用物体的自然颜色。如,用白色羊毛制作的毡子上用黑色或棕色的羊毛巧妙的制作出吉祥图案。假如草原退化,不再有牛和羊,生产生活方式从此改变,那样是否还有民族传统骨雕等民族手工艺呢?
蒙古族手工艺具有实用和观赏的双重价值。在古代,人们在大多情况下主要从实用的角度选择或生产手工艺产品,满足他们的需要。目前,大多民族手工艺品因人们生产生活方式和自然条件的变化逐渐“失去”实用价值,更多人出于收藏观赏角度来选购手工艺产品。漂亮的马鞍很多情况下已成为博物馆或酒店的陈列物、家庭装饰物。
(二)保护好民族文化是蒙古族手工艺得以发展并走向未来的文化条件
保护草原,保护生产生活方式,保护民族文化,关系到草原文化的兴衰,关系到民族手工艺的长期发展。
民族手工艺是民族文化的一种体现,民族文化保护和发展,有利于民族手工艺的发展。
蒙古族生存自然环境和生活习惯等能够直接影响本民族文化的发展。失去了民族文化特征,便失去了手工艺。蒙古高原独特的自然环境和生产生活方式,造就了手工艺的形成和发展。“艺术来源于生活,艺术高于生活。”形成发展的根源失去了手工艺也随着消失,民族手工艺品也逐步走入博物馆。
(三)符合实际的政策措施是蒙古族手工业发展的根本保障
在古代,《大扎撒》里曾记载关于保护手工业和保护经商者利益的法律。“以信托资金经商累计三次亏本的,处死刑。每个人不论贫富与贵贱都平等劳动。”
成吉思汗、窝阔台汗时期,重视经济交易,扶持激励。另外减免了外来的经商者的税,保护他们的利益和安全等方法来激励他们。同时严格打击不公平交易。
当下,应适时完善民族优秀手工艺保护的政策法规,为民族手工艺的传承和发展保驾护航。
保护不仅仅是“民族手工艺品请进博物馆,展览馆”,将文物当欣赏品来对待,如今马鞍、勒勒车、头饰、金银器具等蒙古族日常生活用具,或者在家中的装点架上,或者在展览馆中多见,成为旅游景物。要保护好她的生长的发展的“土地”,保留生产生活方式,其实更为迫切。
手工艺经营者也要意识必须走出“等、靠、要”的思维误区。
我们要结合相关行业,发展畅销手工业产品的途径。随我区经济发展目前草原旅游业也得到了快速发展。 “目前草原旅游产品整体上仍以观光旅游为主,休闲度假旅游专项等仍属于起步阶段,旅游市场的影响力有限。因此,加大草原度假旅游、温泉度假旅游、探险旅游、自然生态旅游等旅游产品开发,使单一的草原观光旅游产品向度假、休闲产品及各种专项旅游产品拓展”。 要借助民族文化大区的建设和西部大开发的良机,不断挖掘发展民族文化,发展独特的民族手工艺。
保护好民族手工艺,要保护它的生成发展的自然环境和民族文化资源.我们要吸收先进文化,同时不断挖掘传统民族手工艺精华,在民族手工艺的文化价值和经济价值方面,能够有所突破。
参考文献:
[1]赤老温・达来.蒙古历史[M].内蒙古人民出版社,2010.
[2]阿古拉泰阿日达扎布编.现代蒙古语版蒙古秘史[M].2007.
[3]迦儿宾著,余大钧译.普兰.迦儿宾行记[M].内蒙古大学出版社,2009.
[4]乌云毕力格,白拉都格其主编.蒙古史[M].内蒙古大学出版社, 2008.
[5]大扎撒.promise0605 baike.省略/view/689173.htm 2010-07-16
历史传奇故事范文4
关键词:Alpha注油器 故障分析 消除失效
Alpha电子气缸注油器系统从上世纪末研发推广至本世纪初,已普遍应用于现代船舶柴油机上,取代了传统的机械式气缸注油器。由于它的注油频率与主机转速是正比例关系,而柴油机的功率与转速是三次方正比例关系,从而很难按实际工况的变化比较柔和地调节注油率。与其相比,电子气缸注油器系统的主要特点是由液压驱动和电子控制,供油数量无级调节精确方便,准确的喷油定时,恒定的注油压力,按照进入气缸的燃油中所含硫量成百分比例和机器负荷二个原则来设定最佳气缸油的精确供应量,以细小微粒状喷射,更加完美均匀布油在缸套四周,柔和的控制在确保满足基本良好气缸壁需要的条件下明显减少气缸油过多消耗,降低气缸套单位时间的磨损量,能有效节约昂贵的气缸油。在世纪交替之际建造的船舶主机上,广泛应用Alpha气缸注油器,有些船东在早期船舶主机已有机械式注油器的基础上,改加装一套Alpha电子注油器以节省气缸油消费。Alpha电子气缸注油器系统基本组成单元简图如图1。
ALCU-Alpha注油器控制单元箱内有三部分组成:
1、MCU-主控制单元执行正常运行。 2、BCU-备用控制单元在主控制单元万一发生电故障时将自动从主控单元控制方式转至备用控制单元控制并同时发出警报3、SBU-将全部电信号从主控单元传至备用控制单元。
HMI panel: 人机界面控制板安装于机舱集控室控制台上,执行给予警报信息、供油比例调节、启动主机前的检查等控制。
Encoder:安装在主机曲轴前端用于主控单元计算气缸油正确喷油定时。Index transmitter:连接在主机油门杆上用于主控单元计算主机负荷等。
BCU pickup box:安置在主机飞轮旁一组脉冲传感器是用于万一主控单元故障时而触发备用单元启动。
Pump station: 使气缸油增压达40~50bar,由Alpha注油器控制单元控制在高压状态下进行注油。
LS轮主机型号HHM-MAN B&W 7S60MC-C,最大持续功率(MCR)22651.26BHP-105 RPM,持续服务功率(NCR)20386.13BHP-101.4 RPM,配置MAN B&W DIESEL制造的ALPHA电子气缸注油器:每缸只设一组注油器,每只注油器设一个电磁阀,一个驱动活塞,六个注油器柱塞泵;柱塞泵柱塞直径为3.5mm,冲程15mm,注油容量0.84 cm3/冲程,六个注油管以及连接到气缸壁上的单向止回阀。
该轮是一艘新出厂仍然在保修期内的集装箱船,在实际应用中所遇故障和消除,各种设备难免在磨合阶段出现些许问题,而且每缸只安装一个注油器,发生故障时,非常紧迫。一旦故障报警,主机自动减速后,需要停车进行检修,不如主机每缸有双注油器来得安心。当一个注油器发生故障报警,主机自动减速,同时另一个注油器会自动加大一倍注油量供油,可以在不停主机情况下,只需关闭注油器进口阀来进行检修,待故障排除后,即可恢复正常工作状态。
主机备车时,在HMI控制板上手动启动【pump1】或【pump2】油泵检查核实本系统正常状态,通过使用【】【】键可查看油压,油温,故障代码等参数。观察油压应达约45bar (报警值为35bar),气缸油温度,正常值:
30℃~60℃,70℃为报警值。系统故障试验;按下【Prelub】按钮,泵站立刻投入运行,注油器将气缸油分别注入每一个单元气缸12次,(每当主机停车时间较长,可将鼓风机AUTO转至STOP再转回AUTO可实现一个预注油12次的循环)。首先机器在启动前给予各气缸套预先,其次如HMI控制板上没有出现任何警报,证明系统正常一切准备就绪。在主机启动前辅助鼓风机不管驾驶台/集控室自动/手动控制或机旁现场控制只要辅助鼓风机启动时,电子气缸注油器预将被激活自动投入工作,此时【Prelub】按钮已失去效能。在HMI人机控制面板上控制开关应放在自动位置“AUTO”,系统默认由“MCU”主控制单元执行正常运行方式控制,万一“MCU”发生故障时将自动从主控单元控制方式转至“BCU”备用控制单元控制并在面板上“BCU控制”灯亮同时发出警报声,假如HMI人机控制面板上控制开关仅仅放在“MCU”或“BCU”任一方式下只是受控于各自的系统,一旦自己的系统发生故障,只能给出本系统故障报警且主机自动减速。
在管理中应按需及时调节供油比例,如新出厂主机在磨合阶段根据说明书运行小时要求需逐渐减少气缸油供油比例,当检修更换新活塞令或新缸套时也需重新调整增加和减少合适的气缸油供油比例。在HMI控制面板上按【】键至显示为【F.rate】按【enter】键选择所需调整缸单元按【、】键进行供油量调节、保存即可。同样当本系统检测到任何紧急或非紧急警报时,在机舱内同时出现声光警报,在HMI控制面板上会显示相应的警报地址代码,查看警报详细故障内容来实施处理。
历史传奇故事范文5
【摘要】
通过交联剂将葡萄糖氧化酶(GOD)固定在Fe3O4磁性纳米粒子上,在磁力作用下将该磁性复合粒子修饰在石蜡碳糊电极(SPCE)表面,制成易更新酶电极。GOD催化氧化葡萄糖生成过氧化氢,并使鲁米诺产生电致化学发光(ECL),据此首次构建了易更新型电致化学发光葡萄糖传感器。其电致发光强度与葡萄糖浓度在1×10-5~1.0×10-2 mol/L范围内呈线性关系,线性回归方程I=65.4374C+23.9017(r=0.9987); 检出限为1.0 μmol/L。此传感器响应快, 稳定性高, 表面易更新,已用于测定人血清中葡萄糖的含量。
【关键词】 电致化学发光; 磁性纳米粒子; 葡萄糖氧化酶; 鲁米诺; 化学修饰电极
Abstract A novel NanoFe3O4 particles biosensor for glucose based on luminol electrochemiluminescence (ECL) is presented. Glucose oxidase (GOD) was covalently crosslinked to the surface of synthesized magnetic nanoFe3O4 particles. Then the composite particles Fe3O4/GOD was adhered to solid paraffin carbon paste electrode by magnetic force to fabricate a working electrode. Hydrogen peroxide was produced by enzymatic reaction of GOD and ECL could be obtained by the reaction between luminol and hydrogen peroxide to construct the renewable glucose biosensor. There was a linear relationship between ECL and glucose concentration in the ranges of 1×10-5-1.0×10-2 mol/L with a regression equation of I=65.4374C+23.9017(r=0.9987), and the detection limit is 1 μmol/L. The ECL biosensor has showed short response time and high stability, and the electrode surface was renewable easily. The proposed biosensor has been applied to the determination of glucose in plasma samples.
Keywords Electrochemiluminescence; Magnetic nanoparticles; Glucose oxidase; Luminol; Chemically modified electrode
1 引 言
电致化学发光(ECL)是在化学发光的基础上,结合电极反应发展起来的一种化学发光法[1~3]。利用葡萄糖氧化酶(GOD)催化氧化葡萄糖生成H2O2可以构建葡萄糖ECL传感器。在ECL葡萄糖传感器研究中,GOD的固定方法是一个重要课题。常用的酶固定化方法有吸附法[4]、包埋法[5]、共价键合法及交联法[6,7],电化学聚合法[8]。这些方法制备ECL酶传感器过程烦琐、复杂,电极表面敏感膜不易更新。
在酶传感器中采用纳米材料为载体,不仅可以增加酶的固定量和稳定性,而且还可以提高酶的催化活性,进而提高酶电极的响应灵敏度[9]。Fe3O4磁性纳米粒子具有纳米粒子的诸多优点,又具有非常好的生物相容性,在外加磁力的作用下能非常方便地实现电极敏感膜的更新,故在酶传感器研究中得到了广泛应用[10~17]。但是在ECL葡萄糖传感器中,使用Fe3O4磁性纳米粒子固定GOD还未见报道。本研究通过交联剂将GOD共价固定在Fe3O4磁性纳米粒子表面,再通过磁力将此固载酶的磁性纳米粒子修饰在SPCE表面,从而制成了易更新的酶传感器,并用于葡萄糖的ECL分析。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
MPIE型电致化学发光分析系统(西安瑞迈分析仪器有限公司); M1703型红外光谱仪(PerkinElmer公司); 三电极系统:工作电极为自制的磁性纳米粒子固定酶修饰电极(GOD/Fe3O4/SPCE/CME),参比电极为Ag/AgCl饱和KCl电极,铂丝为对电极;Bransonic200超声清洗仪(德国Branson Ultraschall公司);pHS2C型精密酸度计(上海雷磁精密仪器有限公司)。
3氨基丙基三乙氧基硅烷(APS,98%, Alfa Aesar公司);葡萄糖氧化酶(GOD,120 U/mg,Sigma公司);标准葡萄糖储备液,放置过夜后使用,保存于4 ℃冰箱中。鲁米诺(>98%,Fluka公司); 戊二醛(25%,上海化学试剂厂);其它试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水(18.2 MΩ·cm)。
2.2 酶传感器的制作
2.2.1 固体石蜡碳糊电极的制作
参考文献[13],取3 cm长的铁棒(外径 2.55 mm)和2 cm长的玻璃管(3.0 mm i.d),磨平铁棒和玻璃管的两端,用水洗净。按一定比例混合固体石蜡和碳粉,加热熔化石蜡,均匀搅拌,制得石蜡碳糊。把铁棒插入玻璃管中距底部约0.5 mm,形成一个凹坑,趁热将石蜡碳糊封装进此凹坑,填平,冷却,除去玻璃壁外的沾粘的碳糊,并在光滑打印纸抛光电极表面。然后分别用HNO3(1∶1, V/V)、无水乙醇和二次蒸馏水清洗电极。在1.0 mol/L H2SO4溶液中采用循环伏安(CV)法活化作为工作电极的SPCE,扫描范围1.2~-1.2 V。再于5 mmol/L K3Fe(CN)6溶液中循环扫描,扫描范围改为0.5~-0.2 V。重复上述步骤直至得到峰形良好的一对可逆氧化还原峰。
2.2.2 磁性纳米粒子的制备、氨基化和葡萄糖氧化酶修饰
按照n(Fe2+)∶n(Fe3+) = 1∶1.75称取适量FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O,溶于水中。搅拌下快速加入适量 2.0 mol/L NaOH溶液,调pH值至11.0,室温下搅拌0.5 h,迅速升温到75 ℃,熟化0.5 h,整个过程都在氮气的保护下进行,得黑色悬浮液。超声15 min,磁铁分离不溶物,用水洗涤至溶液呈中性。在75 ℃下真空干燥,得粉末,4 ℃下密闭保存在。
取20 mL乙醇,加入50 mg Fe3O4纳米粒子粉末,超声分散,之后加入0.2 mL 3氨基丙基三乙氧基硅烷(98%),在氮气的保护下,25 ℃搅拌12 h制得氨基化的磁性纳米粒子,用无水乙醇、水超声清洗后定容至20 mL备用。
取2.0 mL上述溶液于5 mL试管中,晾干,再于试管中加入2.0 mL 0.25%戊二醛,混旋30 s后,放入4 ℃冰箱冷藏1 h,之后水洗并晾干,再加20 g/L GOD溶液2.0 mL,于4 ℃冰箱中保存12 h,制得GOD修饰的磁性粒子溶液(GOD/ Fe3O4)。图1为磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶的示意图。
2.2.3 自组装磁性纳米复合粒子修饰电极
SPCE电极面朝上,用磁铁吸住电极上端铁芯,滴加15 μL GOD/Fe3O4粒子在电极表面,制得酶修饰电极(GOD/Fe3O4/SPCE/CME)。测定时将电极面对准光电倍增管检测方向。每次更新电极时,移去磁铁,水洗去磁性复合粒子,之后重复上述过程以更新电极。
2.3 ECL传感器原理和实验方法
ECL传感器的原理如图2。GOD/Fe3O4复合磁性纳米粒子通过外加磁场而修饰在SPCE电极表面。此时,溶液中的葡萄糖与溶解氧发生GOD酶促反应,生成H2O2。同时,溶液中的鲁米诺在修饰电极表面发生氧化,鲁米诺氧化物与H2O2发生ECL反应。GOD/Fe3O4复合磁性纳米粒子的存在促进了鲁米诺的氧化和H2O2生成。在本实验中,室温下,将10 mL含一定浓度的葡萄糖的0.5 mmol/L鲁米诺 0.1 mol/L硼酸钠缓冲溶液(pH=8.0)转至石英烧杯中,然后采用三电极系统进行测试,并测定ECL的强度。扫描范围为0.2~1.4 V(vs. SCE),扫速为50 mV/s。光电倍增管高压600 V,采样速率10 T/S,放大倍数3,测量时间60 s。SPCE不用时置于冰箱中4 ℃下保存。
3 结果与讨论
3.1 Fe3O4纳米粒子的表征
3.1.1 Fe3O4纳米粒子粒度分析
用激光散射仪(英国Malvern公司)测定Fe3O4纳米粒子粒径。从图3可见,本实验所制备的Fe3O4磁性粒子粒径主要分布在12~22 nm之间。说明磁性纳米粒子已经达到纳米级,且粒径分布较为集中,因此,可用于后续实验。
3.1.2 Fe3O4纳米粒子的氨基功能化表征
用红外光谱表征Fe3O4粒子表面氨基化修饰前后的变化。由图4可见,在Fe3O4粒子表面功能化修饰了氨基基团,Fe3O4粒子与氨基化Fe3O4粒子都具有Fe3O4粒子特征峰(583.235 cm-1);氨基化Fe3O4粒子具有SiO的伸缩振动特征峰(1409.675 cm-1)和氨基弯曲振动特征峰(1638.335 cm-1)。
3.1.3 酶复合磁性粒子的磁力测定
用振动样品磁强计(PAR115型)对移去磁铁而洗脱获得的酶复合磁性粒子进行磁力测量。复合粒子矫顽力较低,同时未见明显的剩磁和磁滞现象,其比饱和磁化强度σ仅为42.1 emu/g(图5)。由此可见,Fe3O4 /GOD复合粒子具有较强超顺磁性即在外磁场存在下有磁性,外撤除磁场则磁性消失,故可用于磁性分离。
3.2 酶电极的ECL行为
Fe3O4/GOD(a)和Fe3O4(b)粒子分别修饰的SPCE,在10 mL含0.1 mmol/L鲁米诺和1.0 mmol/L葡萄糖+0.1 mol/L硼酸钠缓冲溶液(pH= 8.0)中进行CV实验所得到ECL图(见图6)。实验条件:电位扫速为50 mV/s,扫描范围为0.2~1.4 V,采样速率10 T/S,放大倍数3。由图6可见,修饰在电极表面的Fe3O4粒子表面成功地共价固定了GOD,从而催化氧化葡萄糖生成鲁米诺ECL所需的H2O2。
3.3 缓冲液种类、pH值和温度的影响
研究了3种缓冲液: 0.1 mol/L硼酸钠、0.1 mol/L HAcNaAc和PBS(pH=8.0)作为支持电解质的影响。结果表明,0.1 mol/L硼酸钠缓冲溶液中ECL响应最高。
鲁米诺的ECL反应需在弱碱性条件下进行,考虑到葡萄糖氧化酶的生物活性受pH值影响较大,本研究考察了pH在7.0~9.5时ECL强度的变化。其中鲁米诺浓度为0.1 mmol/L,葡萄糖浓度为1.0 mmol/L。当pH=8.0时,鲁米诺的ECL强度最大,本实验选取pH=8.0。
酶的催化活性受温度影响较大。本实验用集热式恒温加热磁力搅拌器控制水浴温度,考察了20~60 ℃范围内酶电极的电流响应。当温度达到40 ℃时,响应最大。综合考虑温度对葡萄糖氧化酶电极寿命的影响,本实验均在室温25 ℃下进行。
3.4 鲁米诺浓度的影响
本实验考察了鲁米诺的浓度在0.01~1.2 mmol/L范围内对ECL强度的影响(图7)。由图7可知,随着鲁米诺的浓度由0.01 mmol/L增大到0.5 mmol/L时,溶液的ECL强度快速增大,之后趋于平稳饱和。因此,实验中鲁米诺的浓度为0.5 mmol/L。
3.5 葡萄糖的分析
取10 mL石英小烧杯,加入含一系列不同浓度的葡萄糖0.1 mol/L硼酸钠缓冲溶液(pH= 8.0)10 mL,此时鲁米诺浓度为0.5 mmol/L,按上述方法测定ECL的强度(图8)。葡萄糖在1×10-5~1.0×10-2 mol/L浓度范围内与ECL强度呈良好的线性关系:I=65.4374C+23.9017, r=0.9987; 检出限为1 μmol/L; 酶电极的响应时间约为10 s。
3.6 葡萄糖传感器的重现性、稳定性和选择性
通过移除ECL葡萄糖传感器上方的磁铁,用水冲SPCE电极表面,在0.5 mol/L HCl中清洗0.5 min,从而去除磁性复合粒子。重复2.2.2节的修饰过程,可实现磁性复合粒子的更新。每次电极更新后对1.0 mmol/L的葡萄糖进行测定,其RSD=3.9%(n=5)。而对于5批次相同条件下制得的传感器,其RSD=4.5%。考察一个月内组装有磁性复合粒子的工作电极对葡萄糖响应情况(不使用时,电极放置在4 ℃冰箱中保存)。结果表明,7天内电极响应基本不变,CV和ECL曲线形状也基本不变;14天后ECL强度约为原来的95%;1月后ECL强度下降85%。显然,用本实验方法固定GOD在Fe3O4纳米粒子表面,能在微环境下保持生物蛋白的活性,从而获得较好的稳定性。
考察了一些常见干扰物质对测定5.0×10-5 mol/L葡萄糖的影响。结果表明,10倍的尿酸和抗坏血酸对葡萄糖的检测的影响均
3.7 临床血清样品测试分析
按照实验方法对人血清样品(桂林理工大学附属医院提供)中葡萄糖的含量进行测定,结果见表1。结果表明,本方法测定结果与医院提供的临床分析结果相吻合。采用标准加入法测定了样品的回收率。表1 人血清中葡萄糖的测定及回收率实验结果(略)
从表1可见,测定结果与参考值基本吻合,回收率在95.2%~104%之间。说明本方法可用于临床样品的测定。
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历史传奇故事范文6
1、吕不韦传奇:(原名《乱世英雄吕不韦》),是周晓文导演并制作的一部古装历史传奇剧,由张铁林、宁静、吴军忱、高虎、陈好等主演。
2、东周列国:是一部62集的电视剧,由沈好放执导,王绘春等主演。全剧分为《东周列国·春秋篇》和《东周列国·战国篇》。其剧情主要是根据小说《东周列国志》改编,讲述了春秋战国时期的故事。
3、东周列国-春秋篇:通过精心收集考证,复原了两千多年来广为流传的有关春秋时期的典故及成语故事, 如:千金一笑、唇亡齿寒、赵氏孤儿、一鸣惊人、卧薪尝胆、孔夫子高山仰止、伍子胥过昭关等。