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质量标准范文1
【关键词】红芪胶囊;红景天苷;高效液相色谱法
红芪胶囊是由红景天、黄芪、红参、山药等中药的提取物加工制成的胶囊。近年国内外研究表明高山红景天具有滋补强壮、抗缺氧、抗疲劳、抗衰老及增强脑力、体力机能等方面的特殊功效[1,2]。红景天中红景天苷为其主要活性成分之一[3,4],红景天苷的化学结构[5]和药理作用[6]较为明确。本实验参照文献[7,8]采用HPLC法对红芪胶囊的主要活性成分红景天苷的检测方法进行了研究。本方法结果准确,灵敏度高,可作为红芪胶囊的质量控制。
1仪器与试药
日本岛津LC210Atvp高效液相色谱;SPD210A紫外-可见检测器;N-2000色谱工作站;分析天平;甲醇(色谱纯);水(重蒸馏水);红景天苷对照品(中国药品生物制品检定所);红芪胶囊(自制)。
2方法与结果
2.1色谱条件流动相:甲醇-水(15:85);检测波长:223nm;流速:1ml/min;进样量:5μl;柱温:45℃。
2.2对照品溶液的制备精密称取红景天苷对照品适量,加甲醇制成1ml含0.108mg的红景天苷溶液。
2.3供试品溶液的制备取本品适量,研细,精密称取0.35g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10ml,密塞,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,放置,取上清液经微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作供试品溶液。
2.4阴性对照液的制备按处方比例称取红景天外其他组分,按供试品溶液制备方法制备即得。
2.5阴性液干扰试验精密吸取供试品液、阴性对照液和对照品液各5μl注入液相色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的包谱峰出现;而阴性液在此峰位无吸收,对本品中红景天苷的测定无干扰。色谱图见图1。
图1色谱图2.6标准曲线的绘制精密吸取红景天苷对照品溶液(0.108mg/ml)1、2、3、4、5、6、7ml各置于10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各取5μl注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定色谱峰面积。以色谱峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归,其回归方程为A=743222X+414.06,r=0.9997。结果表明,在此色谱条件下,红景天苷在进样量为0.054~0.378μg范围内,其重量与峰面积呈良好的线性关系。
2.7精密度试验精密吸取2.3项下配制供试品溶液5μl,连续进样6次,测得红景天苷色谱峰面积,计算相对偏差RSD为1.65%。
2.8重现性试验精密称取样品6份,按2.3项下配制供试品溶液,分别进样5μl,测得红景天苷色谱峰面积,计算相对偏差RSD为1.22%。
2.9回收率试验精密称取同一批已知红景天苷含量的样品6份,精密加入红景天苷对照品,按2.3项下配制供试品溶液,按2.1项下色谱条件测定,结果见表1。表1回收率试验(略)
2.10样品含量测定取样品3批,按2.3项下方法配制供试品,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱仪,按2.1项下色谱条件测定,以外标法计算每粒胶囊中红景天苷的含量,结果见表2。表2样品中红景天苷含量测定(略)
3讨论
红景天苷甲醇液经波长扫描,在223nm处有最大吸收,故以223nm作为测定波长。本试验选用高效液相色谱条件,分离效果好,阴性无干扰,精密度方法、稳定性均符合要求,回收率高。
【参考文献】
1丁树利,朱兆仪.滋补壮阳中草药红景天属植物研究进展.国外医学·植物药分册,1992,7(5):198.
2张无敌,刘世清.藏药红景天的开发利用.中国民族民间医药杂志,1995,12:7-8.
3徐宝军,郑毅男,李向高,等.红景天属植物研究新进展.中药材,2000,23(9):580-584.
4王曙,王峰鹏.红景天属植物化学成分研究概述.天然产物研究与开发,1991,3(4):58-65.
5吴维春.长白山珍贵药用植物高山红景天.长春:吉林科技出版社,1987,86.
6徐宝军.红景天属植物研究新进展.中药材,2000,23(9):580-582.
质量标准范文2
【关键词】 妇舒丸 质量标准 高效液相色谱法 丹皮酚
妇舒丸是由当归、川芎等二十三味药组成,具有补气养血、调经止带作用,临床常用于气血凝滞,子宫寒冷,月经不调等病症。原质量标准中未制含量测定项目,薄层鉴别项目较少,在对本品进行质量标准研究后,新增了对本品处方中甘草等药味的薄层鉴别, 并采用高效液相色谱法对牡丹皮、白芍所含丹皮酚进行含量测定。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10AT VP 高效液相色谱仪,SPD-10A VP 紫外检测器,7725i手动进样器,浙江大学N2000色谱性。
数据工作站,丹皮酚化学对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0708-200304,规格:供含量测定用)。所用试剂均为色谱纯和分析纯。
2 甘草的定性鉴别
取本品6g,加硅藻土3g,研匀,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,用乙醚提取2次,每次10ml,弃去乙醚液,用水饱和正丁醇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,用10%氨水提取2次,每次10ml,弃去正丁醇液,氨水液用5%盐酸调至酸性,用水饱和正丁醇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g,加甲醇同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液15μl、对照药材溶液5μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯—甲酸—冰醋酸—水(15:1:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇—水(55:45)为流动相;检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5000。
3.2 对照品及供试品溶液的制备
3.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。
3.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品约15g,精密称定,加硅藻土10g,研碎,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇100ml,密塞,称定重量,超声处理(功率150W,频率40kHz)45min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,精密量取2ml,置10ml容量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,即得。
3.2.3 阴性对照品溶液的制备及测定 取不含牡丹皮、白芍的处方,按制备工艺制成缺牡丹皮、白芍的阴性对照品,再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。按含量测定方法测定,结果表明本法具有良好的专属性。
3.3 线性关系考察 精密吸取丹皮酚对照品溶液2、5、10、15、20μl注入液相色谱仪,以进样量(μl)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,丹皮酚的回归方程Y=54460.79X+20892.87,r=0.9996。由此确定丹皮酚线性范围为0.0429-0.4292μg。
3.4 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液各5μl, 分别注入液相色谱仪,连续进样5次,依法测定,记录峰面积积分值,计算,考察精密度。结果RSD为0.40%,表明机器精密度较好。
3.5 重复性试验 精密称取同一批样品共5份,按供试品溶液项下制备方法,依法独立测定,测定样品含量,以考察本法的重现性。结果RSD为2.61%,表明该方法重现性良好。
3.6 加样回收率试验 精密称取同法测定的已知含量样品(627.74μg.g)共5份,分别精密加入对照品(21.46μg.ml)10ml,依法测定,计算回收率。结果丹皮酚平均回收率97.71%,RSD=1.45%,表明本法准确性较好,方法可行。
3.7 稳定性试验 精密吸取同一对照品溶液、同一供试品溶液各5μl,每隔一定时间分别注入液相色谱仪,依法测定,以丹皮酚峰面积积分值为指标,测定其稳定性。结果在0-36h内丹皮酚对照品和供试品的RSD分别为2.32%和2.39%,表明在此时间范围内对照品溶液和供试品溶液具有良好的稳定性。
3.8 样品测定 取样品3批,批号050401、050402、050403,按供试品溶液制备方法处理,照上述含量测定方法测定。3批样品含量(mg.g)测定结果分别为0.5747、0.5394、0.6080。
4 讨论
4.1 本制剂成分复杂,甘草、延胡索、黄芩的薄层鉴别,曾试用多种提取方法和展开系统,色谱都不太清晰。经实验摸索,使用文中所述条件后,分离效果好,显色清晰,阴性对照品无干扰。
4.2 在含量测定供试品溶液制备中,根据被提取成分丹皮酚的溶解性,采用70%甲醇为提取溶剂。分别选择超声提取法和加热回流提取法提取,结果超声提取法与回流提取法的提取效率相近,故选择超声提取,操作简便易行。因本品为水蜜丸,粉碎困难,且有效成分不易提取完全,故将本品与适量硅藻土混合后再进行粉碎,便于粉碎和有效成分的提? ?
根据中国药典(2005版一部)中牡丹皮项下的丹皮酚测定方法,选择甲醇—水(55:45)作为流动相,分离效果较好,丹皮酚峰与其它峰达到了良好的分离度(R>1.5),故采用此色谱条件进行含量测定。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:化学工业出版社,2005.
质量标准范文3
[关键词] 露兜;性状;显微鉴别;薄层鉴别;质量标准
[中图分类号]R282.5 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)04(b)-044-02
Study on the quality standard of Pandanus tectorius (L.) Parkins.
XIAO Qi-shan, XU Run-juan, LIU Ting-feng
(Zhongshan Institute For Drug Control, Zhongshan 528437,China)
[Abstract] Objective: To establish the quality standard of Pandanus tectorius(L.) Parkins.. Methods: Morphological characteristics were observed on Pandanus tectorius(L.) Parkins.. Microscopic identification of cross section and powder characteristics was used simultaneously. And then we used thin layer chromatography as a special identification. Results: There were obvious microscopic characteristics about the morphology and the powder on Pandanus tectorius(L.) Parkins.. Spots on TLC were distinct with preferable resolving power. Conclusion: The method is simple and specific. It is able to be applied for the quality control of Pandanus tectorius (L.) Parkins. effectively.
[Key words] Pandanus tectorius (L.) Parkins.; Microscopic identification; Thin layer chromatography; Quality standard
露兜别名露兜、露兜根、勒角、茄骨、猪锯、老锯头、吹拖髻,为民间常用中草药。《纲目拾遗》“露花粉”条引《粤志》云[1]:“露花生番禺蓼涌,状如菖蒲,其叶节边有刺,叶落根以火之,成枝干而多花。花生丛叶中,其瓣大小亦如叶,而色莹白,柔滑无芒刺,花抱蕊心如穗,朝夕有零露在苞中,可以解渴,又有粉可入药,其生于土者,蕊落结子,大如瓜,曰路头花,多不香,惟露花盛夏时露花始熟,以花覆盆盎晒之,香落茶子油中,其气馥烈,是曰露花油。”主产于广东、广西、海南、云南、贵州、福建、台湾等地。本文通过对露兜的外观性状、显微特点、薄层色谱鉴别等的研究,建立了露兜的质量标准。
1 仪器与试药
显微镜数码相机系统(日本奥林巴斯公司);薄层色谱数码摄影系统(瑞士卡玛公司)。露兜工作用对照药材(中山市恒生药业有限公司提供);露兜药材(中山市恒生药业有限公司提供);硅胶G(青岛海洋化工厂);其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 性状
本品茎和根茎呈圆柱状,长20~40 cm,直径3~8 cm;表面灰黄色,有纵皱纹;表皮薄而浮离,易剥落,脱皮处显棕黄色至棕色;质坚韧,不易折断,断面纤维性;皮部狭窄,木部宽广,黄白色,维管束易离散呈丝状;根茎侧面着生根。根呈长条状,略弯曲,常折裂;长30~50 cm,直径1~3 cm;表面灰黄色,有纵皱纹;表皮薄而浮离,易剥落;质坚韧,不易折断,断面纤维性;皮部狭窄,纤维较细小;木部宽广,黄白色,易与皮部分离。气微,味甘淡。以根条均匀、打扁折裂、色黄白者为佳。见图1。
2.2 显微鉴别
2.2.1 露兜根及根茎的横切面见图2。
2.2.2 露兜粉末显微特征见图3。
2.3薄层色谱鉴别研究
2.3.1指标成分类型的确立露兜具清热、治感冒之功效[2],通过成分预试,确立以黄酮类化合物作为其鉴别的指标成分。另外,黄酮类化合物在植物中多以苷和苷元的形式存在[3],而黄酮苷元一般是极性较弱的化合物,使用正相吸附薄层色谱法进行分析,常得到较好的分离效果,固定相一般选用硅胶G。
2.3.2 露兜的薄层色谱鉴别方法取露兜粉末2 g,加乙醇30 ml,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取露兜对照药材2 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(6∶1)为展开剂,预饱和15 min,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热5 min,置紫外光灯(365 nm)下检视(T=30℃,RH=60%)。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图4。
2.3.3 10批供试品的检验分别取10批供试品,照“2.3.2”项下的方法进行检验(T=25℃,RH=60%)。见图5。
3 讨论
3.1色谱条件的研究
3.1.1固定相分离黄酮类化合物多用硅胶G作固定相,通过吸附色谱获得较好的分离效果。
3.1.2 展开剂黄酮苷元多选用非极性展开系统进行分离。选择以环己烷-乙酸乙酯(6∶4)作为展开剂,进行试验。在接近展开剂前沿的位置处,供试品和工作对照药材的色谱均显一蓝色荧光主斑点,显示这是露兜的特征斑点;调节展开剂中环己烷和乙酸乙酯的比例,以环己烷-乙酸乙酯(6∶1)作为展开剂分离效果最佳。
3.1.3显色和检视方法黄酮类成分喷以1%三氯化铝乙醇溶液可显色,在105℃下加热片刻后,在紫外光(365 nm)下观察荧光。
3.2 耐用性的研究
3.2.1 改变薄层板种类分别选用自制手铺硅胶G板、进口MN的普通硅胶G预制板、青岛海洋化工厂的普通硅胶G预制板等三种不同种类的薄层板,照“2.3”项下的方法进行试验考察方法的耐用性,结果显示以上三种类型的薄层板均能有效分离出露兜的特征主斑点,且分离效果均较好。
3.2.2改变点样量分别以3,5,7 μl的点样量进行点样,照“2.3.2”项下的方法进行分析,考察方法的耐用性。在以上3种点样量的供试色谱中,露兜的特征主斑点均能有效分离,显示本方法对点样量的微小变动具有耐用性。
3.2.3改变展开剂比例分别选用环己烷-乙酸乙酯(5∶1)、环己烷-乙酸乙酯(6∶1)、环己烷-乙酸乙酯(7∶1)等3个比例的展开剂,照“2.3.2”项下的方法进行分析,考察方法的耐用性。结果显示露兜的特征主斑点均能有效分离,因此本方法对展开剂比例的小变动具有耐用性。
3.2.4预饱和的研究照“2.3.2”项下的方法分别按预饱和15 min,再展开;不作预饱和,直接展开等方式展开,考察方法的耐用性。结果表明,不作预饱和时,露兜的特征主斑点出现较强的边缘效应,影响到分析结果的判断,经预饱和15 min处理后,可明显减小边缘效应,有利于分析结果的判断。
3.3 小结
本文通过对露兜的性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别的研究,建立了露兜的质量标准,为控制其内在质量提供了操作简便、快速、专属性强的方法。
[参考文献]
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999. 536.
[2]南京中医药大学.中药大辞典[M]. 第2版.上海:上海科学技术出版社,2006.3863.
[3]吴寿金,赵泰,秦永琪.现代中药成分化学[M].北京:中国医药科技出版社,2002.328.
质量标准范文4
关键词:安舒液;盐酸小檗碱;盐酸黄柏碱;高效液相色谱法
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.024
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2016)01-0100-03
Study on Quality Standards for Anshu Liquid LIU Dong-shun1,2, LU Wen-quan2, PIAO Shu-juan2, XIONG Xiao-juan1 (1. College of Chemical and Biological Engineering, Yichun University, Yichun 336000, China; 2. Shanghai Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
Abstract: Objective To establish quality standards for Anshu Liquid. Methods Phellodendri Chinensis Cortex and Kochiae Fructus were qualitatively identified by TLC method. The contents of berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in the preparation were determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm); the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid (0.5% diethylamine) gradient elution; the flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 284 nm. Results Berberine hydrochloride and phellodendrine hydrochloride in Phellodendri Chinensis Cortex and saponin Ic in Kochiae Fructus were detected by TLC method. The linear relationship of berberine hydrochloride in the preparation was Y=23.109X?30.548, r2=0.999 8, RSD=2.97%, showing that the linear range of berberine hydrochloride was 0.050 5C 2.525 0 ?g. The linear relationship of phellodendrine hydrochloride in the preparation was Y=10.038X?2.446 6, r2=0.999 9, RSD=1.24%, showing that the linear range of phellodendrine hydrochloride was 0.050 0C2.500 0 ?g. Conclusion The method is accurate, rapid, stable and reliable, with good reproducibility, which can be used for the quality control and evaluation of Anshu Liquid.
Key words: Anshu Liquid; berberine hydrochloride; phellodendrine hydrochloride; HPLC
安舒液为第二军医大学上海医院院内制剂,由黄柏、地肤子、白鲜皮、白芷、当归5味药提取加工而成,具有清热燥湿、祛风止痒功效,用于治疗湿疹、皮炎、皮肤瘙痒症等。本研究采用薄层色谱法(TLC)对方中黄柏、地肤子进行鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)对黄柏中的盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量进行测定,为建立该制剂的质量标准提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1260高效液相色谱仪(Agilent,美国),包括G1311C输液泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B-DAD紫外检测器、Chemstation色谱工作站;十万分之一天平(Sartorius CPA225D,德国);旋涡振荡混和器(WL-901 Vortex,海门市其林贝尔仪器制造有限公司);超声仪(SK7200H型,上海科导超声仪器有限公司)。
黄柏对照药材(批号130801)、地肤子对照药材(批号130801),购自安徽亳州利锋药业有限公司;盐酸小檗碱对照品(批号110713-201212.)、盐酸黄柏碱对照品(批号111895-201303)、地肤子皂苷Ic对照品(批号111723-201404),购自中国食品药品检定研究院;安舒液(批号140528、140529、140530),第二军医大学上海医院制剂中心提供;乙腈为色谱纯(Merck,德国),水为纯净水,其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 黄柏
取本品10 mL置于锥形瓶中,加20 mL纯水,混匀,再加浓氨水0.5 mL,用乙酸乙酯萃取3次(每次30 mL),合并萃取液,蒸干,用甲醇定容至1 mL,制成供试品溶液。取黄柏药材0.1 g,加1%醋酸甲醇20 mL,超声处理0.5 h,过滤,取滤液蒸干,用甲醇定容至1 mL,制成对照药材溶液。取除黄柏外的处方药材,同法制成阴性对照溶液。另取盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱对照品,分别制成每1 mL含1 mg的对照品溶液[1]286。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》(一部)附录Ⅵ B)试验,取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-水-醋酸(4∶5∶1)[2]的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,以碘化铋钾显色,供试品及对照药材色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照在相应位置上无干扰。
2.2 地肤子
取本品10 mL置于锥形瓶中,加20 mL纯水,混匀,再加浓氨水0.5 mL,用乙酸乙酯萃取3次(每次30 mL),合并萃取液,蒸干,用甲醇定容至1 mL,制成供试品溶液。称取地肤子1 g,加10 mL甲醇,超声处理0.5 h,过滤,取滤液蒸干,用甲醇定容至1 mL,制成对照药材溶液。取除地肤子外的处方药材,同法制成阴性对照溶液。另取地肤子皂苷Ic对照品,制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液[1]114。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》(一部)附录Ⅵ B)试验,取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-水-醋酸(4∶5∶1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,热风吹至斑点显色清晰[3],供试品及对照药材色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照在相应位置上无干扰。
3 盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱号880975-902;流动相:乙腈?0.1%磷酸[1000 mL加50 μL二乙胺(DEA)]梯度洗脱(0~8 min,10%~18%乙腈;8~13 min,18%~30%乙腈;13~20 min,30%乙腈);检测波长:284 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:40 ℃;进样量:10 μL。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品2.02 mg,置于2 mL容量瓶中,加甲醇定容,使其母液浓度为1.01 mg/mL;精密称取盐酸黄柏碱对照品2.00 mg,置于2 mL容量瓶中,加甲醇定容,使其母液浓度为1.00 mg/mL。各取上述溶液0.5 mL混合定容至1 mL,制成每毫升含盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱分别为505、500 ?g的对照品母液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品10 mL置于锥形瓶中,加20 mL纯水,混匀,再加浓氨水0.5 mL,用二氯甲烷萃取3次(每次30 mL),合并下层萃取液,45 ℃蒸干,用5 mL甲醇溶解并用初始流动相定容至25 mL,过滤,取续滤液,即得。
3.4 阴性对照溶液的制备
取除黄柏外的其余药材,按安舒液制备方法制成阴性对照品,按“3.3”项下方法制备,即得。
3.5 空白试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果显示阴性对照无干扰,见图1。
3.6 线性关系考察
将混合对照品贮备液用初始流动相逐级稀释,制成每毫升含盐酸小檗碱5.05、0.1、12.625、25.25、50.5、63.12、101、126.25、252.5 ?g/mL及盐酸黄柏碱5.0、10.0、12.5、25.0、50.0、62.5、100、125、250 ?g/mL的系列溶液,按上述色谱条件测定,以峰面积对浓度(?g/mL)进行线性回归,得回归方程。盐酸小檗碱:Y=23.109X-30.548(r2=0.999 8),表明盐酸小檗碱进样量在0.050 5~2.525 0 ?g范围内有良好的线性关系;盐酸黄柏碱:Y=10.038X-2.446 6(r2=0.999 9),表明盐酸黄柏碱进样量在0.050 0~2.500 0 ?g范围内有良好的线性关系。
3.7 精密度试验
取同一对照品溶液进样10 ?L,重复进样6次,测定峰面积,结果盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.2%、0.8%,表明精密度良好。
3.8 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、20、24 h进样测定,结果盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.33%、0.76%,说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
3.9 重复性试验
取同一批安舒液6份,按样品测定方法测定,盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的峰面积RSD分别为0.8%、0.4%,结果表明本方法重复性良好。
3.10 加样回收率试验
分别精密称取6份已知含量的样品,置于具塞锥形瓶中,精密加入一定量的对照品,按“3.3”项下方法制备供试品溶液,进样测定,结果见表1。
3.11 样品测定
按“3.1”项下色谱条件测定3个批号的样品,每批平行3份,结果见表2。
4 讨论
安舒液制剂液体较黏,辅料较多,需要对其稀释碱化后再富集测定有效成分含量。本试验先后比较了大孔树脂柱分离、乙酸乙酯萃取、二氯甲烷萃取等方法,结果发现使用二氯甲烷萃取操作简便,效果较好。本研究使用同一展开体系对安舒液中君药黄柏和臣药地肤子进行鉴别,阴性对照无干扰,斑点清晰。
本研究通过总结现有文献关于制剂及黄柏药材中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱含量测定方法的报道[4-9],先后尝试了乙腈-乙酸、乙腈-甲酸、乙腈-磷酸体系,发现盐酸小檗碱拖尾严重,在乙腈-磷酸体系中加入二乙胺可明显改善盐酸小檗碱的拖尾现象,峰形改善。本试验对制剂中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱进行含量测定,方法学考察表明,在本文色谱条件下,其他成分几乎不干扰其含量测定,系统适用性符合要求,测定方法简便,结果准确,重复性好,能够有效控制安舒液的质量。
参考文献:
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质量标准范文5
一、酒液。
⑴具有本品的香气,口感正确无误;
⑵清亮透明,无明显悬浮物;
二、酒瓶
1、垂直度。瓶身垂直度偏差不大于3mm。
2、瓶口。
⑴瓶口表面平整、完整无缺陷;
⑵椭圆度不大于1mm;
⑶与瓶盖配合。瓶口与瓶盖配合严密、牢固、到位;不漏酒、不脱钩;
3、瓶壁(底)厚度比。肉眼观察无明显差别
4、划伤。面积不大于5mm2;划痕长度不大于3cm;宽度不大于2mm。
5、瓶高。高度偏差不大于2.5mm。
三、瓶盖
⑴瓶盖无色差;文字图案烤印牢固;
⑵瓶盖坚固有弹性,不破裂;
⑶瓶盖与瓶口配合严密、牢固、到位;不漏酒、不脱钩;
四、标签
1、色差。无明显色差。
2、文字。
⑴技术文字、商标、名称、厂名厂址等正确无误。
⑵技术文字清楚正确,符合国家标准要求。
3、垂直度。贴标及烤花的垂直度偏差不大于3mm;无卷边、翘起、褶皱。
4、粘结度(手工贴标)。使用前须贴空瓶5个放在常温下24小时;放在保鲜柜8小时;放在冰箱8小时解冻后,在常温下观察粘结度是否牢固?达标后方可使用。(这件事情由品控部来做)
五、酒盒
1、色差。无明显色差;箱之间轻微摩擦不掉色。
2、文字。
⑴技术文字、商标、名称、厂名厂址等正确无误。
⑵技术文字清楚正确,符合国家标准要求。
3、封盒。
⑴装盒前将酒瓶倒置逐瓶检验酒液、商标、酒瓶、封盖及是否漏酒;
⑵装瓶正确无误;封盒正确有型;盒底固定坚固。
六、酒箱
1、色差。无明显色差;箱之间轻微摩擦不掉色。
2、文字。
⑴技术文字、商标、名称、厂名厂址等正确无误。
⑵技术文字清楚正确,符合国家标准要求。
3、封箱。
⑴装箱前(裸瓶酒)将酒瓶倒置(酒瓶盖向下)逐瓶检验酒液、商标、酒瓶、封盖及是否漏酒;
质量标准范文6
[关键词] 绿豆;牡荆苷;异牡荆苷;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法
[收稿日期] 2013-08-26
[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2012ZX09301002-002-002, 2012ZX09304-005);国家自然科学基金优秀青年基金项目(81222051);2015年版药典标准提高项目
[通信作者] *姜勇,副教授,Tel: (010)82802719, E-mail: ;*屠鹏飞,教授,Tel: (010)82802750, E-mail:
[作者简介] 李艳荣,讲师,E-mail: 绿豆又名青小豆,为豆科草本植物绿豆Vigna radiata (Linn.) Wilczek的干燥种子,为常用的药食两用植物,具有清热祛暑、利水消肿、解毒排脓等功效,用于解痈肿疮毒、增强免疫力、降血脂、抗肿瘤、治疗烧伤[1-2]等。现代药理学研究表明绿豆具有抗氧化[3]、抑菌[4]、抗肿瘤[4]、降血脂[5]、降血糖[5]以及解毒等多种药理作用。绿豆药材是《中国药典》2010年版中收载的多个成方制剂,如护肝片、消络痛片、消络痛胶囊和清宁丸的重要组成药味。然而,关于绿豆的质量标准目前只有国标(GB/T 10462-2008),而且是按粮油标准起草,没有对药效成分进行定性、定量检测,难以控制其药材及其成方制剂的质量和临床用药的有效性和安全性。因此,有必要建立绿豆的药用标准,以实现对药材及其成方制剂质量的有效监控。关于绿豆质量分析方面的报道较少,仅有文献[6-8]报道了绿豆中牡荆苷和异牡荆苷的含量测定方法,但色谱峰的分离不理想,而且仅对2~3个批次的样品进行了分析,不具有代表性。本研究首次建立了绿豆药材完善的质量控制方法和标准,包括水分和灰分的检查、醇溶性浸出物的测定及牡荆苷和异牡荆苷的TLC薄层鉴别和含量测定,并对25批不同产地的绿豆药材样品进行了检测,制定了合理的限度,为绿豆药材及其成方制剂的质量控制提供了依据。
1 材料
Agilent1100高效液相色谱仪:二极管阵列检测器,四元低压梯度泵,真空脱气机,柱温箱,自动进样器;数据处理机:Agilent1100色谱工作站;EYELA SB-2000水浴锅(上海爱朗仪器有限公司);UV-VI型紫外分析仪(北京智源通技术研究所);KQ-5000DE型数控超声波清洗器(40 KHz,昆山市超声仪器有限公司);202-00AB台式电热恒温干燥箱(中国天津泰斯特仪器有限公司);1/1万电子分析天平(BS 110S,美国Sartorius);1/10万电子分析天平(BP 211D,美国Sartorius);马弗炉(美诚,P型陶瓷纤维马弗炉,TM-0612P,北京盈安美诚科学仪器有限公司)。
乙腈(色谱纯,天津彪仕奇有限公司),重蒸水(自制)。分析级甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇(北京化工厂);硅胶GF254薄层色谱硅胶预制板(批号20120618,烟台市化学工业研究所)。对照品牡荆苷(批号130326,纯度≥99%)购自上海融禾医药科技有限公司,异牡荆苷(ID:2246/8804,纯度≥98.0%)购自上海博兴科贸有限公司。25批绿豆药材(LD)均为市售品及产地收集(2011年秋季收集),经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为豆科植物绿豆V. radiata的干燥种子,样品收集信息详见表1。
表1 绿豆样品收集信息
Table 1 Sample collection information for Vigna radiata
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 供试品溶液的制备 取本品粉末2 g,加入70%甲醇25 mL,浸泡15 min,超声处理30 min,离心10 min(6 000 r・min-1),15 mL于蒸发皿中,在70 ℃水浴上蒸干,残渣加70%甲醇2 mL使溶解,移至离心管中离心10 min(6 000 r・min-1),上清液作为供试品溶液。
2.4.8 检测限和定量限 精密量取已知浓度的供试品溶液适量,置10 mL量瓶中,用70%甲醇定容至刻度,摇匀,取该溶液进样20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,以信噪比为3∶1时的色谱峰对应的浓度作为检测限,结果牡荆苷和异牡荆苷的检测限分别为0.239 8,0.252 6 mg・L-1。以信噪比为10∶1时的色谱峰对应的浓度作为定量限,结果牡荆苷和异牡荆苷的定量限分别为0.799 3,0.842 0 mg・L-1。
2.4.9 加样回收率试验 取已知含量的样品细粉(LD-15)约0.25 g,精密称定6份,分别加入牡荆苷和异牡荆对照品0.306 0,0.328 5 mg,按供试品溶液的制备方法制备待测液,分别精密吸取进对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,测定,记录峰面积,计算牡荆苷和异牡荆苷的加样回收率,结果见表3。
表3 牡荆苷和异牡荆苷加样回收率结果(n=6)
Table 3 Recovery results of vitexin and isovitexin(n=6)
2.4.10 样品的含量测定 取各产地绿豆细粉0.5 g,精密称定,每批平行3份,按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,依次测定各批样品,对应各批所含水分,以干燥品计算牡荆苷和异牡荆苷的含量,结果见表4。
3 讨论
3.1 薄层色谱鉴别
实验考察了不同展开剂,氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5),氯仿-甲醇-甲酸(7∶3∶0.5),乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)[9],结果乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂时主斑点清晰,分离度较好。耐用性试验考察了点样方式(点状点样和带状点样),展开温度(4~30 ℃),展开湿度(18%~65%),及不同厂家生产的薄层板,结果带状点样斑点清晰,分离度较好,展开温度、湿度及不同厂家薄层板对结果影响不大,表明本薄层实验的耐用性较好。实验考察了硅胶G(1%AlCl3乙醇为显色剂,365 nm观察荧光斑点)和硅胶GF254(254 nm观察暗斑)2种硅胶薄层板,均能够将斑点较好分离,显色清晰,重现性较好。但从图谱来看,GF254薄层板上斑点的信息量更大些,故选用GF254薄层板。实验考查了3种常见豆类:绿豆,赤豆和赤小豆,只有绿豆中有牡荆苷和异牡荆苷的斑点,说明该方法具有较好专属性,可以实现绿豆与赤豆和赤小豆的区别。
3.2 浸出物的测定
实验考察了浸出物的测定方法(冷浸法和热浸法),结果冷浸法和热浸法浸出物的含量差别不明显,考虑到省时及节省溶剂的原则,故选用热浸法。由于绿豆中所含的有效成分主要为黄酮和皂苷类,因此选用一定浓度的乙醇溶液为溶剂进行提取,本文对乙醇的浓度进行了优化。考察了30%,50%,70%,90%乙醇和无水乙醇作为提取溶剂浸出物的含量,结果以稀乙醇作为提取溶剂时,醇溶性浸出物的含量最高,因此选稀乙醇作为提取溶剂。
表4 绿豆中牡荆苷和异牡荆苷的含量测定(n=3)
Table 4 The content results of vitexin and isovitexin in Vigna radiata (n=3)mg・g-1
3.3 含量测定
绿豆中的牡荆苷(vitexin)和异牡荆苷(isovitexin)2个黄酮类成分的含量较高,并且这2个黄酮类化合物具有较好的抗氧化、抗菌、抗炎及心血管方面的保护作用,因此,选择牡荆苷和异牡荆苷做为含量测定的指标性成分。 25批药材的含量测定结果表明,以干燥品计算,牡荆苷和异牡荆苷质量分数分别为1.076~2.062 ,1.127~2.303 mg・g-1。从上述结果可以看出,不同产地牡荆苷和异牡荆苷的含量差异不太大,说明不同产地绿豆药材的质量相对比较稳定。
3.4 限量标准制定建议
本实验收集了不同产地的绿豆共25批,样品有一定的代表性,根据不同收集地绿豆的测定结果,并结合药典中已有同类药材的标准,建议规定绿豆的含水量不得多于14.0%,总灰分不得多于5.0%,以干燥品计算醇溶性浸出物不得少于10.0%;以干燥品计算,含牡荆苷和异牡荆苷的总量不得少于2 mg・g-1 (0.20%)。
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Quality standard study on Vigna radiata
LI Yan-rong1,2, ZOU Ping-ping1, JIANG Yong1*, TU Peng-fei1*
(1.State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China;
2. Chengde Medical College, Hebei Key Laboratory of Study and Exploitation of Chinese Medicine, Chengde 067000, China)
[Abstract] In order to control the quality of Vigna radiata, the quality control method and standard were established in this study. The tests of water content, ash and ethanol-soluble extractives of V. radiata were carried out according to the methods recorded in appendix of Chinese Pharmacopeia (2010 edition, volume 1). The TLC method was established by using vitexin and isovitexin as references, and a mixture of acetate-method-water(10∶1.7∶1.3)as the developing solvent system on GF254 thin layer plate. The contents of vitexin and isovitexin were determined by HPLC on a Prevail C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column, using acetonitrile∶water (23∶77) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL・min-1. The column temperature is 30 ℃ and the detection wavelength is 337 nm. As a result, vitexin, isovitexin and the other constituents were well separated on TLC detected under the UV light (254 nm). The methodology validation for the assay of vitexin and isovitexin presented that they were in good linear correlation in the ranges of 6.12-98 mg・L-1 and 6.85-109.6 mg・L-1, with the regression equations of Y=46.213X-7.100(r=1.000) and Y=54.515X+6.829(r=1.000), and the average recoveries were 98.2% (RSD 1.9%) and 97.2% (RSD 0.79%), respectively. The content ranges of vitexin and isovitexin from 25 different batches of V. radiata were 1.076-2.062 mg・g-1 and 1.127-2.303 mg・g-1, respectively, suggesting that the qualities of V. radiata are relatively stable. The ethanol-soluble extractives, water content and total ash of 25 samples varied in the ranges of 13.27%-18.46%, 9.59%-12.43% and 2.63%-3.53%, respectively. All of the above data proved that the established quality of coutrol method V. radiata is specific and accurate, which can be used for the quality control of this drug.