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乳清蛋白范文1
蛋白质是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。人体的每一个细胞都有蛋白质参与。蛋白质由20多种氨基酸按不同比例组合而成，并在体内不断进行代谢与更新。富含8种必需氨基酸、结构合理的蛋白质统称为完全蛋白质。评价蛋白质营养状况一般从“质”和“量”两方面进行。常用的指标有蛋白质消化率、生物价和氨基酸评分。
蛋白质消化率是指在消化道内被吸收的蛋白质占摄入蛋白质的百分数。鸡蛋蛋白质和牛奶蛋白质营养价值高，消化吸收充分，消化率分别为98%和95%，被营养学界定为理想蛋白质。从牛奶中提取的乳清蛋白则是精品中的精品，其消化率达99%。
生物价反映的是蛋白质消化吸收后，被机体利用的指标。生物价越高，说明蛋白质的营养价值越高，最高值为100。乳清蛋白极易被人体消化吸收和利用，生物价为100。
乳清蛋白的必需氨基酸配比合理，富含支链氨基酸，属于完全蛋白质，氨基酸评分高，被尊为“蛋白之王”。此外，乳清蛋白还含有α乳球蛋白、β乳白蛋白、牛血清蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、糖巨肽蛋白、生长因子等多种生物活性物质。
分析乳清蛋白的营养成分
现在市面上的乳清蛋白粉多是利用现代生产工艺从牛奶中提取的。乳清蛋白粉是公认的优质蛋白质补充剂之一。下面具体分析乳清蛋白的主要营养成分和作用。
β乳球蛋白具备最佳的氨基酸比例，支链氨基酸含量极高，对促进蛋白质合成、减少蛋白质分解起着重要作用，有利于防止老年人肌肉减少综合征，保持足够的肌肉储备。
α乳白蛋白是唯一能与金属元素和钙元素结合的乳清蛋白成分，在氨基酸比例结构、功能特性方面与人母乳非常相似。
免疫球蛋白具有免疫活性，起到保护小肠黏膜、增强免疫力的作用，有利于患者的营养治疗和康复。
乳铁蛋白具有潜在的抗菌活性和抗病毒特性，防止致病微生物在肠道内生长，调节免疫。乳铁蛋白还能改善铁和骨骼代谢，增加骨量，预防骨质疏松症。
谁需要乳清蛋白
围手术期患者 外科手术对机体是一种创伤，造成机体蛋白质分解代谢增加，加上患者食欲减退，进食困难、消化吸收功能下降等原因，很容易出现蛋白质代谢的负平衡。因此，手术患者补充优质蛋白质将有助于防止术后并发症，促进伤口愈合。
蛋白质摄入不足的老年患者 研究表明，50岁以后，骨骼肌量平均每年减少1%~2%；60岁以上慢性肌肉丢失约30%；80岁以上丢失约50%。 肌肉减少30%，将影响肌肉的正常功能。进入老年期后，机体合成蛋白质能力降低，分解代谢增强，出现肌肉松弛、体重下降、身体虚弱、抵抗力下降。与此同时，老年人的活动能力逐步降低，有的高龄老人连最基本的日常动作也完成困难，极易摔倒骨折。老年人户外活动少，接受紫外线照射少，维生素D合成能力也差，易导致骨质疏松。老年人味觉嗅觉减退、牙齿不好、食欲不振、消化功能减退，造成蛋白质利用率下降。还有部分老年人因担心发胖和心血管疾病，采用以素食为主的饮食，摄入的蛋白质数量和质量均较差。为此，建议家庭经济条件较好的老年人，可适当补充优质蛋白质如乳清蛋白。
已经发生营养不良的患者 住院患者中，10%-70%的患者伴有原发性和继发性营养不良。有的是疾病（如胃肠功能障碍）、心理、药物等原因所致，使营养素摄入和吸收过少；长期卧床、放疗、化疗、各种并发症、院内感染等都会造成机体营养素储备减少；恶性肿瘤和消耗性疾病会加速机体蛋白质和能量的消耗。这些患者在治疗原发病的同时，必须进行营养支持，补充优质蛋白质。
乳清蛋白范文2
[关键词] NS乳清蛋白；[瘤放、化疗患者；副作用
[中图分类号] R730.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）11-0053-02
Nutritional evaluation of oral administration of NS whey protein in patients with tumor radiotherapy and chemotherapy
YANG Yang
Department of No.1 Respiratory Medicine， Cancer Hospital Affiliated to Harbin Medical University， Harbin 150001， China
[Abstract] Objective To investigate the nutritional status improvement efficacy and safety of oral administration of NS whey protein in tumor radiotherapy and chemotherapy patients with suspicious or moderate malnutrition. Methods A total of 162 cases were included in this study. The control group and the WP group （whey protein test group） were established， by the method of multi-center trial and random enrollment. The experimental group was given oral whey protein 38.5 g （1 spoon） /time （about whey protein 16.2 g）， 2 times a day for 15 days， in addition to daily diet with three meals a day. The Alb， Hb， nutritional status and side effects between the two groups were compared. Results The levels of Alb and Hb were decreased at the 15th day after radiotherapy and chemotherapy in the control group （Ctr group， 16 cases） without nutritional intervention， and the difference was statistically significant（P
[Key words] NS whey protein； Tumor radiotherapy and chemotherapy； Side effects
肿瘤患者多数合并代谢异常，营养不良，导致恶病质发生，影响患者生存质量。常用的治疗肿瘤的化疗药物具有细胞毒性，可产生许多不良反应，造成患者营养缺乏，抵抗力下降[1-3]。肿瘤患者在化疗治疗期间进行营养支持可显著减轻并发症。近年来，越来越多的研究发现，营养支持对肿瘤的发病及预防具有重要作用。乳清蛋白在营养学中被认为是“蛋白之王”，是人乳蛋白的主要成分，含有多种活性成分，能有效改善营养状况。本研究所用纽特舒玛（NS）乳清蛋白粉（营养综合型）是一种新型口服整蛋白配方型蛋白补充剂。本文分析了162例可疑或中度营养不良的肿瘤放化疗患者口服NS乳清蛋白的营养状况改善的有效性和安全性。
1 资料与方法
1.1一般资料
研究对象为2015年1月～2016年1月于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院入组病例162例。其中男82例，女80例，年龄42～80岁，平均（62.1±11.5）岁。受试者入选标准：年龄18～80岁之间，性别不限，能正常进食；肿瘤放疗、化疗患者；PG-SGA营养状况评估为B级（可疑或中度营养不良）；排除标准：严重胃肠道功能障碍患者、严重过敏体质，尤其是对本试验中乳清蛋白过敏、患有研究者认为不宜参加本临床试验的疾病者。入选患者均对本研究知情同意，并签署知情同意书。
1.2 治疗方法
本试验根据是否应用乳清蛋白分为对照组16例和NS组（纽特舒玛乳清蛋白试验组）146例，两组均予一日三餐正常饮食，NS组予口服乳清蛋白 38.5 g（1勺）/次（约含乳清蛋白16.2 g），每天2次，连续服用15 d。
1.3 评价标准
参数包括血清白蛋白（Alb）、血红蛋白（Hb）。放、化疗前1 d和放、化疗第15天，用生化分析仪测定患者血液Alb、Hb含量。对患者的营养状况及副作用改善情况进行分析。
1.4 统计学处理
数据使用SPSS 22.0 软件对各指标进行统计处理。对入组患者资料进行统计分析和形成临床试验报告。其中计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P
2 结果
据生化检测统计结果显示，未经营养干预的对照组患者放、化疗治疗后第15天，Alb和Hb均有下降，差异有统计学意义（P
3 讨论
肿瘤患者在早期的营养不良中症状、体征及临床表现并不明显，很容易被临床医生所忽视，而得不到及时治疗。存在营养不良的肿瘤患者在躯体功能、体力、症状、食欲和整体健康状况或生活质量方面均明显差于营养良好者。肿瘤患者处于营养物质代谢异常状态，患者摄入明显减少，而热量及营养素消耗明显增加，如外源性营养供给不足，肿瘤仍可从寄主体内获得能量，对机体造成的危害更大。肿瘤营养疗法（cancer nutrition therapy，CNT）是计划、实施、评价营养干预，以治疗肿瘤及其并发症，从而改善肿瘤患者预后的过程。有研究表明营养不良可以降低患者对化、放疗的耐受程度，影响中性粒细胞计数，导致患者不能按时完成化、放疗计划，而影响肿瘤治疗的效果[4-6]。由于营养不良广泛存在于肿瘤人群中，严重的营养不良给肿瘤患者进行放、化疗带来严重后果，所以营养疗法成为肿瘤治疗的基础措施与常规手段。如今营养支持治疗已经成为晚期肿瘤综合治疗的重要组成部分之一。肿瘤营养干预不同于普通疾病的营养治疗，对于晚期肿瘤患者的营养支持大多数专家给予支持并达成了一定的共识。及时有效的营养支持能够改善患者营养状况，且肿瘤不至于明显进展，这使患者生活质量提高，能更好地耐受手术、放化疗等治疗措施。
本实验结果显示，对照组患者放、化疗治疗后第15天Alb和Hb显著降低（P
[参考文献]
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乳清蛋白范文3
［关键词］人乳腺珠蛋白;乳腺肿瘤;酶联免疫吸附法
［中图分类号］R737．9［文献标识码］A［文章编号］1004-3101(2016)02-0138-03
乳腺癌已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤，近年来我国乳腺癌的发病率也在逐渐提高［1］。虽然目前乳腺癌的诊断与治疗已经规范化，但能够广泛用于临床的早期诊断指标和预后判断指标仍需进一步探索。人乳腺珠蛋白(hMAM)于1996年首次被发现［2］，研究显示hMAMmRNA可特异性地表达于乳腺组织［3］，被认为是潜在的乳腺癌血清型标志物。本研究通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测人外周血中hMAM的表达，探讨hMAM在乳腺癌早期诊断和预后判断中的价值。
1资料与方法
1．1研究对象
收集潍坊市人民医院乳腺外科2013年10月～2014年3月首诊并确诊为乳腺癌的患者84例为实验组，年龄29～81岁，中位年龄50．6岁。其中76例患者具有完整的随访资料，失访8例。收集同期首诊并确诊为乳腺纤维腺瘤患者30例为对照组，年龄18～58岁，中位年龄42．8岁。每一位患者均由我院病理科作出明确的病理诊断和临床分期等。
1．2标本采集及血清hMAM的测定
所有入组者均于未行任何穿刺或治疗(手术或化疗)前清晨采集静脉抗凝血2ml，分离血清，置于－20℃冰箱内待测。采用血清hMAM测定试剂盒(购自美国RD公司)通过酶联免疫吸附法(ELISA法)应用全自动酶标仪(美国THERMO公司)测定所有标本的血清hMAM水平。实验操作步骤严格按照试剂盒说明书要求进行，根据标准曲线计算各样本浓度值，单位为μg/L。
1．3统计学处理
采用SPSS18．0软件进行统计学分析。通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)确定hMAM提示乳腺癌的临界值(cut-off值)，计算ROC曲线下面积、敏感性和特异性。应用独立样本t检验比较两组血清hMAM水平的差异，应用χ2检验比较两组血清hMAM阳性率的差异及hMAM和各项临床病理特征之间的关系，应用Kaplan-meier生存分析比较hMAM与OS，EFS之间的关系。
2结果
2．1ROC曲线评价hMAM水平
根据本组84例实验组患者和30例对照组患者血清hMAM水平绘制ROC曲线(图1)，其曲线下面积为0．851，其95%可信区间(CI)为0．770～0．931。根据约登系数，计算本研究中乳腺癌患者血清hMAM水平的cut-off值为7．18μg/L，血清hMAM水平筛查乳腺癌的敏感性和特异性分别为78．3%和86．7%，本研究以hMAM水平≥7．18μg/L为阳性结果。
2．2两组患者血清hMAM水平比较见表1。
2．3乳腺癌患者血清hMAM水平与其它临床病理特征之间的关系
临床观察表明，Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌患者血清hMAM阳性率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者(P＜0．01)。淋巴结有转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率明显高于淋巴结无转移患者(P＜0．01)。但ER，PR，CerbB2阴性或阳性与血清hMAM阳性率之间均无明显相关性(P=0．051，P=0．142，P=0．788)，见表2。
2．4血清hMAM阳性率与OS和DFS的相关性
本组资料中乳腺癌组总的中位随访时间为20．9个月，中位生存期为48．1个月。结果显示，hMAM阴性乳腺癌患者与OS之间没有明显的相关性(P=0．160)。但是，hMAM阳性患者与DFS之间有明显的相关性(P=0．012)，见图2，3。
3讨论
乳清蛋白范文4
[关键词] 多发性骨髓瘤；乳酸脱氢酶；C反应蛋白
[中图分类号] R733.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）02（b）-0115-04
Determination and clinical significance of serum lactate dehydrogenase and C-reactive protein in patients with multiple myeloma
ZHANG Haoran1 BI Minghong1 ZHAI Yunzhi1 PAN Chengwu2 ZHAO Lun1
1.Department of Medical Oncology， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui Province， Bengbu 233004， China； 2.Department of Surgical Oncology， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui Province， Bengbu 233004， China
[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of serum lactate dehydrogenase （LDH） and C-reactive protein （CRP） in multiple myeloma （MM）. Methods The levels of serum LDH and CRP of 32 MM patients （8 cases in stage Ⅰ， 11 cases in stage Ⅱ and 13 cases in stage Ⅲ） and 20 healthy persons in the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from July 2013 to September 2015 were measured by using velocity method and nephelometry assay. The relationships of LDH and CRP with clinical characteristics and prognosis were analyzed. Results The levels of serum LDH and CRP in MM patients were obviously higher than those of healthy persons （P < 0.05）. The levels of serum LDH and CRP in MM patients were not correlated with age and gender （P > 0.05）. The serum LDH and CRP of MM patients in different stages were respectively compared， which showed that the levels of LDH and CRP in stage Ⅲ were all higher than those of stage Ⅱ （P < 0.05）， which of stage Ⅱ were higher than those of stage Ⅰ， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. The levels of serum LDH and CRP after two cycles of chemotherapy were significantly decreased compared with before treatment （P < 0.05）. The levels of LDH in patients with MM were positively correlated with CRP （P < 0.05）. Conclusion The detection of levels of serum LDH and CRP can be used as the relative indexes for diagnosis， classification and prognosis of patients with MM.
[Key words] Multiple myeloma； Lactate dehydrogenase； C-reactive protein
多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）居血液系统恶性肿瘤第2位，占10%～15%[1]。MM是一种起源于B淋巴细胞并能分泌大量单克隆免疫球蛋白的恶性浆细胞肿瘤。文献报道显示血清中C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）及血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）水平增高与不良预后有关[2-3]，LDH和CRP与MM患者病情变化有密切的关系，因此本研究对MM患者LDH和CRP水平进行分析，对提高MM患者的诊治及预后的认识有重要意义。现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2013年7月～2015年9月蚌埠医学院第一附属医院（以下简称“我院”）收治的MM患者32例，男18例，女14例；年龄40～76岁，平均（56.3±12.6）岁。所有病例均符合《血液病诊断及疗效标准》[4]的判定标准，按Durie-Salmon分期法：Ⅰ期8例，Ⅱ期11例，Ⅲ期13例。同时选择我院同期健康体检者20名作为对照，男11名，女9名，年龄38～75岁，平均（53.8±10.2）岁。MM患者与健康者在性别、年龄方面比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。
1.2 方法
空腹采集静脉血5 mL，分离血清标本，测定LDH和CRP水平；经过2个周期的化疗以后，复查LDH和CRP指标。LDH的检测采用速率法，测定采用美国Beckman Coulter LX20全自动生化分析仪，109～245 U/L为正常范围。CRP的检测采用散射比浊法，仪器为美国Beckman Coulter Array360特定蛋白分析仪。CRP正常范围
1.3 统计学方法
所有数据采用SPSS 17.0软件包进行分析。非正态分布数据比较采用非参数法 Mann-Whitney检验。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验或方差分析。相关性分析采用Spearman等级相关分析法。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MM患者和健康者血清LDH和CRP水平比较
MM患者血清LDH和CRP水平均高于健康体检者（P < 0.05）。见表1。
表1 MM患者和健康者血清LDH和CRP水平比较（x±s）
注：与健康者比较，*P < 0.05；LDH：乳酸脱氢酶；CRP：C反应蛋白
2.2 MM患者LDH和CRP水平与年龄和性别的关系
LDH和CRP水平与患者年龄和性别均无相关性（P > 0.05）。见表2。
2.3 不同分期MM患者LDH和CRP水平比较
Ⅲ期MM患者血清LDH和CRP水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期（P < 0.05），Ⅱ期MM患者血清LDH和CRP水平明显高于Ⅰ期（P < 0.05）。见表3。
表3 不同分期MM患者LDH和CRP水平比较（x±s）
注：与Ⅰ期比较，*P < 0.05；与Ⅱ期比较，#P < 0.05；MM：多发性骨髓瘤；LDH：乳酸脱氢酶；CRP：C反应蛋白
2.4 MM患者治疗前后LDH和CRP水平变化
经过2个周期的化疗后，患者LDH和CRP水平均较治疗前显著下降（P < 0.05）。见表4。
表4 MM患者治疗前后LDH和CRP水平变化（x±s）
注：与化疗前比较，*P < 0.05；MM：多发性骨髓瘤；LDH：乳酸脱氢酶；CRP：C反应蛋白
2.5 MM患者血清LDH与CRP的相关性
将MM患者血清LDH与CRP进行Spearman相关性分析，结果显示LDH水平与CRP呈明显正相关（r = 0.613，P < 0.05）。
3 讨论
化疗是MM患者的主要治疗手段之一，化疗有助于延长患者存活时间，提高患者生活质量。本研究观察了化疗前后LDH和CRP的改变情况。以往多项研究显示血清LDH和CRP在恶性肿瘤中均有不同程度的升高[2-4]，在本研究中得到进一步证实。
LDH测定在淋巴瘤、MM、白血病等多种恶性肿瘤疾病中的辅助诊断、疗效判断及预后方面均有重要的价值[5-7]，LDH水平明显升高者，多为病情恶化、预后不佳，而其值低者，则预后较好，长期生存期一般较长[8-9]。本研究结果显示MM患者血清中LDH水平较健康者明显增高，提示LDH测定可以作为MM诊断的辅助指标。在正常机体内血清LDH的含量低于组织细胞的1/1000。在肿瘤病理状态下，恶性肿瘤细胞的糖酵解与三羧酸循环脱节，出现细胞代谢紊乱现象，恶性肿瘤细胞葡萄糖代谢的含量超过正常组织的5～10倍，其中大多转化为乳酸盐，可引起释放入血的酶含量增加[10]。在机体内肝脏中LDH的浓度最高，其次是骨骼肌、心脏及肾脏[11]。本研究中排除心、肝、肾病变和溶血标本后的结果显示，血清LDH水平在不同临床分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）中存在明显不同，也从另一角度说明MM患者体内恶性浆细胞的含量及增殖状况。本研究结果显示，化疗前后的LDH变化明显，化疗后LDH活力下降并恢复至正常，提示恶性肿瘤细胞生长增殖受到抑制或肿瘤细胞已被大量杀灭。患者经相应化疗或其他治疗后，病情好转或缓解，多数病例LDH均有不同程度降低。LDH广泛分布于人体组织细胞中，肿瘤细胞快速增殖导致缺氧诱导因子-1激活，从而导致LDH等糖酵解酶基因的表达，使LDH合成增加。Colovi等[12]研究显示LDH水平是MM的一项独立预后指标，根据LDH水平可判断MM疾病的进展。由此表明LDH变化在预测MM患者预后方面具有重要的临床意义。
CPR是由肝脏合成的一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白，其参与体内多种生理及病理过程，进一步研究发现CRP在淋巴瘤、骨髓瘤、肺癌、乳腺癌、食管癌等肿瘤中明显升高，其可作为血液肿瘤的预后因子[13-16]。研究表明CRP、IL-6水平与患者的病情密切相关[17-19]。本研究结果显示，MM患者化疗前CRP与临床分期存在正相关性。这提示CRP可能成为反映MM患者疾病变化的指标，有可能对MM患者的预后有参考价值。有研究结果表明，CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义，高水平的和持久的血清CRP是某些恶性肿瘤不利的预后因素[20]。本研究结果显示化疗后CRP水平较化疗前显著下降，提示CRP水平可能作为MM患者预后的一个指标，同时考虑到CRP是一个在临床中经常被采用的简单而常规的实验室检查指标，因此其存在一定的临床参考价值。
本研究结果显示MM患者血清LDH和CRP水平高于健康体检者，分期高的患者LDH和CRP水平也较高。化疗前后LDH及CRP水平受到显著影响，MM患者化疗后LDH及CRP水平下降。血清LDH与CRP水平呈正相关。联合检测血清LDH和CRP改变可作为MM患者预后的重要指标。但由于本研究样本较少，因此LDH和CRP在MM诊疗及预后中的价值还需要更多的数据和资料来进一步研究和证实。
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乳清蛋白范文5
[关键词]乙醇；氧化修饰低密度脂蛋白；SD大鼠；高脂饮食
[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（b）-0138-03
Influence of Ethanol intake on serum oxidized low-density lipoprotein in rats fed with high fat diet
LIU Jun SHEN Qiang BAO Zhong-wu GUO Shen-yi
Department of Cardiology，Huaihua Hospital Affiliated to University of South China in Hunan Province，Huaihua 418000，China
[Abstract]Objective To investigate the influence of Ethanol intake on serum oxidized low-density lipoprotein in rats fed with high fat diet.Methods 16 male SD rats with 6 weeks of age were fed with high fat diet，and these 16 rats were randomly divided into control group and Ethanol group （50% Ethanol，1 ml/（100 g・d）.The total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high-density lipoprotein （HDL），low-density lipoprotein （LDL） and oxidized low-density lipoprotein（ox-LDL） levels of blood serum were determined before experiment and after 8 weeks experiment.Results The TC，TG，HDL，LDL and ox-LDL had a significant change in both two group before and after experiment （P
[Key words]Ethanol；Oxidized low-density lipoprotin；SD rats；High-fat diet
勇鲋嘌硬化（AS）是导致冠心病、脑梗死及外周血管病的主要原因。其中，泡沫细胞的形成是造成动脉粥样硬化的重要环节，而泡沫细胞的生成，则少不了氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）的参与。
在许多研究中表明，中低剂量的饮酒，对血管具有保护作用，每日乙醇的摄入剂量与冠心病的发病率呈“U”或“J”形曲线关系[1]。小剂量乙醇摄入，可降低心肌梗死的的发病率及梗死后的死亡率[2]。而每日摄入大量的乙醇，则会使冠心病的发病率及死亡率明显升高[3]。且目前国内外有许多关于大量饮酒导致心血管事件的报道[4]。而对于乙醇与动脉粥样硬化之间的关联，仍存在众多疑问，尤其在大量乙醇摄入对机体氧化还原反应的影响上更是存在诸多观点[5]。
人体内的低密度脂蛋白（LDL），经氧化修饰后，可形成ox-LDL，而大量乙醇的摄入，其对身体机能及体内的氧化还原反应有着一定的影响。本研究利用高脂饮食大鼠模型观察长期大量乙醇摄入下，测定大鼠血清内氧化修饰低密度脂蛋白水平的变化。
1材料与方法
1.1 实验材料与试剂
1.1.1实验动物 185～215 g雄性SD大鼠购自长沙市天勤生物技术有限公司。所有动物实验操作均得到南华大学伦理委员会的批准，于2016年2～7月在南华大学附属怀化医院的中心实验室中完成。
1.1.2实验饲料 大鼠高脂饲料组成：78.25%基础饲料、20%脂肪、1.25%胆固醇、0.5%胆酸钠[6]。
1.1.3主要试剂 50%乙醇；大鼠ox-LDL；酶联免疫吸附测定试剂盒（Elabscience公司，E-EL-R0710c）。
1.2 动物分组及饲养
雄性SD大鼠16只，经1周适应性喂养后，随机分成两组，分别为对照组与乙醇组，每组8只，均使用单只大鼠笼分开饲养。均采用大鼠高脂饲料喂养20 g/d，饮水量约40～50 ml/d。
1.3实验干预
乙醇组每日经鼠灌胃针一次灌入50%乙醇[1 ml/（100 g・d）][7-8]，且每日饮水均为10%乙醇水，对照组每日经鼠灌胃针一次灌入蒸馏水[1 ml/（100 g・d）]，每日乙醇灌胃量及浓度，参考自国内外相关文献。每周称重1次，根据体重调整剂量，连续喂养8周[9-10]。
1.4 标本采集及测定
在大鼠未摄入乙醇及高脂饲料前，使用5%水合氯醛以0.3 ml/100 g剂量通过腹腔注射麻醉后使用内眦静脉采血法取血，不使用抗凝剂，封闭采血管，在4℃冰箱中静置6 h后，血液经3000 r/min离心15 min，分离血清，送至附属医院检验科（奥林巴斯AU2700）测定血清中总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、LDL水平，ox-LDL使用酶联免疫吸附法测定，试剂盒采购自Elabscience公司，严格按照试剂盒说明书进行操作。连续喂养8周后，使用上述方式，再次测定相关指标水平。
1.5 统计学处理
采用SPSS 18.0软件分析并处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，检验水准（α）为0.05。
2 结果
试验8周后，TC、TG、LDL、Ox-LDL水平明显升高，HDL水平较实验前下降（P
3讨论
在高脂饮食状态下，SD大鼠体内的血脂将产生明显变化，尤其表现为TG、TC、LDL显著升高[9-10]。因本研究出发点为乙醇对大鼠体内ox-LDL含量的影响，而ox-LDL是LDL通过氧化修饰形成，故本研究采用高脂饲料喂养SD大鼠，造成大鼠体内血脂异常，从而能更显著的观察大鼠体内ox-LDL的变化。本研究通过建立高脂饮食动物模型，发现高脂饮食下的SD大鼠在长期摄入乙醇后，血清内的ox-LDL含量较未摄入乙醇的大鼠明显升高（P
在关于乙醇与氧化应激，以及摄入乙醇促进ox-LDL的形成上，均存在诸多关联。在乙醇的代谢中，涉及到乳酸脱氢酶、微粒体乙醇氧化系统（MEOS）以及过氧化氢酶，上述三种酶学反应中，均会产生大量的活性氧以及氧自由基[11]，而在摄入乙醇后，在代谢过程中产生的活性氧，可氧化细胞膜上的多价不饱和脂肪酸（PUFAS），形成过氧化脂质，其进一步氧化，形成产物丙二醛（MDA）等自由基[12]，打破体内氧化还原平衡，加速LDL的氧化修饰，生成过多的ox-LDL，从而造成ox-LDL在体内及蓄积。同时，乙醇可对大鼠行为能力产生影响，乙醇属于水溶脂溶性物质，可透过血脑屏障，大剂量摄入乙醇，可抑制呼吸中枢[13]，使受试动物呼吸频率减慢，并且在本研究的前期预实验中发现，大鼠在摄入乙醇1周后，出现了明显行为异常，表现为躁动，且更具有攻击性，群养大鼠出现攻击同类行为，动物活动量增多。结合上述观点，摄入乙醇可使摄氧量减少、耗氧量增加，导致机体缺氧，而机体低氧状态也会造成氧自由基的增加[14]，从而加速ox-LDL在体内的蓄积。
本研究发现一定剂量的乙醇摄入可引起高脂状态下的机体血清内ox-LDL升高，其机制可能为，乙醇摄入后体内产生大量的氧自由基，并且破坏体内的氧化还原平衡，在氧自由基的作用下，过多的LDL被氧化修饰成ox-LDL且在体内蓄积。而在近十余年的国内外研究中，已确认ox-LDL与动脉粥样硬化（AS）存在必然联系[15]，并且其在体内的水平与AS发生率成正相关[16]，如ox-LDL能促进人体内巨噬细胞、肥大细胞等分泌IL-6、TNF-α等因子，可导致内皮细胞的损伤，及影响内皮细胞的代谢，从而导致血管内皮受损，并且高脂状态同样具有损伤内皮细胞的功能[17]。并且有研究指出，人体内ox-LDL水平的增高，会引起血管内皮细胞变性，乃至坏死，使其局部从主动脉壁上分离，为形成脂质条纹及脂质池创造先决条件[18]，ox-LDL与动脉粥样硬化之间关系的研究中取得了大量进展的同时，还存在着诸多的疑问[19]，对此，可提出一个假设，针对乙醇摄入加速AS的发生与发展的氧化应激学说中，其机制之一可能与乙醇致ox-LDL过内外对脂蛋白相关磷脂酶 A2（Lp-PLA2）的研究中发现，ox-LDL与Lp-PLA2在血管局部炎症反应中，存在直接关系。关于Lp-PLA2，Steen等[20]的研究表明，使用Lp-PLA2抑制剂，能显著降低心血管事件的发生率。而对于Lp-PLA2，其具有对心血管疾病风险预测的价值[21]，人体内Lp-PLA2水平与急性心肌梗死、不稳定性心绞痛存在正相关。
综上所述，在摄入乙醇后，机体可加速产生并蓄积ox-LDL，而ox-LDL则直接影响到AS及心血管事件的发生，由此，可在乙醇对AS影响的氧化应激学说中得到一点启示，ox-LDL在其中扮演了重要的角色。在国外对ox-LDL与动脉粥样硬化及心血管疾病的相关的临床研究中，已表明在健康人群中使用抗氧化剂对AS和心脑血管疾病的发生发展并无获益，但在高危患者中使用抗氧化剂仍可获益[22]。在临床工作中，长期摄入乙醇的患者，其存在一系列原因的导致体内氧化还原失衡，从而造成LDL被过多的氧化修饰成ox-LDL，对于因此而造成的心脑血管疾病风险，是否可通过纠正体内的氧化还原失衡而得到改善，还需要临床研究加以证实。
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乳清蛋白范文6
【关键词】乳腺浸润性导管癌；双向电泳；血清蛋白质组分析；相关抗原
【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0144-02
贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目（2005-298）；贵州省科学技术基金项目（黔科合J字2007-2086）
乳腺浸润性导管癌是乳腺癌中最常见的一种类型，预后较差[1]。肿瘤相关抗原（TAA）是在肿瘤发生、发展过程中高表达的，能够诱发机体发生免疫应答的抗原。血清学蛋白质组分析（SERPA）是一种基于蛋白质组学和免疫学原理，利用二维电泳和质谱分析方法筛选和鉴定TAA的新技术[2]，目前已被广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病的研究中[3]，但其在乳腺浸润性导管癌研究中应用的报道尚少。我们采用SERPA方法对乳腺浸润性导管癌TAA进行了筛选，以期为该病的发生、发展机制研究及辅助诊断提供基础。
1材料
1.1标本来源
收集贵阳医学院附属医院2010年12月至2011年3月期间收治的20例女性乳腺浸润性导管癌患者（无其它自身免疫性疾病）的静脉血清作为实验组，所有病例取材得知情同意，采血和手术前未进行放疗、化疗和内分泌治疗，年龄范围34-78岁，平均年龄49.5岁；所有患者组织标本均经病理结果证实，按国际抗癌协会（UICC）制定的乳腺癌分期标准（TNM分期法）分为Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，Ⅲ期7例。另外同期采集20例健康女性志愿者静脉血清作为对照组，年龄范围36-75岁，平均年龄52.8岁。健康志愿者均经系统健康体检，无乳腺相关疾病史、其它自身免疫性疾病和恶性肿瘤家族史。人乳腺浸润性导管癌细胞株T-47D细胞购自中国科学院细胞库。纳入本研究者采其空腹静脉血5ml，尽快分离血清并置-80℃冰箱保存。
1.2主要试剂
高糖DMEM培养基购于美国Gibco公司；IPG胶条（13cm，pH3-10）、裂解液购自Amershan biosciences公司；辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG（HRP-兔抗人IgG）购自武汉博士德公司；聚偏氟乙烯（PVDF）膜购自美国Millpore公司；ECL化学发光试剂盒购自美国Pierce公司。
2 方法
2.1 细胞培养及总蛋白的制备
用含10%胎牛血清的DMEM培养液，置于5%CO2细胞培养箱中培养。收集对数生长期的细胞，加入5倍体积裂解液（7M尿素，2M硫尿，4%CHAPS，65mM DTT，0.2%Bio-Lyte）混匀，液氮中反复冻融3-4次（每次置液氮中3秒，室温融化），加入20ug/ml脱氧核糖核酸酶，离心1小时（4℃，20000×g），取上清即为细胞总蛋白。用Bradford法检测浓度，将样品分装并且置-80℃保存。
2.2 双向电泳和Western blot分析
取700μg T-47D全细胞蛋白进行2-DE，2-DE操作按照说明书进行。2-DE所得凝胶经考马斯亮蓝R-250染色液染色2h；并脱色至蛋白点清晰可见为止。
T-47D细胞总蛋白经双向电泳分离后，半干转印法转印至PVDF膜并封闭2h，分别与1：100稀释的乳腺浸润性导管癌或对照血清（一抗）于室温孵育2h，用TBST洗膜液洗膜（10min×3次）；其次与辣根过氧化物酶标记的兔抗人（1：3000）二抗室温孵育2h；再经TBST溶液洗膜（10min×3次）；最后经ECL化学发光检测得到胶片；观察杂交信号点，并确定发生免疫反应的蛋白在双向电泳凝胶上的位置。
2.3 统计学处理
采用SPSS17.0统计软件，用X2检验对与患者血清和对照血清发生免疫反应的蛋白进行分析，p
2.4候选蛋白酶解和质谱鉴定
选取2-DE凝胶上候选蛋白质斑点经胰酶酶解，肽段经液相色谱串联质谱（Liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）分析，用Mascot搜索引擎搜索NCBInr数据库，获知氨基酸序列。
3 结果
3.1 T-47D细胞总蛋白2-DE分析
使用图像分析软件对T-47D细胞总蛋白双向电泳图谱进行分析，在分子量为14.4.0kDa-94kDa和等电点pI3.0-10.0的范围内，发现约630个蛋白质点（图1）。
3.2 T-47D细胞总蛋白与血清的Western blot分析和统计学分析
T-47D细胞总蛋白和对照血清发生免疫反应的蛋白较少，大约为4个蛋白点（图2）；而其与患者血清发生免疫反应的蛋白较多，大约14个蛋白点（图3）。采用SPSS17.0软件对与患者血清和对照血清发生免疫反应的蛋白进行统计学分析，筛选出10个差异蛋白（表1）。这10个差异蛋白分别与对照组（N）和实验组（BC）血清发生免疫反应印迹图（图4）；确定这10个差异蛋白在2-DE凝胶上的位置，其主要分布在分子量为22.0kDa-94kDa和等电点pI4.7-6.7的范围内（图5）。
4 讨论
分离鉴定TAA有可能发现新的辅助早期诊断、预后判断和疗效监测的候选肿瘤标志物。本研究运用SERPA方法对引起乳腺浸润性导管癌患者发生体液免疫反应的抗原进行检测并筛选出10个抗原，经质谱鉴定及数据搜索，鉴定出其中8个抗原的功能，主要涉及到分子伴侣、能量代谢、细胞信号；有两个抗原未鉴定出功能。HSP90、P4HB、ER-60、HSP60、HSP27属于分子伴侣蛋白，是原核和真核生物细胞在应激状态下可被诱导表达的一类具有重要生理功能和高度保守的多肽类蛋白质分子家族。多项国内外研究[4]显示，上述五种蛋白在乳腺癌患者体内表达升高，本研究结果与之一致。PGAM1是一种糖分解酶，主要在糖酵解过程中起作用，因而能促进癌细胞等糖酵解旺盛的细胞生存。研究发现，PGAM1在肺癌、肝癌和食管癌中表达明显升高，但在乳腺癌肿瘤抗原方面的研究罕见报道。因此，PGAM1在乳腺浸润性导管癌中的作用值得进一步探讨。EEF1G和P0属于信号类蛋白，其中EEF1G含有N-末端谷胱甘肽S转移酶域，可与氨基酰-tRNA结合，将其运至核糖体，使肽链延长；P0是一种多功能蛋白，参与翻译过程中的调节机制。有研究[5]发现，EEF1G和P0在乳腺癌组织中的表达明显升高，但P0表达升高或降低在病理、生理代谢中的具体作用目前尚未清楚，其在乳腺浸润性导管癌中的作用待于进一步研究。本研究中两个未鉴定出功能的蛋白是未命名蛋白和假想蛋白，其结构和功能还不清楚。
参考文献
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