集体备课制度范例6篇

前言:中文期刊网精心挑选了集体备课制度范文供你参考和学习,希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感,欢迎阅读。

集体备课制度

集体备课制度范文1

更多0

分享本页将有机会获得最新IPAD2及其它奖品.

为了做到资源共享,集思广益,提高课堂教学效果,对集体备课提出如下要求,请各集备组严格遵照执行:

一、集体备课时间每周一课时,要确保用足用好。

各备课组每次集体备课时,应预先确定中心发言人。各中心发言人在集体备课前要认真准备,对有

关教学内容,包括教学目标、重点、难点、教法、学法、教学程序、板书设计、作业设置等均应全盘考虑,所作发言应具有示范性、指导性、启发性。

二、集体备课时间不得做任何与集体备课无关的事,不得迟到、早退或无故缺席。

三、学期初各备课组长要制定好集体备课计划(主备人.集备内容.时间.地点四落实),每次集体备课时要做好充分准备工作,确保集体备课活动按时进行。

四、每次集体备课时间均由一人重点说课,其他教师积极参与讨论。

每次集体备课后,要及时填写“集体备课记录”交教导处。

五、备课可根据下周教学内容或一个专题、一个单元等为一次备课内容,或选择最难教或最有研究价值的一课时作为说课内容重点评说,其余各课时略说。

每课时教学重点难点、典型例题选择、课堂练习设计、课后作业布置一定要统一。对于上述四个方面讨论情况及结论,经集体讨论后形成统一要求,各自编写教案,并严格执行。

六、所有教师(特别是青年教师)都要认真钻研教材,认真备课,将说课内容转化成“教学设计”。

集体备课制度范文2

摘要:

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。

关键词:

犬细小病毒;病毒分离;单克隆抗体;胶体金免疫层析试纸

犬细小病毒病是由犬细小病毒所引起的传染性疾病,可通过直接或间接接触传播,以剧烈的呕吐、腹泻和白细胞减少为主要特点,可引起犬急性心肌炎。犬细小病毒传播性强,发病率和病死率较高,且可感染狐、貉、狼等动物,对养犬业和皮毛动物等经济动物养殖业可造成巨大经济损失[1]。1977年,美国科学家最先从患肠炎的犬粪便中分离出CPV。1983年,徐汉坤等首次报道了犬细小病毒病在我国的出现。CPV在分类上属细小病毒科,病毒呈圆形或六边形,无囊膜,直径约25nm。病毒颗粒具有球型的衣壳,衣壳内包含单链线状DNA,在DNA两端各有一个发夹样的回文结构,DNA量占整个病毒粒子重量的25%~34%。CPV基因主要编码结构蛋白VP1、VP2、VP3和非结构蛋白NS1、NS2。VP1和VP2构成病毒的衣壳,其中VP2是主要结构成分和免疫原性蛋白,能够促使机体产生中和抗体[2]。VP1和VP2蛋白对病毒与宿主细胞之间的识别起重要作用,删除VP1或VP2蛋白的突变体均失去了对宿主细胞的感染能力。近年来,CPV非结构蛋白NS1被认为在病毒的致病性和细胞毒方面起主要作用,并在体外可引起肿瘤细胞凋亡[3-5]。目前国内外对犬细小病毒的诊断主要通过临床症状诊断、血常规检查和试纸快速诊断等,前两者存在着依赖临床经验、特异性低等缺点,难以达到对犬细小病毒病快速诊断的要求;而快速诊断试纸条主要被国外产品所垄断[6]。本研究用F81细胞分离的CPV制备获得了单克隆抗体,并用单克隆抗体,初步制备了CPV的胶体金层析快速检测试纸条。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物、细胞株及毒株

猫肾细胞系细胞(F81),购自中国兽医药品监察所;犬细小病毒病料,河南牧业经济学院动物医院提供;SP2/0多发性骨髓瘤细胞,河南牧业经济学院生物工程学院生物技术实验室保存;Balb/c小鼠和日本长耳大白兔,购自河南农业大学实验动物中心;含有CPVVP2基因的重组质粒pGEX-6p-1-VP2,河南牧业经济学院生物工程学院生物技术实验室构建并保存;犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCV)和犬腺状病毒(CAV),河南牧业经济学院生物工程学院生物技术实验室鉴定并保存。

1.1.2主要试剂与药品

dNTP、DNA提取试剂盒、琼脂糖、DNAMarkerDL2000和蛋白分子质量标准等,宝生物工程(大连)有限公司产品;DMEM、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、50倍HAT贮存液,GIBCO公司产品;胎牛血清,Hyclone公司产品;HRP-羊抗鼠IgG、HRP-羊抗兔IgG、羊抗鼠IgG抗体、PEG4000、DMSO、BSA及氯金酸,Sigma公司产品;硝酸纤维素膜(NC膜),Millipore公司产品;样品垫和PVC底板,上海金标生物科技有限公司产品;SBAClonotypingSystem/HRP抗体亚类鉴定试剂盒,SouthernBiotechnology公司产品;引物合成和序列测定由上海生工生物工程技术服务有限公司完成;CPV多抗IgG由河南牧业经济学院生物工程学院生物技术实验室制备;犬细小病毒阴性血清由河南牧业经济学院动物医院提供;其他常规用试剂为国产或进口分析纯。

1.2方法

1.2.1病毒的鉴定

样品由河南牧业经济学院动物医院提供。采集出现血便、高热等疑似CPV感染的犬粪便,加入适量磷酸盐缓冲液,5000r/min离心10min,收获上清液。按常规DNA提取方法提取DNA,置于-20℃保存备用。参照CPV基因序列(基因登录号:M19296.1),设计引物序列为:上游引物P1:5′-AATCACAGCAAACTCAAG-CAGAC-3′;下游引物P2:5′-TAGCAAATTCAT-CACCTGTTCTTAG-3′。以提取的DNA样品为模板,使用Taq酶扩增,反应条件为:94℃5min;94℃30s,55℃30s,72℃60s,共30个循环;最后72℃10min。取PCR反应产物5μL用10g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果[7]。

1.2.2病毒的分离和抗原的制备

将采集的病料加入含1000单位/mL青霉素和链霉素的DMEM细胞维持液(含20mL/L胎牛血清)制成1∶9的悬液,混匀后5000r/min离心20min,取上清,用0.22μm微孔滤膜过滤,置-20℃保存备用。将单层的F81细胞用胰蛋白酶消化,按1∶2传代,按体积10%的病料上清同步接种F81细胞,置37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养,设立阴性对照,同时逐日观察细胞病变并进行盲传[8-9]。待细胞病变达到80%以上时,反复冻融3次,10000r/min4℃离心30min,收获上清,加入PEG6000浓缩,经过Sepharose4FF凝胶柱层析,收集洗脱峰即为CPV抗原,紫外分光法检测CPV浓度,保存于-80℃。

1.2.3间接ELISA检测方法的建立

以纯化的VP2蛋白作为包被抗原[10],采用方阵滴定确定阳性血清的最佳浓度和最佳抗原包被浓度,建立了间接ELISA方法。通过酶标仪读取OD值判定结果,以OD待检血清>0.4且P/N≥2.1为阳性判定标准。另外检测30份犬细小病毒阴性血清450nm波长处的OD值,并将平均OD值与3倍的标准差(SD)之和作为阴阳性的临界值,即珚x+3SD为确定的阴阳性界限[11]。

1.2.4小鼠的免疫

将纯化的CPV抗原加等体积弗氏完全佐剂初次免疫6周龄Balb/c小鼠,每隔2周分别再注射2次以加强免疫。细胞融合前3d再加强免疫1次注射抗原。

1.2.5杂交瘤细胞的筛选和McAb腹水制备

按常规方法进行细胞融合,使用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化培养,选择能够稳定分泌、效价较高的单个克隆进行培养。按常规方法制备腹水,并采用辛酸-硫酸铵盐析法和亲和层析法纯化腹水中的McAb[12]。

1.2.6McAb亚型鉴定及染色体计数

①采用SBAClonotypingSystem/HRP抗体亚类鉴定试剂盒测定制备的CPVMcAb的Ig亚类。②选择生长良好的杂交瘤细胞,用秋水仙素阻断法进行染色体核型分析,在显微镜下选择染色体分散良好的细胞观察计数。

1.2.7McAb的特异性分析

将犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CPV)、犬冠状病毒(CPV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV)作为包被抗原进行间接ELISA,检测该单克隆抗体的特异性。

1.2.8胶体金抗体的制备

将200mL0.1g/L氯金酸溶液,搅拌加热至沸腾,迅速加入2mL10g/L柠檬酸三钠溶液,溶液颜色从浅黄逐渐变黑,然后变红,继续煮沸10min,溶液冷却后微孔滤膜过滤,4℃下保存备用。将制备的胶体金,调整pH至8.0后加纯化后的3E2单抗搅拌,室温静止5min,经低温高速离心法纯化获得胶体金抗体[13]。

1.2.9免疫试纸条的制备和初步鉴定

在玻璃纤维上喷涂胶体金抗体。取蛋白浓度为1.5mg/mL的CPV多抗IgG标记在硝酸纤维素膜上,设为检测线;取蛋白浓度为1.0mg/mL的羊抗鼠IgG抗体喷在离检测线5mm处,即为质控线;将喷有检测线和质控线的硝酸纤维素膜与样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水纸组装成试纸条。取PCR和ELISA鉴定的犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV),用制备的胶体金试纸条进行检测,验证其特异性。

2结果

2.1PCR鉴定

通过PCR扩增,得到608bp左右的预期大小目的片段,经测序与预期序列一致,证明样品中含有CPV(图1)。

2.2病毒的分离

从第3代开始一般会出现规律性细胞病变,接种病料上清液后约24h~36h,细胞出现弥散性颗粒,胞浆收缩,细胞变圆;约48h病变细胞开始逐渐拉网、崩解、脱落;约72h~96h,细胞病变达80%以上时,收毒,置-80℃保存备用(图2)。

2.3间接ELISA方法建立

采用方阵滴定确定抗原的最佳包被浓度和阳性血清最佳稀释度,阳性判断标准为OD待检血清>0.4,且OD待检血清/OD标准阴性值≥2.1,当抗原的稀释浓度为1∶160,血清的稀释度为1∶80,阴性与阳性血清的OD450nm值相差最大(P/N=9.253)。建立了筛选犬细小病毒McAb的间接ELISA方法(表1)。

2.4杂交瘤细胞株的筛选

经脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合并筛选,获得1株能高效分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。间接ELISA检测,3E2腹水效价为1∶1.8×105。

2.5McAb的Ig亚类鉴定检测

抗体的Ig亚类,结果表明,3E2亚类为IgG1型。

2.6杂交瘤细胞染色体数目

Balb/c小鼠脾细胞的染色体为40条,SP2/0骨髓瘤细胞的染色体为62条。统计结果表明,该细胞株染色体数介于90条~100条,大约为小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞染色体数目之和,说明为两者融合产生(图3)。

2.7McAb的特异性检测

将3E2分别与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV)包被的ELISA板进行交叉反应试验,结果发现,3E2与CPV可发生阳性反应,与CDV、CCV和CAV不发生反应,表明制备的McAb与其他犬常见病毒没有交叉反应,制备的3E2单克隆抗体有良好的特异性(表2)。

2.8胶体金溶液的制备

制成的胶体金溶液日光下肉眼观察透明清亮、颜色为酒红色、无沉淀。经紫外分光光度计检测其最大吸收波长为525nm。

2.9胶体金免疫层析试纸的特异性

特异性试验结果显示犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV)在胶体金免疫层析试纸检测线上均无条带,为阴性。犬细小病毒(CPV)在检测线上均出现特异性条带,为阳性(图4)。

3讨论

犬细小病毒病传播性强,发病率和病死率较高,且一年四季都有发生,绝大多数年龄、品种的犬类都可被传染,但幼犬和纯种犬更易被感染,病死率也高[14-15]。细小病毒感染犬类后,一旦发病治愈率特别低,没有特效药,早期确定犬细小病毒病并予以抗病毒、消炎、补液和止呕等治疗,可以提高疗效和存活率,因此,对CPV的早期检测就非常关键[16-19]。胶体金免疫层析试纸检测方法只需将待测溶液加入试纸条中,静止后一段时间观察结果,不需要仪器设备来读取结果,不需要操作者有专业技能,能减少很大检测工作量和节省大量检测费用,敏感性高,特异性好[20]。但目前我国市场上部分CPV试纸条主要以国外进口为主,价格较为昂贵,市场较为广阔。我们以分离得到并纯化的CPV为抗原,多次腹腔注射免疫小鼠获得了能够分泌抗CPVMcAb的脾细胞,ELISA试验结果表明该杂交瘤细胞产生的McAb只与CPV发生特异性反应,与CDV、CCV和CAV无明显的交叉反应,表明制备的3E2单克隆抗体有良好的特异性。另外,经间接ELISA检测,3E2腹水效价为1∶1.8×105。本试验确定了标记的最佳条件,设定3E2为金标抗体、取蛋白浓度为1.5mg/mL的CPV多抗IgG标记为检测线,蛋白浓度为1.0mg/mL的兔抗鼠IgG高免血清标记为质控线,初步建立了胶体金免疫层析方法。本试验建立的诊断方法特异性强,与其他3种犬常见病毒抗原无交叉反应,具有较好的重复性,与ELISA方法结果一致,可用于CPV的快速检测。下一步我们将在反应条件、稳定性及工艺上进一步改进,以期进一步提高检测灵敏度。本研究分离并纯化了CPV,经免疫Balb/c小鼠后,通过杂交瘤技术获得了1株高亲和力和高特异性的杂交瘤细胞,经鉴定制备出的McAb效价高、特异性强。并在此基础上研发了胶体金免疫层析检测试纸条,快捷准确,在临床上具有很好的应用前景,有一定的社会和经济价值,并为犬细小病毒的深入研究奠定了基础。

参考文献:

[1]赵建军,闫喜军,吴威.犬细小病毒:从起源到进化[J].微生物学报,2011,51(7):869-875.

[7]J萨姆布鲁克,DW拉塞尔.分子克隆实验指南[M].3版.黄培堂,等,译.北京:科学出版社,2002.

[8]周云朵,康真玉,陈月平,等.犬细小病毒的分离鉴定与生物学特性分析[J].畜牧兽医学报,2011,42(10):1402-1408.

[9]孟凡进,于志海,邱昌伟,等.犬细小病毒地方株的分离与生物学特性分析[J].动物医学进展,2014,35(9):15-19.

[10]马辉,赵绪永.犬细小病毒VP2主要抗原表位区的原核表达载体构建及诱导表达[J].郑州牧业工程高等专科学校学报,2012,32(2):9-11.

[11]汪家政,范明.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社,2000.

[13]钱红,石峰,陈创夫,等.伯氏疏螺旋体外膜蛋白OspA胶体金免疫层析法快速检测技术的建立[J].中国病原生物学杂志,2014,9(12):1075-1083.

[15]张仁舟,杨松涛,冯昊,等.中国国内首次检测到犬细小病毒CPV-2c[J].中国病原生物学杂志,2010,5(4):246-249.

[18]刘俊玮,刘娟,杜林林,等.复方参芩对犬细小病毒致心肌组织Bcl-2和BaxmRNA的影响[J].畜牧兽医学报,2013,44(1):122-128.

集体备课制度范文3

关键词:新城疫病毒;单克隆抗体;HN蛋白

中D分类号:S852.65+7 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2017)01-0121-05

Abstract The recombinant plasmid pET28(a)-HN was transformed into BL21(DE3) to purify the recombinant HN protein. The 6-week-old BALB/c mice were immunized by the protein. The spleen lymphocytes were separated and conducted the cell fusion with SP2/0 cells at 3 days after the last immunization. The hybridoma cell lines were obtained by clone culture and indirect ELISA assay. Then the monoclonal antibodies against HN protein of newcastle disease virus (NDV) were preparated. Their biologic properties were identified. The results showed that the molecular mass of purified recombinant HN protein was about 49 ku. Four monoclonal antibodies were screened. In which, the antibody 2H7 had broad antigen spectrum and neutralization activity. This study provided a basis for further research on the HN protein function and clinical diagnosis.

Keywords Newcastle disease virus; Monoclonal antibody; HN protein

新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒引起的多种禽类的一种急性、高度接触性传染病,是危害世界养禽业的重要传染病之一,给各国养禽业造成了严重的经济损失。新城疫病毒属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒亚科(Paramyxovirus)腮腺炎病毒属(Rubulavirus)成员,其宿主范围广泛,迄今已知能自然或人工感染的鸟类超过250种。自1926年从印度尼西亚爪哇首次分离到NDV以来,世界上已发生了4次ND大流行。虽然NDV只有一个血清型,但是每次ND流行都会有新的基因型出现,且具有一定地域性[1]。NDV分子流行病学研究表明:自20世纪90年代中期以来,我国流行的NDV病毒,在鸽上主要为Ⅵb亚型[2],其他家禽90%以上为基因Ⅶ型。基因Ⅶ型病毒与我国使用最广泛的基因Ⅱ型疫苗病毒(LaSota)之间存在明显的遗传差异和抗原差异[3]。本研究以原核表达纯化的鸭NDV强毒株SD03 的HN蛋白为免疫原,研制了4株能分泌抗NDV HN蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其与实验室不同基因型分离株的反应性,为新城疫快速诊断方法的建立奠定一定基础。

1 材料与方法

1.1 病毒、细胞与实验动物

鸭源基因Ⅶ型新城疫强毒Duck/China/SD03/2009(SD03),由本实验室分离并保存[4],GenBank登录号JN400895;小鼠骨髓瘤细胞SP2/0和鸡胚成纤维细胞DF1,由本实验室保存,均以含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;BALB/c小鼠,购自山东大学实验动物中心。

1.2 载体和试剂

pET28(a)-HN重组质粒,由本实验室构建并保存,其中HN基因克隆自鸭源新城疫强毒SD03;Qiagen Ni-NTA Agarose和SBA单克隆抗体分型试剂盒,购自济南赛恩斯生物技术公司;荧光素(FITC)标记的山羊抗鼠IgG和辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG,均购自SantaCruz公司;ECL发光试剂盒、预染蛋白质、Marker,均购自Clontech公司;显影、定影试剂盒,均购自山东赛恩斯公司。

1.3 SD03强毒株HN重组蛋白的表达

将构建好的pET28(a)-HN载体转化BL21(DE3)感受态细胞于含卡那霉素的固体培养基上培养,鉴定阳性菌,挑阳性单菌落接种于含Kan (终浓度为50 μg/mL)的500 mL LB液体培养基中,37℃振荡(200 r/min),培养至OD600为0.6,加入IPTG至终浓度为 0.6 mmol/L,37℃继续培养6 h,收集菌液,12 000× g、4℃、20 min离心后收集菌体,以20 mL PBS重悬,超声波破碎后离心,收集沉淀,然后按照Qiagen Ni-NTA Agrose试剂盒说明书的实验步骤对获得的包涵体进行纯化。SDS-PAGE分析蛋白纯化结果,用考马斯亮蓝法(Bradford)法测定纯化蛋白浓度,分装,-80℃保存备用。

1.4 单克隆抗体的制备

1.4.1 免疫BALB/c小鼠 以上述提纯的HN融合蛋白免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,每次每只免疫剂量50 μg,免疫方法为腹腔注射,共免疫4次。每次免疫的间隔期为2周,首免用弗氏完全佐剂按体积比1∶1乳化蛋白,二免至四免用弗氏不完全佐剂按体积比1∶1乳化蛋白。三免一周后,小鼠眼眶采血,测血清抗体效价。四免两周后,选择效价最高的小鼠,以不加佐剂的蛋白腹腔注射加强免疫一次,3 d后取小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合。

1.4.2 细胞融合 取免疫小鼠的脾细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤胞按常规方法进行细胞融合,于5% CO2细胞培养箱中37℃培养,当SP2/0细胞和脾细胞全部死亡时,用新鲜配制的HT培养基全部置换HAT培养基。逐日观察,待融合的杂交瘤细胞生长至孔底十分之一,取上清检测。

1.4.3 阳性杂交瘤细胞的筛选与建株 阳性杂交瘤细胞的筛选采用ELISA方法进行,具体参照文献[5],阳性细胞株扩大培养并进行有限稀释法克隆3~5次,筛选出能稳定分泌特异性单抗的杂交瘤,并制备单抗腹水,测定其ELISA效价。

1.5 单克隆抗体生物学特性的鉴定

1.5.1 ELISA 效价测定 包被酶标板,加入单抗腹水,并进行倍比稀释,间接ELISA方法检测。

1.5.2 特异性测定 以SPF鸡胚尿囊液、禽流感病毒、禽传染性支气管炎病毒等包被96 孔酶标板,间接ELISA 鉴定各株单抗反应特异性。

1.5.3 细胞中和活性测定 采用细胞中和试验鉴定单抗中和活性,具体参见文献[6]。

1.5.4 间接免疫荧光测定 将200 TCID50的SD03毒株接种CEF细胞单层,37℃作用2 h,更换含1%胎牛血清的DMEM,3 d后做IFA检测,具体步骤参照文献[7]。

1.5.5 Western-blot检测 取1 mL诱导表达的菌液,12 000 r/min离心2 min,弃上清,加100 μL灭菌双蒸水,悬浮沉淀,加100 μL 上样缓冲液,煮沸5~10 min。取20 μL/孔加样,进行SDS-PAGE电泳和电转印。转印的膜经5%脱脂乳封闭后,加入1∶5 000稀释的单抗腹水,37℃轻摇作用1 h,洗涤后加入1∶4 000稀释的HRP标记羊抗鼠IgG,室温轻摇作用1 h,于暗室中加入ECL发光液作用1 min,再转至暗盒中曝光5 min后进行显影与定影[7]。

1.5.6 单抗亚型的鉴定 用单克隆抗体分型试剂盒对4株杂交瘤细胞培养上清进行亚型鉴定,具体步骤参见试剂盒说明书,加入终止液终止反应后在450 nm处测定OD值。

1.6 单抗排谱试验

挑选的24株NDV分离株,测定血凝抑制价,配制相应的4单位病毒后与筛选出的有HI活性的单克隆抗体分别进行HI 试验,以AIV、IBV、IBDV和EDSV作为阴性对照[8]。

2 结果与分析

2.1 HN蛋白的纯化结果

表达的HN蛋白经镍柱亲和纯化后SDS-PAGE电泳检测,获得较纯的目的重组蛋白。经Western blotting分析,结果显示在49 ku附近有1条清晰的蛋白印迹(图1)。

2.2 杂交瘤细胞系的建立

以表达纯化的SD03的HN蛋白为免疫原, 经3次融合, 间接ELISA 筛选, 共筛选出4株能稳定分泌特异性抗NDV单抗的杂交瘤细胞,并分别命名为杂交瘤细胞2H7、2G6、1E1、2E11。

2.3 单抗特性鉴定结果

2.3.1 ELISA效价 单抗2H7的ELISA效价为6.4×105,2G6、1E1的ELISA效价均为3.2×105,2E11的ELISA效价为8×104(表1)。

2.3.2 特异性 4株单抗与SPF鸡胚尿囊液、禽流感病毒等均不反应,具有良好的特异性。

2.3.3 单抗中和性 单抗2H7具有中和性,与SD03的中和效价为128,其余3株单抗无细胞中和性(中和效价

2.3.4 单克隆抗体的间接免疫荧光检测结果 将接种SD03毒株的CEF细胞进行间接免疫荧光检测,结果显示,以2H7的单抗腹水为一抗,可在细胞中检测到特异性黄绿色荧光,而未接种NDV的细胞中检测不到特异性的荧光(图2)。

2.3.5 单克隆抗体的Western-blot检测结果 Western-blot结果显示单抗2H7、2G6、2E11、1E1均能识别亲本病毒SD03株表达的HN蛋白,并出现特异性条带(图3),条带大小与预期相符(49 ku)。

2.3.6 单抗亚型的鉴定结果 单抗亚型鉴定发现,2H7与其他3株单抗均属于IgG1,κ链。

2.4 单抗排谱试验结果

通过与SD03的HI试验发现,单抗1E1、2G6、2E11无血凝抑制性,2H7血凝抑制价为27(表1)。挑选24株NDV分离株,测定血凝抑制价,配制相应的4单位病毒后与2H7进行HI 试验,结果显示2H7与F48E8及基因Ⅵ型和Ⅶ型的所有毒株都反应,而与基因Ⅰ型和基因Ⅱ及ClassⅠ的2型和3型所有测试毒株都不反应(表2)。

集体备课制度范文4

一、高中语文集体备课存在的问题

新课标实施后,集体备课已经成为教学研究的重要形式,但高中语文集体备课还存在一些亟待解决的问题。

(一)集体备课制度不健全

目前,高中语文的集体备课缺乏制度保障,许多学校的集体备课制度不健全。笔者调查发现,许多学校的语文集体备课制度只有备课形式的规定和要求,如时间的规定、地点的规定、参加的规定等简单的制度。许多学校的备课制度挂上了墙,但对集体备课的内容的要求、集体备课的评价和检查、集体备课主讲人的安排与责任等内容的规定还很简单,没有细化的要求。同时,一旦遇上学校大的集体活动,以年级组为单位的集体备课组的活动就不能得到保证。由于时间难以协调,有时候只好将集体备课改成分散备课,采取网上汇总的办法,把个人的备课意见每次集中给一个老师去整理成集体备课的学案。这种方式缺乏教师集体备课研究智慧和集中讨论的环节。

(二)合作意识缺失,合作流于形式

合作是一种学习方式,也是一种学习态度和团队精神。由于语文教学水平和经验的局限,许多老师在备课中的认识会有很大的差异。在升学的压力下,要所有的老师在集体备课中都毫无保留地发表自己的教学意见,还有很大的难度,有少数教师担心自己的经验被年轻老师学去,在发言中总是有所保留。

(三)集体备课成为少数教师的讲堂

集体备课活动中经常见到少数教师发言,其他教师则很少发言甚至沉默。究其原因,有的教师是因为怕讲不好被其他教师耻笑,不敢发表意见;有的教师是因为怕被其他教师超越,不愿发表意见;学校对教师工作的评价和奖惩体制,使得教师不得不权衡竞争与合作;许多学校尽管意识到了集体备课的重要性,也建立了相关的备课与集体备课制度,但机械地认为集体备课就是案、统一作业,学进度,不去评价备课的实际效果,使集体备课成为检查和学进度的手段,降低了集中备课的作用。

二、高中语文集体备课的有效策略

(一)集体备课活动要有明确要求

集体备课并不是简单地把老师组织起来就可以的,要从集体备课的活动过程的组织和评价过程中抓好每一个环节。第一,教师要了解备课内容。让每一个教师在备课前就知道备课的内容,了解集体备课的要求,是提高集体备课有效性的前提。一般来说,集体备课并不是孤立的备课过程,其应该是在个人分散自治备课基础上的集体备课,从备课的过程上来看,集体备课应该是个人备课的整合。是在教师个人自主独立备课和充分研究课程标准和教材的前提下,教师之间进行的二次专业探讨、交流和合作。从备课的过程和结果上来看,集体备课应该具备两个特性:一是集体备课是个人备课的总结和整合。集体备课是以教师个体在教学前所做的教学准备为基础的,教师只有充分准备,很好地收集教学资料,集体备课时才能有话可说;二是集体备课是固定的备课内容。集体备课必须有特定的教学内容,是根据具体的教学内容进行的集体研讨。通过集体讨论把个人的意见集中形成一个较好的教学案例。把专家和名教师的典型课例变成自己的教学课案。第二,充分调动教师集体备课的主动性。集体备课是一个集体行为,不能搞成骨干教师的集体备课,要调动每一个成员的主动性和参与性。从调查结果来看,教师集体备课的参与性不够是高中语文集体备课中迫切需要解决的问题。在许多学校的集体备课中,年轻教师参与度不够是一个普遍现象。集体备课成为老教师的讲台,年轻教师基本没有话语权。在调查中发现,有少数年轻老师在集体备课的讨论中很少发言,还有的老师一年中没有一次担任过主讲老师。调动每一个老师在集体讨论中主动发表自己的意见与看法,是提高集体备课有效性的重要条件。 第三,发挥骨干教师和备课组长在集体备课中的骨干作用。每一个老师都能参与是集体备课有效性的中条件,发挥骨干教师的引领作用也是提高集体备课效果的重要条件。从集体备课的要求来看,首先要调动全体教师的主动性,在大家都能主动参与的基础上再发挥骨干教师的引领作用。这二者之间不是对立的,而是缺一不可的相互联系的两个必要条件。

(二)高中语文集体备课要有效设计

集体备课制度范文5

尊敬的各位领导、同仁:

大家好!

今天,我和大家交流的话题是《以教育科研引领学校管理特色》。

一、管理特色的确立

(一)背景

XX年以前,洼子店中学只有9个教学班,学生不足400人。教学条件简陋,师资力量薄弱。主要表现为师资结构不合理,严重缺科;教师教育教学观念落后,教学水平更是参差不齐;课堂沉闷,效率低下。布局调整合校后,优秀学苗仍然流失严重。如XX年暑假招生,本镇前100名只留下3人。教学条件、师资力量、学苗素质严重制约着学校的课堂教学质量。

(二)确立

面对残酷的办学现实,如何改善教学条件,提升师资水平,提高教学质量,已经成为学校迫在眉睫的重要课题。我校领导班子反复酝酿,充分论证,明确提出了科研兴校的战略方针—— “以教育科研引领学校管理特色”。决定通过发展信息技术教育来改善教学条件,并与集体备课相结合,提高教师专业水平,构建有效课堂,以此来达到吸引学生、留住学生、发展学生的目的。

二、管理特色的研究

(一)、明确目标,规范管理

学校制订了《教育科研发展规划》,建立了教科研管理制度和教科研成果奖励机制,明确了教科研工作的重点和主要策略、措施。确立了教育科研中心课题《加强现代信息技术教育,推动教师专业发展》和《集体备课管理评价策略研究》,并加强对各级各类课题的规划和整合,形成了一个以中心课题为统率,由分部主课题和教师子课题组成的课题群,使教科研工作规范化、系统化。承担的河北省电教馆“十一五”规划课题《初中数学与信息技术的整合研究》和承德市“十一五”规划课题《集体备课管理评价策略研究》,带动了中心课题研究向纵深发展。课题研究过程中多次请教研室和电教站领导进行专业指导,学校的教科研氛围日益浓厚,取得了较好的成绩。

(二)、发展信息技术教育,引领教师专业发展

1、加强信息技术装备建设,实现教学手段现代化

自XX年开始,学校千方百计筹措资金,先后投入127余万元,购置了较为先进的信息技术设备。现已装备语音教室1个、多媒体网络教室1个、多功能演播厅1个、学生计算机教室3个。共有台式电脑130台,笔记本电脑50台,移动多媒体2台,电子白板2块。专任教师实现了人手一机,24个教学班全部装备了多媒体,实现了“班班通”。建立了完善的校园网,网点覆盖每间教学、办公用房。并装备了分布校园各个角落多达30个音区的广播设备系统。在加强硬件建设的同时,学校不断提高教学资源建设水平,我校享有农村中小学远程教育资源和河北省远程教育资源,并先后投入20万余元,购买了足够的电子课程资源和大批教学软件,并建立了学校教学资源库。

技术装备的不断投入和更新,全面改善了教学条件,满足了日常教学需要,更为教育科研工作的开展奠定了良好基础。

2、强化信息技术培训,促进教师专业成长

我校注重强化教师群体的信息技术培训,努力建设一支与现代教育技术同步发展的教师队伍。XX年,作为一所农村学校的教师,懂信息技术者寥寥无几。学校就邀请电教站领导和老师,利用寒暑假多次从教育教学观念引导,从使用技术进行指导。同时,我校强化教师树立网上学习的观念,并通过专题讨论、现场观摩、案例分析、课件制作和各种竞赛活动,使教师在相互交流中提高,在实践探索中成长。目前,我校教师都能自制课件,都能熟练使用、乐于使用多媒体进行课堂教学。教师运用现代教育技术的能力、信息技术与学科教学整合的能力、网络教研能力都得到了提高,使教师向现代化、信息化、科研型转化。今年开学,我校所有专任教师又开通了教育博客空间,以此作为专业化发展平台。

(三)、加强集体备课研究,促进有效课堂构建

几年来,我校在教研室的指导下一直致力于《集体备课管理评价策略研究》,走研究、实践实践、反思反思、再研究的科研之路,促进了有效课堂的构建。

1、建立了科学的集体备课制度。

我校在实践中不断完善集体备课制度,使集体备课日趋科学、合理,主要包括《集体备课实施方法和步骤》、《教学设计编写要求和评价标准》、《集体备课研讨制度》、《集体备课反思交流制度》、《集体备课检查督导制度》、《集体备课奖惩制度》、《集体备课管理评价制度》。

集体备课制度范文6

一、要妥善处理的六种关系

1、“已知”与“未知”的关系

教学过程对学生来说,是由“未知”到“知”的过程;对教师来说,是一个将“已知”转化为“他知”的过程。可以说,教师的“已知”和学生的“未知”的矛盾构成了教学过程中的主要矛盾,而矛盾的主要方面则是教师的“已知”。所谓教师的“已知”,就是指教师对教材的理解和掌握。因此,在教学过程中,钻研教材成了解决教师本身的“知”与“未知”的矛盾的过程。解决这个矛盾的主要方法就是熟读教材,深入理解教材。钻研教材时要以一章为钻研“对象”,进行知识排队,抓住主线,明确重点,确定难点,在自己的头脑中形成一个清晰的知识结构网。

二、知识与能力的关系

备课不但要钻研教材,同时还应钻研如何通过传授知识来培养学生的能力。知识是能力的基础,但知识决不等于能力。因此,挖掘教材中有利于培养学生某种能力的因素,是钻研教材的一个极其重要的问题。如总结解题思路,不但能加深学生对物理定律和概念的理解,而且也是培养学生总结概括能力的好方法。

三、局部与全局的关系

有的教师说,研究教材好比下围棋,只有全局在胸才能下好每一个子。这个比喻十分贴切。这个局部与全局的关系问题,在研究教材中不可忽视。若以整个物理作为全局,那么基本概念、基本理论、元素及化合物知识、有机化合物知识、物理计算和物理实验就是组成这个全局的个个局部。若以物理实验作为一个全局,那么仪器、药品的使用、基本操作、气体的制取、物质的检验、定量实验就是组成这个全局的各个部分。教师只有心中有全局,处理各章各节教材,才能做到心中有数,才能知道功夫应下在何处。

四、新与旧的关系

物理各部分之间有着密切的内在联系。对学生来说,这种知识之间的内在联系产生了新知识与旧知识,已知与未知的问题;对教师来说,产生了在教学中如何充分利用学生已有知识来获得新知识的问题。钻研教材就要深入研究这种新与旧的关系,力求以“旧”引“新”,利用“新”来巩固和深化“旧”。这个新旧的辩证关系,是我们钻研教材时应注意掌握的教学方法论原则。

五、难与易的关系

物理基础理论具有较强的概念性和抽象性,而且又要求学生要有较好的数学基础和实验技能。形形的物质的性质,既有普遍性又有特殊性,而且又要求学生要有较强的记忆能力和推理判断能力。因此,物理学科教学确有难的一面。教师钻研教材,就是要设法化“繁”为简,化“隐”为现,化“难”为易。比如分散难点,多做实验,联系实际,由旧到新,搭桥过河,进行类比等都是化难为易的有效方法。此外,激发学生的兴趣也是化难为易的一种手段。如果我们能对教材钻深钻透,理论联系实际,把课组织好,激发学生学习物理的兴趣,“难”就变为“易”了。

六、知识与品德的关系

我们应当既教书又育人。我国教育的根本目的是培养德、智、体、美、劳全面发展的人才。一方面,物理教师不可能只传授知识,在传授知识的过程中,任何教师总会以自己的身教言教去影响学生的言行和世界观。另一方面,物理教材中也确实蕴含着丰富的教育因素,如唯物主义思想、辩证的思维方法、爱国主义思想及科学家们的勤奋精神与创造精神等等。

如何备课

一般来说,重难点的教学内容都必须经集体备课研究后进入教学实施过程。集体备课的时间及人员参与通过制度加以保证。集体备课的每一阶段要有明确的研究主题。每一次集体备课必须有中心发言人。提倡教案多样化。教案可以是纸介质文档、电子文档,也可以是笔记本模式、活页模式等多种形式。允许担任同课头多年的教师一次编写教案,经复备、修改后多次使用。

上一篇人定胜天

下一篇房地产交易