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元旦的黑板报范文1
关键词：玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）；黑色素；酵母单杂交报告载体
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）14-3542-04
DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.14.053
Construction of Report Vectors of Melanin HNreductase Gene of
Setosphaeria turcica in Yeast One-hybrid
JIA Hui， GUO Li-jie， MENG Qing-jiang， CAO Zhi-yan， SONG Ya-feng
（College of Life Science， Agriculture University of Hebei/Hebei Key Laboratory of Physiological and Molecular Plant Pathology，
Baoding 071000， Hebei， China）
Abstract： According to the restriction enzyme sites of melanin biosynthesis promoter region of reductase gene St3HNR， St4HNR and reporter vector pHIS2.1 of Setosphaeria turcica， two pairs of primers containing restriction enzyme sites were designed， the fragment length about 1 000 bp obtained by PCR using genomic DNA of S.turcica 01-23 strain as templet， and double digested by the corresponding restricted enzymes respectively， recycled and connected， constructed the yeast one-hybrid reporter vector of reductase gene. The results showed that the fragment length of two genes were both 998 bp， vectors were successfully constructed by PCR， sequencing， restriction enzyme digestion， and lay the foundation for the study of the transcription factor.
Key words： Setosphaeria turcica； melanin； report vectors of the yeast one-hybrid system
玉米大斑病是玉米（Zea mays L.）的重要叶部病害，病斑呈梭形，直接影响玉米的产量和品质，造成严重的经济损失[1]。玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）是引起玉米大斑病的一种丝状病原真菌，在其侵入寄主过程中，主要依靠附着胞产生机械压力穿透植物表皮细胞[2，3]。成熟的附着胞内沉积着一层黑色素，黑色素是由病菌产生的一种非均质的不溶于水的无定形小颗粒状类多酚聚合体，其作为重要的毒力因子，在维持附着胞内机械压力方面起着重要的作用。玉米大斑病菌能够代谢DHN黑色素，其在病菌附着胞壁上的沉积，保证了病菌能够产生足够的膨胀压力而穿透寄主组织致病[4]。对不同病原真菌中DHN黑色素合成途径的研究结果表明，DHN黑色素合成途径起始于聚酮体合成酶（Polyketide synthase），其后经2个还原酶（HNreductase）、2个脱水酶（Scytalone dehydratase）和1个氧化酶（Laccases）催化聚合而形成黑色素，另外还存在一个调控黑色素生物合成的转录因子（MR）[5]。在玉米小斑病菌（Helminthosporium maydis）、水稻胡麻斑病菌（Bipolaris oryzae）中均存在该转录因子，其对黑色素合成酶基因的转录具有调控作用[6，7]。河北农业大学真菌霉系与植物病理学实验室根据其他真菌中已知DHN黑色素调控基因设计引物获得StMR1基因片段，并通过RACE（Rapid amplification of cDNA ends）技术得到该基因全长。
研究蛋白质与DNA互作的方法很多，包括DNA蛋白质印迹杂交、凝胶阻滞电泳、DNasel足迹法、DNA与蛋白质复合体的电镜观察、紫外交联法、体内交联与免疫沉淀相结合等[8]。酵母单杂交体系（Yeast one-hybrid system）是一种识别稳定结合于DNA上的蛋白质的研究技术，它是根据DNA结合蛋白（即转录因子）与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理来研究目的转录因子与基因（DNA或cDNA）互作的体系，该方法也是在细胞内分析鉴定转录因子与顺式作用元件结合的有效方法[9，10]。真核生物中各种转录因子在转录水平的调控是基因表达调控的主要方式。典型的转录因子都有DNA结合区与转录激活区（或抑制区），在特定的时间、部位或特定条件（如胁迫条件）下，特定的转录因子与靶基因启动子的顺式作用元件特异性结合并相互作用，就可以激活或抑制靶基因的表达[11]。要阐明细胞内各种信号转导与基因表达的机制，以及细胞对外界环境刺激引起的一系列信号传递与应答基因表达调控等机理，鉴定各种调控基因表达的顺式作用元件和转录因子至关重要。本研究构建了玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因St3HNR、St4HNR启动子区酵母单杂交报告载体，为探究转录因子StMR1和还原酶基因St3HNR、St4HNR的作用机制奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
玉米大斑病菌菌株01-23、大肠杆菌（Eschrichia coli）DH5α感受态细胞、SDS碱裂解溶液由河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室保存或制备，pHIS2.1载体由河北农业大学生命科学学院张彩英教授惠赠；质粒提取试剂盒、凝胶回收试剂盒、Taq DNA聚合酶、dNTPs、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、pMD？R19-T Simple Vector购自宝生物工程（大连）有限公司；引物合成与序列测定由生物工程技术（上海）有限公司完成。
1.2 方法
1.2.1 PCR扩增 根据St3HNR、St4HNR启动子区的基因序列和载体pHIS2.1上的多克隆位点分别设计一对引物，并分别添加Sac I、Spe I和EcoR I、Spe I酶切位点，引物序列见表1。采用CTAB法提取玉米大斑病菌01-23菌株基因组DNA[12]，用于PCR反应模板，扩增体系为DNA 2 μL，10×Taq Buffer（Mg2+）2.5 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL， Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3 μL，3HPF（4HNF）（10 μmol/L）1.0 μL，3HPR（4HPR）（10 μmol/L）1.0 μL，加ddH2O至25 μL。PCR扩增程序为95 ℃预变性 5 min；94 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30个循环；72 ℃延伸10 min。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，用紫外凝胶成像仪（Bio-Rad）观察结果，凝胶回收试剂盒回收扩增产物。
1.2.2 St3HNR、St4HNR基因启动子区的克隆 将凝胶回收的目的基因片段与pMD？R19-T Simple Vector 16 ℃连接30 min或过夜。连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，随机挑取白色单菌落于3 mL含100 μg/mL Amp+ 的LB液体培养基中，37 ℃下220 r/min 振荡培养过夜。取2 μL菌液作为模板，利用pMD19-T Simple载体克隆载体上的通用引物M13+和M13-进行PCR检测。选取PCR检测阳性的单克隆测序，将测序正确的阳性克隆分别命名为pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP。
1.2.3 酵母单杂交报告载体的构建 采用SDS碱裂解法制备质粒DNA。将质粒pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP以及pHIS2.1载体分别进行双酶切，电泳检测并回收酶切目的片段进行连接反应，连接完毕后转化大肠杆菌感受态细胞，提取阳性克隆质粒酶切验证，构建完成St3HNR、St4HNR基因启动子酵母单杂交的报告载体pHIS-3HNRP、pHIS-4HNRP。
2 结果与分析
2.1 St3HNR、St4HNR基因启动子片段的扩增
分析St3HNR、St4HNR基因启动子区序列的酶切位点，结合酵母单杂交报告载体质粒pHIS2.1上的多克隆位点，分别选用限制性内切酶Sac I、EcoR I和Spe I，设计2对带有酶切位点的特异引物扩增目的片段，分别得到998 bp两条条带，与预期大小相符（图1）。
2.2 St3HNR、St4HNR基因启动子的克隆
回收纯化片段并与pMD？R19-T Simple Vector连接，转化大肠杆菌感受态细胞，转化后选择单克隆进行菌液检测，引物用载体通用引物M13/M17和特异引物3HPF/3HPR和4HNF/4HNR进行PCR扩增（图2）。选取PCR鉴定为阳性的克隆送生工生物工程技术（上海）有限公司测序，并命名为pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP。
2.3 pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP的酶切鉴定
将与pMD？R19-T Simple Vector载体连接并且测序正确的单克隆pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP分别用Sac I和Spe I，EcoR I和Spe I进行双酶切验证，均得到预期大小的目的条带（图3），成功克隆得到St3HNR、St4HNR基因启动子。
2.4 pHIS2.1载体酶切鉴定
提取pHIS2.1载体质粒，用Sac I和Spe I，EcoR I和Spe I进行双酶切并回收，得到7 190 bp大小的片段，所得片段与预期结果一致（图4）。
2.5 St3HNR、St4HNR基因启动子酵母单杂交报告载体的构建
将pMD19-3HNRP和pHIS2.1质粒载体分别用Sac I、Spe I进行双酶切，回收目的片段后将带有相同黏性末端的3HNRP和线性的pHIS2.1连接，得到pHIS-3HNRP重组载体。将pMD19-4HNRP与pHIS2.1分别用EcoR I、Spe I进行双酶切，回收纯化目的片段后再连接，得到pHIS-4HNRP重组载体。pHIS-3HNRP、pHIS-4HNRP重组载体全长约8 200 bp，Sac I与Spe I双酶切得到大小为7 190 bp和998 bp的条带，EcoR I与Spe I酶切得到大小为7 190 bp和998 bp条带，结果均与预期大小相符（图6），玉米大斑病菌黑色素还原酶基因启动子的酵母单杂交载体构建成功。
3 小结与讨论
目前，在研究DNA-蛋白质相互作用中，酵母单杂交体系主要有以下3种用途：①确定已知DNA-蛋白质之间是否存在相互作用；②分离编码结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点蛋白的新基因；③定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域以及准确定位与DNA结合的核苷酸序列[13]。应用酵母单杂交体系已经识别并验证了许多与目的DNA序列结合的蛋白质。
StMR1基因是DHN黑色素合成途径中的具有转录调控作用的转录因子，St3HNR、St4HNR基因是该途径中编码还原酶的基因。据报道，瓜类炭疽病菌、玉米小斑病菌中调控基因CMR1的转录产物直接或间接作用于还原酶基因，影响其表达，进而影响黑色素的合成[5，6]。本试验构建了玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因St3HNR和St4HNR的酵母单杂交报告载体，为其研究调控基因的互作机制奠定了基础。
参考文献：
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元旦的黑板报范文2
展示风采 喜迎新年
二、活动目的
为了迎接元旦的到来，感受节日的气氛，使同学们过上一个欢庆的新年，本次活动特提供展示学生风采的舞台，通过黑板报、书法、绘画、文艺汇演等形式，进一步丰富校园文化生活，活跃校园氛围，增强学生集体荣誉感和合作精神，使同学们成为德、智、体、美、劳的全面发展的合格人才。
三、活动内容
1、班级庆元旦黑板报评比
2、庆元旦书法、绘画比赛
3、元旦文艺汇演
四、相关活动安排与说明
1、黑板报评比
内容：庆祝元旦 评比检查时间：12月26日
评比检查人员：有经验的美术老师
评比方法：100分制 其中内容50分，设计50分。
奖项设置：一等奖二名 二等奖三名 三等奖四名
2、元旦书法、绘画比赛
比赛内容：
绘画：画种不限，儿童画、色彩画、国画、纸版画皆可;
书法：篇幅、风格不限，毛笔、硬笔均可，书法字体不限。
参赛对象：全体学生和教师。
参赛要求：
①、绘画书法内容要求表现学生生活，发挥儿童的想象空间，绘画作品必须是反映积极向上和美好的事物。 严禁教师或帮助学生涂色。
②、书法、绘画作品背面右下角请务必用铅笔注明班级和姓名，以便于评奖。
③、参赛办法、表彰及奖励：本次比赛分为书法和绘画两个组，分别对书法和绘画比赛进行设奖。届时，将评选出一、二、三等奖若干名。对获奖的选手将进行表彰，其中的优秀作品将在学校宣传窗中展出。
④、考评小组。由学校美术老师、书法老师及部分老师对作品进行评选。
3、文艺汇演活动
元旦的黑板报范文3
半年来，学校团委在校党委和上级团委的正确领导下，立足学校实际，本着服从学校管理，利于德育工作，利于学生成长的原则，配合学校各项活动，开展了一系列教育活动，营造了良好的校园文化氛围。现将本学期的工作总结如下：
一、主要工作回顾
（1）常规工作：坚持做好每周一的升旗与国旗下讲话的安排；每周五第八节课对国旗护卫队成员进行训练，周日晚对国旗下讲话的学生进行培训，确保升旗顺利进行；每周六教室、寝室卫生大检查评比；每天校园卫生责任区的检查；每天早晚各播音一次，关注校园，关注时事。
（2）每月具体工作
9月：
1各班级以班会形式，对暑期开展的“孝行月”活动进行总结。
2组织开展一期主题为“新学期，新征程”的主题黑板报评比活动。
3 做好新一届团委会，学生会的组建准备工作。
4继续对新一届国旗护卫队队员继续进行培训。
5 报学校党委批准,升级改造了校园广播设备。
6 完成了部分毕业生“智慧团建”网上团关系转接工作。
7举办了“我和我的祖国”书法美术作品比赛活动。
10月：
1 完成了新一届团委会、学生会的组建工作，并召开了学生干部会，布置相关工作。
2 开展主题为“腾飞的祖国”中华魂主题读书系列活动。选拔3名学生代表学校参加县关工委组织的演讲比赛活动，并对他们进行演讲方面指导与培训。
3 10月12日，组织200名学生参加了县文明办组织开展的“省级文明县城创建万人签名”活动。
4 组织学生志愿者清扫学校门前河道。
5 开展了一期主题为”庆中秋迎国庆”的黑板报评比活动.
11月：
1开展了一期主题为的“期中复习迎考”黑板报评比活动。
2 组织学校青年志愿者清扫学校门前河道。
3 组织学校青年志愿者到县福利院开展“孝老敬老”志愿服务活动。
4 组织学生参加了网上“青年大学习”答题活动。
5 整理了高二年级学生团员档案.按团县委要求,清理了部分违规发展的团员.
12月：
1 配合体卫艺处组织筹备开展了学校2020年元旦晚会。
2组织学校教职工完成了中国志愿服务网志愿者注册工作。
3 按上级部门要求，发展了一批新团员。
4 上报本年度纳新团员信息、团情统计及下年度纳新团员计划情况。
5 组织开展了一期主题为“奋进吧2020”的黑板报评比活动
1月
1 组织开展元旦晚会总结表彰会，表彰在元旦晚会中表现突出的班级及个人，并颁发奖状与荣誉证书。
2 做好团委本学期各项工作清理与总结。
元旦的黑板报范文4
元旦黑板报资料参考：
中国的元旦，据传说起于三皇五帝之一的颛顼，距今已有3000多年的历史。“元旦”一词最早出现于《晋书》：“颛帝以孟夏正月为元，其实正朔元旦之春”的诗中。南北朝时，南朝萧子云的《介雅》诗中也有“四季新元旦，万寿初春朝”的记载。
中国最早称农历正月初一为“元旦”，元是“初”、“始”的意思，旦指“日子”，元旦合称即是“初始的日子”，也就是一年的第一天。正月初一从哪日算起，在汉武帝以前也是很不统一的。因此，历代的元旦月、日也并不一致。夏朝的夏历以孟喜月（元月）为正月，商朝的殷历以腊月（十二月）为正月，周朝的周历以冬月（十一月）为正月。秦始皇统一中国后，又以阳春月（十月）为正月，即十月初一为元旦。从汉武帝起，才规定孟喜月（元月）为正月，把孟喜月的第一天（夏历的正月初一）称为元旦，一直沿用到清朝末年。但这是夏历，亦即农历或阴历，还不是我们今天所说的元旦。
元旦的黑板报范文5
为了活跃节日气氛，丰富学校文化生活，促进教职工的交流合作，增进教职工间的友谊，创设文明、健康、和谐的校园文化氛围，特组织本次活动。
二、活动时间：
12月30日晚上
三、活动形式和内容：
1、学校统一组织，各部门、班组协调配合。
3、各部门、班组积极协助支持。
4、各组分组聚餐，8：30在卫星接收教室聚会。
四、活动地点：
卫星接收教室。
五、具体安排与分工：
1、主持人：李小龙 姚志丽
2、团委、政教处负责音响、场地的布置。
3、王爱萍老师负责出好会场黑板报。
4、周永吉、张洋、周静、徐晓丽老师负责做好会场服务工作。
六、后勤保障服务：
李守生、李志军
七、议程：
1、张校长致辞。
元旦的黑板报范文6
一、本班少先队队员情况分析:
制定出少先队工作计划的基础是将班级内学生状况了解清楚。本班学生在这学期共45人，转出去3个，又进来了3个插班生，学生人数比上年有所增加，总体看来男生仍多于女生，在上个学期的学习中，学生在学习、生活上的很多情况我都有了比较详细的了解，不再象刚接手这个班级时的毫无头绪。有的学生经过一年来的品德行为训练,对行为规范有了一定的掌握,十分清楚一些基本的学生守则,能很好地遵守纪律。
二、工作分类：
1、五项竞赛工作
制定详细的班级卫生工作计划。这是体现学生纪律、卫生等行为品德方面的一个具象的表现，学生哪个方面不好，哪方面比较欠缺，都能在这里得到体现。这个学期关于五项竞赛中的相关内容，我制定了一系列的措施，因为上一学期可以说是我来做主体，是扶着学生一步步走来，而这一学期，我试着放开手，让学生自己走走看。而让他们自己走，就得告诉他们如何走，怎样走才是最好的走姿。要形成这个最好的走姿，就得有一系列完全严密的规章制度，为此，我试着制定了一些新的制度，做到每个干部责任分明。
2、设立卫生监督员
结合学生健忘的特性，我在班级里设立了一个卫生监督员，用来提醒一日三扫制度，卫生监督员的职责是提醒组长，组长则提醒组员。如果卫生监督员忘了，是卫生监督员的责任，如果卫生监督员提醒了，组长没有很好的实施，是组长的责任，组长说了，组员不行动，是组员的责任，做到责任到人。而且平时卫生监督员和组长负有巡逻、检查教室卫生的职责。
为了让卫生监督员时刻知道自己的职责，我为他配备了一个漂亮的胸卡，让他看到胸卡时知道自己该做什么了。
另外，为了增加忧患意识，我要求一星期给卫生监督员打分，不合格的撤换，优秀的加以奖励。而评分的标准则是一星期的竞赛成绩。组长，组员也是如此，一个月评出最好的一组，加以奖励。
3、设立“三带”检查员
三带，具体说是戴红领巾、戴小黄帽、戴校徽这三样东西。每天早上我让一个乘车的来得早的学生，站在门口，检查每个学生的三戴情况，并对没有戴齐的学生进行记录，加以扣分处理。
检查员的打分，也是一周一次，进行评比，不合格者撤换。
4、班长进行协调工作
班长我让她每天早上中午两次对班级内的同学，进行点名，发现未到的学生，及时通知老师，并且我把点名册挂在教室里，班长每天记录好后，都把他挂在墙上，在记录册里，我注明了每个学生的联系电话，这样即使不是班主任负责的课，其他老师如果要联系学生，了解学生情况，就来得容易的多了。
另外，对于卫生监督员、三戴检查员的评比，开始可以由我主持，适应了一段时间后，我将把这个工作教给班长，每天的扣分单，班长统一收集，一周统计一次，并进行评比。把评比情况告知教师。让小干部真正动起来。
5、黑板报工作
这也是训练学生能力的好途径，一年级的时候，黑板报可以说是我一手包办，从不让学生插手，如今二年级了，我决定让他们一步步学起来，先是教师设计好版面，让学生按着教师的安排进行添色、画图，到后来再慢慢放手让学生自己来出一期黑板报。
三、少先队工作思路
1、认真贯彻爱国主义教育，采取读爱国书、看爱国影片、唱爱国歌曲等形式，激发学生的爱国热情。
2、营造一个温馨，和谐，自然的学习环境，让学生到了班里就象回到了家里一样。
3、教会学生学会生存的技巧，学会与人相处的能力，学会付出和爱，学会关心爱护他人等美好的品格。
4、利用晨会、集会、黑板报、图片展等形式，开展安全知识教育，让学生对安全知识有很大的了解，明白什么危险的事情是不能做的。
5、关爱每一个学生，走进每一个学生的心里，成为学生的真正意义上的朋友，为学生排忧解难，树立信心。
6、上好每一节班队课，认真抓好课堂纪律，让班级永远充满活力，积极，向上，永争第一!
四、工作安排
九月份
1、五项竞赛开始
十月份
1、庆祝国庆节
2、建队节活动
3、老人节慰问活动
十一月份
1、五项竞赛小结
2、讲故事比赛(一-三年级)
3、野炊活动
4、第三期校报刊出(二1-一3)
十二月份
迎元旦大合唱比赛
一月份
