关于荷花诗句范例6篇

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关于荷花诗句

关于荷花诗句范文1

毕竟西湖六月中,风光不与四时同。接天莲叶无穷碧,映日荷花别样红。

2、白莲

素蘤多蒙别艳欺,此花端合在瑶池。无情有恨何人觉?月晓风清欲堕时。

3、荷花知

荷叶五寸荷花娇,贴波不碍画船摇;相到薰风四五月,也能遮却美人腰。

4、莲花

关于荷花诗句范文2

【关键词】供电企业;组织绩效;优化完善

1.引言

广东电网公司下属地市供电局自2009年全面推广实施绩效管理以来,经过近几年的创先实践,不断改进,组织绩效考核已发展成为推动创先工作持续深入开展,促进提升企业经营管理水平的重要管理工具,发挥了良好的激励和导向作用。

2.存在问题

地市供电局组织绩效管理工作虽然取得了一定成效,但也存在一些需要解决的问题,现梳理总结如下:

2.1地市供电局组织绩效的考核项目还没能全面有效承接网省公司中长期发展战略和深化创先工作的部署,组织绩效考核模式和项目设置尚待优化完善,确保组织绩效考核手段作为实现年度创先目标的重要保障。

2.2组织绩效考核对地市供电局经营效益考核力度尚待加强,随着国资委对国有企业推行EVA指标考核,地市供电局需进一步提升价值创造能力,强化利润经营指标考核,引导企业更加注重要注重投资效益,优化资源配置,确保国有资产保值增值。

2.3地市供电局组织绩效考核对推动下属分子公司协调发展的作用尚待增强。地市供电局下属分子公司发展极不平衡,分公司与子公司管理水平差距很大,子公司电受网网架不牢固、电网设备残旧、人员综合素质较低、管理基础薄弱等因素影响,需分公司对子公司发挥“传、帮、带”作用,推动全局管理水平整体提升。

2.4地市供电局组织绩效合约指标和任务类考核项目尚有较大改进空间。指标类绩效指标对主体责任部门进行了有效考核,但对关联支持单位考核力度不够;指标考核比较重视量化结果缺乏过程考核,任务类考核项目评分标准比较模糊、不够明确,需进一步采取量化指标评价任务完成情况。

2.5地市供电局各级单位组织绩效等级评定的合理性和公平性尚待提高。地市供电局各级单位(部门)专业特性和业务内容差异较大,以本部和分子公司两级单位考核得分分列排序,择优评选20%的绩效A级单位的做法需进一步调整。同时组织绩效考核在推动各部门打破部门壁垒,促进各级单位形成纵向贯通、横向协同的内部运营机制方面尚待发挥积极作用。

2.6地市供电局组织绩效扣减类项目尚待完善。可以从廉政从业、法律风险、营销纪律、农网改造、保密维稳、人资管理等方面引入更多扣减项目,强化企业经营生产纪律,营造安全生产、规范经营、廉洁从业的工作氛围。

3.优化措施

为充分发挥组织绩效的导向和激励作用,进一步优化完善组织绩效的考核模式,确保绩效考核作为推进战略落地的闭环手段,现建议对地市供电局组织绩效管理和考核工作做如下几方面改进:

3.1全面承接发展战略和深化创先工作部署

地市供电局组织绩效考核方案以网省公司中长期发展战略为统领,贯彻落实“三个发展”工作要求,要以组织绩效合约作为深入推进全局各项重点领域专项创先工作,全面承接省公司下达地市供电局年度绩效合约考核内容,引导和激励各级单位团结一致、积极进取,圆满完成全年各项工作任务,努力实现年度绩效考核目标。

3.2持续提升价值创造能力,更加注重经营效益考核

地市供电局绩效考核工作需进一步落实“分公司体制、子公司考核”的模式,建立以模拟经济增加值(S-EVA)为核心,模拟内部利润总额(S-内部利润总额)、可控供电成本节约率、万元固定资产售电量为补充的经营业绩考核指标体系。引导各级单位注重资产使用效益,提高资产管理水平;同时增加平均售电单价作为利润的支撑指标,积极引导各单位调整售电结构,增加售电收入。

3.3引入“捆绑式”联动机制,推动分子公司协调发展

建立分公司和子公司分组帮扶联动机制,组建若干个结对帮扶小组,设置第三方客户满意度、用户平均停电时间、综合电压合格率、当年电费回收率、线损率、单位供电成本六项联动指标,实行分子公司“捆绑式”加分奖励,指标得分采用目标法,根据下达给分子公司的基本值和满分值进行评分,达到基本值得60分,达到或超过满分值得100分,介于基本值和满分值之间线性评分,到达先进值得105分或115分。帮扶小组得分=∑帮扶小组内分子公司该项指标得分×指标权重/该小组分子公司个数。年度考核时,排名第一帮扶小组内的分子公司可酌情予以加分,加分上限不超过1分。采取“捆绑式”联动机制以推动分公司加大对子公司的帮扶支持力度,补齐子公司科学发展短板,加快子公司接轨分公司管理水平的步伐。

3.4优化绩效指标和绩效任务考核项目设置

地市供电局组织绩效考核不仅落实关键指标主体单位管理责任,还促进关联单位做好支持服务工作,进一步强化职能部门承接关键指标的管理责任,同时梳理关键指标的驱动因素和关联关系,形成支撑指标和分工任务,层层分解落实到相关单位,按照关联强弱程度设置不同考核权重,促使相关单位齐抓共管,形成合力,共同提升绩效指标。指标类评分规则多样化,加强考核导向激励作用。在绩效指标评分规则方面,根据不同管控要求,分别采用目标法、综合贡献度法、靶心法等评分方式,既注重指标完成情况,又能体现指标提升幅度和提升难度,对达到先进值的指标进行加分,增强发挥绩效考核导向和激励作用。专项任务指标数量化考核,关键指标任务具体化考核,进一步融合指标类和任务类考核方式的优点,一是将考核指标落实到指标成长过程的关键节点任务,加强指标成长过程管控;二是将考核指标分解为支撑指标进行考核,提高指标考核的精细化水平;三是将专项任务提炼设计出考核指标,用量化标准评价工作任务完成情况,通过指标考核驱动业务发展,通过业务发展提高指标水平。

3.5增强绩效考核的导向作用,完善多维度测评机制

地市供电局绩效考核方案根据各职能部门专业特性和业务差异,结合指标类和任务类权重设置情况,应对职能部门分组开展绩效考核工作,旨在提高以往指标权重较低部门绩效评级争A的积极性,进一步提高绩效考核的公平性和合理性,形成良好的竞争态势,实现协调发展。同时建立多维度测评机制,推动企业一体化运作。引入多维度测评机制,发挥各级单位相互协调作用,一是在地市局层面考核职能部门落实上级单位和地市局各项重点工作完成情况;二是在职能部门层面加强协作,提高工作效率,打破部门壁垒,实现横向协同;三是在基层单位层面促进职能部门落实对专业管理和指导责任,实现纵向贯通。

3.6强化扣减类项目考核力度,为企业科学发展保驾护航

地市供电局组织绩效考核继续增强安全生产与财经纪律考核,例如对“安全管理”扣减类别设定标准为“发生较大及以上人身事故、电力安全事故、设备事故,一次扣40分”,提高扣减分数。增加廉政从业、法律风险、营销纪律、农网改造、保密维稳、人资管理等方面扣减项目,例如对“农网改造项目”扣减类别设定标准为“对于未能完成“应改未改”项目进行扣分,扣分值=(下达的“应改未改”计划当年投产项目数-当年实际完成项目数)/下达的“应改未改”计划当年投产项目数”。采取增设扣减项目手段进一步增强警示作用,杜绝违法、违规行为发生,为地市供电局科学发展创造良好氛围。

4.结束语

地市供电局需坚持持续改进、优化完善的原则,继续组织做好直属各单位组织绩效管理和考核工作,会同人力资源部等相关部门加强组织绩效考核结果应用,研究建立组织绩效奖励机制,充分发挥考核导向作用和激励作用,为有效推动中长期发展战略落地,加快地市供电局科学发展提供有力保障。

参考文献:

[1]付亚和 许玉林. 绩效管理(第二版). 复旦大学出版社, 2008-4-1

关于荷花诗句范文3

2015年6月14日,第18届上海国际电影节期间,国内娱乐巨头华谊举办了一场华谊ELLE之夜。成龙、张震、宋承宪、杨幂等娱乐大咖悉数到场助阵,展示了这家娱乐巨头在娱乐行业中深厚的人脉。

而对电竞爱好者来说,他们更为关注另外一件事:EDG也来了!

刚刚获得MSI世界冠军的EDG衣冠楚楚,焕然一新。不过在这种镁光灯聚焦、娱乐大咖云集的场合,即便是经历过S总决赛大场面洗礼的厂长(Clearlove,原名明凯)也难以镇定。在主持人询问登上舞台是什么感受时,他腼腆地笑道:“有点紧张……”

随着EDG的到来,这次华谊ELLE之夜特意安排了一个电竞环节。EDG的Meiko坐上了解说席,而其余四人分成红蓝两队,带着娱乐明星进行友谊赛。与厂长、deft、pawn他们搭档的有当时正在参加《跑男》的包贝尔,中国达人秀冠军刘伟以及东方卫视主持人朱桢等娱乐人。

而在台下,另外一位早就闻名遐迩的LOL娱乐大咖陈赫正在观看他们的比赛。

这是一场欢乐的比赛,厂长说:“我的心情就是开心,不用关心胜负。”而最终他被强制使用锤石打野,然后打出1杀8死的毁灭性数据,惨败给对方。

赛后,华谊兄弟副董事长兼总经理王中磊为胜利的一方颁发了奖品。

这是一份难得的礼遇,正如主持人朱桢所说:“在娱乐行业,他们可能永远没有机会获得王中磊先生的颁奖,所以说今晚获得的这份奖励将成为他们的一份难得回忆。”

这是一次电竞与娱乐行业顶尖人物的亲密接触。尽管从头到尾,这次活动都充满了欢乐祥和的气氛,但某些细节仍然显示出双方的陌生。由于大多数到场的娱乐人并不知道何为电竞,主持人朱桢不得不用类比的方式告诉大家EDG在中国电竞行业的分量:“在电竞行业的地位,EDG就相当于华谊在中国电影行业的地位。他们拿到了世界冠军,就像是足球队拿到了世界杯……”

EDG与华谊的牵手,要追溯到2015年3月19日。当时在“尚荒新文化盛典”活动现场中,华谊兄弟时尚与EDG正式建立合作关系。

实际上自2014年以来,电竞俱乐部的触角就开始向娱乐领域不断延伸。

2014年,曾在S4中零封韩国队、上演50血基地翻盘的OMG战队了一首单曲《星球之光》,由队员演唱,也是OMG队歌。这一队歌让OMG一度被网友们誉为“EXOMG”。2015年OMG还全队参与了电影《前任攻略2》的拍摄。

2016年1月9日,EDG也与强视传媒合作,推出电子竞技题材青春偶像剧。这部电影以EDG队员的故事为蓝本,由影视人员担纲表演。

随着电竞俱乐部娱乐化的加速,一个问题开始困扰俱乐部:如何在娱乐化的过程中,保证队伍的竞技性?竞技和娱乐化,到底哪一个才是根本?

娱乐化是锦上添花,竞技才是根本

EDG新任俱乐部经理阿布说:“无论怎么娱乐化,成绩和冠军才是它竞争力的核心。”在他看来,EDG之所以能得到华谊的青睐参加华谊ELLE之夜,并不是因为队员长的帅、老板多有钱,而是因为这支有足够影响力的队伍在足够有影响力的赛场上取得了足够骄人的成绩。

EDG俱乐部2013年9月在广州成立,主要项目是LOL,后来也涉猎了风暴英雄和炉石传说等项目。在中国电竞产业中,EDG属于后起之秀,他们比不上WE、EHOME那么辉煌的历史,也没有LGD那样长久的底蕴。之所以能在短短一两年内名声大噪,完全是靠成绩拼杀出来的。

为了组建一支高水平队伍,他们引入了国内外多位具有高水平的电竞明星。包括前WE主力厂长clearlove,以及来自世界冠军三星战队的韩国人deft和小pawn。兵强马壮的他们连续获得2014年LPL春季赛和夏季赛双料冠军,2015年又获得MSI季中赛世界冠军,成长为国内首屈一指的LOL俱乐部。

获得MSI世界冠军后,EDG将名气扩散到了与电竞一墙之隔的娱乐行业。这也让他们踏上了华谊ELLE这个娱乐梦工场。

3月19日的会上,双方都谈到过合作目标。华谊时尚董事长赵磊表示:“华谊时尚要探索全新路线,将时尚注入电子竞技,衍生出时尚产品,并成为影响未来年轻人的主流文化。”而当时的俱乐部经理三少则表示:“希望可以将EDG提升一个新高度,在接下来的国际大赛中让世人眼前一亮!”

然而,或许是因为娱乐动作影响了训练时间,在接下来的LPL夏季赛季后赛中,他们0比3惨败给LGD未能夺冠,失去直接晋级S5的资格。尽管最后通过选拔赛搭上了S5末班车,但在S5上他们止步于八强,未能再现MSI的辉煌。

由于成绩下滑,这一时期的EDG受到了极大压力。阿布表示:“2015年下半年,EDG的商业、娱乐、公益活动参加的比较多,确实给选手训练造成了困扰。”当时厂长也曾在EDG的app上谈到过这个问题。

不过在阿布看来,保证训练并不等于完全杜绝参加娱乐活动:“最重要的是合理安排时间。选手也是人,枯燥的训练会降低他们的训练效率,也影响心态,他们需要休整。闷头死练很难出成绩,劳逸结合才是王道。参加娱乐活动换换脑筋,对调节选手心态有好处。”

从2015年底开始,EDG根据娱乐活动的性质做出了调整。

“娱乐行业的活动数量多,但如果提高效率,每一次活动占据的时间并不长。我们之前处理这方面的事情没有经验,后来注意了时间的合理安排,把活动都放到休赛期集中进行。这样就避免了类似问题。”阿布说道。

2016年春季赛,在pawn带着腰伤上阵的情况下,他们仍然获得亚军。目前正在进行的夏季赛,他们也是5连胜高居A组第一,仍然是中国LOL最顶尖的几支战队之一。

说起娱乐化对竞技的影响,OMG也许能作为一个前车之鉴。2014年获得成绩后,他们进行了一连串的娱乐化动作,包括拍宣传片、拍电影、拍MV等。最终由于长期参加娱乐活动,严重影响竞技状态,队伍成绩一落千丈,没能参加S5总决赛。最后俱乐部费劲心理包装的五人天团,有四人选择退役。直到2016年,OMG仍在LPL保级的路上苦苦挣扎。今年的夏季赛中,5轮过去仍然一分未拿。

远远称不上成熟的娱乐化

由于竞技和成绩的限制,电子竞技俱乐部的娱乐化空间实际上相当有限,相关的模式也还远远谈不上成熟。

目前俱乐部的娱乐化,有以下两种模式。

第一种是向娱乐行业学习,用娱乐模式包装队员,发掘和提升本战队的商业价值。第二种则是与娱乐行业的人或机构合作,做出非电竞的文化产品。

第一种模式非常简单,也非常普遍。

早年的电竞选手大多是不修边幅的,而从2013年以来,越来越多的电竞俱乐部意识到了选手形象的重要性。如今的LOL战队选手出席正规场合,永远是西装革履、温文尔雅、风度翩翩。LPL赛场上,甚至对文明用语都做出了规定。这些方面娱乐行业已经有几十年的成熟经验,是电竞俱乐部取经的最好对象。

2015年与华谊达成合作后,EDG队员的宣传照和个人形象开始由华谊帮忙设计。

“他们非常专业。从造型、摄影、包装、设计到后期的宣传推广,他们都有专门的团队负责,而且非常专业。这一点很值得我们学习。”阿布说道。

这种模式增加了俱乐部的人气,以此为基础,增加战队的出场身价。通过娱乐的手法去积聚电竞粉丝,然后再用娱乐行业的模式去变现,比如拍摄广告、参加表演赛、参加公益活动等。在传统体育如足球、篮球等领域,C罗、科比等人早就这么干了。

为了配合这种娱乐化,EDG甚至开发了一个专属APP。该APP是一个类似于微博微信的平台,玩家可以在上面与EDG队员随时互动。值得一提的是,EDG队员很少在新浪微博上发声,大多数时候都通过APP向粉丝展示最新状态。

阿布表示,APP相当于一个过滤器,把热爱EDG的粉丝全都聚集到了一起。和微博相比,这个APP上的粉丝更为理智,其消费热情也更高。微博用户可能是任何一家俱乐部的粉丝,但EDG APP上几乎全是EDG粉丝。这让EDG在APP后续的商务开发中拥有无可比拟的用户精准性。据悉EDG的APP目前有100多万用户,其变现潜力值得关注。

第二种模式则近两年才开始有俱乐部尝试,方式则各不相同。

2016年,EDG与强视传媒合拍青春偶像剧。和当年的OMG全员出镜不同,为了不影响队员状态,EDG队员并没有出演电视剧。

“电视剧制作公司会来EDG基地采风,许多镜头拍摄都是以基地为背景的。他们还会对我们的队员进行采访考察,并以队员们的故事为蓝本创作剧本。通过EDG选手的故事,来反应我们的队员健康、竞技、积极向上的精神特质。”阿布这样阐述这部青春偶像剧中的EDG元素。

2016年3月,腾讯影业宣布旗下电影《电竞狂潮》正在拍摄中,参演人包括了Sky、Moon和目前的OMG战队。这是一部纪录片性质的电影,选手们只需要本色演出即可。而电影题材也是相当小众的纯电竞,可复制性不高。当然它也算是一种宝贵尝试,可以检验电竞电影的号召力。电影将于9月公映,如果取得票房成功,相信会有更多投资人愿意与电竞俱乐部联合拍片。

不过考虑到OMG战队目前糟糕的战绩,又有多少顶尖战队愿意冒成绩下滑的危险,让旗下队员参与电影拍摄呢?

正因为有“竞技”的根子,注定了电竞俱乐部无法进行彻底的娱乐化。

电竞职业发展到现在,竞争已经相当残酷。日复一日的训练才能保持状态,要不然随时有可能被打下神坛。

在娱乐化方面花费多少时间和精力?电竞战队面临艰难的取舍。

另外阿布也坦承,电竞选手毕竟不是娱乐艺人,并没有受过相关专业训练。让他们自己来进行娱乐化创作,产出电影、歌曲、才艺等产品,这种可能性不大。拍电影需要外形条件好,还需要演技出众;出唱片需要声音好,会唱会跳。考虑到绝大部分电竞选手性格内向、学历不高,他们这方面的技能储备明显是不够的。

无论是参与拍摄还是提供队伍知识产权,都能直接带来收入,但对具体的方式,目前各大俱乐部也都在尝试和摸索中。

“目前在EDG战队内,也没有哪位队员特别适合娱乐行业。他们把一切精力都奉献给了电竞,其他方面的特长没有得到锻炼。现在可以想见的方向是参加综艺节目,比如脱口秀或真人秀之类。现在NiceTV和战旗TV都在进行真人秀方面的尝试,未来俱乐部可以从这方面进行娱乐化。”说完,阿布又补充道,“在可预见的未来,电竞俱乐部在娱乐化方向上的营收,最多只能占据到俱乐部的50%,我们还需要更多探索。”

总得来说,第一种模式容易进行,对战队成绩的影响在可控范围内。但其不具备直接变现能力,见效较慢。而第二种模式能很快得到娱乐化产品,可以直接变现,其弱点则是电竞选手很难成为好的娱乐产品创作者。而且俱乐部很难在时间和精力上取得平衡,一旦在娱乐化上投入的精力过多,影响了战队成绩,战队的商业价值就会迅速降低。

关于荷花诗句范文4

开展宣传教育,与婚育新风进万家活动相结合

一是制作、发放宣传品到户,使广大计生家庭了解关爱女孩的具体措施。二是实施新型生育文化建设工程,规划建设伏羲婚育文化公园。我们将新乐伏羲文化与现代婚育文化有机融合,以家庭为切入点,依托新型家庭人口文化,投资20余万元,规划建设了伏羲婚育文化公园。以群众喜闻乐见的形式宣传当前的人口计生政策、优生优育、生殖保健知识。三是精心策划开展各种宣传活动。举办“关爱女孩成长、争创文明家庭”经验交流会:开展“关爱女孩行动”进校园;开展“婚育文明村、婚育文明家庭”等各具特色的宣传活动。四是组织开展了一系列影响广泛、效果良好的宣传活动,在全市营造了“生男生女一样好、女儿也是传后人”的科学文明的生育观念氛围,有效遏制了重男轻女的不良传统习俗。

落实优先优惠政策,抓好奖励扶助,与利益导向机制相结合

进一步加强利益导向机制建设,帮助实行计划生育的独女户和双女户家庭脱贫致富,建立和完善有利于女孩成长的利益导向机制和社会保障体制,落实优先优惠政策,开展帮扶救助活动。妇联结合“春蕾计划”帮助贫困女童上学,团委借助“希望工程”向计生女孩家庭倾斜政策,教育部门对独生女在中高考时加10分,农行、科技、药监等部门在职工中开展救助贫困女孩家庭活动。乡村两级把计生女孩户作为“三结合”户的首选条件,通过小额贷款、扶贫项目、减免义务工、发放爱心帮扶卡等优惠待遇促进群众婚育观念的转变。在开展的结对帮扶活动中,结对干部要为被帮扶户出点子、想办法,提供物资帮助等,解决女孩户在生产、生活、学习等方面的困难。

今年,新确认奖扶对象64人,奖扶对象达到786人;新增特扶对象4人,特扶对象达到28人。严格落实独生子女奖励政策,独生子女父母奖金兑现率100%。独生子女父母退休时3000元一次性奖励全部落实到位。为102名中考、80名高考的农村独生子女办理了加分。由市财政为全市农村独生子女家庭缴纳了新农合参合费。按照Vl视觉识别系统要求,建成了计划生育家庭关怀扶助中心,抽调专人专职负责此项工作。

依法行政,与治理出生人口性别比相结合

关于荷花诗句范文5

【关键词】 巨噬细胞

关键词: 巨噬细胞;视网膜色素上皮细胞;单核细胞趋化蛋白-1;地塞米松;道诺霉素

摘 要:目的 评价巨噬细胞调理液(MCM)对视网膜色素上皮(RPE)细胞合成单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的作用. 方法 在培养的人RPE细胞的培养液中加入200mL・L-1 培养人巨噬细胞调理液(MCM),培养2,4,8,16,24和48h后,对培养的细胞进行免疫组化和原位杂交,用Western blot检测培养的上清液中MCP-1的含量.同时在培养液中加入地塞米松(10-8 ,10-7 和10-6 mol・L-1 )和道诺霉素(2,20和200mg・L-1 )重复上述实验,观察在此条件下MCM对MCP-1合成的作用. 结果 200mL・L-1 MCM培养条件下RPE细胞2h时已检测出分泌的MCP-1并在16h达到较高水平.同时原位杂交和免疫组化在细胞中检测到MCP-1的表达.加入地塞米松(P

Keywords:monocyte chemotactic protein-1;macrophages;retinal pigment epithelial cell;dexamethasone;daunorubicin

Abstract:AIM To examine the effects of cultured macrophage conditioned media(MCM)on production and gene expression of monocyte chemotactic protein-1(MCP-1)of human retinal pigment epithelial(HRPE)cell.METHODS HRPE were cultured with200mL・L-1 macrophage condi-tioned media(MCM)for2,4,8,24or48h,and with addi-tional dexamethasone(10-8 ,10-7 ,10-6 mol・L-1 )or daunorubicin(2,20,200mg・L-1 ).Secreted MCP-1in the supernatant of cultured RPE was measured using Western blot assay,and intracellular MCP-1was detected by in situ hybridization and immunohistochemistry.RESULTS Secret-ed MCP-1was detected with200mL・L-1 MCM for2hours after incubation,and reached the most intensity at16hours.MCP-1in cytoplasm was noted during the same time.The levels of MCP-1in cultures with Dexamethasone(P

0 引言

视网膜脱离后发生的一个重要变化就是血-视网膜屏障的破坏,血浆成分和炎症细胞可以借此进入视网膜下腔参与视网膜脱离后的炎症过程[1] .对新鲜视网膜脱离后视网膜下液中的细胞成分进行分析,发现其中的主要成分是巨噬细胞和淋巴细胞[2] .巨噬细胞在增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)中有重要作用[3] ,但巨噬细胞参与PVR形成中的作用机制还没有详细地得到揭示.单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是参与炎症过程的一种重要炎症细胞趋化因子,其靶细胞是巨噬细胞和淋巴细胞,在临床和实验研究中,发现PVR的前膜组织中存在这种因子[4] .本实验的目的是研究巨噬细胞的培养调理液对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞合成MCP-1的作用,以及地塞米松和道诺霉素对这一过程的影响.

1 材料和方法

1.1 材料 细胞系为原代培养人RPE细胞.由本院王雨生副教授惠赠4个不同人来源的第四代RPE细胞作为实验细胞.

1.2 方法

1.2.1 巨噬细胞调理液(MCM)的制备 取肝硬化患者的腹水200mL,1000r・min-1 离心5min,制成细胞悬液,孵育,24h后用Hank’s液冲洗未附壁细胞,48h用胰蛋白酶消化去除成纤维细胞.1mL・L-1 利多卡因Hank’s液孵育解除附壁;制成(3.8~5)×1010 ・L-1 细胞悬液孵育36h后,取细胞培养液,针头滤器过滤,-20℃保存备用.

1.2.2 RPE细胞爬片制备和培养上清液的收集 RPE培养于盖玻片上至细胞铺满.次日加入含200mL・L-1 MCM的DMEM,另设地塞米松条件组(DEX,10-8 ,10-7 ,10-6 mol・L-1 )和道诺霉素条件组(2,20,200mg・L

-1 )重复上述实验.分别于加药后2,4,8,16,24和48h取出细胞爬片,PBS漂洗,多聚甲醛固定,空气干燥,-20℃保存备用.不加处理因素的作为正常对照组.在75mL培养瓶中,待RPE细胞生长满瓶底后,重复上述刺激条件,并在相应时间点收集细胞培养的上清液,-80℃保存待用.

1.2.3 原位杂交染色 地高辛标记MCP-1的DNA探针(大连宝生物公司,中国)序列为5’-TTG-GGT-TTG-CTT-GTC-CAG-GTG-GTC-CAT-GGA-3’.原位杂交试剂盒购自博士德公司(中国).细胞爬片灭活内源性过氧化物酶,1∶200蛋白酶K消化10min,滴加含探针的原位杂交液,杂交24h,洗涤,封闭,滴加小鼠抗地高辛抗体、生物素抗羊化小鼠IgG,加入显色剂后显微镜下控制显色.水溶性封片剂封片,镜检.

1.2.4 免疫组织化学染色 试剂盒购自中国博士德公司.细胞爬片用正常羊血清封闭,滴加小鼠特异性抗体(抗人MCP-1抗体,美国PharMingen公司),4℃过夜,漂洗后顺序滴加生物素化羊抗小鼠IgG和SABC复合剂,加入显色剂后显微镜下控制显色.水溶性封片剂封片,镜检.

1.2.5 Western blot分析 RPE细胞培养上清液样品100μL,阳性对照用重组人MCP-1(美国Promega公司)10μg・L-1 .用SDS-PAGE分离蛋白后,放入电转移装置中,使胶上的蛋白转移至硝酸纤维素膜上,4℃转移过夜,丽春红S蛋白染色,脱色,照相,将分子量标准染色.将滤膜放在塑料袋中,封闭1h,加入稀释的第一抗体,PBS漂洗,加入辣根过 氧化物酶标记的第二抗体,加入DAB显色2~3min,水洗中止反应,照相.

结果分析:分析处理组阳性(显色)条带的蛋白表达量.用HP IAS-1000高清晰度彩色病理计算机图像分析系统根据信号的强弱分析蛋白的表达量,以灰度表示强弱(灰度值愈大表示愈强,分级256).阳性对照条带的灰度值设为100%,其他条带的灰度经测量后,以对照条带比对的百分数表示.

统计学处理:对不同培养条件下,RPE上清Western blot条带的灰度值进行t检验.

2 结果

2.1 原位杂交 MCP-1的mRNA表现为细胞胞质中浓淡不一的紫蓝色着色,其中在巨噬细胞调理液刺激下,2h组表现为较浅的着色,4h组开始出现明显的着色,随着时间的延长,细胞质中的着色逐渐加深(Fig1).

2.2 免疫组化 细胞内的MCP-1表现为胞质中浓淡不一的棕色着色.4h组开始有明显的着色,随着时间的延长,细胞质中的着色逐渐加深(Fig2).

图1 - 图2 略

2.3 Western blot检测 表明培养的人RPE细胞在未无刺激的条件下,MCP-1的表达为阴性,200mL・L-1 MCM培养条件下,2h时已检测到MCP-1,而且随着时间延长而增多,并在16h达到较高水平(Fig3A).加入DEX后,MCP-1分泌的高峰值明显下降(P

转贴于

图3 略

3 讨论

本研究结果表明20%MCM条件下可以促进RPE细胞合成MCP-1,并呈现时间依赖性.地塞米松和道诺霉素可以抑制MCM的这种作用,地塞米松的作用明显而持久,并呈现剂量依赖性;而道诺霉素可以轻度降低MCP-1的合成.二者均可使MCP-1分泌的时限后延.以往PVR病理证实,在PVR的视网膜前膜中有RPE细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞样细胞、巨噬细胞样细胞、巨噬细胞和淋巴细胞等多种细胞成分[5] .巨噬细胞在PVR的发病过程中有一定的作用:首先它是普通炎症反应中较早出现在炎症部位的炎细胞,它主要负责吞噬细胞的碎片.同时培养的巨噬细胞可以产生许多炎前性因子,如:TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8等[6] .

MCP-1作为一种趋化因子,可以特异地趋化巨噬细胞和淋巴细胞到炎症部位,而参与炎症反应.在临床和实验研究中,发现PVR的前膜组织中存在这种因子[4] ,同时在PVR和视网膜脱离后的玻璃体中可以检测到,而患者的血液中为阴性,说明其产生是 一种局部的反应.眼内细胞包括RPE细胞和胶质细胞在TNF-α和IL-1β的刺激下,可以产生MCP-1,IL-8和某些生长因子如转化生长因子-β(TGF-β)等[7] .而这些生长因子又可以促进RPE细胞的增殖.在这样的一个循环过程中,由巨噬细胞游走向炎症部位聚集开始,自分泌炎前性因子TNF-α和IL-1β,这些因子又可以刺激眼内细胞产生MCP-1,从而有更多的巨噬细胞向炎症部位聚集,从而进一步放大了炎症过程,同时产生的生长因子又可以刺激RPE细胞和胶质细胞的增殖.由于我们实验中取材于肝硬化腹水患者腹水中的巨噬细胞,取材的数量有限,而且巨噬细胞是一种终末细胞,本身不能繁殖,所以定量测量MCP-1mRNA的表达方法如:Northern Blot较困难.我们通过Western blot方法检测培养RPE细胞上清中MCP-1并对条带的浓度进行比对,发现在200mL・L-1 作用下,RPE细胞分泌的MCP-1呈时间依赖性,这个作用通过原位杂交和免疫组化的结果得到验证.

地塞米松和道诺霉素对抑制眼内炎症[8] 和PVR[9] 的作用已经在实验和临床上得到证实[10] ,我们的结果表明二者对炎症早期趋化因子的合成有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制MCP-1的mR-NA合成[11] 和抑制细胞的生长起作用.地塞米松对培养RPE细胞的毒性较小,而且作用呈剂量依赖性增强.大剂量的道诺霉素对培养的RPE细胞有一定的毒性作用.临床上将二者合用可能对抑制眼内炎症和PVR发生的早期过程有较好的治疗作用.

参考文献

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[2]Bakunowicz,Lazarczyk A,Sulkowski S,Moniuszko T.Com-parative studies of morphological changes and interleukin con-centration in subretinal fluid of patients with retinal detachment [J].Ophthalmologica,1999;213(1):25-29.

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[5]Baudouin C,Fredj-Reygrobellet D,Gordon WC,Dralands L.Immunohistologic study of epiretinal membranes in proliferative vitreoretinopathy [J].Am J Ophthalmol,1990;110(5):593-598.

[6]Hui YN,Shi YN,Zhang XH,Yang K,Yu CH.Proinflamma-tory cytokines in macrophages induced proliferative vitreo-retinopathy modle of rabbit [J].Zhonghua Yanke Zazhi(Chin J Ophthalmol),1999;35(2):140-143.

[7]Elner VM,Burnstine MA,Strieter RM,Kunkel SL,Elner SG.Cell-associated human retinal pigment interleukin-8and mono-cyte chemotactic protein-1:Immunochemical and in-situ hybridization analyses [J].Exp Eye Res,1997;65(4):781-789.

[8]Polansky JR,Weinreb R.Steroids as anti-inflammatory agents [J].Ocular Pharmacol,1984;69(4):461-538.

[9]Wiedemann P,Sorgente N,Bekhor C,Heimann K.Dauno-mycin in the treatment of experimental proliferative vireo-retinopathy [J].Invest Ophthalmol Vis Sci,1985;26(3):719-724.

关于荷花诗句范文6

    为了加强2001年春运期间组织民工有序流动工作的领导与组织工作,维护广大民工的合法权益,保证首都社会秩序的稳定,现将劳动和社会保障部《关于印发2001年春运期间组织民工有序流动工作计划的通知》(劳社厅发〔2000〕17号)转发给你们,同时结合我市实际情况,提出如下几点要求,请一并贯彻执行。

    一、提高认识,加强领导。一年一度的春运工作关系到广大民工的切身利益,关系到首都的社会秩序的稳定。各部门、各单位要进一步提高认识,将春运工作作为开年一项利国利民的首要任务抓紧抓好。各区(县)劳动和社会保障局均要成立春运工作领导小组,主管领导要亲自挂帅,要设立办公机构,派专人负责,通过制定工作方案,建立春运值班、带班制度,设立值班电话等方式,加强春运工作的领导组织,做到各司其职、各尽其责。同时负责协调有关科室做好各项任务措施的落实。

    二、开展广泛的政策宣传活动。春节前,各区(县)劳动和社会保障局、企业主管部门要认真贯彻执行国务院、劳动和社会保障部有关文件规定,并及时将政策下发宣传到辖区或所属各用人单位。同时,要选择本地区1~2处民工流动频繁的火车站、长途站开展宣传日活动。通过设立标语宣传栏、散发《致外地务工人员一封信》、咨询解答等形式进一步做好春运有关政策法规的宣传教育。

    三、1月9日至3月17日春运期间及春运过后1个月内,本市将暂停用人单位招用新民工,市、区县劳动和社会保障部门暂停办理《外地来京人员就业证》等有关手续。企业在此期间因生产、经营特殊需要,需招用外地务工人员的,必须提前15天向市劳动和社会保障局提出用工申请。经批准后,方可招用,并依据有关规定办理招用手续。

    四、加强民工流动的监测和监控工作。为了加强春运期间民工有序流动的管理,及时准确把握民工离京、返岗的时间人数,各区(县)劳动和社会保障局要选择10家使用外地务工人员百人以上的用人单位进行重点动态监测,重点了解离京、返岗的时间人员安排。并将有关情况分析整理后于1月9日至2月17日期间每周五将情况上报市劳动保障局就业处。市建工集团、市城建集团、市政工程局、市二商局等重点监控企业也要将所属企业使用外地务工人员的变动情况按上述时间进行上报。劳动和社会保障部设在本市崇文、海淀两区的民工流动监控点要按照部里的工作要求,认真做好春运期间百名民工流动的监控工作,并将监控信息按时上报劳动和社会保障部。

    五、组织开展劳动用工大检查工作。为了维护春运期间本市劳动力市场正常秩序,各区(县)劳动和社会保障局要在春运期间组织开展劳动用工大检查,重点对私招乱雇、拖欠克扣民工工资、非法职业中介行为等违法问题进行有针对性、有重点的劳动监察。

    六、在春运期间,各级劳动和社会保障部门要加强对民工流动的动态信息的收集、信息上报工作,对出现的重大突发事件要及时上报市劳动和社会保障局就业处。各企业主管单位要加强工作中的指导协调,统筹安排所属企业务工人员的休假、返岗工作。企业对于留京工作的务工人员要做好工作、生活的安排,开展多种形式的慰问、文化娱乐活动,丰富务工人员的节日生活。

    七、各区(县)劳动和社会保障局及重点监控企业要认真做好春运期间组织民工有序流动的工作总结,并于2月15日前将总结上报市劳动和社会保障局就业处。

    附件:劳动和社会保障部办公厅关于印发2001年春运期间组织民工有序流动工作计划的通知

各省、自治区、直辖市劳动和社会保障厅(局):

    为做好2001年春运期间组织民工有序流动各项工作,现将《2001年春运期间组织民工有序流动工作计划》印发你们。请结合本地实际情况,贯彻执行。

    请于2001年1月5日前将你厅(局)春运期间组织民工有序流动工作负责人、工作人员的姓名、联系电话(手机)和传真号码传报我部。

    联系人:贾丽、黄华波

    联系电话:(010)84201056,84201656

    传  真:(010)84227798

    2001年春运期间组织民工有序流动工作计划

    2001年春运期间组织民工有序流动工作,要继续认真贯彻国务院春运期间组织民工有序流动和农村劳动力就地安置的各项方针政策,充分运用近年来取得的成功经验,加强地区间、部门间合作,确保春运期间民工流动安全有序。具体安排如下:

    一、2000年12月~2001年1月上旬

    1.制定上报工作方案。分析预测本地农村劳动力流动数量、方向及趋势,协调有关部门,制定春运期间组织民工有序流动工作方案和应对突发事件的工作预案。2001年1月5日前各地将工作方案报劳动保障部。

    2.部署春运期间重点监控工作。指导和督促重点监控地区按照劳动保障部要求,做好检查网点设置,开展人员培训,制定必要的调控预案等项准备工作。2001年1月9日开始,上报春运期间民工流动信息。

    3.开展流动就业工作检查。检查内容为:春运期间组织民工有序流动工作准备情况;农村劳动力就地安置和有序流动政策措施落实情况;重点监控工作准备和进展情况;清理整顿劳动力市场,以及保障民工权益情况等。检查方式:以各省(区、市)自查为主,1月中旬劳动保障部派出检查组到有关地区督查。

    二、2001年1月中旬-2月中旬

    1.开展宣传工作。输出、输入地要根据本地实际,开展多种形式宣传活动。宣传内容:城乡就业形势,农村劳动力流动就业和就地安置政策等。宣传工作要开展到农村劳动力流动量较大的乡村、企业和车站码头。

    2.配合有关部门做好返乡民工疏运工作。输入地要调查了解企业春节期间放假安排和民工返乡情况,并通报相关输出地,协助有关部门搞好民工返乡运输组织;输出地要了解民工返岗时间及数量,做好本籍返乡民工的输运接应工作;中转地要积极开展疏导分流工作。

    3.做好春运期间信息调查预测。重点开展春节期间百名民工抽样调查,指导重点监控地区开展信息监测和通报。随时上报民工流动动态。

    4.协助有关部门搞好返岗民工输送工作。输出地与铁道、交通部门配合,采取组织专车(列)、预订团体票等措施,组织好民工返岗工作;输入地与有关部门配合,帮助返岗民工及时安全到岗。要集中力量做好正月初一后和正月十五后的民工返岗工作。

    5.开展疏导分流和调控,劝阻劝返盲目外出人员。输出地要发挥基层劳动就业服务机构的作用,加大政策宣传力度,动员返岗民工不携带新民工外出,劝阻盲目外出人员;输入地、中转地与民政、公安部门配合,做好盲目外出人员的疏导分流、劝阻劝返和收容遣送工作。重点监控地区要开展对外出民工流动的调控。

    6.整顿劳动力市场秩序。输入地要加强劳动监察,对劳动力市场和企业用工情况进行专项监察,严厉查处私招乱雇、非法职业中介行为。

    7.做好春运期间值班工作。各主要农村劳动力输出、输入地建立春节期间值班、带班制度,搞好值班工作安排,保证春节期间信息畅通。

    三、2001年2月下旬-3月中旬

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