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露营注意事项范文1
关键词：过水路面；施工质量控制；技术
中图分类号： O213.1 文献标识码： A 文章编号：
过水路面虽然有很多优点，但也存在一些不容忽视的缺点。主要有：水泥混凝土面层易破损、裂缝、断板、错台；和沥青混凝土路面的连接处跳车严重，易破损；较短的过水路面使纵坡变换频繁，易造成颠车；阻水拦沙，易造成上游淤积、下游冲刷；汛期洪水时造成短时间阻车；受河流地下水位影响出现冻胀，导致横纵裂缝等。但只要在设计施工中加以注意，以上缺点也会迎刃而解。
一、过水路面位置的选择
过水路面位置的选择是过水路面设计的重要步骤，过水路面择位恰当与否，直接关系到路基的稳定、过水路面的使用功能以及工程造价的高低。因此，只有合理的选择过水路面的位置才能做出正确合理的设计。过水路面的位置选择基本上应服从路线走向，但当河沟宽浅时，可根据实际情况做适当调整，结合选线共同确定其位置。一般要求要与洪水位流向垂直，斜的过水路面会增加工程量和阻水面积，但也不要强求正交，造成桥头线形标准过低，行车不便。
此外，过水路面所处的位置，还需要考虑以下几点：
(1) 河面宽、河床稳定、水流顺道。
(2) 平时无水或者水很浅，汛期洪水时整个河滩流水，水流慢，不向一边冲深。
(3) 上游两岸堤坝坚固，做过水路面后，不至于冲坍堤坝，淹没农作物和村庄。
(4) 与修建永久性桥位结合考虑，使改桥时改线不长。
综上所述，过水路面在设计过程中应根据其用途和近、远期交通流向和流量的需要，结合实际路线平、纵面和水文、地形、地质等条件，以及对邻近构筑物和公用设施的影响大小等要求综合考虑来确定。
二、原材料质量控制
原材料是保证面板强度的基础，所以过水路面的混凝土路面原材料必须合格。水泥作为混凝土的胶结材料，必须采用质量好，性能稳定，有国家颁发的准用证的产品，并做复试检测，合格后方能使用。碎石作为骨料必须用坚硬碎石有一定强度，禁止采用石灰岩碎石。应对其压碎值、针片状含量、含泥量、级配作检测，粒径一般在20mm~40mm之间。细集料作为骨料空隙的充填料应采用中粒砂，含泥量应符合规范要求。应由颗粒坚硬、强度高、耐久性好的天然水洗砂组成。砼采用外加剂时，必须具有出厂合格证，并严格按配合比规定的掺量添加。
三、砼配合比
配合比设计对混凝土强度非常重要。首先，配合比试验用的材料必须与施工用材一致，以真实反映配合比情况。根据设计弯拉强度、耐久性、耐磨性、和易性等要求和经济合理的原则，通过计算、试验、试拌调整，选择最佳砼配合比。各交通等级路面的28d设计弯拉强度标准值应符合规范的要求。
四、路面垫层、基层的控制
基层强度、平整度、标高和橫坡是保证面板质量的基础。基层平整度差会造成路面板厚度不一，有局部超厚也有局部厚度小于设计值，过水路面基层应根据排水方向设置成一面橫坡，所以过水路面在基层施工时一定要控制好平整度和橫坡。
基层标高是控制板厚度的关键，控制时宁低勿高，在施工时，施工单位往往为节约成本，从垫层起就有意抬高标高，意欲减少基层和面层厚度，这是非常错误的做法。
五、施工质量控制
1、模板安装
模板的质量和安装质量直接影响混凝土路面的平整度，模板采用标准槽钢加工较好。模板的高度应与砼板厚一致，接头要紧密，用专用配件牢固固定，不能有错台、错茬现象，要保证模板的稳定，模板安装应能承受摊铺、振捣、整平设备的负荷下，不发生位移和变形。需要设置拉杆和传力杆时，模板应设置插入孔和定位套管。
2、砼的拌合和运输
混凝土拌和质量将直接影响混凝土强度，故在施工组织时，拌和设备宜采用电子计量的配料器和强制式搅拌机，确保严格按配合比计量用材，且其功率大，效率高，拌料均匀。 严格控制好砼的水灰比，砼生产后立即做坍落度试验，塌落度达不到设计配合比要求的不得使用，原则上要使用干硬性砼，坍落度控制在3—5cm。
砼在运输过程中，要防止砼产生离析，装料高度不应超过1.5m并要防止漏浆。夏季要遮盖，冬季要保温。
3、砼的摊铺
砼摊铺布料应注意控制松铺系数（1.1—1.25）和长度，板厚大于22cm时分两次摊铺，下层厚度宜为总厚度的3/5。砼的振捣不得有漏振、欠振、过振的现象，以砼不再沉陷和不冒气泡为宜，然后用平板式振捣梁匀速振一遍后采用三轴整平机整平，整平过程中对缺料的地方及时补料，严禁用纯浆找平。经过三轴整平机反复整平后，面板表面的平整度基本满足规范要求，然后用人工或机械饰面，饰面结束后用3m靠尺在纵横两个方向检查，以没有空隙，表面无抹面印迹，致密均匀，无漏骨为饰面合格标准。
4、接缝施工
纵缝施工：铺筑面积小于路面总宽度时，纵缝位置应按车道宽度设置，并插入拉杆浇筑砼。胀缝在砼路面中具有重要的作用， 胀缝失效或传力杆不水平，会使面板先在胀缝处出现病害，所以，胀缝施工时传力杆一头必须能滑动，传力杆应用专门的托架托起，并保持水平。缩缝施工的关键是掌握好切缝时间，当平均气温在30℃左右时，软切时间不宜超过6-8h;当平均气温在25℃左右时，切缝不宜超过10-12h；防止砼路面应温差应力出现断板。
5、过水路面与沥青砼路面连接
为使过水路面与沥青砼路面接头处车辆通行平顺，其连接处应设置过度段，过渡段宜采用砼搭板结构。砼搭板与过水路面处应使用拉杆钢筋连接，搭板上铺筑沥青混凝土面层。
6、抗滑构造
抗滑构造是提高过水路面行车安全性的重要措施之一。抗滑构造宜采用机械刻槽机硬刻，砼抗压强度达到40%后开始硬刻槽，亦不得中途抬起或改变方向。一般路段可采用横向槽，弯道宜采用鱼脊梁式刻槽。
7、养生与填缝料
砼路面铺筑完成或作抗滑刻槽后应及时养生，一般采用保湿膜、土工布、草帘等覆盖物保湿养生并及时洒水，昼夜温差大于10℃的地区还应采取保温保湿养生措施。
填缝为防止路面降水渗入面板，缩缝、胀缝、纵缝均应灌缝，灌缝前应将缝隙用机械清除干净，确保缝隙填满灌缝料。
六、过水路面的防护及交通安全措施
过水路面的防护主要是防止洪水对过水路面的损坏，过水路面的上下游均要设置截水墙及护坡、跌水等砌体防护设施。
过水路面两端需设置过水路面警告标志，路面两侧需设置警示轮廓桩，当洪水水量较小时可诱导车辆缓慢通过，提高过水路面通行能力。
结语 总之，控制好过水路面的质量，只有严格按照规范要求施工，把握好过水路面位置的选择、原材料质量控制、路面垫层、基层的控制、施工质量控制等关键环节，才能避免过水路面早期及后期产生的各种病害，延长使用寿命，降低养护成本，确保行车安全。
参考文献：
[1]张学文,孙凤娣.涵管式过水路面在山区小河道上的应用[J]. 吉林水利. 2005(10)
露营注意事项范文2
【关键词】沥青；道路施工；应用；注意事项
[Abstract] with the rapid development of Highway Engineering in our country, because of its advantages of asphalt pavement basic seepage prevention, durability, firmness, and resistance to low temperature and good quality problems caused by cracking, widely used in road construction. This paper discusses the actual application of asphalt in road construction, and analysis of asphalt need to pay attention to in the process of road construction problems, to ensure the construction quality of the asphalt can improve fundamentally.
[keyword] asphalt; road construction; application; matters needing attention
中图分类号：TF526+.3文献标识码：A 文章编号：2095-2104（2013）
前言
现今，我国交通事业有着较为迅速的发展，建设公路也有着较大的规模。公路工程现代化建设中沥青属于相对重要的施工方式。因为公路工程实际的建设中沥青路面有着较为广泛的利用，且较为复杂的施工工艺，因此，道路施工的整体质量在很大程度上受到沥青施工质量的影响。本文重点分析道路施工中沥青的应用以及相关注意事项。
沥青在道路施工中的具体运用
2.1摊铺沥青混合料施工
首先通过分析施工设备、搅拌机工作能力、摊铺宽度、摊铺厚度等方面的具体情况，确定摊铺机运行的实际速度。预先做好2~6m/min摊铺速度的设计。道路运用沥青进行施工时要确保摊铺施工能够处于一次性、均匀、缓慢等状态，对于摊铺施工的速度不能随意进行更改。摊铺沥青施工过程中通常不用工人做任何整修处理，倘若存在相对特殊的情况，则应该在专业工作人员的引导下，采用混合料更换以及人工找补等措施，全面铲除有着较多质量缺陷的位置，确保摊铺施工的整体质量得到提高[1]。摊铺施工时应该采用扭绕式类型的钢丝，控制直径小于6mm的范围内，同时确保拉力超过800N，将钢丝支架每隔5m进行设置。摊铺机施工时在前面的位置将钢丝在左侧架设，同时将横坡仪安装在摊铺机上进行控制，同时将钢丝安装在摊铺机的右侧进行架设处理。
2.2碾压沥青路面的施工
道路施工过程中沥青路面的碾压施工是相对重要的施工流程，沥青路面在进行碾压施工时应该对压实机运行的速度进行严格控制以及密切灌注，确保压实施工的质量得到明显提高。由于沥青路面在具体的碾压时，碾压的次数与速度属于相互制约、相互作用的。倘若碾压施工有着较快的速度，为了给碾压质量提供保障，那么则要将碾压次数合理的增加，压实施工的效率则有所降低[2]。由此得知，沥青路面的碾压施工有着合理的速度是相对重要的，对于促进碾压效率提高、碾压时间减少有着非常重要的意义。沥青路面实际施工过程中，应该控制速度在2~4km/h的范围内，并且合理的提高轮胎压路机的速度，同时要将速度在5km/h的范围内进行控制。倘若有着过慢的速度，则会造成道路工程压实、摊铺之间会出现空隙，对施工质量产生影响。所以，选择碾压施工的速度时，应该要确保沥青混合料有着良好的碾压质量，尽量将碾压速度提高，将施工次数减少，确保工作效率得到明显提高。
2.3沥青路面接缝施工以及压实技术
道路施工中要向将沥青路面的使用寿命、耐久性等全面提高，则要确保混合料有着合理的配合比设计。倘若混合料配合比在优化时没有全方位进行压实处理，则会导致沥青路面的实际功能有所降低。对沥青路面进行压实处理主要是讲混合料中含有的缝隙进行全面减少，确保路面实际的密实度得到有效提高，从根本上促进沥青路面使用周期得到增强。沥青路面的接缝施工应该通过两台摊铺机进行施工，先在混合料完成摊铺的位置将10~20cm的宽度留下不进行压实施工，则会出现摊铺层有5~10cm的厚度处于重叠状态，通过热接缝的操作进行跨接碾压施工确保缝迹得到消除。如果施工缝是属于横向类型的，则通过平接缝进行处理，通过直尺在施工缝纵向延伸的部位进行测量，将直尺与摊铺层脱落的位置当成处理裂缝的主要位置，采用锯缝机进行割齐处理后将其铲除，再次进行摊铺施工时，先要干净的清理接缝施工时存在的粉尘，通过摊铺机在接缝位置进行摊铺施工，通过钢筒式压路机以横向压实的方式进行碾压施工，首先是从路面上进行跨缝施工，接着往新铺面层进行施工。
沥青运用在道路施工中的相关注意事项
（1）道路施工中沥青路面常见的坑槽危害。导致沥青公路路面出现坑槽的因素是由于沥青材料加热时有着过高的问题，没有及时的清除垃圾，没有足够的摊铺厚度，没有足够的碾压，造成道路施工时无法全面修复原有坑槽。根据这种情况，道路施工时应该要有着干净、平整的路面，一旦发现有坑槽的情况，则应该采取相应的措施进行处理，避免出现质量缺陷，在维护路基的过程中，还应该加大道路运输管理的力度，促进混凝土使用周期得到明显增强[3]。
（2）沥青在道路施工的实际运用中出现裂缝也是需要注意的问题，沥青路面的裂缝主要是以网状、纵向、横向等裂缝为主。因此，沥青运用在道路施工时要想全面防治路面出现的裂缝，则首先要从公路工程的设计、沥青材料的选择、沥青材料施工、沥青路面养护等方面进行控制。通过分析施工季节、地质条件、道路等级等方面的因素，通过合理可行的措施对沥青道路工程出现的裂缝进行全面预防。同时合理的对沥青面层进行施工，不但能将成本投资减少，同时还能够使温缩裂缝与干缩裂缝得到有效防止。另外，在沥青材料选择时，应该尽量的确保材料有着较好的抗裂性能，例如采用玻璃纤维格栅、钢筋网、石屑、砂、土工布以及改性沥青等进行施工。
（3）另外，通过全面分析沥青混凝土路面的结构机理、选用材料等方面的情况得知，道路实际的施工过程中，还应该做好以下几个方面的内容：首先选择混合料时要确保级配材料满足较小空隙率、较小粒径等基本要求，并且将沥青与配料的比例全面控制，有着严密的碾压以及均匀的搅拌，同时确保摊铺路面的厚度处于合理、科学的范围内。其次，改造旧路工程时要方式路段的具体强度应该要低于弯沉的设计值，避免出现强度不足的情况，应该要均匀的对混合料进行加热，防止道路路面出现推移和坑槽的情况。最后，及时对路基路面存在的浮灰、浮土等清除干净，做好二次补强层施工的控制工作。
结束语
随着公路工程建设的快速发展，全面使用或者推广不同方面的施工施工工艺。道路施工过程中采取相应的措施控制技术质量是非常重要的，对促进道路施工质量的提高有着非常重要的作用。因此，沥青在实际运用过程中，应该做好质量监控的工作，并且注意在施工过程中遇到的问题，及时采取相应的措施进行解决，确保道路施工的整体质量得到整体提高。
【参考文献】
[1]尹汤军.沥青路面公路工程施工现场的技术管理探析[J].现代物业(上旬刊),2011,16(11):247-248.
露营注意事项范文3
关键词：卢梭；自然主义教育；中国英语教育现状；启示
文/王力佳（作者单位：云南师范大学）
一、卢梭简介
让·雅克·卢梭（Jean-JacquesRousseau）是瑞士著名哲学家，1712年出生。他出生后不久母亲便离开了人世，随后他的父亲也被放逐，因此他一直过着孤苦伶仃的生活。1750年，卢梭在30岁时一举成名。随后他又写出了许多其它著作，其中包括《论不平等的起源》（1755），《埃罗伊兹的故事》（1761），《爱弥尔》（1762），《社会契约论》（1762）和《忏悔录》，所有这些著作都提高了他的声望。此外卢梭对音乐有浓厚的兴趣，写了两部歌剧：《爱情之歌》和《村里的预言家》。
从1762年起，卢梭由于写政论文章，与当局发生了严重的纠纷。他一生的最后二十年基本上是在悲惨痛苦中度过的，1778年他在法国埃及迈农维尔去世。
二、自然主义教育理论
卢梭认为，人是依据自然制定的计划而成长的。每个时期，都有不同的学习内容，人所做的就是顺应这个进程进行学习。依据人自然发展的进程与不同时期的身心发展特点，因此卢梭将自然教育划分为4个阶段：
1.幼儿期的教育（0～2岁）卢梭认为，这一时期主要是婴儿身体的成长期，所以婴儿的身体保养是幼儿期的主要任务。良好的身体状况是学生接受各种教育的基础。为了让孩子从小养成顺应自然的生活方式，卢梭主张婴儿应该在乡村环境中成长。
2.儿童期的教育（2～12岁）
随着幼儿的不断成长，他们的独立意识开始形成，但是儿童对外界认识仍然依赖对事物的感官判断，如何针对儿童的感官进行教育是这一时的主要任务。卢梭认为，感觉教育应遵从由触期觉到视觉，再到听觉的顺序，绘画、唱歌、游戏是锻炼儿童感觉的重要方式。
3.少年期的教育（12～15岁）
幼儿期、儿童期的教育让儿童获得了进一步学习的条件，少年期转入更进一步的教育，也就是所谓的智育和劳动教育。在卢梭的观念里，智育不是为了传授科学知识，而是培养儿童的学习思维。
4.青年期的教育（15-20岁）
青少年的道德教育、信仰教育也是卢梭特别强调的。青年阶段是一个人一生中最富激情和热情的年龄阶段。良好的道德教育可以让人获得正确的价值观、世界观和人生观。
三、我国英语教育的现状
英语现在已经成为国际通用语言，学好英语对我国参与到全球化进程中尤为重要。在我国，英语已成了中国学校普遍开设且学程最长的科目，但是大量英语专业本科毕业生找不到工作，大部分岗位又找不到满意人才。有些学者已经发现，今日中国英语教育不仅浪费了大量的人力、物力、资源，还损伤汉语，消磨中华民族的自尊自信。这是因为在当下的中国教育界，存在一些误区。
（一）盲目追求早教。中国成人对孩子的起跑线教育过度关注，甚至形成早教决定一切的观念，这对孩子的成长及教育都有不良影响。
（二）教育内容缺乏科学性。在中国，学生们进行英语学习都是老师带着学习教材上刻板的内容，而课本上的内容大部分又缺乏实际性，所以对学生的英语学习有一定的局限性。此外，大部分教育只重视纵向的知识体系，而忽视知识的横向联系和综合运用。
（三）学生英语学习压力较大。对当代学生来说，各种名目繁多的课程令学生无力应付，几乎失去了自己支配的时间。更高的学习目标以及更大更全的学习内容令儿童不堪重负，这严重违反了儿童自身发展的客观规律。
（四）中国式溺爱危机。溺爱现已成为中国教育的通病，孩子们过着衣来伸手、饭来张口的生活。过度的溺爱使孩子不能正确应对个人生活包括学习，这对孩子的教育是不益的。
（五）教育方法刻板。我国的教育主要是教师的一味教授，即只重视教而忽视学，缺乏实践性。虽然我国目前已经在实行素质教育，但很多学校的教育仍然不能脱离单一的课堂授课方式，学生普遍缺乏学习热情，动手操作能力也较弱。
（六）教育自主性匮乏。大部分家长把自已的主观想法强加到孩子身上，因此很多学生学习的不是自己感兴趣的专业，就业率、父母的决断成为他们选择一门专业的标准。
四、自然主义教育理论对中国英语教育的启示
随着我国应试教育弊端的不断显露，越来越多的人在呼吁教育改革，而卢梭的自然教育理论虽然提出较早，但其主张顺其自然、遵循人的成长规律、因人因时施教的教育观，对我国的现代教育仍有很多的启示。
（一）遵循人的成长规律的教育。我们要为学生提供属于他们自己的教育，并符合他们的身心发展规律。我国的中学阶段相当于卢梭所说的青少年期，以卢梭的观点而言，这个时期的孩子应该多参与体育运动、全面发展，但很多家长只注重社会的需要，盲目跟风。
（二）进一步深化素质教育。当代学生需要具有健康的体魄、丰富的知识、卓越的能力，和正确的价值观、世界观、人生观。学生的全面发展，不仅要求学校教育者具备各种增强学生素质的课程，还要从根本上具备素质教育的意识。
（三）授之以鱼不如授之以渔。这就是说培养人学习的能力远比教他们知识更重要，兴趣是最好的老师。
（四）提高教师的职业素质谈及教育，教师的素质首当其冲。教师的素质是多方面的，一个教师的知识水平和业务素质固然重要，而其道德水平和思想政治素质也不容忽视。教育者必须先被教育，为人师表，而不可误人子弟。
（五）因人施教。对不同的学生实施教育时，既要充分基于学生的共性，又能针对不同人在智力、体力、兴趣和需要等方面的不同来因人施教。
（六）激发学生的创造力青少年的创造力是一个民族和国家建立自己知识创新体系的基础。我们必须摒弃陈腐和固步自封的教育模式，让学生作为主体参与到教育工作中，去自主地学习和创造。
露营注意事项范文4
野外生存就是通过一系列的富有挑战性的个人项目.具有艰巨性困难性的团队项目，让成员全身心地投入，仿佛真的置身其中，通过这种培训方式，激发成员内在的潜能，强化个人的心理素质和应变能力，不断地认识自我和超越自我，同时让成员感受到个人与团队唇齿相依的关系，真真感觉到一个团队的力量，已达到增强全队活力、凝聚力和创造力。
二 活动目的
1使同学认识自身潜能，增强自信心，以开放的心态应对变化，积极进取，磨练战胜困难的毅力
2.拓宽视野,增加感情, 增进对集体的参与意识与责任心，让同学们认识群体的作用，改善人际关系，;
3.增强体魄，锻炼坚韧不拔的意志.;
4.培养团队精神，提高动手能力;
5.掌握野外生存知识，学习野外生存技巧和野外急救方法。
三 地点
黄峪沟(交大野外生存班每年去的地方，这个季节里风景怡人，所以成为我们进行野外生存的首选。)
四 时间 五月12到13号(如有雨，则向后推)
五 行程路线及时间安排
具体时间与路线
07:20---07:30
图书馆前集合、报数、合影
7:30-8:20
出发到兰工专
到目的地
休息
14：20-16：30
熟悉环境、放松、游戏
16：40-18：30
搭帐篷、、用餐
19：30-21：30
游戏，篝火晚会
6：00-7：00
早餐
7:00-8:00
登山比赛、生态摄影
8：30-9：00
收拾行李
9：00-12：00
返校
六、活动对象及分组
此次活动面向军事爱好者协会成员，自愿报名参加，预计人数在30人左右。分为4组，每组一人组长，8人组员，组长负责联系组员，并在集合、乘车清点组员，发现组员有却，即刻告知露营总负责人。（相约雨季 信守花开—诗歌节策划书）
七、活动准备
前期准备
1.踩点
杨伟伟前往黄峪沟，熟悉环境，选好露宿地点，询问并弄清楚当地物资情况。
2.装备租用
魏周梅同学联系租用露营装备，确保周五装备到手。李永峰同学联系包车，确保车准点到。
3.准备应急物资
刘津津同学准备应急物资，包括手电、驱虫剂、花露水、创可贴、感冒药等。
4.露营娱乐策划
何攀同学负责露营娱乐游戏方面，游戏要有可行性，尽量保证大部分同学参与到游戏中来，游戏安全系数要高，尽量少用道具。
5.分配部署工作
周五晚9：30点，军协同学聚在一起，分配部署工作，讲解露营注意事项,发放本次露营同学同学录及工作安排(另见露营活动工作安排表)。(自带餐具，外套，水杯，防晒霜，雨伞)
活动中
按照时刻表并根据实际情况安排活动进展，游戏环节参照游戏清单。
八、 注意事项
1、出发前通知所有同学把手机充满电，魏周梅方备份好所有人的联系方式，活动过程中请同学们手机保持开机状态，以便及时联系。
2、 活动期间采取班长负责加组长负责，组长协助班长定时清点人数， 同组同学相互照应。
3、 篝火周围三米内不允许有可燃物。
4、 请同学们只饮用带去的饮用水，食用带去的食物。
5、 参加集体活动，不支持小团体，独立团，远离露营地点请通知组长，组长酌情上报。
6、 严禁私自爬山，做危险性动作。
7、 垃圾专人负责回收，严禁乱扔。
8、 活动摄影摄像专人负责。
九、经费预算
装备租赁…………………………………………………………..200元
药品物资…………………………………………………………….20元
除装备外，药品外其他食品车费自带。
必备物品：双肩包，手电或台灯，帽子，雨伞，防晒霜，花露水，长袖衣物，湿巾和口香糖，水杯
委员职责：
摄委：拍摄活动过程中的照片(个人照、集体照、猥琐照、艺术照等等)
安委：保障大家的安全，上车前的报数，行进中保持队形，行车经过提醒靠边走等
伙委：安排大家的伙食，买菜，生火做饭。
医委：准备基本药物，对受伤营员进行简单护理。
装委：负责装备的管理，搭帐篷收帐篷，清点装备等。
垃委：负责清理我们在路上和露营点产生的垃圾。
露营的纪律：
1. 遵守纪律，听从队长及负责人的安排。
2. 注意安全，不能擅自离队，单独行动须汇报并征得同意，且三人以上行动。
3. 外出活动要互相帮助，团结协作，要积极融入集体，不搞小团体。
4. 不得随意丢弃垃圾，集体垃圾由垃圾委员统一安排处理。
露营注意事项范文5
[基金项目] 福建省自然科学基金项目（2012J01389）
[通信作者] *刘艳，Tel：13305920475，E-mail：
[作者简介] 施文荣，副教授，硕士生导师，Tel：13328219556
[摘要] 目的：探讨甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发食管癌前病变Wnt通路抑制因子的变化及膈下逐瘀汤的影响。方法：Wistar大鼠按3.5 mg・kg-1体重剂量皮下注射MBNA溶液，每周2次，造模首日起以膈下逐瘀汤16，8 g・kg-1剂量灌胃给药，于造模第10周处死各组大鼠，观察食管黏膜病理变化，荧光定量PCR检测sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2，GSK-3β mRNA转录水平，Western blot检测β-catenin蛋白水平。结果：MBNA诱导下，模型组大鼠食管黏膜病理学检查呈轻度不典型增生，膈下逐瘀汤高、低剂量组与模型组比较病理形态学与组织学均未有明显改善；模型组大鼠食管组织sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2基因转录水平较对照组降低（P
[关键词] 甲基苄基亚硝胺；食管癌；膈下逐瘀汤；大鼠；β-catenin；sFRP；Axin；GSK-3β
亚硝胺类化合物是常见化学致癌物之一，约有10余种亚硝胺与食管癌的发病有关，如甲基苄基亚硝胺（MBNA）、甲基戊基亚硝胺等。Wnt/β-catenin信号通路是调控细胞生长、发育和分化的重要途径，与多种人类肿瘤的发生、浸润和转移密切相关[1]。已有研究证实，在人类食管癌的发生过程中也存在Wnt/β-catenin通路的激活[2-3]。
中医认为“气塞不通，血壅不流”与癌瘤的发生有关，气滞日久必血瘀不畅，气滞血瘀，渐成瘤块，久积为癌，因此理气活血类方剂如膈下逐瘀汤广泛应用于恶性肿瘤防治的中医临床实践[4-5]。为探讨亚硝胺致食管癌变与Wnt通路的关系及理气活血类方剂对该通路的影响，本研究以MBNA为诱变剂建立大鼠食管癌前病变模型，并于诱变期间予以膈下逐瘀汤干预，检测了食管组织β-catenin蛋白的表达变化及Wnt通路抑制因子sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2，GSK-3β的基因转录水平变化，为人类食管癌的发病机制提供参数，并为食管癌的中医药防治研究提供基础资料。
1 材料
1.1 动物 雄性Wistar大鼠，清洁级，购自上海斯莱克实验动物有限公司，体重180～200 g，生产许可证号SCXK（沪）2012-0002，合格证号2007000541047。
1.2 药物与试剂 MBNA（本实验室有机合成）；RNA guard（上海华舜生物技术有限公司）；Trizol（美国Invitrogen公司）；PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser，SYBR Premix Ex Taq（大连宝生物工程有限公司）；兔抗β-catenin多克隆抗体（美国Cell Signaling公司）；兔抗GAPDH多克隆抗体（杭州贤至生物科技有限公司）；山羊抗兔IgG抗体、BCA蛋白定量试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；引物由上海生工生物工程有限公司合成。膈下逐瘀汤全成分颗粒剂由福建省人民医院中药房提供，处方为：醋五灵脂6 g、当归9 g、川芎6 g、桃仁9 g、牡丹皮6 g、赤芍6 g、乌药6 g、醋延胡索3 g、甘草9 g、醋香附6 g、红花9 g、炒枳壳5 g，处方编号21095649。
1.3 仪器 SDS-PAGE电泳仪、转膜仪（美国BIO-RAD公司）；荧光定量PCR仪（德国Eppendorf公司）。
2 方法
2.1 分组与给药 Wistar大鼠按体重分层随机分为模型组、膈下逐瘀汤高、低剂量组及正常对照组，每组8只。除对照组，其余各组参考文献方法[6]，以MBNA 3.5 mg・kg-1体重剂量，每周2次颈背部皮下注射，连续注射10周。对照组颈背部皮下注射等体积氯化钠注射液。于诱变首日开始，膈下逐瘀汤高、低剂量组分别以膈下逐瘀汤16，8 g・kg-1剂量（以全方生药量计）灌胃给药，模型组和对照组以等体积蒸馏水灌胃，每日1次，共10周。根据实验动物等效临床剂量换算，膈下逐瘀汤给药剂量相当于成人日剂量的2，1倍。
2.2 病理学检查 实验结束时处死大鼠，沿食管纵行剖开，于解剖镜下观察食管黏膜病变情况，拍照记录。取典型病变组织用10%中尔马林固定液固定，常规制片，HE染色，光镜观察病理组织学变化。余下食管组织分为2份，保存于RNA guard及液氮中，分别用于提取食管组织总RNA及总蛋白。
2.3 基因转录水平检测 sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2，GSK-3β基因转录水平检测采用Real-time RT-PCR法。用Trizol法提取食管组织总RNA，核酸蛋白分析仪检测A260/A280，计算RNA浓度；琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。使用RevertAid First Strand cDNA synthesis kit试剂盒将总RNA中的mRNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板进行荧光实时定量PCR检测（SYBR染料法）。扩增条件为：95 ℃预变性30 s，95 ℃ 5 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40个循环。反应结束后确认扩增曲线和熔解曲线，以β-actin为内参基因，用2-ΔΔCt值表示目的基因转录水平。各基因引物及扩增产物片段长度见表1。
2.4 β-catenin 蛋白水平检测 采用Western blot法检测食管组织β-catenin蛋白水平。组织裂解后提取总蛋白，BCA法进行蛋白定量，各组取等量蛋白经SDS-PAGE（分离胶10%，浓缩胶3%）分离后，转移到PVDF膜上；TBST脱脂奶粉封闭液（5%脱脂奶粉）室温封闭2 h，兔多克隆β-catenin抗体（1∶500）和兔多克隆GAPDH抗体（1∶1 000）4 ℃孵育过夜，再与山羊抗兔IgG 抗体（1∶2 000）37 ℃孵育1 h，ECL法压片曝光，使用Gel-Pro Analyzer 4.0软件分析各组食管组织β-catenin蛋白水平。
2.5 统计分析 数据均采用±s表示，用SPSS 13.0统计软件进行分析，多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），组间两两比较采用最小显著性差异法（LSD法）。
3 结果
3.1 一般情况观察 对照组大鼠体重增长较迅速。其余各组大鼠在诱变初始2周内体重略有减轻，至第3周开始体重缓慢增加，随着MBNA暴露次数和累积剂量的增加，体重增速逐渐变慢，体重较对照组显著降低（P
3.2 食管病理形态学及病理组织学变化 对照组大鼠食管黏膜光滑平整，未见明显异常。模型组、膈下逐瘀汤高、低剂量组大鼠食管黏膜均出现全段病变，食管腔内可见食物残渣，食管黏膜粗糙，出现乳突瘤样改变，成瘤率为100%。膈下逐瘀汤高、低剂量组食管黏膜的病变程度与模型组比较未见明显改善，见图1。病理组织学显示，对照组大鼠食管黏膜上皮细胞1～3层，细胞排列均匀，基底细胞层规整，未见异常改变；膈下逐瘀汤高、低剂量组病理组织学检查结果与模型组无明显差异，均表现为上皮细胞明显增生，层次增多，细胞排列紊乱，细胞向管腔方向增生形成状突起，见图2。
3.3 Wnt通路抑制因子基因转录水平 MBNA诱变10周时，模型组大鼠食管组织sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2基因转录水平较对照组降低（P
3.4 食管组织β-catenin蛋白水平 经MBNA诱变10周，模型组大鼠食管组织β-catenin蛋白水平较对照组升高；膈下逐瘀汤低剂量干预后，大鼠食管组织β-catenin蛋白水平较模型组降低；膈下逐瘀汤高剂量干预后，大鼠食管组织β-catenin蛋白水平与模型组比较无明显变化，见图4。
4 讨论
亚硝胺类化合物是国际公认的强致癌污染物之一，通常被认为是腌制食品、烟草等致癌性的主要物质基础。其中，MBNA是一种前致突变物，经体内代谢产生的活性代谢产物具有较强的致突变作用，实验研究证实MBNA可诱发多种动物食管癌以及人食管上皮鳞癌[6-9]。MBNA诱发食管癌变存在着复杂的分子机制，迄今为止尚未被完全揭示。MBNA诱发的大鼠食管状瘤存在ras癌基因的突变激活[7]；MBNA可引起大鼠食管凋亡抑制基因Survivin的激活[6]；MBNA的诱变可引起大鼠食管组织2 261个基因的表达改变[8]，可见MBNA诱导食管癌变与多种癌基因及抑癌基因调控活性改变有关。由于信号转导通路内部及不同信号转导通路之间存在着复杂的网络调节，通常需要多种因素共同作用才会引发肿瘤，因此在食管癌发病机制研究中不能过分强调某一基因的改变。目前研究表明，Ras/MAPK通路，Wnt/β-catenin，NF-κB通路的激活与食管癌的发生有关[10]。
本研究结果显示，经MBNA诱变10周，在大鼠食管组织中可检测到Wnt通路关键分子β-catenin蛋白水平的升高。王丽芳等报道MBNA诱变F344大鼠5周，诱变开始后第9周食管组织β-catenin蛋白水平是同期正常大鼠的4倍左右[11]。针对Wistar大鼠的研究仅检测到约1.5倍左右的β-catenin蛋白水平上调，笔者推测可能与实验大鼠品种及MBNA诱变方式的差异有关。
本研究针对Wnt通路抑制因子sFRP1，sFRP4，Axin1，Axin2，GSK-3β基因转录水平的检测表明，经MBNA诱变10周时，除GSK-3β基因转录水平的降低尚无统计学意义外，其余各抑制因子的基因转录水平均较正常组显著降低。sFRP1，sFRP4属于Wnt信号通路分泌型抑制因子，其在细胞外与Wnt分子竞争性结合Frizzled受体而发挥拮抗Wnt信号通路的作用。在人类食管癌的研究中发现sFRP1，sFRP4在食管鳞状细胞癌中的表达水平显著低于癌旁正常组织[12]。Wnt通路的活性也受到细胞内型抑制因子的调节，包括APC，Axin，GSK-3β等，细胞内型抑制因子参与组成β-catenin的降解复合物，该复合物的功能是使胞浆内的β-catenin发生磷酸化从而被泛素化降解。β-catenin降解复合物形成障碍是Wnt通路活性升高的原因之一。本研究结果提示，下调上述Wnt通路抑制因子转录水平从而增强Wnt通路活性是MBNA致大鼠食管癌前病变的可能分子机制之一。
膈下逐瘀汤出自清代《医林改错》，具有活血化瘀，行气止痛之功效，在恶性肿瘤的中医临床实践中，以该方加减可治疗肝癌、胃癌、食管癌、胰腺癌及各种晚期癌性疼痛。本研究结果显示，等效人临床1，2倍剂量膈下逐瘀汤于诱变期间干预大鼠，对MBNA诱导的大鼠食管癌前病变并无明显阻断作用。但针对β-catenin蛋白水平及Wnt通路相关抑制因子的检测则显示，等效人临床1倍剂量膈下逐瘀汤可对MBNA诱变所致的Wnt通路抑制因子sFRP4，Axin1，Axin2转录水平的下调有不同程度的升高作用，可抑制β-catenin蛋白水平的上调，等效人临床2倍剂量膈下逐瘀汤却未能体现上述作用。这一现象笔者认为主要与以下几个方面有关。首先，癌变过程是一个多信号通路多基因调控活性改变的复杂过程，MBNA诱导的大鼠食管癌变涉及Wnt通路活性的上调，但并不依赖也不局限于该通路活性的改变；其次，中药方剂由多味中药配伍而成，每味中药又含有数种不同的化学成分，不同的化学成分可作用于不同的靶点，因此方剂的量效关系表现较为复杂，不同剂量水平下可表现出相似的或者截然不同的效应；再次，中医学认为食管癌是由内伤饮食、情志、脏腑功能失调3种因素相互影响共同致病，在不同阶段可表现为热毒、气滞、血瘀、痰凝，气滞多见于早中期食管癌，而血瘀则可见于各期食管癌。MBNA诱变后的大鼠表现为毛发枯槁不泽、形体消瘦，具有热毒伤阴的特征，因此仅以理气活血法干预不足以阻断MBNA诱发的食管癌前病变。
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[10] Keld R R， Ang Y S. Targeting key signalling pathways in oesophageal adenocarcinoma： a reality for personalised medicine[J]. World J Gastroenterol，2011，17（23）：2781.
露营注意事项范文6
薄刀岭属大别山主峰天堂寨发脉于罗田境内的四大支脉之一。这里群峰耸立，林深岩险，沟壑纵横，地势险要，集华山之险，泰山之雄，峨眉之秀，庐山之幽于一身，横卧于大别山中为历代兵家必争之地。因其峰高耸入云，鹤鸣九天，山峰奇拔，形如薄刀刺天，声闻于外而名之为薄刀岭。
行程设计：
第一天
07：00在指定地点集合，发放装备。
07：30出发，开往薄刀岭大本营，车行4个小时约在11：30分到达目的地薄刀岭山庄。
11：30学习野外生存知识，吃原汁原味的农家饭。
12：30丛林穿越，定向登顶，过脊鱼背使你步步惊魂，险象环生。
14：30牛脊天然岩壁攀爬，让您感受在四肢并用的向上攀爬中，发挥你最原始的潜能，僵硬的手臂、麻木的手指、乱颤的双腿让你体验极限。
18：30农家小撮。简单的粗粮粗怍，咸咸的、酸酸的。大婶笑呵呵的向你推荐"来盘土鸡蛋吧，这东西你们城里可没有."看到了，才知道什么叫金灿灿。
19：30亲自搭建营帐，体验大地当床，天空做被的山间野趣。好几十年了，每天为了房子、车子、票子奔波，累吗？记得小时候和邻居家孩子玩过家家吗？来吧，搭把手，享受一次简单的乐趣。其实，国家登山队登珠穆朗玛峰支帐篷也不过如此。
20：30篝火联欢（跳兔子舞，幸福团团转等）
23：00入住帐篷/睡袋休息，没有希梦思，没有轻音乐，没有柔软的睡衣，不过，睡得很好。可以听到溪流的声音，夜鸟的鸣叫，隔壁帐篷的细语，验天当房、地当床的山林野趣，数着多的看不清楚的星星。。。。
第二天
07：30起床，洗漱。
08：00农家早餐。清早的雾气散了，空气被沉淀了一宿，拉开帐篷门，用力吸气，吐气，反复3次，感觉就像把肺里的灰尘洗净了，象是新生儿一样清爽。多久没有好好吃过早饭了，因为忙，这顿早餐你一定喜欢，因为还有一天的路要走呢，也一定要吃饱，
因为中午要在山中吃干粮呢。
08：00穿越原始生态林区，抵百米断崖
09：00绝版垂直极限-断崖悬降活动。挑战自我、挑战极限、终身回味。看过喋中喋里汤姆-克鲁斯后背上拴根绳"刷"的从屋顶跃下吗？你要做的比他牛多了，因为你要从百米的崖壁上换根绳索，再下50米，然后再"刷"的跳下来。不过跳的高度和你爬的高度成正比，放心!我们的安全绳很结实，上次一只大象都玩上瘾了呢:)。
百步穿杨—飞镖，古代印地安人的狩猎装备，现代射击的标准，这所有的一切都靠您的手上的巧劲和眼力上演一出百步穿杨的神话。04：00农家饭合影留念，总结回顾，评选"开心宝贝""勇士先生"颁发荣誉证书及奖品等20：00有些疲劳，有些想家，两天的收获就是享受了疲惫后的轻松。圆满完成愉快的山林探险，带着对野外生存活动的回味回到城市中来，信心百倍的迎接新的挑战。行程特点：4级4星，穿越式，难度高，娱乐性强。版权所有
活动内容：绝壁攀岩、丛林穿越、断崖速降、定向登顶、露营、篝火晚会、农家饭注意事项：事先应认真听取教练员的讲解和指导，在整个活动过程中，要听取教练员的指挥，不要太逞强，在自己能力范围内，要相互作帮助。
服务标准：
1、往返交通接送、食宿、药品；
2、提供全套法国、意大利等进口登山探险专业器械；
3、提供所需野外用品（背包、帐蓬、睡袋、防潮垫、炊具、手套、帽子等）；
4、国家级专业持证教练；
5、10万元人身意外伤害保险；
6、提供"开心宝贝""勇士先生"颁发荣誉证书及奖品等；
7、赠送集体合影照一张（6寸）个人要求和须知：个人自备：手电筒、水壶、登山鞋、宽松耐磨衣裤、个人洗漱用品、水。其他：我们还可以根据企业团队设计和安排相关活动内容，费用另算。考虑季节、天气及突变情况可能会作者适当调整，但不影响整个活动质量。注意事项：
事先应认真听取教练员的讲解和指导，认真阅读《安全篇》和《环保篇》，在整个活动过程中，要听取教练员的指挥，不要太逞强，在自己能力范围内，要相互帮助。
服务标准：
1、往返交通接送、农家饭、露营、药品；
2、提供全套法国、意大利等进口登山探险专业器械；3
、提供所需生活装备（背包、帐蓬、睡袋、防潮垫、炊具、手套、帽子等）；
4、国家级持证教练和资深教练；
5、10万元人身意外伤害保险；
6、评选“挑战奖”、“巾帼奖”、“环保奖”等并颁发荣誉证书及奖品；
7、集体合影照一张（7寸）
个人要求和须知：
1、热爱大自然，具有较强的环保意识；版权所有
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4、个人所带物品仅有：耐磨宽松衣裤、小物品袋、手电、登山鞋或运动鞋、备用鞋、水壶及小刀。
5、自带2份中餐干粮，请带质轻、便于携带和保存的高热量、高能量食品，如牛肉干、巧克力、火腿肠、压缩饼干、八宝粥、水果黄瓜等：
6、个人身体健康，无心脏病、高血压等病史，无不适和从事剧烈及高空运动病症。
其他：