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拟人的作用范文1
做人做事是一门艺术,更是一门学问。
很多人之所以一辈子都碌碌无为,那是因为他活了一辈子都没有弄明白该怎样去做人做事。
每一个人生活在现实社会中,都渴望着成功,而且很多有志之士为了心中的梦想,付出了很多,然而得到的却很少,这个问题不能不引起人们的深思:你不能说他们不够努力,不够勤劳,可为什么偏偏落得个一事无成的结局呢?这值得我们每一个人去认真思考。
从表面上看,做人做事似乎很简单,有谁不会呢?其实不然,比如说你当一名教师,你的主观愿望是当好教师,但事实上却不受学生欢迎;你去做生意,你的主观愿望是赚大钱,可偏偏就赔了本。抛开这些表层现象,去发掘问题的症结,你就会发现做人做事的确是一门很难掌握的学问。
可以这么说,做人做事是一门涉及现实生活中各个方面的学问,单从任何一个方面入手研究,都不可能窥其全貌。要掌握这门学问,抓住其本质,就必须对现实生活加以提炼总结,得出一些具有普遍意义的规律来,人们才能有章可循,而不至于迷然无绪。
读懂一个字诀,受用你一生!
一、社会交往字诀
——教你建功立业
(一)“谦”字诀
处世唯“谦”字了得,若一味狂妄自负、骄傲自大,只会失去处世的根本,落得个孤苦伶仃、千夫所指的骂名下常1、不可目中无人2、得意不要忘形3、有本事不必自夸4、请教不择人(二)“淡”字诀为人处世,交朋待友,对势利纷华,似乎不必太过于苛求,当以“淡”字当头。看淡些,看开些,人生也就豁然开朗,有滋有味了。
正如“平平淡淡才是真”。
1、君子之交淡如水
2、淡看人生,善待生命
3、淡泊明志,莫为名利遮望眼
4、减少心欲,满足心灵
(三)“俭”字诀
不懂得“俭”字的人,不知道如何成功,任何成功的事业都在于点滴的积累;不懂得“俭”字的人,只会丧失成功,过分的骄奢多败人品质。
“俭以养德”,为人做事之良训。
1、从节省生活费开始
2、“穷大方”不可取
3、谨防变态的节俭:吝啬
4、欲路勿染,俭以养德
(四)“自”字诀
做一个有个性的人,给自己一点自信!成功的道路靠自己闯,美好的前途来自于自强自立,不屈服于任何权威,用自我的努力找到属于你的自尊。
男儿立世,自己拍板!
1、自强自立,与成功有约
2、独品人生百态
3、用自我来挑战权威
4、自信——任你东南西北风
(五)“礼”字诀
生在礼仪之邦,做一个彬彬有礼之人。有礼之人会做人,有人缘,多朋友。有礼之人会做事,注重形象,有教养,不树敌,成功路上事事顺。
1、以礼待人
2、彬彬有礼,礼多人不怪
3、注重礼仪着装,给人良好印象
(六)“正”字诀
做一个正直的人,做一个人格健全完善的人,受人崇敬。做一个自私的人,做欺心的事,疾贤防能,与成功无缘。
1、己所不欲,勿施于人
2、嫉妒乃方正之人之大忌
3、不做欺心事,本身是一种愉悦
二、形象塑造字诀
——教你品格高雅
(七)“志”字诀
给自己一根足够长的杠杆,希望转动地球。
给自己的人生立个志愿,树个目标,树个偶像,脚踏实地,成功的意识需要培养,先立志,再与成功约会。
1、度德量力,以志立身
2、先立志,有志就有希望
3、培养成功意识:立志为王
4、树立偶像,改变自己
(八)“时”字诀
做人要惜时,做事要守时。塑造自己的形象,现代人离不开时间观念。合理安排自己的时间,有效利用自己的时间,守时、惜时、不拖延。
切记:时间就是金钱。
1、一秒值万金
2、别漠视业余时间
3、盗窃他人时间,等于谋财害命
4、按重要性办事,更能有效利用时间
(九)“勤”字诀
多一些努力,便多一些成功的机会。无数事实证明:成功的最短途径是勤奋。不要光耍嘴皮子,不要好逸恶劳,勤字当头,苍天不负有心人,天道酬勤!
1、成功的最短途径:勤奋
2、多一些努力,多一些机会
3、勤于行动,胜于勤说
(十)“实”字诀
踏踏实实做人,实实在在办事。任何一个双手插在口袋里的人,都爬不上成功的梯子。给人留下一个实在的形象,给自己的成功增添一份夯实的基础,从实际出发,对自己负责。
1、敬业,实干家的成功保障
2、把每一份工作都做好
3、双手插在口袋里的人,爬不上成功的梯子(十一)“专”字诀有专才有恒,有恒才有我。
你生活在一个知识大爆炸的时代,如果你是一个天才,不专心就成了你的不幸;如果你资质平凡,请不要悲观,只要你下定决心一辈子做好一件事,你就能成功。年轻人,千万别给人留下一个朝三暮四的形象。
1、把所有的鸡蛋放入一个篮子
2、多才多艺,莫如练就“独门暗器”
3、专一,让劣势变成优势
(十二)“慎”字诀
人生漫长,又短暂,关键的就几步。人性丛林,职场事业,利益多多、诱惑多多。老成不怕多,凡事应多三思,不怕一万,就怕万一。一旦伸错手,入错行,做错事,于名誉,于事业,于形象皆有不救之危。
“慎”之!
1、千万别入错行
2、想好了你再“跳”
3、不要草率行事
三、自我提升字诀
——教你拯救命运
(十三)“硬”字诀
做人难,做事难,面对千难万阻,要提升自我,不来点“硬”的怎么行?如果事有勉强,应该敢于说“不”;如果是正当利益,则应当仁不让;甚至,有时还得来点霸王硬上弓,要有“脸皮厚”的时候,也要有“头皮硬”的时候。
1、拒绝是一门艺术
2、该我的,就不要客气
3、怒发冲冠之功
4、厚脸皮做人,硬头皮做事
(十四)“斜字诀
一家海鲜连锁餐厅的老板很可能当初是水产市场练滩儿的,而一家皮鞋连锁店的老板当初可能是擦鞋的。欲做大事,赚大钱,必先做小事,赚小钱,放下架子,舍得小利。从细微处入手,先扫一屋,再扫天下!
1、一屋不扫,何以扫天下
2、先做小事,赚小钱
3、一枚钉子改变一个人的一生
(十五)“锐”字诀
小小麻雀,飞飞跳跳、争分夺秒,不停地寻觅食物。人生亦如此,面对残酷竞争,惟有锐意进取,做一个好先锋,把下一个进球当目标,敢于冒险,敢于闯荡,守株待兔的事情毕竟很渺茫。
1、不以现有成就为满足
2、锐意追求,绝不退缩
3、锐气不可抛,成功是迟早
(十六)“创”字诀
提升自我,就要有胆有识去超越自我。何谓超越?超越就是吃螃蟹,就是创新。同时创新就意味着冒险,所谓富贵险中求。想人家想不到的,做别人不敢做的,敢为天下先,在于思维的转换。
1、敢为天下先
2、打破规则的创意
3、人弃我取也能创奇迹
4、逆向思维的攻守之道
(十七)“通”字诀
穷则思变,变则通。识时务者为俊杰,通机变者为英豪。通往成功的道路不是一条,又何必在一棵树上吊死呢?抓住成功的关键,东方不亮西方亮,不管它是黑猫白猫,重要的是它能否逮“耗子”。
1、巧妙地以变应变
2、条条大道通罗马
3、成功在于通,有通才有赢
(十八)“言”字诀
把赞扬送给别人,就像把食物施舍给饥饿的乞丐一样。古往今来,不知有多少人,凭着三寸不烂之舌,改变了自己平凡的命运。说话幽默,找共同语言……一个“言”字,一生受用。
1、投其所好找话题
2、恭维是最好的“剂”
3、成功人生,幽默机智
4、“流行语”为你添姿着色
四、人际互动字诀
——教你赢得朋友
(十九)“宽”字诀
人际互动,应着眼于未来,不念旧恶。原谅别人,是对待自己的最好方式——为你的仇敌而怒火中烧,烧伤的是你自己。做人做事,心胸不可太狭隘。海纳百川,靠一棵宽容的心!
1、宽恕你的敌人
2、宽容做人,宽容成事
3、乐于忘记,不念旧恶
(二十)“和”字诀
在人海中,如果我们不想孤立,那么就学会如何与人相处吧!林子大了,什么鸟都有,不要求你喜欢所有的人,但同时世上也没有什么最牛的人。
和为贵嘛,就要互相留台阶,大家给面子。
1、为他人着想,为自己铺路
2、你给别人留面子,别人给你做好事
3、夫妻之道,亦和亦智
(二十一)“信”字诀
有多少人信任你,你就拥有多少次成功的机会,“信”是什么东西?信是一种人格的力量,是超越金钱的友情,是了解、是欣赏、是覆水,具有不可逆转性。所以,言必行,行必果,能帮的忙则帮,但不可轻易许诺!
1、能帮则帮,不轻易许诺
2、言而有信,做人讲原则
3、做事先做人,做人先取信
4、信誉基石,生死友情
(二十二)“帮”字诀
“好风凭借力,送我上青天”。人际交往,互利互惠。帮助别人,就是在为自己的人情信用卡储蓄,特别是在人患难之际施于援手,救落难英雄于困顿。真心助人,其回报不言而喻。
1、助人发财,自己沾光
2、好风凭借力,借梯能登天
3、掌握时机,拉人一把
(二十三)“敬”字诀
人要面子树要皮。人存在于社会上,要扮演各种各样角色,特别是在互相的交往中,需要一定的尊严来支撑,这是人性的弱点。明白了这点,才能体会到“敬”字的必要性。
1、为尊者讳,为上司讳
2、在失意者面前不谈你的得意
3、尊敬对方的“闪光点”
(二十四)“交”字诀
人情冷暖、世态炎凉,平常朋友平常过。交朋接友,不可急功近利,友情投资,宜走长线,拜拜冷庙,烧烧冷灶,平时多烧香,哪怕是只言片语的问候,亦是交友之道。
1、闲时多烧香,急时有人帮
2、友情投资,宜走长线
3、拜冷庙,烧冷灶,交落难英雄
五、解困渡厄字诀
——教你轻松快乐
(二十五)“坚”字诀
面对挫折与困难,铭记丘吉尔的名言:“永远,永远,永远不要放弃!”其实世界上并没有什么幸运的事,就是有,也是坚持的结果。为了最后的胜利,应以坚毅不拔之志,面对种种暂时之屈辱,执着追求,不到黄河心不死!
1、厚积薄发,耐得寂寞
2、谁笑到最后,谁笑得最甜
3、执着追求,永不放弃
4、不到黄河心不死
(二十六)“谋”字诀
做人有困惑,做事有困境,面对“山重水复”之关卡,光有坚强的毅志不行,硬闯也不行。解决难题靠的是脑袋,脑袋产生思考,让思考发威,在出人意料之处轻松解决问题。
1、巧妇能为无米之炊
2、从“山重水复”到“柳暗花明”
3、思考的威力
(二十七)“屈”字诀
要摆脱人与事的困境,就难免要求人,求人就难免要低三下四,但着眼于未来的成功,即使像蟑螂一样的生活也应在所不惜,风水毕竟轮流转。放下架子,该屈就屈,能屈能伸,以屈为伸方为英雄!
1、像蟑螂一样生活
2、放下身段,前方是大道
3、你敬我一尺,我敬你一丈
4、低人一级“屈”不死人
(二十八)“静”字诀
“不在沉默中爆发,就在沉默中灭亡!”凡遇大事需静气,平心静气是一种境界,一种气度,一种修养。冷静之中的决定往往是摆脱困境的最佳方案,同时冷静也是一种智慧,以静待变,乱中取胜!
1、把冷板凳坐成经理椅
2、心宁智生,智生事成
3、沉着冷静心自怡
4、沉得住气方为人杰
(二十九)“乐”字诀
世上没有绝对幸福的人,只有不肯快乐的心。人生苦短,与其事事张弓拔弩,不如“幽它一默”。记住,成功是从微笑开始的,人生不如意事常八九,乐观点,自己营造快乐,学会轻松解决难题。
1、成功从微笑开始
2、学会营造快乐
3、学会轻松愉快地解决难题
4、世上没有绝对幸福的人,只有不肯快乐的心(三十)“靠”字诀人生不等不靠,没错,天上不会掉馅饼,守株待兔饿死人,但一点不靠也不行,亲戚朋友、同学、老乡,这是一种“人力资源”,谁人没个三灾六难,能靠则靠,靠不上创造条件也要靠!
1、让朋友成为你的靠山
2、出门落难靠老乡
3、亲戚亲戚,越走越亲
4、恰同学少年,该靠靠一把
六、不败人生字诀
——教你人生辉煌
(三十一)“愚”字诀
学学猫头鹰,睁一只眼,闭一只眼。你说我糊涂,其实我不傻!只是世事多变幻,创业难,败家快,人说水至清则无鱼,人至察则无徒。其实是,明哲保身,大智者往往大愚,聪明者多,能过“愚”字关鲜矣!
1、糊涂人聪明一世
2、不要以为自己比别人聪明
3、处事不要太认真
4、谁是英雄?
(三十二)“忍”字诀
真的英雄,何必气短,善始善终,方为不败!忍能保身,忍能成事,忍是大智,大勇,更是大福!忍是厚,忍是黑,忍小人,忍豪强,忍天下难忍之事,不做性情中人,成常人难成之事。
1、忍是大智大勇大福
2、不做性情中人
3、不败人生,忍者无敌
(三十三)“退”字诀
久历江湖,练达人情之人都守一个“退”字。退是一种谋略,退是一种交换,更是一种维系生存的手段。哲人说的好,“不要把痰吐在井里,哪天你口渴的时侯,也要来井边喝水的。”
1、用心计较般般错,退步思量事事顺
2、拒绝妥协,就是拒绝成功
3、惹不起,躲得起
(三十四)“圆”字诀
方圆做人,八面玲珑;圆满做事,事事顺心。人心叵测,凡事最好留一手,有闲时,可研究一下“模糊哲学”,人生这套马车,如若安上方方正正的轮子,你没听说过,我也没听说过,寸步难行嘛!
1、方圆做人,圆满做事
2、做老二,不要做老大
3、人情练达即文章,处世圆通慎言语
(三十五)“危”字诀
“豪华尽出成功后,逸乐安知与祸双?”历史教训如此,平头百姓亦如此。居家过日,工作职场等都逃不过一个“危”字,人无远虑,必有近忧。
1、远虑在先,近处无危
2、郭子仪屏退侍女免祸患
3、上山下乡当农民——范蠡富贵终身
(三十六)“装”字诀
人生在世一台戏,你方唱罢我上场,不管你会不会演,就看你会不会装。充英雄容易,扮弱者难。俗话说得好,枪打出头鸟,不怕贼偷就怕贼惦记着,当你还不具备实力时,请把你过剩的才华藏起来!
1、故意示弱有好处
拟人的作用范文2
自己感慨,真的好好,一个小小的年纪,比自己大一两岁,自己出来拼,还时不时地,可以有一场说走就走的旅行,在他的空间,总是可以时不时地看见一些他去旅游的相片,每次都只是一张,两张,但,已经足够!足以证明他脚下的鞋,踏过的路很多。
QQ好友里面有很多都是老师,网上老师,学校的老师都有。每次节假日,都可以看到他们晒的照片。
看着是直流口水吧。现如今的我,却只能宅在这里,根本走不出去。
拟人的作用范文3
关键词:人防地下工程、逆作法施工
中图分类号:TU2 文献标识码:A
逆作法施工技术近年来比较流行,是一种技术比较先进的施工技术,对于高层建筑物,地面上、下可同时进行施工,工期大大缩短。对于城市道路下开挖的地下工程,顶板施工完毕即可恢复路面,之后才进行顶板以下的主体施工,大大减少道路围蔽时间,减小工程建设对城市日常生活的影响,尤其是在城市主要干道和商业旺地,逆作法施工更是很好的选择。近年来我做的几个人防与平时商业相结合的人防地下工程,都位于商业旺地,采用了逆作法施工,但在施工过程中发现了一些问题。
人防地下工程与一般的民用地下工程有一些比较大的区别,也正是因为这些区别,导致了逆作法施工在人防地下工程中的使用中出现了比较大的问题。
对于人防工程而言,在施工过程中,有一个非常重要的要求就是必须要保证人防工程的气密性。严格的气密性要求人防工程主体应一次浇注完成,而在逆作法施工过程中,大量的竖向构件均需分段浇注,人防墙体上产生大量的水平和竖向施工缝,这些施工缝的处理一般为后注浆处理,但即使如此,处理效果却仍然难以保证人防工程的气密性要求。
人防地下工程与一般民用地下工程的一个重大区别就是人防地下工程里面的人防墙体很多,民用地下工程一般为框架结构,竖向构件只有柱子和外墙,顶板施工时,只要把柱子和外墙的竖向钢筋预留好即可,预留钢筋较为简单方便。而人防地下工程中的人防墙体很多,意味着在顶板施工时,这些钢筋都必须预留到位,且在后续的施工过程中,一般都不得再对人防墙体定位进行修改,因为一旦修改,一方面造成前面预留钢筋的浪费,另一方面后面做的人防墙体钢筋采用植筋的话普遍都难以满足人防要求,且大大增加施工成本和工期。
逆作法施工对底板结构不利。在底板的施工过程中,顺序是先将底板基础施工完成,同时预留出底板面筋和底筋,待基础施工完成一段时间后再统一浇筑底板,这样的施工顺序对于底板结构而言是非常不利,因为在基础边沿,是板受弯不利处,本身就是比较容易出现裂缝的关键位置,这样的施工方法使得该位置在没有使用前就已经出现了施工缝,等于在薄弱的地方提前破坏了其整体性,裂缝的最大宽度则容易超过正常使用状态的要求,结构耐久性难得到保证。
在结构设计的过程中也应该考虑到逆作法施工带来的一些问题。
在设计顶板结构时,要注意到最外边跨板在施工时,板是处于一种悬挑的状态,因为我们是先形成板,再做外墙,在外墙施工时,需将板下的土开挖掉,且此时板下一般都难于做临时支撑,板下无支撑自然就成了悬挑构件,而不是常规正做法时的状态,应在设计时按悬挑模型来配置这部分板的钢筋。
如果没有设计以桩代柱来承受主体荷载的情况,即没有桩的地下人防工程,在设计底板结构时,不宜将底板设计成筏板基础,而应该设计成独立基础。因为前面已经说过了,在底板形成时,其工序是先将柱及周边的底板先施工完成,同时预留出跨中底板的面筋和底筋,待柱及周边的底板施工完成一段时间后再统一浇筑其它中间跨底板,设计成独立基础的好处就是,独立基础做好了之后即可完全承受上部结构的所有荷载。如果做成筏板基础,筏板基础分段完成,前面柱子及周边做好的部分筏板,并不能完成承担上部主体的全部荷载,可能带来的后果则是前面做的部分筏板由于承载能力不足,导致筏板破坏,甚至导致主体的沉降过大。
对于一些地下两层及以上的人防地下工程,一般会采用包桩柱的竖向支撑形式,即在柱形成前,在柱位处以桩代柱作为竖向受力构件,以支撑上部已完成部分的主体传下来的荷载。这对于中板和底板而言是很不利的,因为由于桩的存在,阻断了中板和底板穿过柱截面中间的柱上板带(框架梁)的钢筋,影响了板的传力。此时,直接从柱的桩周混凝土拉通的钢筋是很少的,被桩阻断的钢筋则只能向下锚固于桩周混凝土内,使得包桩柱的桩周混凝土成为了非常关键的受力部位,一旦包桩柱的桩周混凝土厚度过薄,将无法实现这样的传力途径,板柱节点就可能出现难以弥补的破坏。结构设计时应在板柱节点处增加环梁,使这里形成扩大柱头来优化传力,同时必须保证桩周混凝土厚度不能过小。
综上所述,逆作法施工对于人防地下工程还存在一些比较大的问题,目前这些问题也都比较难以避免和较好的解决,如果这些问题得不到较好的解决,那么逆作法施工确实是不太适用于人防地下工程的。但就其发展前景来说,面对着土地资源越来越少的基本国情,地下工程的发展有着巨大的空间,如果凡是人防地下工程都要面临大开挖施工的话,将对人民日常生活产生巨大的影响,是不现实的,我们要做的就是不断在这个方向去完善它,而不是一遇到困难就一味的去否定它。我相信在以后的发展中,逆作法施工会有美好的未来。
参考文献
拟人的作用范文4
关键词:《我在雨中等你》,心理分析法,人性
一、引言
《我在雨中等你》是当代美国作家加思・斯坦的著作。该书以一条狗名叫恩佐来作为小说的主人公。恩佐是一只注入了人类灵魂的狗,该小说通过恩佐的这只狗的视角来观察,以幽默而温暖的口吻讲述主人公丹尼一家的悲欢离合。无论是幸福时光、困顿岁月,还是痴痴守望、苦尽甘来,它始终像现实生活中的真实朋友陪伴在主人身边,目睹这个家庭的幸福、离散和忧伤,感受生命的温暖与绝望、心灵的脆弱与坚强,这些无不体现出它身上的人性。小说的文字撩人心弦,情节起伏跌宕,全书感人至深又意味深长。弗洛依德将人的人格结构分为本我、自我和超我三个部分。他的心理分析以其独特而深刻的理论体系对西方文坛产生了长远的影响,在分析、解读文学作品中发挥出十分独特的作用,为文学与心理学架起了桥梁,人们可以从一个崭新的角度去解读文学作品。本文主要运用弗洛伊德的心理分析法来浅析恩佐与主人的家庭成员以及与主人之间的友谊,在主人遇难受挫时,它内心极度的想成为人类的超我表现。从而揭示出它身上所体现出的人性并给予当今社会上人类以启示。 通过分析恩佐与主人的友情来揭示它内心深处的高贵灵魂对于启人们具有重要的启示意义,并且,对于唤醒社会上的人性具有重要的现实意义。
二、恩佐的内心独白
恩佐是一条具有人类灵魂的狗,它一只认为自己是人和其它的狗不一样,只是被塞进了狗的身体里,拥有一副否的去躯壳,里面的灵魂却是非常像人类。它每天陪伴在主人丹尼一家人的身边,高兴的时候摆摆尾巴,无论丹尼的家人发生了什么,它的内心都能看清楚人类社会的复杂,一直陪伴在他们的身边。
三、恩佐对待主人的忠诚
小说中的主人丹尼是一位赛车手,在进行赛车比赛的时候,妻子伊芙在家待产。恩佐目睹伊芙在家痛苦的生下女儿而丈夫丹尼不在身边时,伊芙把恩佐当做朋友进行交流,恩佐此时作为丹尼的替身来分享她的痛苦与喜悦。而当丹尼赛车失败丧气回家后懊悔自己赛车失败也没有陪伴在妻子身边,恩佐目睹了这一切,理解丹尼的愧疚,许下要好好保护女儿卓伊的承诺,恩佐对自己默念到,要永远保护她。一般动物的思维是简单明了的,恩佐却能读懂人类的思维,内心装的是人类的灵魂与思想,作为主人丹尼的替身陪伴伊芙以及内心与丹尼达成统一,要永远的保护卓一,这无不体现出恩佐身上的人性。
在恩佐年幼时,伊芙曾落下恩佐三天,恩佐没吃一点东西,饿的产生了幻觉,毁坏了卓一的斑马玩具。丹尼回家后,卓一因为心爱的斑马玩具啜泣,丹尼生气的咆哮着打骂恩佐,恩佐内心深深的忏悔,匍匐向着卓一,微微抬起眼请她原谅自己,走到丹尼的旁边问问他的手腕,试图舔他已表示自己的忏悔。丹尼原谅恩佐“有时候我觉得,你好像真的理解我。”“好像有个人藏在你身体里面,你什么都知道。”恩佐在心里对自己说“我什么都知道。”此时的恩佐也已经不是简单的动物,他的忏悔以及对丹尼的理解是人类中人性的表现。
恩佐把丹尼的岳父岳母把他们称为“双胞胎”,因为他们看起来如同一个模子刻出来的:头发是一样的颜色,永远穿情侣装,他们的身上都有化学味道。在伊芙去世后,丹尼的岳父岳母开始和丹尼抢夺卓伊的监护权。在他们看来丹尼的职业充满了危险,无法给予卓伊良好的教育和生活环境。可是卓伊却喜欢和爸爸、恩佐住在一起,丹尼的岳父岳母为了卓伊的监护权开始不择手段,他们控告丹尼犯有害等重罪。而丹尼,则因为这些控告,不能出去比赛赚钱。为了应对这突如其来的官司,丹尼需要支付高额的律师费,并为此而几乎倾家荡产,在最后恩佐生病时,丹尼连为恩佐看病的钱都付不起。此时丹尼只能向岳父岳母妥协。当丹尼正要签字同意岳父岳母监护女儿卓伊的时候,恩佐想到三天没进食损坏的玩具斑马是自己和主人丹尼一家的关系经历过最坏的时候,它突然明白了,“正是因为我们自身的恐惧,正是因为我们自我毁灭的倾向。面对自己最低迷的时刻,斑马正是我们最糟糕的部分。恶魔就是我们自己”。于是,恩佐冲上去抢下了丹尼的文件并对着文件乱抓。丹尼却开始哈哈大笑,笑得跪在地上,直到不能再笑。丹尼面对恩佐“捣乱”的行为,并没有发火,而是很开心,因为恩佐让他知道“你的心,决定你看见的”。恩佐在此时理解丹尼的处境并且在关键的时候给了丹尼积极的启示。
在丹尼面临岳父岳母的官司和赛车事业不顺的时候,恩佐是他唯一的支柱并且他照顾卓伊。而此时的恩佐健康正逐渐走下坡路,髋部的病痛也开始严重起来,它的行动能力受到了限制,不能快跑。然而,它却一直担心丹尼官司能否成功,梦见自己能够像人类一样说话在法庭上作为丹尼的证人,证明丹尼的清白,梦里官司成功了。梦醒后,丹尼的控诉被取消了,他拿回了卓伊的监护权。遗憾的是,恩佐最后因为身体支撑不住没能看到卓伊和丹尼团聚。
弗洛伊德认为,超我由自我理想和良知组成,强调的是道德准则和美德。小说中恩佐想成为人类的理想,以及无论主人是否打骂自己都能理解主人,并且一直能像个人类一样分享主人的快乐与痛苦,在主人困难时给予主人鼓励和启示;看清楚了人类的复杂,主人岳父岳母的“不择手段”,相信正义,连最后做梦都希望自己能够像人一样作为主人的证人证明主人的清白。就连在最后健康状态糟糕的时候想起了曾经在“国家地理频道”看到的那个关于“蒙古狗”的纪录片:狗死后会转世成人,它仍然坚定地说“我准备好了”,仍然坚信自己在来世转世成人还会找到丹尼,找到卓伊。这些深刻的揭示了恩佐身上的人性,以及它的超我,它已不单单是一只简单的狗,它是具备高贵的人类灵魂的高级动物,从某种意义上来说,恩佐可以看做是“人”。在小说故事的最后,恩佐在丹尼温柔的呼唤声中,离开了,它可能去了那个可以转世成人的地方。(作者单位:中国地质大学)
参考文献:
[1](德)霍夫曼著, 王宁等译:《弗洛伊德主义与文学思想》,北京: 生活・读书・新知三联书店, 1987.
[2](美)查尔斯・布伦纳著, 杨华渝等译:《精神分析入门》, 北京: 北京出版社, 2000.
拟人的作用范文5
[关键词] 尼美舒利;宫颈癌;环氧化酶-2;Caspase-3
[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(a)-0004-04
近年来研究发现环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)与人类恶性肿瘤的发生密切相关,COX-2选择性抑制剂尼美舒利可对乳腺癌、胃癌、肝癌等发挥有效的抗肿瘤作用[1-7]。宫颈癌为女性最多发的恶性肿瘤之一,目前各种预防和治疗药物疗效均不理想或毒副作用较大。本研究对尼美舒利的体外抗肿瘤活性进行了研究,并深入探讨了相关机制,为其临床抗肿瘤研究提供实验依据,以期为宫颈癌的防治开辟新的途径。
1 材料与方法
1.1 材料
人宫颈癌Hela细胞株(Foucsbio公司);尼美舒利半乳糖苷(中国药品生物制品检定所);胎牛血清、DMEM培养基为Invitrogen公司产品;Caspase-3、COX-2和β-actin一抗购自Calcam公司;辣根过氧化物酶标记的抗小鼠IgG购自Promega公司;Super Signal ECL化学发光试剂盒购自Pierce公司;蛋白定量试剂盒(Bradford)、β-巯基乙醇、过硫酸氨等均购自上海生工公司。细胞培养皿和96孔培养板(Corning公司);蛋白电泳及转膜装置(Bio-rad);分光光度计(Beckman公司);倒置显微镜(Olymmpus),透射电子显微镜(PM-1200PX型)。
1.2 细胞培养
Hela细胞用含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的DMEM/F12培养液,培养在37℃、5%CO2的细胞培养箱中。细胞每隔2 d以1∶3的比例传代1次。
1.3 尼美舒利对Hela细胞增殖抑制率检测
取对数生长期的Hela细胞,以4×104个/mL的细胞密度接种于96孔培养板,每孔100 μL,每组各设置6个复孔,培养24 h后吸弃原培养液,加入含不同浓度(0、100、200、400、800 μmol/L)尼美舒利200 μL。分别于24、48和72 h,向每孔中加入质量浓度为5 g/L的MTT溶液20 μL,继续培养4 h后,小心吸弃全部上清液,然后向每孔中加入150 μL二甲基亚砜(DMSO),震荡10 min至结晶全部溶解,于酶标仪上490 nm波长处测量吸光度(A)值。实验重复3次,按以下公式计算细胞增殖抑制率:抑制率(%)=×100%。
1.4 细胞形态学观察
1.4.1 倒置显微镜观察 对数生长期的人宫颈癌Hela细胞经0.1%胰蛋白酶溶液消化,制成单细胞悬液,调整细胞浓度至4×104个/mL,接种于24孔板,每孔1 mL。Hela细胞分为对照组0 μmol/L、200 μmol/L尼美舒利组和400 μmol/L尼美舒利组,按分组药物浓度加入尼美舒利。细胞继续培养48 h后,倒置显微镜观察。
1.4.2 透射电镜超微结构观察 Hela细胞用0.25%胰蛋白酶消化,制成细胞悬液,4×104个/孔接种到6孔培养板中,37℃下5%CO2及饱和湿度条件下培养24 h。待细胞完全贴壁后,吸弃培养液,分别换上含有0、200、400 μmol/L尼美舒利的培养基,培养48 h后,收集约107个细胞,以1 500 r/min离心10 min,形成细胞团。4℃下用2.5%戊二醛固定1 h,再用1%四氧化饿4℃下固定20 min。室温下丙酮脱水,再经浸透、包埋、修块、切片等程序制成50~70 nm超薄切片,铅染液电子染色后,JEM-1200EX型透射电镜下观察细胞超微结构。
1.5 免疫印迹法检测Caspase-3、COX-2蛋白表达
分别用溶剂(空白对照组)和400 μmol/L尼美舒利(尼美舒利组)处理Hela细胞,作用24、48及72 h后,Western blot法检测Caspase-3及COX-2蛋白表达水平,β-actin为内参蛋白,具体步骤如下:收集处理后细胞,预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,加入蛋白匀浆液(50 mmol/L,This-HCl,PH 7.4,1%Triton X-100, 0.2 mmol/L PMSF,1 mmol/L EDTA),用4℃超速离心机以12 000 r/min离心10 min,取上清,用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,10 μg/well,电泳结束后,将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移到PVDF膜上,Caspase-3(1∶1 000)或COX-2(1∶1 000)或β-actin(1∶2 500)一抗孵育,4℃过夜,加标记辣根过氧化物酶的抗鼠/兔IgG二抗,常温孵育1 h,然后用ECL发光,X线胶片曝光成像,TotalLab软件进行图像分析。
1.6 统计学方法
采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析。计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,比较采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 尼美舒利对Hela细胞增殖的抑制作用
100~800 μmol/L尼美舒利作用Hela细胞24、48和72 h后,可显著抑制细胞的生长,见图1。对照组(0 μmol/L组)宫颈癌Hela细胞抑制率在观察期内始终处于本底水平,而浓度为100、200、400和800 μmol/L的尼美舒利作用24~72 h后Hela细胞抑制率显著升高,药物作用浓度、作用时间与细胞抑制率之间呈现明显的剂量-效应和时间-效应关系。
2.2 尼美舒利对Hela细胞显微及超微结构的影响
2.2.1 显微结构改变 见图2。对照组Hela细胞呈梭形或多角形,单层生长良好,数量多,胞间接触紧密(图A)。而经400 μmol/L尼美舒利处理的Hela细胞,数量明显减少,细胞膜鼓起,体积缩小,细胞固缩,胞间隙增大,附壁能力显著下降,呈悬浮状,胞浆透亮度下降,呈颗粒感(图B)。200 μmol/L尼美舒利处理组细胞改变较400 μmol/L组轻,只有部分脱壁固缩(图C)。
A:对照组;B:400 μmol/L尼美舒利组; C:200 μmol/L尼美舒利组
2.2.2 超微结构改变 对照组细胞表面微绒毛丰富,胞浆均匀,较多细胞器分布,空泡少,细胞核大且染色质呈均匀斑点状分布,胞质中糖原颗粒及线粒体较多见。400 μmol/L尼美舒利作用后,细胞表层微绒毛减少,核呈不规则状,核内染色质凝集成块,可见凋亡小体,个别细胞呈空化状,线粒体肿胀,嵴断裂,少数细胞膜破坏,细胞器溢出。见图3。
2.3 尼美舒利对Hela细胞COX-2表达的影响
为了探讨尼美舒利的抑制肿瘤细胞的机制,笔者研究了COX-2蛋白的表达变化,见图4。由图4可知,COX-2在尼美舒利作用24、48和72 h后,表达水平与空白对照组相比均显著下降(P < 0.05、P < 0.01),且其变化趋势与作用时间均呈现明显的时间-效应关系。
2.4 尼美舒利对Hela细胞Caspase-3的表达的影响
为了进一步探讨尼美舒利的抗肿瘤机制,笔者研究了细胞凋亡通路关键蛋白Caspase-3的表达变化。尼美舒利对Hela细胞Caspase-3的表达的影响结果见图5。由图5可知,Hela细胞在药物作用24、48和72 h后,Caspase-3的表达水平与空白对照组相比分别上升了约1.2、1.5和2.5倍(P < 0.01)。
3 讨论
尼美舒利是一种新型的非甾体类抗炎药,对COX-2的抑制具有高选择性,长期服用无明显肾或胃肠道副作用。大样本人群的回顾性研究表明,绝经妇女定期服用非甾体抗炎药5~9年和10年以上,乳腺癌发生率分别下降21%和28%[8],也有研究认为,服用非甾体抗炎药与降低女性癌变的发生风险之间并无统计学上的联系[9]。基于此,探讨非甾体抗炎药抗癌的机制具有重要意义。
本实验通过观察尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作用,探讨了其对人宫颈癌细胞抑制作用以及相关机制。MTT检测结果及细胞纤维形态学改变均表明,尼美舒利可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,超微结构中可见凋亡小体及细胞器损伤,这表明尼美舒利可诱发肿瘤细胞的凋亡或坏死。
COX-2可通过前列腺素参与调控癌细胞生长与分化,同时,COX-2可抑制细胞凋亡[10]。尼美舒利抑癌机制可能与抑制COX-2的活性,进而促发癌细胞凋亡的发生有关。研究表明,尼美舒利还可通过减少慢性炎症中超氧化物、8-羟基-脱氧鸟苷酸的产生,促进细胞的凋亡[11]。本研究结果显示,尼美舒利作用后,COX-2表达水平显著降低,这可能在一定程度上促进了肿瘤细胞的凋亡。
细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中具有重要的生物学意义,很多化疗药物都是通过诱导癌细胞的凋亡进而发挥抑制肿瘤的作用[12]。细胞凋亡是由Caspase家族介导的蛋白酶级联反应过程,不同的细胞或不同信号转导途径诱发的凋亡过程参与的Caspase也不尽相同,而Caspase-3是凋亡的关键酶和执行者,是所有细胞凋亡蛋白酶级联反应的“公共通路”,被称为“死亡蛋白”。本研究的结果表明,尼美舒利可以诱发Hela肿瘤细胞中凋亡关键蛋白Caspase-3的表达水平显著升高,且药物作用时间与Caspase-3表达水平之间均呈现明显的时间-效应关系。
综上所述,尼美舒利具有明确的抑制宫颈癌Hela细胞的作用,其机制之一可能是通过抑制COX-2表达引发肿瘤细胞的凋亡。尼美舒利是一种具有临床应用价值的抗宫颈癌药物,对其作用机制和在体抗肿瘤活性作用仍需深入探索。该研究对拓展抗宫颈癌药物研究思路、寻找新的抗癌作用靶点具有重要的理论和实践意义。
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拟人的作用范文6
[关键词]TNIP1;A20;TNFα;NF-κB;自身免疫疾病
[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2017)03(c)-0018-05
[Abstract]TNFAIP-interacting protein 1 (TNIP1) also called A20-binding inhibitor of NF-κB ctivation (ABIN1),and TNIP1 can combine and inhibit transmembrane receptors,such as TNF-αR,EGFR and TOLL sample receptor,and it can combine and inhibit nuclear receptor,such as PPAR and RAR.Current studies mainly focus on function and molecular pathways of TNIP1 on inflammation and autoimmune diseases,such as psoriasis vulgaris,rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus.This view summarized recent studies following the function and mechanism of TNIP1 in human autoimmune diseases.
[Key words]TNIP1;A20;TNFα;NF-κB;Autoimmune disease
自身免疫的疾病(autoimmune disease)是指自身M织或器官与自身的抗原发生应答反应造成自身器官或组织的损害,如银屑病(psoriasis vulgaris)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)和类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)等许多疾病相继被列为自身免疫性疾病。研究发现,在T细胞中肿瘤坏死因子诱导蛋白3相互作用蛋白1(TNFAIP3-interacting protein 1,TNIP1)与其细胞表面CD4的抗原增加及其相关信号的转导有密切联系,这表明TNIP1基因可能与多种自身免疫疾病的发病有关,本文将对TNIP1 基因在三种自身免疫疾病中的作用机制及相关研究结果进行综述。
1 TNIP1的结构和功能
1.1 TNIP1的结构
人类的TNIP1基因位于染色体5q32-33.1上[1],由18个外显子组成,其编码序列由2~18号外显子组成并且1号外显子不可译。18号外显子中的选择性剪接结合位点不同。此外,其他的选择性拼接变体已经被确认[2],TNIP1基因翻译的蛋白质存在两种亚型,分别为ABIN1α和ABIN1β,相对分子量均为72 kDa,两个亚型的蛋白质只在其C端区域有区别[1]。鼠源的TINP1蛋白质同样存在两种形式的亚型,但由于两种亚型的蛋白质起始于不同的甲硫氨酸,因此两者的剪接异构于N端而非C端。其相对分子量分别为72 kDa和68 kDa[3]。在其mRNA水平,TNIP1在组织中广泛表达,且在骨骼肌、外周血淋巴细胞和脾脏中表达量较高[4]。研究表明,TNIP1在人体的平衡免疫细胞系(MOLT-4、Jurkat和HL60)中也存在TNIP1 mRNA的表达,且TNIP1在人类的免疫细胞及器官中都有较高的表达,同时TNIP1的多态性与自身免疫及免疫系统紊乱有关。
1.2 TNIP1的功能
TNIP1蛋白的主要功能结构域已经被确定,其包括ABIN homology domains(AHD)和UBAN两个区域。在TNIP的蛋白家族中,其功能结构域的氨基酸序列是高度保守的,被称之为ABIN的同源区域(AHD)1-4,AHD1区域的主要功能是介导TNIP与A20结合。另有研究表明在TNIP蛋白家族中AHD2区域与核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)相关信号通路的重要调控蛋白IKKγ和NEMO的泛素结合域(ubiquitin-binding domain,UDB)的氨基酸序列存在高度保守[5],并且AHD2区域同样可以与泛素结合,因此把AHD2和NEMO中的UBD统称为UBAN[6]。目前还未见对AHD3和AHD4相关功能的报道。另外所有TNIP蛋白的C末端均含有一个NEMO结合域(NEMO binding domain,NBD),Beyaert的研究表明若失去C末端的NBD结合域的AHD2也无抑制NF-κB的功能[7]。通过UBAN、AHD1和NBD的研究结果表明,TNIP1蛋白具有抑制NF-κB活性的功能。
2 TNIP1对NF-κB反馈调节
2.1两种经典的NF-κB活化信号途径
NF-κB家族包括五个成员形成同源或异源二聚体。不同的NF-κB抑制蛋白与NF-κB结合形成无活性的NF-κB存在于细胞质中,两种NF-κB活化途径已经被确认[8]。许多刺激物如TNFα,激活经典的NF-κB途径,这条途径包含IKKβ(IκB激活酶β)调节的对IκBα的磷酸化。IKKβ是IκB kinases(IKKs)复合物中的一员, IKKs是由IKKα和IKKβ以及调节亚基IKKγ三个亚基组成的复合物, IKKα和IKKβ 都包含相似的结构,且两者具有52 %的同源性。IKKβ在IκBα的激活过程中主要作用是引起IκBα的快速磷酸化和被26S蛋白酶降解[9],因此释放出NF-κB进入细胞核参与细胞活动。特殊的刺激物如淋巴毒素1活化另一NF-κB途径[10],这条途径包含IKKα调节的对p100的磷酸化,这使部分的p100降解成为p52和形成Rel/p52二聚体。这些降解产物能激活另一组基因,这条传导通路同样包含NF-κB诱导激酶(NIK),这一激酶反过来作为IKKα的激酶[11]。另外,TNIP1能显著的和蛋白A20结合抑制IκB家族成员的磷酸化,最终沉默因TNF处理的细胞中的NF-κB的激活,同时TNIP1能被TNF或脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)以依赖NF-κB的方式强烈的上调,表明TNIP1起到负反馈调节NF-κB激活的作用[12]。
2.2锌指蛋白A20对NF-κB的负反馈调节
肿瘤坏死因子α诱导蛋白质3 (tumor necrosis factor alpha-induced protein 3,TNFAIP3)又称锌指蛋白A20,是Dixit等在1990年发现的,人类的TNFAIP3中内含一个由2370个核苷组成的开放读码框, 其翻译的的蛋白A20相对分子量90 kDa,由790个氨基酸残基构成。A20有两个功能结构域,分别是N末端区的1~385区域和C末端区386~775区域,其中N末端区是A20蛋白的特征结构域。C末端区域是锌指蛋白区,有7个特征性的Cys-Cys锌指结构[13]。
在TNFα、IL-1、CD40、细菌脂多糖LPS、EB病毒LPM1蛋白人T细胞白血病病毒Tax蛋白等刺激物的作用下都可使细胞内锌指蛋白A20的表达增高,但A20的增高具有NF-κB依赖性。研究发现,其启动子上有两个NF-κB结合位点。在TNFα介导的转录激活过程中,这两个κB结合位点都会与NF-κB结合[14]。而过表达的A20对NF-κB的激活具有负调节作用[15],在高表达NF-κB的小鼠支气管上皮细胞中转染A20后发现NF-κB的活性明显受到抑制[16]。相反,在对A20缺陷型小鼠的研究中发现,该小鼠对TNFα的刺激非常敏感并伴随有多器官炎症。一系列实验表明A20不但能抑制TNFα所导致的炎症反应和细胞凋亡,还可抑制NF-κB的过度激活[17]。Klinkenberg等[15]的研究发现,A20的C末端386~775区域中的7个锌指结构中只要有4个就可以对NF-κB的活性起到抑制作用,并且对这4个锌指结构并无特殊的要求。近年来,Boone等[16,18]的研究发现A20还具有两种相反的酶活,去泛素化和泛素化(de-ubiquitinationandubiquitination)。研究表明,在NF-κB信号通路中有多种中介物如IκB、TNFR-1、TRAF2、RIP、IKKγ等在受到TNFα刺激后均发生泛素化[19]。Wertz等认为,A20可能是先通过其去泛素化活性使RIP去泛素化,之后通过其锌指结构的泛素化活性再使RIPLys48泛素化,通过泛素化和去泛素化这一过程使RIP降解,从而达到对NF-κB活化的抑制作用[20]。此外还有研究表明,A20还可使TRAF6去泛素化从而达到抑制NF-κB激活作用[21]。
综上所述,锌指蛋白A20通过对NF-κB通路中的RIP、TRAF6去泛素化和泛素化作用,进而负调节NF-κB活性, 抑制NF-κB的激活。而TNFAIP3基因的表达又依赖于NF-κB的激活,这说明A20对NF-κB具有负反馈调节作用。
2.3 TNIP1对NF-κB的负反馈调节
在人体TNIP1广泛表达组织和细胞中,在骨骼肌、外周血淋巴细胞和脾脏中都呈较高表达,而脑中表达量较低。研究显示,类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(finroblast-like synovioctes,FLS)受到TNFα刺激后, FLS内的TNIP1表达量明显上调。而通过抑制NF-κB的活性, 细胞中TNIP1表达量也明显地下调,表明在FLS中TNIP1的表达与NF-κB的活性有关[22]。在呼吸道上皮细胞中过表达TNIP1,可有效抑制NF-κB的活化,从而抑制其引起的各种炎症反应[23]。
在TNIP家族中同源序列AHD1和AHD2是高度保守的。IKKγ的C端相关蛋白NRP中都含有TNIP家族中AHD2的同源序列且高度保守,这表明TNIP家族中AHD2的一个重要功能是抑制NF-κB的活性,而突变或失去AHD2区域,即使高表达TNIP1,也不能有效抑制NF-κB[24]。Mauro等的研究显示,ATNIP1与IKKγ/NEMO相结合诱导A20和IKKγ/NEMO作用,使A20对IKKγ去泛素化,进一步抑制NF-κB的激活[25]。进一步研究显示,TNIP1 AHD1区可与A20结合,说明TNIP对NF-κB的抑制作用是与A20共同作用在IKKγ实现的。
3 TNIP1基因在自身免疫疾病中的作用机制
3.1 TNIP1基因在寻常型银屑病中的作用机制
寻常型银屑病也称银屑病(psoriasis vulgaris),是一种常见的因免疫系统紊乱介导的慢性炎症性皮肤病,寻常型银屑病的发病原理是NF-κB的过度激活导致[26]。近年来对寻常型银屑病研究发现TNIP1和TNFAIP3为其发病的易感基因,这两个基因所编码的蛋白质相互结合,通过阻止NF-κB激活和抑制其入核转录的发生,从而抑制炎症反应的发生发展,进而抑制银屑病的病程[26]。研究还发现在高加索人群中TNIP1基因的5q32-q33.1序列与寻常型银屑病的发病有关[27]。通过使用Genome-wide association study(GWAS)研究分析法分析了中国汉族群体中的银屑病患者后发现,其患者体内的TNIP1基因single nucleotide polymorphism(SNP)rs17728338的表达量高于其他TNIP1基因的SNP的表达量[1],并且通过qPCR技术对寻常型银屑病患者患病皮肤组织、患者正常皮肤组织以及健康志愿者的正常皮肤组织中TNIP1基因的mRNA水平进行检测发现,与健康志愿者的皮肤组织相比患有严重寻常型银屑病患者的患病皮肤组织中TNIP1基因的mRNA表达水平较低,而在早期寻常型银屑病患者的患病皮肤组织和正常皮肤组织中TNIP1基因的mRNA表达水平无明显差异[28],这表明TNIP1基因的异常表达可能是寻常型银屑病发病原因之一。
3.2 TNIP1基因在SLE中的作用机制
SLE是免疫系统功能紊乱所导致的系统性慢性炎症性疾病。该疾病的发生会导致体内多种器官及系统产生炎症反应,最终对自身造成严重损伤。广泛认为有多种因素与SLE的发病有关,主要是环境因素和遗传因素,其中遗传因素在疾病的发展中扮演着重要角色[29]。研究发现,T细胞表面CD4抗原增加和其信号转导都与TNIP1基因表达有关[30],ERK(extracellular-signalregulate kinase)家族蛋白在细胞的增殖与分化方面起到重要调节作用,具有抑制细胞凋亡的功能[31]。过表达T细胞中的TNIP1导致T细胞表面CD4抗原分子的增加,从而对ERK蛋白家族的激活起到抑制作用,表明在T、B淋巴细胞的增殖和分化过程中TNIP1起到重要的调节作用,并最终导致SLE的发生[32]。近年来对TNIP1基因SNP位点的研究发现,在与TNIP1相关的所有SNP位点中有七个SNP位点与中国汉族人群SLE的发生及发展高度相关[33]。Kalergis在研究系统性红斑狼疮小鼠模型时发现系统性红斑狼疮小鼠IκB蛋白的表达量明显下调,IκB蛋白对NF-κB的活性具有抑制作用,并且还发现A20和TNIP1蛋白的表达量也出现了明显的降低,并导致核转录因子NF-κB的过度激活,最终导致了SLE 的发生。Kalergis在Fcγ受体缺陷的小鼠模型中,发现多种NF-κB的抑制因子的表达量均有明显的下调。这种小鼠模型中出现SLE病理症状,通过对Fcγ受体缺陷的小鼠使用NF-κB抑制剂可缓减这种症状[28]。与正常人相比,SLE患者的PBMC(peripheral blood mononuclear cell)中,活性NF-κB表_量明显升高。在细胞中异常表达TNIP1可能还影响了受体相互作用蛋白(RIP)的表达,而受体相互作用蛋白在IκB 激酶复合物中起到重要作用,受体相互作用蛋白的存在激活了IKK,而活化的IKK引起IκB降解最终导致NF-κB的活化[18]。
相P研究一致认为,SLE的核心发病机制是B细胞和T细胞紊乱及异常造成的,而TNIP1通过与锌脂蛋白A20结合抑制了NF-κB活性,减少炎症反应的发生,并且T细胞中TNIP1的表达对T细胞表面抗原CD4的表达具有调节作用,因此,在SLE中TNIP1低表达导致了NF-κB的异常活化,最终导致了SLE的发生。
3.3 TNIP1基因在RA中的作用机制
RA是由于巨噬细胞受TNFα的刺激,激活了下游的成纤维滑膜细胞(FLS)产生的大量炎症因子,最终形成一种慢性炎症反应[35]。Gallagher等的研究显示,在类风湿性关节炎患者的滑膜活性检测中TNIP1基因的mRNA呈高水平表达[34];在RA患者的FLS中促炎因子的活性与TNIP1和TNIP3的表达量成正相关; Hideya lgarashi等的研究发现RA患者的FLS细胞在受到TNFα的刺激后细胞内TNIP1和促炎因子的含量会同时升高。通过凝胶迁移或电泳迁移率实验发现在受到TNFα的刺激后RA患者的FLS中高表达的TNIP1不但抑制了NF-κB的活性,同时促进炎症因子的表达。通过慢病毒使FLS中的TNIP1基因沉默后发现,在TNAα的刺激下炎症因子的表达量不会上升,因此,在RA中TNIP1并没有抑制NF-κB的活性从而对抑制炎症反应的发生,高表达的TNIP1与RA的发生及发展具有密切的关系[34]。
4结语
综上所述,TNIP1蛋白能抑制TNFα诱导的NF-κB活性。在各种自身免疫疾病中均发现TNIP1表达异常,说明其与自身免疫疾病的发生与发展存在密切的相互关系。在缺失TNIP1的小鼠模型中细胞及胚胎都无法存活,说明TNIP1在维持细胞的生长发育和抗凋亡方面扮演着重要的角色。TNIP1的生物学功能是通过调节NF-κB活性实现的,在NF-κB信号途径,TNIP1与蛋白A20结合,使A20对IKKγ进行去泛素化作用进一步阻止IκBα的激活和降解 ,最终抑制活性NF-κB入核。目前针对TNIP1的研究还处于初步阶段,其在自身免疫疾病中的作用机制还不是十分清楚。现阶段的研究表明,TNIP1可能是一种衔接蛋白,拉近A20与RIP /IKKγ的空间距离促进反应的发生。研究 TNIP1 与不同信号途径之间的相互关系,对阐明在自身免疫疾病中TNIP1的分子作用机制及生物学功能具有重要意义,为治疗自身免疫疾病提供了一个新的思路。
5展望
伴随着全新的医疗方法的不断出现和医疗技术的发展以及人类基因组计划(human genome project,HGP)的完成,通过更为细致和完善的研究将使TNIP1基因在各种自身免疫疾病中的功能及作用机制得以阐明,不但为提高治疗效果和控制疾病发展提供帮助,还为治疗自身免疫疾病的药物开发提供了全新的思路,同时为相关疾病的临床治疗、等级评定和预后效果分析等方面也提供了一个理论基础。
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