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病毒实验室范文1
关键词 计算机实验室;计算机病毒;防范策略
中图分类号TP39 文献标识码A 文章编号 1674-6708(2010)26-0217-01
随着个人计算机的普及与广泛应用,计算机病毒也随之走进千家万户。在计算机实验室管理中,计算机病毒防范一直是一个非常重要的方面。其主要原因就是一旦机房计算机感染上病毒,轻则导致计算机运行速度变慢,干扰教师正常授课;重则令计算机无法使用,造成教学事故。因此,各实验室管理员都对计算机病毒深恶痛绝,并做出诸多防范策略。本文就目前计算机病毒主要传播途径加以分析,并对其防范策略做出探讨。
1 计算机病毒主要传播途径
1.1 通过网络传播
由于计算机实验室中的计算机一般都是连接到校园网中,没有直接连入Internet,故其受到黑客攻击的概率相对较小,感染计算机病毒的机会主要是在浏览包含恶意代码的网页以及下载并打开未经安全检测的文件(主要是可执行文件)时。
1.2 通过移动存储器传播
近几年,随着移动存储器(U盘、MP3播放器、移动硬盘等)价格的下降,其逐渐成为了学生上课的必备物品。学生使用移动存储设备来拷贝教师课件或者存储个人作业,为教师教学带来了极大的方便。但是,与此同时,移动存储器也成了计算机病毒的藏匿地点与顺风客船,将病毒四处传播。
2 安装安全软件
安全软件包括杀毒软件、防火墙以及专门保护用户上网安全的软件,如:360安全卫士、金山卫士等。
鉴于一般计算机实验室都装有提供上网服务的服务器,为了保障上网安全,应在该服务器上安装杀毒软件以及防火墙,并开启自动升级功能,使该服务器成为隔绝外部安全威胁的屏障,实现类似“堡垒主机”的功能。
对于普通客户机,由于其已受到上网服务器的保护,且计算机实验室经常会作一些网络方面的实验,故客户机不建议再安装防火墙软件,只安装杀毒软件以及专门保护用户上网安全的软件即可。
3 禁用操作系统的“自动播放”功能
很多通过移动存储器传播的病毒都会磁盘根目录释放一个名为“Autorun.inf”的文件以达到用户浏览该磁盘内容时自动运行病毒程序的目的。防止此种病毒自动执行的最好方法就是禁用操作系统的“自动播放”功能。对于WinXP系统,可以通过以下3步来彻底禁用该功能。
1)禁用系统的“Shell Hardware Detection”服务。
2)在系统“组策略”中,找到“计算机配置\管理模板\系统”分支,然后找到“关闭自动播放”项目,设置其属性,在其属性对话框中依次选择“已启用”和“所有驱动器”即可。
3)在注册表编辑器中找到“HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Explorer\MountPoints2”子键,删除其子键,并将其权限设置为只读。
4 安装还原卡
计算机实验室所用客户机一般都带有还原卡,它能自动或手动将客户机的文件系统恢复到上个还原点时的状态,是机房管理员防范病毒最有力的武器之一。因此,计算机实验室中的每台客户机都应该安装还原卡,即使不安装硬件还原卡的情况下,也应该安装还原软件(比如:冰点还原)。
对于还原卡的还原策略设置,应该将教师计算机与学生计算机分开讨论,两种计算机分别应用不同的策略。
对于学生用的计算机,应该将还原卡的还原策略设置为全盘保护,并且在启动计算机时自动还原。这么设置的原因主要在于:学生的安全意识相对于教师来说比较薄弱,而且学生的求知欲以及动手欲望比较强烈,容易给计算机系统造成未知的混乱,影响在他之后上机的学生正常使用计算机。而每次开机自动还原的还原策略可以避免这一点。
对于教师所用的计算机,建议将还原卡的还原策略设置为每天仅在第一次开机时还原,而且最好留出一个非系统分区不进行还原保护,或者还原间隔设置的长一些(比如一个月)。这样做的原因是:一般教师都有比较强的安全意识,令计算机中毒的概率相对较低。而且教师在授课时,经常会往系统分区安装教学软件或者拷贝一些教学用的资料,如果遇到死机或者所安装软件需要重新启动计算机方可完成安装的情况,每次开机自动还原的还原策略将会导致教师之前所做工作前功尽弃,影响教学质量。而每天只进行一次还原的还原策略可以有效避免这一点。至于为教师预留一个不受还原保护(或还原间隔较长)的非系统分区的原因,主要是考虑到教师授课用的一些文件以及学生提交的作业可能数量较多、占用存储空间教大,不方便使用U盘拷贝;而且有时候教师会由于赶班车等原因来不及拷贝这些资料。那么,有这样一个分区可以给教师带来极大地方便。不过,为了防止这个不受保护(或还原间隔较长)的分区受到病毒威胁,建议将该分区的文件系统设置为NTFS,并在建立几个可供教师使用的文件夹后,将该分区根目录(不包括子文件夹)的NTFS权限设置为只读。这样,可以有效避免依赖“Autorun.inf”文件传播的病毒感染该分区。
5 对于伪装成文件夹的病毒程序防范
近一段时间以来,很多依靠移动存储器传播的病毒改变了以往依靠“Autorun.inf”文件启动的方式,而是将受感染的磁盘分区根目录文件夹隐藏起来,将自身病毒程序改为文件夹的名称,并将病毒程序的图标设置成了WinXP系统默认文件夹图标,诱使用户去点击以达到传播病毒的目的。
对于此类病毒,除了靠安全软件识别之外,只能依靠用户自身提高安全意识,避免被病毒误导来进行防范。不过,还是可以靠修改一些系统设置来辅助用户识别病毒程序,避免被病毒误导。
1)更改系统文件夹的默认图标。此举可方便用户识别病毒文件。
病毒实验室范文2
【摘要】 目的 对2001～2004年云南省各临床实验室甲型肝炎病毒IgM抗体测定的室间质量评价进行总结分析，以督促各实验室提高该项检测的质量。 方法 每年发放卫生部临检中心提供的甲型肝炎病毒IgM抗体质控血清10份，分两次测定，对其回报的结果进行统计、分析。 结果 4年来云南省临床实验室甲型肝炎病毒IgM抗体40份质评样本中有5份低值阳性样本，其阳性检出率分别为31.8%、62.4%、74.3%、59.2%和71.7%，阴性样本17份，符合率均在94%以上;开展与不开展室内质控的实验室PT成绩差异有显著性（P<0.05）;使用与不使用酶标仪的实验室PT成绩差异有显著性（P<0.05）。 结论 使用酶标仪判读，严格开展室内质控的实验室质评成绩明显优于未使用仪器及未开展室内质控者。
关键词 甲型肝炎病毒IgM抗体 室间质量评价
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【Abstract】 Objective To analyze the external quality assessment result of anti-HAV IgM testing in clinic lab in Yunnan Province during2001-2004，and improve the testing qulity in clinic lab.Methods The10control samples offered by CCCL were distributed to all laboratories participating the EQA scheme per year and detected twice.Then the data of laboratories were analyzed statistically.Results 40control samples were distributed to all lab-oratories during four year，there are five weak positive samples，and positive rate were31.8%，62.4%，74.3%，59.2%and71.7%，there are17negative samples，their according rate were all exceeded94%.There is difference（P<0.05）between developed internal quality control and non-developed.There is significant difference between us-ing instrument and no instrument（P<0.05）.Conclusion The PT score of lab using instrument and developed in-ternal quality control are better than lab of no instrument and non-developed internal quality control.
Key words anti-HAV IgM external quality assessment
2000～2004年，云南省参加甲型肝炎病毒IgM抗体测定室间质量评价的实验室从最初的80家增加到132家，检测质量也有很大提高，到2004年，10份质评样本的符合率均在95%以上，但也还存在一些问题。本文总结了4年来我省甲型肝炎病毒IgM抗体测定室间质量评价的结果，并分析了对成绩影响较大的几个因素，希望对参评实验室提高检测质量有所帮助，共同提高我省甲型肝炎病毒IgM抗体的检测水平。
1 材料与方法
1.1 质控样本 均由卫生部临床检验中心提供。
1.2 方法 将质控样本分装邮寄到各参评实验室，全年分两次进行，每次做5个样本。参评实验室按规定时间回报结果后，进行统计分析。评分方法为PT评分:每个样本回报正确得100分，错误得0分。
2 结果
2.1 2001～2004年全省甲型肝炎病毒IgM抗体质评样本预期结果与全省各临床实验室检测结果符合率 见表1。
从表1看到，阴性样本的符合率很高，均在94%以上。符合率较低的几个样本如014111、014112、024215、034113和034214都是低值弱阳性。
2.2 开展室内质控与未开展室内质控实验室室间质评PT成绩分析 见表2。
2.3 仪器判读与肉眼目测实验室室间质评PT成绩分析 见表3。
3 讨论
室间质量评价是由非本单位的机构采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现实验室本身不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，帮助其校正，使其结果具有可比性 ［1］ 。云南省临床实验室甲型肝炎病毒IgM抗体检测室间质量评价工作是由云南省临床检验中心组织的，参评实验室从最初的80家增加到2004年的132家，检测质量不断提高的同时，也暴露出存在的一些问题。从表1的结果可看到，阴性样本的符合率很高，但还是有少数实验室出现假阳性，假阳性将给患者带来不必要的精神压力和经济损失，必须引起重视。而低值阳性的漏检问题就比较严重，如014111、014112、024215、034113和034214几个样本符合率均很低，说明大部分的实验室对甲型肝炎病毒IgM抗体检测的灵敏度还达不到要求，主要有以下原因:有少数实验室未选择合格的有批号的试剂盒，而采用快速金标测定试剂盒，其灵敏度低导致弱阳性标本漏检;另外，从室间质评成绩回报来看，几个低值阳性漏检的基本是偏远的、经济较落后的基层单位，他们大都没有酶标仪，或者没有正确使用酶标仪，肉眼目测无法正确判断处于临界值附近的结果;同时，不使用酶标仪判读结果，便无法开展室内质控，室内质控精密与否直接影响室间质评的成绩。从表2和表3可知，使用酶标仪且严格开展室内质控的实验室PT成绩明显优于未使用者。
表1 2001～2004年全省质评样本预期结果与检测结果符合率（略）
表2 是否开展室内质控实验室室间质评PT成绩比较（略）注:经t检验比较，开展室内质控与未开展室内质控实验室5个批号室间质评PT平均成绩差异均有显著性（P<0.05）
表3 仪器判读与肉眼目测实验室室间质评PT成绩比较（略）注:经t检验比较，仪器判读与肉眼目测每个批号检测成绩差异均有显著性（P<0.05）
而就试剂盒的使用来看，用量较大的几家试剂仍存在差异，试剂盒的选择也是影响检测质量的重要因素 ［2］ 。如何选择高质量的试剂，首先看试剂盒有无国家相关部门的批文;其次要认真用定值血清检测精密度，用卫生部考核血清盘检测准确度;再者要选择有效期相对长，保存条件许可的试剂盒。还有不同试剂厂家生产的甲型肝炎病毒IgM抗体试剂盒有差异，如有的厂家要求稀释，有的厂家则用原血清检测。为此希望大家加强室内质控，并且最好用稀释血清的试剂盒，它可减少血清中其他IgM（尤其是类风湿因子）导致的假阳性。总之，影响室间质评成绩的因素主要有:实验室管理者的质量意识（是否愿意投资好的设备，是否使用高质量的试剂盒）;实验室操作人员的素质（是否正确使用仪器，是否严格执行操作规程，是否认真开展室内质控）。还有其他，如是否按规定保存质控品，是否正确填写检测结果等。只有各个方面都认真重视，才能保证甲型肝炎病毒IgM抗体的检测质量。
参考文献
病毒实验室范文3
该报告详细解读了伪装类手机病毒的伪装病毒原理、传播途径、典型伪装病毒案例、病毒发展趋势，同时还给手机用户提供了有效防范手机伪装病毒的办法。分析认为，该报告在帮助用户全方位了解手机伪装类病毒的同时，对于爆炸式增长的伪装类手机病毒的防范与治理有着很好的借鉴意义。
诱骗欺诈类病毒占四成以上
腾讯移动安全实验室相继在Symbian、Android手机平台上率先截获多款伪装类手机病毒，比如，伪杀毒、伪完美闹钟、伪懒人看书、伪OVI商店、伪Google框架等。热门安全软件、工具软件、系统进程都是该类病毒常用的伪装形式，通过与热门应用相近甚至相同的图标和名称欺骗用户下载安装，一旦成功安装便会恶意吸费、偷窥隐私、偷偷联网、下载恶意程序等，给用户造成严重的经济损失。
该报告指出，截至到2011年10月9日为止，腾讯移动安全实验室最新的病毒数据分析显示：在Symbian平台发高达13000多个手机病毒，其中诱骗欺诈类病毒所占比例为46%，在所有类别中占据第一的位置；在Android平台发现高达6000多个手机病毒，其中诱骗欺诈类病毒所占比例为18%，在所有类别中也占据到前三的位置。
Android将成手机伪装病毒重灾区
报告指出，腾讯移动安全实验室针对大部分的伪装类病毒进行研究发现，其伪装类别可以分为三大类：捆绑应用式伪装类、独立封装式伪装类和篡改应用式伪装类。并且对三个类别的伪装病毒工作原理都做了详尽的分析。
该报告还预测，由于Android系统的开放性，应用越来越多，软件市场鱼龙混杂，将成为伪装类手机病毒重灾区。伪装病毒技术含量层次不齐，SP仍然是病毒利益驱动者，手机病毒产业链日趋完善，同时云端技术被应用到手机病毒中，可以随时通过云端遥控用户手机，更换SP端口，导致手机病毒的治理难度进一步加大。
专家支招应对手机伪装类病毒
面对越来越多、越来越隐蔽的手机吸费病毒，腾讯移动安全实验室专家给出了详细解决方案：
1）安装手机安全软件。为手机安装专业的手机安全软件，比如，QQ手机管家。
2）到安全可靠的站点下载软件。一定不要轻易从手机论坛、不知名的应用市场中下载手机软件，而是要到经过安全认证，有品牌知名度的手机应用下载站下载手机软件，比如，手机腾讯网应用中心、QQ手机管家的“人气推荐”“装机必备”。
3）不要轻易打开陌生人短信中的网址链接，以防下载木马。
病毒实验室范文4
关键词：老年人 甲型病毒性肝炎 实验诊断
中图分类号：R512.61 文献标识码：B 文章编号：1004-7484(2011)16-0013-02
甲型病毒性肝炎是我国法定的乙类传染病，是由一种肠道性病毒引起的，主要以肝实质细胞的炎性损伤为主[1]，具有传染性较强、流行面广泛、传播途径复杂以及发病率高等特点[2]，除了对肝脏损伤之外，还会对身体的心脏、肾脏以及神经系统等其他器官产生损害，可逐渐演变成慢性肝炎[3]，与再生障碍性贫血也有密切的联系，严重者可发展为肝硬化或者原发性肝细胞癌。其传播途径主要是通过日常生活接触经口传染，多呈散发性，老年人机体比较衰弱，脏器功能和免疫力已经下降，临床特点与其他年龄段不同，目前临床上甲型病毒性肝炎确定诊断主要还是要靠实验室检查，尤其是靠特异性血清学检查。我院2005年5月~2011年5月收诊的172例老年甲型病毒性肝炎患者分别进行实验室检测，为临床上甲型病毒性肝炎的治疗提供了参考依据，现将具体诊断过程报道如下。
1 研究对象与方法
1.1研究对象
选取自2005年5月~2011年5月来我院就诊的172例甲型病毒性肝炎患者为研究对象，判断标准参考1995年中国传染病寄生虫病学术论坛制定的病毒性肝炎的诊断标准和中国2000年病毒性肝炎防治方案的诊断标准。其中男性83例，女性89例，年龄在60~75岁之间，平均年龄为65.72岁。
1.2研究方法
1.2.1 对每个老年人甲型病毒性肝炎患者进行血液采集，并从中分离出血清，采用ELISA技术检测血清中的抗-HAV IgM、抗-HAV IgG。
1.2.2采集每个老年人甲型病毒性肝炎患者的粪便标本，采用ELISA技术检测粪便中的HAVAg。
2 结果
2.1患者主要临床表现总结（见表1）
表1. 患者主要临床表现
临床症状
疾病 食欲
减退 乏力 腹胀腹
痛腹泻 肝脾
肿大 黄疸
甲型病毒性肝炎患者人数（例） 152 149 97 93 147
2.2患者主要临床并发症总结（见表2）
表2. 患者主要临床并发症
临床并发症
疾病 电解质
紊乱 肝细
胞癌 肺部
感染 肝肾
综合征 原发性
腹膜炎
甲型病毒性肝炎患者人数（例） 82 1 87 5 7
2.3血清特异性检验结果（见表3）
表3.血清特异性检验结果
检验项目 抗-HAV IgM 抗-HAV IgG
阳性患者人数（例） 168 159
2.4粪便检验结果（见表4）
表4.粪便检验结果
检验项目 HAVAg
阳性患者人数（例） 146
3 讨论
甲型病毒性肝炎是一种传染性的肝炎，主要是经过粪便-口的途径进行传播，过去大部分人们认为是一种良性的自限性疾病，不可能引发慢性肝炎，更不可能导致重症肝炎。近年来医学对甲型病毒性有了新的发现，认为此病有一个慢性过程，并且容易复发，其所引发的重症肝炎占有相当大的比例。
甲型肝炎病毒(HAV)存在于患者的血清、粪便、胆汁以及肝细胞中，HAV侵入人的身体以后，机体将主要产生lgM抗-HAV 和IgG抗-HAV两种抗体，两者的临床意义完全不同。
抗-HAV lgM出现的时间比较早，一般在患者发病7日之内，患者的血液中就可以检测到了，只有极少数的少数病人在发病前血液中可以检侧到。抗-HAv lgM出现以后，大约在出现临床症状之后，其在血液中浓度已经迅速达到高峰，一般高峰浓度维持2~3周后开始下降，发病3~4月后大多数病人血液中便检测不到，可持续残留1年以上的只是极个别患者，且浓度很低。因此IgM抗-HAV可以作为甲型病毒性肝炎早期诊断的可靠、理想检测指标。目前检测防方法多采用ELISA或SP-RIA。此两种方法都有较好的灵敏性、重复性，且操作方法简单，用血量很少，出结果快。大多数医院均可开展此项检测工作。本文中有一部分患者 的血清中没有检测出IgM抗-HAV，可能是因为患者处于发病后4个月之后，血液中的IgM抗-HAV已经完全消失。IgG抗-HAV在感染HAV之后的3~12周在血清内即可出现，故有一部分之后浓度逐渐升高，在6个月时达到高峰后缓慢下降，其可在患者血清内残存十年以上甚至终生。在甲型病毒性肝炎患者发病1周后，大多数在其粪便中便可检测出HAAg，可作为该病的最基本实验检查。
老年人是人群中比较特殊的一组人群，由于年龄处在老龄阶段，机体的组织结构以及生理功能均发生很多变化，体质衰弱，免疫力逐渐降低[4]，老年病毒性肝炎患者也逐年增多，仅根据临床症状无法确诊，应相应采用一些实验检测来帮助诊断，并根据各个患者的情况采取治疗措施，以提高该疾病的治愈率。
参考文献
[1] 任军，王建军，许明德.甲型病毒性肝炎的免疫预防研究进展[J].安徽预防医学杂志，2001,7（1）：75~77.
[2] 戴孟阳，王萍，孙百军.等甲型病毒性肝炎预警指标的探讨[J].2005,6（1）：64~65.
病毒实验室范文5
【关键词】化湿解毒方/治疗应用;轮状病毒性肠炎/中医药疗法； 电解质
【中图分类号】R285.6 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455（2011）12-0349-01
2009年11月-2011年03月，应用中药化湿解毒方灌肠治疗轮状病毒性肠炎60例，观察其对轮状病毒性肠炎患儿电解质的影响，现报告如下。
1 临床资料
1.1 一般资料:120例均为本院门诊及住院腹泻伴脱水的患儿，随机分为2组。治疗组60例，男32例，女28例，年龄6个月-2岁，平均年龄11.56+2.72月。对照组60例，男29例，女31例，年龄6个月-2岁，平均年龄12.12±4.15月。两组患儿一般资料经统计学处理无显著性差异（p
表1 临床症状及体征 例
表2 大便检查 例
1.2 诊断标准:参照中国卫生部颁布的“中国腹泻病诊断治疗方案”（1）急性起病； （2）大便呈水样或蛋花汤样；（3）可伴发热、呕吐、脱水、电解质紊乱；（4）大便常规白细胞，＜5个/hp；（5）大便轮状病毒检测呈阳性。
2 治疗方法
常规治疗：静脉或口服补液纠正脱水、电解质紊乱及酸碱失衡，调节饮食。治疗组: 加上自拟化湿解毒方灌肠。药物组成：白花蛇舌草30g,葛根10g,芦根20g,附子1.5g。功效：清利湿热、安肠止泻、温阳利湿。用凉水500ml浸泡药物30分钟，先武火后文火，煎煮30分钟即可，取药液300ml备用。灌肠时药液温度30-40℃, 6个月至18个月的患儿每次50ml，18个月至28个月的患儿每次75ml，早晚各一次。使药液在结肠内保留1h左右为宜。3天为一疗程。对照组: 加用静点病毒唑10-15mg./kg/d。3天为一疗程。
3 观察指标
临床症状和体征：急性起病；大便呈水样或蛋花汤样；可伴发热、呕吐、脱水、电解质紊乱；实验室检查：大便常规白细胞，
4 结果
两组疗效比较,见表3。
表3结果经Ridit分析p＜0.05有显著性差异，化湿解毒方治疗组明显优于病毒唑对照组。
两组治疗后观察指标比较 （ x±s，d） ,见表4。表3
表4
表4结果显示，治疗组治疗后症状体征消失时间、住院天数等方面均优于对照组，经统计学处理，有显著性差异，提示化湿解毒方,可快速缓解病情、缩短疗程、提高疗效，是治疗轮状病毒性肠炎的有效方剂。
治疗前后电解质情况见表5。
表5
治疗组治疗后36h电解质的变化与治疗前比较均有显著性差异（p＜0.01）。对照组治疗后36h电解质的变化与治疗前比较也有所改变，但与治疗前比较差异 不显著（p＞0.05）。2组治疗后比较：治疗组治疗36h电解质变化明显优于对照组,提示化湿解毒方是治疗轮状病毒性肠炎的有效方剂。
5 讨论
轮状病毒性肠炎多发生于秋冬季节,以2岁以下的婴幼儿多见,常呈流行性,抗生素治疗无效.我们采用化湿解毒方灌肠治疗效果显著,方中大量白花蛇舌草本身对脾细胞具有丝裂原作用,能有效控制热势，迅速改善炎症病理状态，抑制体内细菌生长。葛根有明显的罂粟样松驰平滑肌的作用，使肠道正常动力恢复，大大减少大便次数；煨葛根所含的淀粉遇水有较强的吸附作用，吸于肠壁，消除有害物质的肠粘膜刺激，降低肠痉挛，葛根素有退热作用；葛根煎剂能增强白细胞的吞噬能力，有抑制病原微生物的作用1。芦根具有解热、镇痛 、提高免疫力等作用。附子的作用抗炎、兴奋脑垂体、肾上腺皮质系统。诸药同用，能增强机体的细胞免疫功能，抑制人轮状病毒的复制，对大肠粘膜有保护作用，对胃肠的推进有明显的抑制作用以抗腹泻，从而达到治疗本病的目的。
化湿解毒方灌肠治疗轮状病毒性肠炎3天后，治疗组电解质变化明显优于对照组,提示化湿解毒方是治疗轮状病毒性肠炎的有效方剂。
病毒实验室范文6
【摘要】 目的 观察绵马贯众水、乙醇两种提取物的抗病毒作用。方法 (1)离体实验：采用致细胞病变法观察绵马贯众水、乙醇两种提取物对流感病毒(FM1株)、呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)的抑制作用，计算药物半数有效浓度(EC50)、治疗指数(TI);(2)在体实验：绵马贯众提取物按25%、12.5%、6.25%原液的浓度设高、中、低3个剂量给药，并设立正常对照组和病毒对照组，观察绵马贯众水、乙醇两种提取物对滴鼻感染FM1株流感病毒的昆明种小鼠肺指数的影响。结果 绵马贯众水、乙醇两种提取物对流感病毒(FM1株)、呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)均具有一定的抗病毒作用，绵马贯众水提取物对上述病毒的EC50分别为110.58、141.72、126.21、152.66、182.55 ng/L;TI分别为34.94，14.21，30.62，25.31，21.17。绵马贯众乙醇提取物对上述病毒的EC50分别为152.08、168.27、132.28、135.26、156.38 ng/L;TI分别为14.24，11.12，16.37，16.01，13.84。绵马贯众水提物高、中剂量组、乙醇提取物高剂量组降低感染FM1株的小鼠肺指数，与病毒对照组比较差异有统计学意义(P
【关键词】 贯众/分离和提纯; 流感病毒/药物作用; 呼吸道合胞病毒/药物作用; 腺病毒/药物作用; 动物，实验
【Abstract】 Objective To investigate the antiviral effects of the water and alcohol extracts of Dryopteris Crassirhizoma.Methods (1)The cytopathic method was used to observe the antiviral effects in vitro of the water and alcohol extracts of Dryopteris Crassirhizoma on influenza virus(FM1)，respiratory syncyntial virus(Long)，para influenza virus(Ⅰ，Ⅲ)，adenovirus(AD3);(2)Mice were randomly pided into treated group(25%，12.5%，6.25% extract as high，middle and low dose respectively)，normal control group and model group，the in vivo antiviral effects of them were studied in mice infected with influenza virus(FM1) on induced lung index.Results Both the water and alcohol extracts of Dryopteris Crassirhizoma had the antiviral effect on influenza virus(FM1)，respiratory syncyntial virus(Long)，para influenza virus(Ⅰ，Ⅲ)，adenovirus(AD3).EC50 of the water extract was 110.58，141.72，126.21，152.66 and 182.55 ng/L，TI was 34.94，14.21，30.62，25.31 and 21.17.EC50 of the alcohol extract was 152.08，168.27，132.28，135.26 and 156.38 ng/L，TI was 14.24，11.12，16.37，16.01 and 13.84.The water extract 250 mg/L(P
【Key words】 Dryopteris Crassirhizoma/separation and purification; Influenza virus/action of drugs; Respiratory syncyntial virus/action of drugs; Adenovirus/action of drugs; Animal，experiment
绵马贯众为常用中药，又名东北贯众，其来源为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨Dryopteris crassirhizoma Nakai的干燥根茎及叶柄残基，主产于东北。始载于《神农本草经》，有驱虫、止血、清热解毒的功能，临床上用于风热感冒、虫积腹痛、热毒疮疡、痄腮肿痛、崩漏等。本实验采用离体和在体实验的方法评价绵马贯众两种提取物抗流感病毒(FM1株)、呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)的作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种小鼠108只，雌雄各半，体质量18～22 g，由吉林大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(吉)20030002。
1.2 药品 绵马贯众水、乙醇提取物由辽宁中医药大学提供(每毫升含生药1 g)。阳性对照药利巴韦林注射液(湖北制药有限公司，批号：091022)。
1.3 试剂 MTT(3(4，5二甲基噻唑2)2，5二苯基四氮唑溴盐)为Hyclone公司产品，MTT以磷酸盐缓冲液配制成5 g/L溶液，过滤除菌后置4 ℃冰箱保存备用。二甲基亚砜为上海菲达有限公司产品。1%鸡血由来亨公鸡翅下静脉取血，按1∶4加入Alserver液后4 ℃保存，使用时用生理盐水配成1%鸡红细胞悬液。
1.4 细胞 犬肾传代细胞(MadinDarby canine kidney，MDCK)、人宫颈癌传代细胞(Hela)由吉林市防疫站提供。DMEM(Dulbecco′s modified eagle′s mediurn)培养基由美国Gibco公司提供。MDCK细胞生长液中含有10%胎牛血清、1×105 U/L青霉素、100 mg/L链霉素;MDCK细胞维持液中除含有2%胎牛血清，并加入2 g/mL胰蛋白酶外，其他含量均同细胞生长液。
1.5 病毒株 流感病毒(FM1株)、呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)均购于中国预防科学院病毒学研究所，用于体外抗病毒实验。流感病毒使用前在10日龄鸡胚尿囊腔接种传代3～4次，收集尿囊液，以3 000 r/min离心15 min，取上清液进行血凝实验，将血凝滴度大于1∶320且细菌培养阴性的病毒液分装，置-80 ℃保存备用。FM1株由吉林省疾病预防控制中心提供，用于体内抗病毒实验。
1.6 实验仪器 Model680型酶标仪(美国伯乐公司);二级生物安全柜(305040195，France Thermo);CKX41型倒置显微镜(日本奥林巴斯);MCO175型CO2培养箱(日本三洋);AL204型分析天平(MetterThermo Group);LD42A型离心机(上海安亭);Human up 900型超纯水机(韩国Human)。
1.7 实验方法
1.7.1 药物对MDCK和Hela细胞毒性测定 实验于长春中医药大学中药药理实验室完成。将样品分别配成0.1 g/mL混悬液，0.22 μm微孔滤膜滤过除菌，分装备用。将96孔板每孔加入2×105个/mL密度的MDCK细胞或Hela细胞0.1 mL，培养至细胞长成单层后，弃去原培养液，换含不同浓度的含药维持液，每孔200 μL。药物的终浓度分别为10、20、40、80、160、320、640、800、1 600 μg/L，置于37 ℃ 5% CO2培养箱培养。每日于倒置显微镜下观察细胞变化，培养72 h后计算细胞存活率，每一药物浓度均重复4孔，同时设正常细胞对照和病毒对照。以Probit回归方法计算药物对MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)。
1.7.2 药物对抗病毒作用 先用10TCID50的流感病毒(FM1株)感染MDCK细胞，用呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)感染Hela细胞，每孔0.1 mL，置于35 ℃ 5% CO2培养箱孵育2 h后，吸去病毒液，加入不同浓度的含药维持液，在35 ℃ 5% CO2培养箱继续培养，每天于倒置显微镜下观察细胞变化;采用致细胞病变法进行试验，待病毒对照孔细胞病变呈+++～++++，且细胞对照正常时，计算细胞存活率，每一药物浓度重复4孔，同时设正常细胞对照和病毒对照，以Probit回归方法计算药物半数有效浓度(EC50)。治疗指数(TI)=药物半数毒性浓度(TC50)/药物半数有效浓度(EC50)[1]。
1.7.3 绵马贯众水、乙醇提取物体内抗病毒试验 取昆明种小鼠108只，用抓阄法随机分为9组，正常对照组、阳性对照组(利巴韦林)、病毒对照组及试验药物高、中、低剂量组，每组12只。在乙醚轻度麻醉下，用已滴定的FM1株流感病毒液(以无菌盐水稀释成每0.05 mL含15个LD50)滴鼻感染，每鼠4滴，约0.05 mL。贯众提取物按25%、12.5%、6.25%原液的浓度设高、中、低3个剂量给药，分别为250、125、62.5 mg/kg;阳性对照药利巴韦林剂量为70 mg/kg。以上药物均在病毒攻击后2 h开始灌胃给药，共给药4 d，每日1次。感染后4 d禁食禁水4 h以上，称小鼠体质量，麻醉后处死取出鼠肺，记录病变程度，将肺置于生理盐水的平碟中洗涤2次，用吸水纸吸干表面水分，称出肺湿质量。按以下公式计算肺指数与抑制率：肺指数=小鼠肺湿质量(g)/小鼠体质量(g)×100%;肺指数抑制率=(病毒对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/病毒对照组平均肺指数×100%[2]。
1.8 统计学方法 采用SPSS 11.5统计软件进行统计学处理，数据以±s表示，计量资料行t检验。
2 结果
2.1 绵马贯众水、乙醇提取物对MDCK细胞和Hela细胞的半数毒性浓度(TC50)比较 见表1。表1 绵马贯众水、乙醇提取物对MDCK和Hela细胞的半数毒性浓度(TC50)(ng/L)
2.2 绵马贯众水、乙醇提取物的抗病毒作用比较 见表2。表2 绵马贯众水、乙醇提取物的抗病毒作用注：EC50：药物半数有效浓度，TI：治疗指数。
表2结果表明，绵马贯众水、乙醇提取物对呼吸道合胞病毒(Long)、流感病毒(FM1株)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)均具有一定的抑制作用。
2.3 绵马贯众水、乙醇提取物的体内抗病毒作用 见表3。表3 绵马贯众水、乙醇提取物的体内抗病毒作用(n=12)注：与正常对照组比较，at=7.235，P
表3结果表明，绵马贯众水提物高、中剂量组、乙醇提取物高剂量组对滴鼻感染FM1株的小鼠均有保护作用，可降低流感病毒感染小鼠的肺指数，减轻病区引起的炎症反应，具有一定的抗病毒作用。
3 讨论
绵马贯众是中药贯众的主流品种，现代研究表明其具有抗肿瘤、抗疟、抗病毒等活性[3]。本课题组利用鸡胚试验进行了抗病毒中药的筛选工作，发现绵马贯众提取物对流感病毒具有显著抑制作用;通过离体试验发现绵马贯众提取物对流感病毒(FM1株)、呼吸道合胞病毒(Long)、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、腺病毒(AD3)均具有一定的抗病毒作用;并通过在体实验，观察到绵马贯众提取物降低感染FM1株流感病毒的昆明种小鼠的肺指数，可减低病毒引起的肺损伤。同时通过实验，观察到绵马贯众水提取物对MDCK细胞、Hela细胞的毒性比乙醇提取物稍大;但是从离体、在体实验结果看到，绵马贯众水提取物的抗病毒活性略好于乙醇提取物，对于水提取物和乙醇提取物抗病毒的活性性成分需要进一步的研究。
参考文献
[1] 柳晓琳，何雅慧，金艳书，等.苦碟子抗呼吸道病毒的实验研究[J].中国现代中药，2006，8(1):1113.
