一周学习计划范例6篇

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一周学习计划范文1

【关键词】 高血压 趋化因子 单核细胞 基因表达 逆转录聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定

原发性高血压（essential hypertension，EH）是常见的心血管疾病，也是导致心脑血管疾病的重要危险因素。近年来，越来越多的学者认为EH是一种与遗传、环境、代谢极为相关的复杂疾病[1～3]，当EH与其他相关危险因素并存时，单纯的血压控制只能使不到60%的患者获益，而危险因素的干预才能获得更大的益处。因此，积极探讨EH的发病机制及其影响因素，对更有效的控制EH，减轻其危害已成为医务工作者的共识。有学者研究发现，炎症可能在EH的发病机制中起着重要的作用[4]，2007年2月～12月实验检测EH患者外周血单核细胞趋化因子1（monocyte chemotactic protein1，MCP1）蛋白水平及单个核细胞MCP1 mRNA的表达，探讨外周血MCP1的变化与EH的关系。

1 对象与方法

1.1 对象及分组

按《中国高血压防治指南（2005年修订版）》[5]制定的标准，选取心血管科住院和门诊新诊断或未经正规降压治疗的EH患者62例，同时选取血压正常的30例健康体检者作为对照组。排除继发性高血压、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血症、感染、严重肝肾疾病、自身免疫性疾病及肿瘤性疾病，排除近期有手术或外伤史等影响MCP1的因素。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂和仪器 人淋巴细胞分离液（上海捷瑞），Trizol试剂（美国Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞兴），逆转录试剂盒（Promega），PCR试剂盒（Promega），100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker（天根生化），人MCP1 ELISA 试剂盒（美国R＆D公司）；ULT13863三洋-80 ℃低温冰箱(日本)，5745台式冷冻离心机(德国)，Eppendorff centrifuge 5810R 高速离心机，Amersham核酸蛋白分析仪，PCR仪（PE geneAmp PCR System 2400）（Perkin Elmer），DNA成像分析仪（Gel Doc EQ，BioRad），酶标仪（ELx800，BioTek公司）。MCP1引物设计由上海生工合成，上游引物5' AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG 3'，下游引物5' – AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG 3'；βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT 3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT 3'。

1.2.2 标本采集 受检者空腹12 h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中静脉血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室温静置2 h，自然凝固后予离心10 min，1 000 r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待测；另4 ml置于EDTA抗凝试管中摇匀后即刻置40 ℃冰箱冷存，于6 h内提取RNA用。

1.2.3 外周血MCP1蛋白含量测定 用保存待测的血清，依照MCP1 ELISA试剂盒说明书的步骤操作。用酶标仪检测450 nm波长下各孔吸光度，根据吸光度值计算标本中MCP1的浓度。

1.2.4 人血单个核细胞中RNA提取和逆转录聚合酶链反应（RTPCR） 淋巴细胞分离液提取外周血中单个核细胞后，按照说明书的步骤提取总RNA；按逆转录试剂盒说明书步骤合成cDNA，并用PCR技术扩增目的片段，PCR产物用1.5% 琼脂糖凝胶跑电泳，溴乙锭显色。测定各条带灰度值，以βactin为内参，用MCP1与βactin的灰度比值定量MCP1。

1.2.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行数据分析处理，数据以（x±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 一般资料

EH组及对照组的一般资料见表1。两组研究对象的年龄、性别、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、空腹血糖和外周血白细胞比较，无统计学差异。表1 EH组及对照组的基本资料注：TC示总胆固醇，TG示甘油三酯，FBG示空腹血糖，LDL示低密度脂蛋白，HDL示高密度脂蛋白，WBC示白细胞。

2.2 MCP1水平及MCP1 mRNA表达

见表2。与对照组比较，EH组外周血MCP1蛋白水平及单个核细胞MCP1mRNA表达均显著增高（P＜0.01)。表2 外周血MCP1水平及单个核细胞MCP1mRNA表达注：（1）与对照组比较， P＜0.01。

3 讨论

EH是最常见的心血管疾病之一。传统观念认为，EH是多种因素引起的血液流变学异常，表现为心搏出量和（或）外周阻力增加，治疗目标也仅限于用药物控制血压。随着对EH发病机制的深入研究，发现在EH发生发展的不同阶段，血管炎症是一个主要的、共同的病理特征，提示EH与炎症关系密切[6]。

MCP1为碱性蛋白，属于趋化因子超家族，可由炎症介质刺激的单核-巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、内皮细胞及平滑肌细胞分泌。MCP1在体内及体外均有强大的诱导单核-巨噬细胞聚集、附壁、游走的功能，是炎症的始动因子及标志[7]。研究发现，原发性高血压患者外周血MCP1蛋白含量升高，认为EH可能是一种慢性炎症过程[8]。本研究显示，EH患者外周血MCP1蛋白水平显著升高，提示MCP1可能参与了EH的病理生理过程。因此，积极探索控制炎症的方法可能是高血压乃至冠心病具有前景的治疗策略之一。

EH患者外周血MCP1升高的机制尚不十分明了，可能来源于与内皮细胞、血管平滑肌细胞等上调表达MCP1 mRNA有关，但外周血MCP1蛋白的升高是否与外周血单个核细胞中MCP1 mRNA表达上调有关尚未见报道。本研究显示，与对照组比较，单纯EH组外周血单个核细胞中MCP1 mRNA表达显著增高，提示外周血单个核细胞的MCP1 mRNA表达上调可能是导致EH患者外周血MCP1蛋白含量升高的一个因素，但是否与内皮细胞等其它因素有关，需进一步实验证实。由于MCP1蛋白可能进一步激活CCR2趋化因子受体，介导趋化活性，使单核细胞和巨噬细胞发生移行，黏附于血管内皮细胞，进一步损伤血管内皮[9]，使其产生更多的炎症因子，加速血管重构，使血管壁顺应性下降，从而使血压升高。因此，针对炎症的治疗，或许对控制血压有一定意义。

参考文献

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一周学习计划范文2

【摘要】 目的对亚洲带绦虫膜联蛋白B2(Annexins B2)进行克隆表达及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Annexins B2基因，并将该基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中，在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达，表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定，重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化，纯化的重组蛋白用Western blotting进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及重组质粒DNA测序均显示重组体构建成功，并得到高纯度的蛋白，且该重组蛋白可被亚洲带绦虫、猪带绦虫及牛带绦虫患者的血清识别。结论亚洲带绦虫成虫Annexins B2基因可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。

【关键词】 亚洲带绦虫;膜联蛋白B2;基因克隆;免疫反应性

ABSTRACT: ObjectiveTo clone and express the gene named as Annexins B2 of Taenia saginata asitica so as to analyze the immunogenicity of its recombinant protein.MethodsBy online analysis of the gene at bioinfomatics websites to identify the gene from the Taenia saginata asiatica full-length cDNA plasmid library， the gene was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then transformed to E.coli BL21 with IPTG induction. Thereafter， the gene product was analyzed by SDS-PAGE and purified by Ni-NTA affinity chromatography. In addition， the immunoreactivity of the purified recombinant proteins was analyzed by Western blotting.ResultsAs demonstrated by PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing indicated that the recombinant plasmid was successfully constructed and highly expressed. The recombinant protein tested with Western blotting analysis could react with Taenia asiatica and Taeniarhynchus saginatus infected patient serum.ConclusionThe Annexins B2 of Taenia saginata asitica has been cloned and expressed in the prokaryotic expression system and the purified protein has been confirmed with immunogenicity.

KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; Annexins B2; gene cloning; immunoreactivity

鉴于亚洲带绦虫与猪带绦虫及牛带绦虫在起源、分类学地位存在的差异[1-2]，本课题组率先构建亚洲带绦虫成虫全长cDNA质粒文库，并对该虫进行功能基因组的研究工作[3]。本文利用生物信息学工具从文库中筛选到了一个膜联蛋白B2(Annexins B2)的同源基因，构建了原核表达载体，并对其原核表达产物进行免疫学方面的初步研究。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1血清、载体与菌株3种人体带绦虫患者血清取自粪检阳性的带绦虫患者。原核表达质粒pET-28a(+)及大肠埃希菌BL-21/DE3由中山大学热带病防治教育部重点实验室惠赠。

1.1.2主要试剂和工具酶Ex Taq酶(含dNTP)，BamHⅠ，XhoⅠ，T4 DNA连接酶 (大连宝生物工程公司);异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)(美国Promega公司);质粒纯化试剂盒(广州东盛科技公司);辣根过氧化物酶标记的山羊抗猪IgG二抗、兔抗人二抗、3，3二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);氯化钙、氯化钠等为国产分析纯试剂。

1.2方法

1.2.1Annexins B2基因的识别及扩增将获得的亚洲带绦虫Annexins B2基因进行BLASTX分析。并根据已获得的该基因全长编码序列的开放阅读框，利用软件设计引物(引物由上海联合基因公司合成)，分别带上BamHⅠ和XhoⅠ的酶切位点进行PCR反应。

1.2.2重组原核表达质粒的构建及鉴定PCR产物和pET-28a(+)载体分别用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，回收、连接后转入大肠埃希菌BL-21/DE3感受态细胞，对阳性克隆依次进行质粒的提取、双酶切和PCR鉴定，并进行重组质粒DNA测序鉴定(测序由英俊科技股份有限公司完成)。

1.2.3重组蛋白的表达及纯化按照常规方法进行蛋白诱导表达，考马斯亮兰蛋白染色液染色观察蛋白表达情况。确定蛋白表达后，进行大量的诱导表达，并判断重组蛋白的可溶性，再将样品加入预先处理好的Ni-IDA His.Bind树脂亲和层析纯化柱中，最后再用PBS 24h透析以去掉过柱时留下的咪唑。

1.2.4Western blotting分析重组蛋白的免疫反应性用3种人体带绦虫患者及正常人血清与辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗人IgG进行Western blotting鉴定。

2结果

2.1Annexins B2基因的识别和序列分析该基因全长922bp，编码区为224～686bp。其最大ORF为其完整编码区。

2.2原核重组质粒的鉴定将重组质粒进行PCR和双酶切鉴定，产物行0.8g/L琼脂糖凝胶电泳。结果显示在500bp左右有一清晰条带，与目的基因大小基本相符。此外，重组质粒的测序报告表明插入序列与理论序列一致，证明重组质粒构建成功(图1)。

2.2蛋白表达及纯化结果将构建好的重组质粒转化到E.coli BL/DE3中，超声裂解后SDS-PAGE电泳分析结果显示在大约25ku处出现高效表达条带(图2)，与目的蛋白基本相符。测得纯化产物的蛋白浓度为0.526g/L。

2.3Western blotting鉴定纯化蛋白的免疫反应性

用感染亚洲带绦虫、猪带绦虫、感染牛带绦虫的患者血清以及亚洲带绦虫感染猪的血清与纯化蛋白反应的结果均显示出较清晰的条带，而阴性对照血清在相应位置未识别出该蛋白条带(图3)，表明该表达产物具有良好的免疫反应性。图1重组质粒的PCR和双酶切鉴定

Fig.1 The identification of the pET-28a(+)-Ta Annexins B2 by PCR amplification and digestion with restriction enzymesM1：DNA标准(DL2000);1：PCR产物;2：pET-28a(+)质粒双酶切;3：pET-28a(+)-Annexins B2重组质粒双酶切;M2：DNA标准(DL 15000)。图2100g/L SDS-PAGE分析pET-28a(+)-Ta Annexins B2在大肠埃希菌中的表达产物及其纯化产物Fig.2 100g/L SDS-PAGE analysis of the prokaryotic expression product and purified product

M：蛋白Marker;1：pET-28a(+)IPTG未诱导;2：pET-28a(+)IPTG诱导;3：pET-28a(+)-Annexins B2 IPTG未诱导;4：pET-28a(+)-Annexins B2 IPTG诱导;5：pET-28a(+)-Annexins B2上清;6：pET-28a(+)-Annexins B2沉淀;7：pET-28a(+)-Annexins B2纯化蛋白。

3讨论

带绦虫病的流行在我国西部一直是一个严重的公共卫生问题。每年由带绦虫病造成的健康和畜牧业经济损失上百亿，严重影响西部欠发达地区的社会发展。目前，亚洲带绦虫病的防治研究的重点集中在诊断和疫苗候选抗原、药物靶标、致病的分子机制研究。图3重组蛋白的Western blotting 鉴定Fig.3 Western blotting analysis of the recombinantsM：蛋白Marker;1：纯化蛋白与亚洲带绦虫患者血清的反应结果;2：纯化蛋白与牛带绦虫患者血清的反应结果;3：纯化蛋白与猪带患者血清的反应结果;4：纯化蛋白与亚洲带绦虫感染猪血清的反应结果;5：纯化蛋白与正常人血清的反应结果。

本实验通过生物信息学方法从已经构建好的亚洲带绦虫成虫cDNA质粒文库中筛选出了一个膜联蛋白(Annexins B2)的同源基因，并且预测出该基因位于胞浆，无跨膜区，二级结构基本上是以α螺旋为主。这些都符合膜联蛋白家族的共同特征[4]。根据膜联蛋白家族分布广泛，表达丰富且稳定的特性，可以推测其在绦虫的生理活动中可能起着重要的作用。

膜联蛋白是一个广泛存在的蛋白家族，在所有真核基因组中广泛表达。具有内部重复单位和“G-X-G-T-(38residues)-D/E”基序[5]，即Ca2+结合区域的特征，用以结合带有负电的脂质。虽然它为钙结合蛋白，但是在结构上却没有EF手，而且在和Ca2+结合后，还可以与磷脂再次结合而发挥生物学效应。例如，细胞的胞吞胞吐，离子通道的形成，调节磷脂酶A2的活性及细胞内外Ca2+浓度、抗炎症反应等。在长期的生物进化过程中，膜联蛋白家族各成员在生物学特性和生理功能方面表现出非常复杂的关系，且在研究过程中发现，annexins没有信号肽，没有跨膜结构，是一个典型的细胞内蛋白。但是，却有学者发现它可以与细胞外基质发生作用。例如，抗炎[6]、抗凝[7]、抑制肿瘤[8]等。最新的研究报道，当将其作为疫苗的候选因子时，可以消除一些寄生于哺乳动物体内的寄生虫。此外，学者们认为膜联蛋白是维持细胞膜表面结构和信号转导功能的重要蛋白。并可能具有激活纤维蛋白酶原的功能，有助于破坏宿主的结缔组织，使虫体抗原更加容易进入宿主机体，诱发免疫应答。因此，对该基因的研究有助于进一步了解它的生物学功能及开辟预防治疗寄生虫病的新途径[9-10]。

目前，Annexins B2已经在猪囊尾蚴的研究被发现并命名，但是具体的生理功能还不清楚，且在亚洲带绦虫研究领域还是空白。因此，本研究将亚洲带绦虫成虫annexins克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中，构建重组质粒，在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达，表达产物通过SDS-PAGE电泳进行鉴定。SDS-PAGE结果表明，该蛋白在全菌和沉淀中都有表达，上清中有微量的表达，说明annexins主要表达在包涵体中。因此，进一步溶解包涵体[11]，经变性处理并亲和层析纯化后，得到了大量较纯的重组蛋白。此外，还尝试性的用上清过柱纯化并用蔗糖进行蛋白浓缩，也得到部分有活性的蛋白。Western blotting就是以抗体-抗原沉淀反应为基础的，可用于不同抗原的比较和定量。其检测结果表明所获得的重组蛋白与猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫有较强的交叉反应且在绦虫中的诊断特异性不高，推测其不能作为免疫诊断抗原的合适候选分子。但是，其具有免疫活性的高效表达。由此可推测它是一个具有开发潜力的基因。总之，本项研究填补了该蛋白在亚洲带绦虫研究领域的空白，也为进一步研究该基因的生物学功能及在诊断尤其是疫苗研究方面奠定了基础。

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一周学习计划范文3

【关键词】 生长激素-胰岛素样生长因子轴； 血小板参数； 网织红细胞参数； 肝硬化

Study on Detection Significance of GH-IGF Axis，Platelet and Reticulocyte Parameters of Patients with Cirrhosis/HUANG Han-wen，ZHAO Ting-ting，LIN Yun-hui，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（10）：043-046

【Abstract】 Objective：To study detection significance of growth hormone-insulin-like growth factor（GH-IGF）axis，platelet and reticulocyte parameters of patients with cirrhosis.Method：From February 2015 to June 2016，49 patients with cirrhosis diagnosed in our hospital were selected as the observation group，49 healthy people of physical examination during the same period were selected as the control group.Then the serum GH-IGF axis indexes，platelet and reticulocyte parameters of the two groups were detected and compared，and the serum GH-IGF axis indexes，platelet and reticulocyte parameters of patients with cirrhosis with different etiology and clinical stages were compared.Result：Serum IGF-1，IGFBP-3，PLT and PCT of the observation group were all lower than those of the control group（P

【Key words】 GH-IGF axis； Platelet parameters； Reticulocyte parameters； Cirrhosis

First-author’s address：The Third People’s Hospital of Longgang District Shenzhen，Shenzhen 518115，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.10.012

肝硬化是R床高发病，关于肝硬化的各类研究十分多见，其中关于肝脏功能包括代谢方面的研究尤其多，而生长激素-胰岛素样生长因子轴作为肝脏代谢过程中的重要指标，对其研究虽可见，但结果差异较大的情况十分普遍，因此对其研究仍十分必要[1-2]。而血小板参数及网织红细胞参数作为在肝脏疾病患者中研究并不少见的指标，对其在肝硬化中的研究也十分必要。本文就生长激素-胰岛素样生长因子轴、血小板及网织红细胞参数在肝硬化患者中的检测意义进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2015年2月-2016年6月期间本院就诊的49例肝硬化患者选为观察组，并以同时间段内49例体检示健康者为对照组。对照组男29例，女20例；年龄32～70岁，平均（50.46±5.57）岁。观察组男28例，女21例；年龄31～70岁，平均（50.51±5.47）岁；病因分类：肝炎后肝硬化患者26例，酒精性肝硬化患者12例，其他肝硬化患者11例；临床分期：代偿期28例，失代偿期21例。两组研究对象的平均年龄和男女比例比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 采集两组研究对象的空腹静脉血进行检测，检测方面包括三大类，即血清生长激素-胰岛素样生长因子轴指标、血小板及网织红细胞参数，其中部分血标本进行离心，取血清部分进行生长激素-胰岛素样生长因子轴指标的检测，采用酶联免疫法对上述检测项目包括生长激素（GH）、胰岛素生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）进行检测，另将静脉血标本以血细胞分析仪进行血小板参数[血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）、血小板平均体积（MPV）及血小板分布宽度（PDW）]及网织红细胞参数[未成熟网织红细胞指数（IRF）、网织红细胞计数（RET）、网织红细胞生成指数（RPI）及强光散射网织红细胞（HLR）]的检测。然后统计比较两组研究对象的血清生长激素-胰岛素样生长因子轴指标、血小板及网织红细胞参数，并比较不同病因和临床分期肝硬化患者的检测结果。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验和方差分析；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P

2 结果

2.1 两组患者不同病因和临床分期的血清生长激素-胰岛素样生长因子轴指标比较 观察组的血清IGF-1及IGFBP-3均低于对照组（P

2.2 两组患者不同病因和临床分期的血小板参数比较 观察组的PLT及PCT均低于对照组（P

2.3 两组患者不同病因和临床分期的网织红细胞参数比较 观察组的IRF、RET、RPI及HLR均高于对照组（P

3 讨论

肝硬化在临床十分常见，在我国肝硬化主要为病毒性肝炎导致，与本类患者相关的研究也极为多见，且研究不仅仅涉及到患者的治疗及其相关方面，对于肝硬化患者发生发展过程中的较多相关指标的研究也十分多见[3-4]。有研究认为，肝硬化患者可能存在不同程度的生长激素抵抗情况，同时也有研究认为生长激素-胰岛素样生长因子轴是与肝代谢及肝细胞增生等有密切关系的指标[5-6]。而生长激素（GH）、胰岛素生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）作为其中的代表性指标，其在肝硬化患者中的变化研究尤为必要，其中的IGFBP-1及IGFBP-3是肝脏内合成的重要指标，其表达水平的波动可有效反应肝细胞功能的变化，故进一步提示我们对其在肝硬化患者中的检测必要性[7-8]。另外，血小板相关指标是在肝硬化患者中研究较多的一凝血相关指标，血小板参数中的血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）、血小板平均体积（MPV）及血小板分布宽度（PDW）作为其中代表性的指标，其在肝硬化中的细致研究仍十分缺乏，因此对其细致变化的探究价值仍较高，而有研究认为主要与肝硬化患者的肝脾功能异常导致的血小板破坏异常等情况有关[9-13]。再者，网织红细胞参数是有效反应机体造血功能状态的指标，而当肝脏处于相对较差的状态时，其造血因子受到影响，因此造血状态即处于异常的状态，但是对其在肝硬化患者的细致监测意义研究十分不足，因此此方面的研究也十分必要[14-15]。

本文中笔者就生长激素-胰岛素样生长因子轴、血小板及网织红细胞参数在肝硬化患者中的检测意义进行分析与研究，主要为将肝硬化患者与体检示健康的人员进行比较，比较结果显示，肝硬化患者的血清IGF-1、IGFBP-3、PLT及PCT均低于健康人员，其他血清生长激素-胰岛素样生长因子轴指标、血小板及网织红细胞参数均高于健康人员，不同病因和临床分期肝硬化患者检测结果也存在明显差异，其中肝炎后肝硬化患者的表达水平相对更差，与此类患者肝炎期肝脏状态即受到不同程度的不良影响有关，同时，失代偿期的异常程度明显大于代偿期，说明上述指标的检测不仅仅对于肝硬化的诊断有一定的临床意义，且对于肝硬化的病因分类和临床分期也有一定的指导意义[16-20]。

综上所述，笔者认为生长激素-胰岛素样生长因子轴、血小板及网织红细胞参数在肝硬化患者中的检测意义较高，上述指标对于肝硬化的病因和临床分期均有积极的临床检测价值。

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一周学习计划范文4

［摘 要］ 目的检测结肠癌患者外周血中CD3+CD8+T细胞上趋化因子受体CCR7的表达，分析CCR7的表达与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期的相关性。方法利用流式细胞仪检测44例患者外周血，以CELLQuest软件分析获取CD3+CD8+T细胞，检测CCR7的阳性表达率。比较结肠癌患者与正常人外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7的表达情况；比较患者术前、术后外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7表达阳性率变化；比较CD3+CD8+T细胞亚群上CCR7表达在术前、术后的变化。结果结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比正常人低，差异有统计学意义（P＜0.05）；术后组外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比术前组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。外周血CCR7的表达与结肠癌肿瘤的大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等具有显著相关（P＜0.05）。结论CCR7在结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上高度表达，并与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期的密切相关。CCR7的表达可能与促细胞凋亡和抗细胞凋亡蛋白质有关。

［关键词］结肠癌；趋化因子；CCR7；外周血；T细胞；流式细胞术

［中图分类号］ R735.3+5［文献标识码］ A［文章编号］ 1672-4208(2008)21-0034-02

趋化因子(chemokine)是由组织细胞或炎性细胞衍生的、具有白细胞趋化活性的肽分子，其能选择性地引导白细胞亚群的定向游走和组织内集聚。根据趋化因子的氨基酸序列，将趋化因子分为四个亚家族，即CXC、CC、C和CX3C亚家族[1]。CXC亚家族有IL-8、IP-10，CC亚家族有MCP 1~5等。已有研究表明，趋化因子与许多疾病如肺部的支气管扩张、特发性肺动脉纤维化、风湿病、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤等均有密切关系[2]。由于肿瘤组织存在浸润的免疫细胞，趋化因子与肿瘤的关系受到关注。但是由于结肠癌临床的异质性表现，迄今为止尚缺乏有效理想的肿瘤标志物，因此寻找敏感性、特应性高的结肠癌标志物，以提高结肠癌的早期诊断、疗效评价和预测预后尤为重要。本研究就是利用流式细胞仪技术检测趋化因子受体(chemokine receptor)CCR7在结肠癌患者术前、术后外周血记忆型T细胞亚群上的表达情况，并与正常人相对照，通过与肿瘤免疫逃逸有关的表面抗原以及细胞因子等的检测，为结肠癌临床标志物的筛选、结肠癌发病机制的探讨以及结肠癌的综合防治提供有价值的线索。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 FACScaliur流式细胞仪：美国BD公司。KDC-160HR低温高速离心机：科大创新中佳分公司。可调式微量移液器：德国Eppendrof公司。CELLQuest获取和分析软件：美国BD公司。鼠抗人CD8-FITC、CD3-PE-cy5、CCR7-PE单克隆抗体、溶血素、Falcon管均购自美国BD公司。0.5 M EDTA、PBS缓冲液、Tip头及其他常规试剂与耗材均为国产。1.2 标本来源及分组 44例结肠癌患者为泰安市中心医院2007年4月～2007年10月住院病人，其中男性34例，女性10例，年龄45~74岁，平均年龄57岁。常规根治手术后按照UICC 1997年结肠癌PTMN分期法进行分期。正常对照组44例选自我院健康查体者，经结肠镜取材并经病理证实无胃部疾病。其中男性32例，女性12例，年龄34~84岁，平均年龄59岁。

1.3 标本的留取及制备 术前2d清晨空腹抽取肘静脉血2 ml置EDTA抗凝无菌试管中送中心实验室做流式检测CCR7表达情况。术后7d再次抽血检测，并查看病人病理情况。将病人按编号在“临床病例登记信息表”中记录其姓名、性别、年龄、住院号、籍贯、家族史、饮食习惯、临床诊断、病理号、病理描述、临床分期、CEA、CA19-9、CA242。

1.4 研究方法及操作步骤 （1）加入标本血。收集结肠癌患者术前、术后以及正常人外周血，分离PBMC后，在Falcon管中各加入5 μl CCR7-PE、5 μlCD3-PE-Cy5和10 μlCD8-FITC标记的抗体，每管加入50 μl细胞悬液（5×105），充分混匀后，室温避光孵育15 min。同时设同型阴性对照管，只加入50 μl细胞悬液。（2）加入溶血素，室温避光8 min。（3）1000 r/min离心5 min，弃上清，再加入0.9%生理盐水4 ml混匀。（4）重复步骤（3）。（5）1000 r/min离心5 min，弃上清，加入500 μl生理盐水，上机检测。（6）流式细胞仪检测结果，以CELLQuest软件获取细胞，设立同型阴性对照，调整电压，设立淋巴细胞门，检测淋巴细胞数量和CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率。

1.5 检测及数据采集 利用流式细胞仪检测每一例患者外周血，以CELLQuest软件分析获取CD3+CD8+T细胞，检测趋化因子受体CCR7的阳性表达率。

1.6 实验结果的统计学分析 采用ANOVA方差分析，以SAS 9.0统计软件对实验结果进行统计学分析。比较结肠癌患者与正常人外周血CD3+CD8+T细胞上趋化因子受体CCR7的表达情况；比较结肠癌患者术前、术后外周血CD3+CD8+T细胞上趋化因子受体CCR7表达阳性率变化；比较CD3+CD8+T细胞亚群上CCR7在术前、术后的变化。分析结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上趋化因子受体CCR7的表达情况与结肠癌肿瘤的大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移的相关性。

2 结果与分析

我们在检测趋化因子受体CCR7在结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上的表达情况时，发现获取的大部分CD3+CD8+T细胞可以根据CD8+分子表达强度分为两个亚群：低密度群和高密度群。首先从整体上分析CCR7在结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上的表达情况，然后对每个亚群单独分析，比较术前、术后亚群的变化。

2.1 患者组与正常对照组整群检测结果 整群三组间采用ANOVA分析，F＝10.13，P＜0.0001；术前组与术后组比较，P＜0.05，有统计学意义，可以认为结肠癌患者术后组外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比术前组高；正常对照组与结肠癌患者组比较，P＜0.05，有统计学意义，可以认为正常对照组外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比患者组高。见表1。

表1 结肠癌患者组与正常对照组CCR7阳性表达率

注：(1)与(2)比较、(1)与(3)比较、(2)与(3)比较，P＜0.05。

2.2 患者组两个亚群间检测结果 （1）结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞亚群低密度组采用ANOVA分析，F＝8.15，P＜0.001；术后组与术前组比较，P＜0.05，有统计学意义，可以认为术后低密度群上CCR7阳性表达率增高。（2）结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞亚群高密度组采用ANOVA分析，F＝7.76，P＜0.001；术后组与术前组比较，P＜0.05，有统计学意义，可以认为术后高密度群上CCR7阳性表达率增高。

2.3 CCR7的表达与结肠癌的相关性分析 分析44例结肠癌患者组织标本病理结果，发现外周血CCR7的表达与结肠癌肿瘤的大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等具有显著相关（P＜0.05），见表2。

表2 CCR7表达与结肠癌患者临床资料的关系

3 讨论

趋化因子是一类由不同类型细胞分泌的低分子量（8～12 kd)的细胞因子，其生物学功能主要是使细胞发生趋化运动，在淋巴细胞的定向迁移、造血细胞和免疫细胞的发育和分化、炎症的发生、血管的生成及肿瘤的发生中分别起着不同的作用[3]。趋化因子功能的发挥需要由趋化因子受体来介导。趋化因子受体是一类表达于不同类型细胞上的G蛋白耦联受体，含有7个跨膜区，通常表达于免疫细胞、内皮细胞的细胞膜上。趋化因子与其受体的相互作用控制着各种免疫细胞在循环系统和组织器官间定向迁移[4]。趋化因子受体和其配体结合后，不仅可以参与细胞的生长、发育、分化、凋亡和分布等多种生理功能，而且在多种如炎症反应、损伤的修复、肿瘤的生长和恶化等病理过程中发挥重要作用[5]。CCR7是一类新发现的趋化因子受体，目前发现CCR7与其配体CCL19和CCL21结合后，在肿瘤生长和转移中起着令人瞩目的作用。我们就从CD3+CD8+T细胞着手，研究CCR7在CD3+CD8+T细胞上的表达及其与抗肿瘤效应、细胞调亡在恶性肿瘤转移方面的作用。

本实验利用流式细胞仪检测44例患者外周血，以CELLQuest软件分析获取CD3+CD8+T细胞，检测趋化因子受体CCR7的阳性表达率，并与正常人对照比较，分析CCR7的表达与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期的相关性，探讨CCR7在结肠癌的发生、发展及浸润转移过程中的作用。对实验结果进行综合分析，初步得出以下结论：（1）CCR7在结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上高度表达，并与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期密切相关。表现为CCR7的含量表达随着结肠癌细胞的分化程度的上升而下降，随着结肠癌临床分期的进展而上升。（2）CCR7的表达可能与促细胞凋亡和抗细胞凋亡蛋白质有关，CCR7影响包括淋巴细胞在内的各种细胞的生存，因此抗细胞凋亡信号的传送是一个重要机制。

参 考 文 献

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一周学习计划范文5

我觉得一周的学习计划，首先要预测未来可能发生的变化，进而制定出可实施的学习计划。第一，制定此计划的优点：内在因素：1、我认为首先我是一个比较独立的人，能够自主学习。2、马上就要考试了，所以有了外在的动力，能够让我产生紧张的情绪，能够投入进去。外在因素：1、天气变凉了，应该会减少上网的机会。2、父母的期盼，希望养成好好学习的习惯。3、老师也希望自己的学生有良好的学习习惯。4、要考英语四级。

第二，缺点：1、自己的自制力不强。2、外在因素的诱惑使自己不能投入学习中。3、不够坚持，缺乏恒心。

我觉得这应该会是一个可实施的学习计划，因为优点还是大于缺点的，且缺点可以克服。

2、确定目标

每天都要做到看课外书（课余时间）；每周老师布置的作业按时完成（周末）；对于要考试的科目要看书复习（晚自习时间）；写英语四级试卷（每周2套抽早自习或下午）；每天早上记二十个单词。一周要去两三次图书馆；上课要认真听课并做好记录、积极回答问题；早上努力学习英语。

3、确定前提条件

不可控制的：上课听课可能会走神，导致记录不全面；可能会抑制不住上网的情况；周末可能朋友会找自己逛街而不能推脱，导致周末不能实施计划。

部分可控制的：比如每天课余时间的看书能不能坚持；一周去图书馆的次数；除开学习娱乐时间。

可控制的：早上起床早自习与晚上的晚自习；按时完成老师布置的作业的时间；写英语试卷。

这是预期环境，即假设条件。

4、拟定可供选择的可行方案

对于一周的学习计划，我觉得我能够选择的方案一个。所以，只拟定的可选择的方案一个。

首先，我想说说它的优点：第一，分配比较合理，不具夸张性。第二，简单明了。第三，如果有一定的实施性，且实施了效果会很好。

缺点：第一，与预定的目标有一定差距。第二，有些可能不能实现，特别是周末的方案。第三，对于课余时间休息太少（可能有时候会想要上网）。

5、评价可供选择的方案

1. 这个方案中存在一定的隐患，但是是可以避免的，所以个人觉得问题不大。

2. 个人觉得实施此方案会给丰富自己的业余生活；以及会改善自己经常上网的状态；还可以是学习能力提升；改善慵懒也是很重要的一方面。

3. 对于每天要完成的学习量，我觉得还是较为合理的，也是可行的。

4. 当然这一计划不仅会带来学习上的进步，取得一定的效果，也会使自己的业余生活不那么舒坦，使自己和朋友的沟通变少，生活中少了一份除了 学习以外的乐趣。更重要的是如果没有实施好就会使自己的时间浪费。

6、选择方案

我所选定的方案就就一个。所以对于其它方案就没有制定。只要从它的患处改一下就会成为可实施的方案。

7、制定派生计划

制定一周的学习计划，需要时间计划(合理安排时间)；活动计划（活动的开展的计划制定）作为其支撑。这些的合理配置与利用可以大大地提高一周学习效率，是效果清晰明了。

8、编制预算

由于学习计划不需要金钱上的预算，所以我针对时间上进行预算，对于周一至周五这一上课期间我觉得可以实施并达到效果的有8成以上，其它部分应该效果也是可佳的，因为预期的环境可以自己调整与改变。

一周学习计划范文6

专升本报名时间一般是什么时候

1、成人高考专升本一年一次报名机会，报名时间为8月份。

2、自考专升本一年两次报名机会，报名时间为1月份和4月份。

3、网络教育专升本和国家开放大学一年两次报名机会，报名时间为3月份和9月份。

专升本的报名条件

1、统招专升本：全日制在校应届专科毕业生;专科学习期间无记过及以上纪律处分;或专科学习期间受到记过或留校察看纪律处分，但报考前已解除处分的;专科阶段必须获得专科毕业证书;遵守《中华人民共和国宪法》及其他法律法规。

2、自考专升本：自考专升本报考没有年龄，民族，种族等的条件限制;只要有专科学历就能报考;跨专业报考自考专升本需要根据专业的不同加考相应的课程。

3、成考专升本：遵守中华人民共和国宪法和法律;专科起点升本科招收在职、从业人员。

4、网络教育专升本：大专起点的网络教育考生在报考本科时则需要具备国民教育系列的专科或以上学历。

升本学习是一个过程，这个过程说长不长，说短也不短。要想升本成功制定计划，是十分必要的。说到计划，首先要有一个可执行的计划，需要把学习任务具体分配到每一月、每一周、每一天去。计划的时间跨度不宜过长。以一周一计划(或半月一计划)为宜。因为若跨度太长，则难以做到“具体”。

把学习计划精确到每一天，这样才能充分利用好每一天。具体到某一天，可以在每周的星期一安排好一周的学习内容，或者是在每一天晚上做好第二天的学习计划。并且，要在每一天睡前检查一下是否完成当日的学习任务，时刻督促自己按时完成计划。

每天的时间都是有限的，同学们应该按照一定的规律安排每天的学习，使时间得到充分的利用。在安排时间复习时也要注意结合自己的实际。如果你的兴奋点在白天的话，就可以多安排一些白天时间来学习，晚上多安排一点时间来休息。

如果是“夜猫子”，就可以晚上多安排一些学习时间，中午安排一些时间来休息。

感觉学习没有进展。这可能是你的学习方法不好，你不妨改变一下学习方法，调整一下学习状态。明显感到学习状态不好时。先别着急学习，先通过体育运动、严格作息、放松等方法提高学习状态。