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细胞器范文1
关键词： 高中生物教学 “细胞质和细胞器” 评优课 反思
近期我有幸参加了一次我区高中生物优质课的评比活动，课题是苏教版必修一《分子与细胞》模块中第三章第二节《细胞质与细胞器》的内容。这次评优课我感觉参赛教师在教学理念上有很大的转变。从教师的角度上，注重角色的转变，利用自己的智慧组织教学，努力实现“教师是学生学习的促进者、合作者、研究者”。对待学生，注重自主、合作、探究等多种学习方式的引导，使学生能够主动地获取科学知识，体验科学过程与科学方法，理解科学本质，实现三维目标。当然在执教过程中，也凸显一些问题，例如有些课堂教学仅是形式的改变，实质上变化不大。通过对这次评优课优点与不足的反思，一是拓宽自己的教学思路，二是希望与同行交流在新课程理念下，如何利用多样化教学形式，提高课堂教学的有效性，以及在组织教学时应该怎样避免课堂教学落实的形式化。
在抽取“细胞质和细胞器”这一课题时，教师大多感觉教学内容多，在教学任务的完成上时间较紧。如果利用传统的讲授法，对每部分内容逐一讲解，学生就会掌握各细胞器结构与功能。但用这种知识点直接呈现的方式，在一节课是无法完成教学任务的。更主要的是学生被动接受知识，没有体现主体地位。在实际教学中，参赛教师利用多样形式，提高了课堂的有效性。
1.实现课堂教学设计多样化，提高课堂教学的有效性。
各个细胞器的结构与功能是这节课的重点。在处理这部分内容时，各位教师采用了不同的方法。有的借助多媒体教学直观的特点，重点展示线粒体、叶绿体的亚显微结构。清晰的结构，讲到外膜、内膜、基质结构时闪动变换的色彩，激发了学生的学习兴趣，创设出一种“图文并茂”的教学情境，使学生在一种轻松愉快的环境下感受知识，形成学习动力；有的教师则采取以小组为单位合作学习的方式。具体的做法是把课前准备的细胞器模型分发给每一小组，对照模型，小组内合作探究教师提出的问题：是什么细胞器？形态结构特点是什么？功能是什么？在动植物细胞内的分布使怎样的？有无膜结构？在小组内自主学习的基础上，每一组选一名代表到讲台前给全班同学讲解。有不完整的地方组内成员可补充、完善，各小组间也可互相补充。在合作交流后教师再精讲点拨。这种模式有利于学生与学生间的知识交流、情感交流。在学生讲解与纠错的过程中，完善知识，在对话间增强了学生间的合作交流，培养了团队意识；有的教师把各个细胞器做成许多图片，从不同的角度分类粘贴。例如双层膜、单层膜、没有膜的细胞器分别有哪些？动物细胞内有哪些细胞器？植物细胞内有哪些细胞器？含有色素的细胞器有哪些？与能量代谢有关的细胞器有哪些？运用这种归纳的教学方法有利于学生对所学知识的比较总结，在剪贴过程中，思考总结深化了知识；更有的教师采用了情景剧的形式组织教学。以著名的小品《五官争功》为蓝本，演绎了细胞器的争功。诙谐的表演，幽默的语言，课堂为他们提供了一个思维碰撞的舞台，使学生真正成为了学习舞台上的主人。学生在愉悦的气氛中掌握了知识，教师也实现了自己的教学目标。
2.促进学生学习方式的多样化，提高课堂教学的有效性。
新课程改革的重要内容之一，是学生学习方式的变革。以问题串的形式引导学生自主学习；以小组为单位合作学习；创设问题情境的探究性学习等，在这次评优课上都有所体验。多样化的学习方式，一改以往学生被动接受的学习地位，真正成为学习的主体，能积极主动参与到学习任务中来。
3.注重习题形式的多样化，提高课堂教学的有效性。
在巩固知识这一环节中，参赛教师精选习题，采用多种形式增强练习效果。除了常见的选择题、填空题外，有的教师应用了判断题。以小组为单位，进行抢答。学生的热情被充分地调动起来，更重要的是把一些易混淆、易出错和一些学生搞不清楚的知识点以这种形式展示出来，这样学生就有豁然开朗的感觉。例：（1）植物的所有细胞都有叶绿体；（2）线粒体是生物有氧呼吸的必要条件；（3）叶绿体基质和线粒体基质相同等说法的判断。还有的教师把细胞器的结构图与功能以连线的方式考查学生。这样不仅使学生掌握每个细胞器的结构与其对应的功能，在连线中也对相应的细胞器进行比较。例如内质网与高尔基体形态上的比较，线粒体与叶绿体功能上的比较。
在本次活动中也存在着不足，主要有以下几点：一是有些合作学习的小组组建不合理，流于形式，表现在合作小组的组建比较单一。对教师要求探讨的问题前后桌的学生以小组为单位进行讨论。没有考虑学生层次、需求、能力，男女生性别的差异。这样在讨论时分工不明确，组与组学习能力的差异较大，因此在回答问题，展示学习成果时，基本上是个别小组垄断了课堂。没有达到面向全体学生的目的。二是评价形式单一。评价是合作学习中不可缺少的一个环节，合作学习应以各集体的学习效果作为评价的依据，进行组员自评、互评，小组自评、互评，教师评价。这样有利于形成组内成员合作，组间成员竞争的格局。而有些教师在评价时主要采取教师评价，给各个小组简单的积分，没有适时点评。这样的评价基本没有达到激励的效果。
总之，在几节同题异构课中，虽然教学内容，目标统一，但不同的教师以不同的方式组织教学给予了很多启示，教无定法，对一节内容，我们可从不同的角度设计教学。但主旋律是在新课程理念下，真正提高课堂教学实效。
参考文献：
［1］周初霞.凸现学生学习主体性的生物课堂教学案例探讨.中学生物教学，2011，（6）：32-34.
细胞器范文2
基金项目：全军医学科学技术研究“十二五”发展计划重点项目（BWS12J018）；国家自然科学基金（81071529，81101467，81101406）
作者单位：510010 广州，广州总医院重症医学科 全军热区创伤救治与组织修复重点实验室
通信作者：苏磊，Email：
【摘要】目的 研究热打击对培养人骨骼肌细胞（HSKMC）通透性、细胞骨架及细胞周期影响。
访法 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响，考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响，流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变。结果 给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1 h后， 43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63，37 ℃对照组中位数为22.98。同对照组相比，随着热打击程度加强，显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维。骨骼肌细胞在热打击情况下，各组G0/G1期DNA含量在44.13～62.98之间，与正常对照组对比，当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA含量明显高于对照组，培养第18 小时恢复才同对照组基本相同。
结论 热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应，导致细胞内钙超载。可改变HSKMC骨架结构，使骨架失去正常的网状有序排列结构，间隙增大。细胞周期出现阻滞，细胞被阻滞在G0/G1期。
【关键词】热打击；骨骼肌细胞；通透性；钙超载；细胞骨架；细胞周期；考马斯亮蓝染色；流式检测
The effect of heat stress on the permeability， cytoskeleton and cell cycle of human skeletal muscle cellPan Zhiguo， Shao Yu， Wan Jun， Geng Yan， Chen Jinghe， Su Lei.ICU Department of Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command， Guangzhou 510010， China
Corresponding author：Su Lei， Email：
【Abstract】Objective To study the effect of heat stress on the permeability， cytoskeleton and cell cycle of human skeletal muscle cell （HSKMC）. Methods The HSKMC membrane permeability was detected by calcium ion inflow with flow cytometer， the cytoskeleton was stained by CBB 250， and the cell cycle was determined by flow cytometer.Results After 1 h of heat stress on human HSKMC cells under different temperature gradient， the median level of calcium ion was 91.63 in 43 ℃ heat stress group compared with 22.98 in 37 ℃control group. As temperature increased， thicker and shorter cytoskeleton and stress fiber were shown under the high power lens of microscope. The DNA expression of skeleton cells at G0/G1 stage was 44.13-62.98 in groups under heat stress. Compared with normal control group， DNA expression was much higher in heat stress group， when HSKMC was cultured under 37℃ temperature for another 18 h， it kept decreasing DNA expression to a similar level as control group.Conclusions Heat stress can cause calcium iron inflow resulting in intracellular calcium overload， and affect the cytoskeleton leading to loss of normal web ordered arrangement and increased gap in HSKMC cells， which give rise to blocking cell cycle into G0/G1 stage.
【Key words】Heat stress；Skeletal muscle cells；Permeability；Calcium overload；Cytoskeleton；Cell cycles；Coomassie brilliant blue； Coomassie brilliant blue；Flow cytometry
中暑的特征为中心体温过高伴随着系统炎症反应致多脏器功能障碍，患者中心体温可超过40 ℃，导致机体主要脏器如心、肝、肺、肾、肠、血管和骨骼肌等发生一系列损伤[1-7]。中暑并发横纹肌溶解症的发病率约为25%[8]。骨骼肌占成人体质量的40%～50%，骨骼肌细胞内外的电解质失衡、炎症因子变化对整个机体的影响十分巨大。本课题组前期实验证实热打击对骨骼肌细胞具有细胞毒效应，抑制骨骼肌细胞的增殖，并促进细胞因子IL-6和TNF-α的释放，提出重症中暑的“第二关键点”理论[9-10]。笔者在前期的研究中发现热打击是导致横纹肌溶解的重要原因[11-12]，本实验拟通过研究在热打击条件下骨骼肌细胞的钙离子内流情况、细胞骨架改变和细胞周期变化情况，观察热打击对于骨骼肌细胞的影响，进一步研究骨骼肌在重症中暑发生、发展中的作用和机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料及试剂
人骨骼肌细胞株（HSKMC）从中国科学院昆明细胞所购买。流式细胞仪购自BD公司，Fluo-3 AM钙离子荧光探针试剂盒购自invitrogen公司，Olympus荧光显微镜，细胞周期与凋亡检测试剂盒购自武汉碧云天公司。
1.2 方法
1.2.1 HSKMC细胞培养 HSKMC细胞复苏后，将细胞收入离心管中，1000 r/min离心10 min，弃上清，用高糖DMEM培养液（含20%胎牛血清，10 0000 U/L青霉素、100 mg/L链霉素）混匀细胞，转入25 mL玻璃培养瓶中，在37 ℃、5% CO2浓度及饱和湿度条件下培养，次日换液，以后根据细胞生长情况每48～72 h更换培养液一次，每周传代1～2次。
1.2.2 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响 将Fluo-3AM钙离子荧光探针溶于1 mL DMSO中，制成1 μg/μL，取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合后，给予消化，然后将悬浮液按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。打击后同一时间每瓶悬浮液按2 μL/100 μL加入Fluo-3AM钙离子荧光探针，置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱共同避光孵育1 h，予以上机检测。
1.2.3 考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响 取对数生长期细胞，消化后按5×103个/片密度铺入6孔板培养玻片，培养至单层融合后，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。应用考马斯亮蓝R250染色：①配制M-缓冲液；②倾弃培养上清，加入1 mL PBS冲洗3次；③吸去PBS，用1.5%TritonX-100摇床震荡处理8 min，3次；④吸去TritonX-100，用M-缓冲液摇床震荡洗4次，每次3 min；⑤用3%戊二醛固定10 min，给予M-缓冲液洗3次，每次3 min；⑥用0.2%考马斯亮蓝R250震荡染色40 min；⑦蒸馏水洗3次，每次孵箱烘干；⑧然后将细胞玻片置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察；⑨如染色效果好，可用二甲苯处理样品，5 min，两次，最后一次不要等样品干；⑩加一滴中性树胶，加盖玻片封片，制成永久切片。普通光学显微镜高倍镜下照片。
1.2.4 流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变 取对数生长期细胞，按1×104个/皿密度铺入60 mm×15 mm细胞培养皿，培养至单层融合，按下述方法给予刺激：①对照组（即将细胞置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱中同其余各组等时间培养）；②43 ℃热打击组（将细胞置于43 ℃细胞培养箱中培养1 h）。将43 ℃热打击组继续置于标准37 ℃、5%CO2浓度培养箱孵育，于0、6、18、24 h分别取出后消化，用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。具体操作按武汉碧云天公司细胞周期与凋亡检测试剂盒说明书进行。染色完成后在24 h内完成流式检测。用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
2 结果
2.1 热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响
流式细胞仪检测结果提示，给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1 h后，如图1所示，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63，37 ℃对照组中位数为22.98。
2.2 热打击对HSKMC细胞骨架影响
本实验中，同对照组相比，随着热打击程度加强，显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维，见图2。
2.3 热打击对HSKMC细胞细胞周期改变
同正常对照组相比，骨骼肌细胞在热打击情况下，DNA含量与细胞周期中各期百分构成比统计结果分别见图3及表1。3 讨论
胞浆Ca2+是细胞的第2信使。细胞内钙不仅作为一种重要的第2信使广泛参与细胞的运动、分泌、代谢和分化等多种细胞功能活动的调节，而且胞内钙离子浓度的变化与调控对于参与维持存在于细胞质膜或细胞器膜两侧的跨膜梯度差，以及介导细胞对外界刺激的应答反应具有重要的调节作用[13]。研究发现， 钙在细胞损伤过程中起重要作用，各种因素导致的细胞或细胞器内钙过度集聚可引起细胞结构和功能损害，线粒体和细胞内钙异常增加程度常作为细胞损伤指征之一[14]。
引起横纹肌溶解的一个重要的理论就是线粒体Ca2+超载导致线粒体功能障碍[15]。细胞内外的Ca2+水平变化是微小和迅速的，极难测定，目前定量这些变化在技术上仍存在一定困难[16]。通过测定荧光强度来反映细胞中的钙离子浓度是目前普遍采用的细胞内钙离子检测方法。本实验通过应用流式细胞仪及Fluo-3/AM检测不同温度热打击后细胞内钙离子变化。本实验结果显示，Fluo-3/AM负载的HSKMC细胞在37 ℃基础状态下就有少量钙离子内流，但随着热打击温度及时间延长，43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位值为91.63，而37 ℃对照组中位值仅为22.98，提示细胞内钙离子浓度明显增加，说明在热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应，导致细胞内钙超载，最终导致骨骼肌细胞损伤、坏死。
细胞骨架是细胞内不同蛋白质纤维的聚合物和各种调控蛋白交错连接的网络结构，它参与细胞分裂及运动、细胞内物质运输等多种功能，在维持真核细胞的形态、承受外力、胞内运输、变形运动、信号转导等方面发挥着重要的作用，而且还参与许多重要的生命活动，包括染色体分离、细胞中各类小泡和细胞器的定向转运以及白细胞迁移、游动、神经细胞轴突伸展等[17-18]。一般而言，应力纤维是支撑细胞形态的主要结构，其表达的改变往往代表细胞的变形和增殖等变化[19]。本实验通过应用考马斯亮蓝R250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响，随着热打击时间及程度加强，同对照组相比，显微镜高倍镜下可见HSKMC细胞骨架逐渐出现变粗、变短，出现明显的应力纤维。提示热打击可改变HSKMC骨架结构，增加HSKMC通透性，同时使骨架失去正常的网状有序排列结构，引起细胞收缩，使HSKMC间隙增大，最终会导致HSKMC结构和功能出现改变。
多细胞有机体的发生与发育有赖于细胞增殖、分化和死亡的精密结合， 即细胞周期的正常运行。本研究通过流式细胞仪检测热打击后骨骼肌细胞细胞周期分布，发现骨骼肌细胞在热打击情况下，各组G0/G1期DNA相对含量在44.13～62.98之间，与正常对照组对比，当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA相对含量明显高于对照组，培养第18小时才恢复同对照组基本相同，说明热打击情况下，细胞周期出现阻滞，细胞被阻滞在G0/G1期，细胞内部活动减缓，处于“休眠”状态，不能进一步发展到S期和G2/M期，从而不能完成整个细胞的分裂过程，大约18 h左右才恢复至正常状态。
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细胞器范文3
肥大细胞（mast cell,MC）是多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞，广泛分布于机体各个器官，尤其是皮肤真皮、消化管管壁、呼吸道管壁等全身各处的结缔组织中。来源于骨髓的肥大细胞，以前体的形式离开骨髓，随血流迁移至结缔组织，并在那里增殖分化为形态上特异的成熟肥大细胞。MC最为主要的生物学特征之一就是它的异质性。上世纪初, 有些人观察到大鼠不同部位的MC形态存在一定的差异性［1］。起源于骨髓干细胞, 但分化成熟过程及其生理功能却不尽相同。前体MC离开造血器官, 进入胸腺后就可诱导分化成黏膜肥大细胞, 而进入腹腔内就分化成结缔组织肥大细胞。Fujita等［2］报道, 改变各亚型的相应生长环境, 它们可以发生表型的互换。因此，分选并鉴定出各发育时期肥大细胞，对肥大细胞的发育和功能系统性研究具有重要的意义。本文对肥大细胞发育各时期的分离鉴定方法进行综述。
（一） 小鼠胚胎血始祖肥大细胞鉴定
胚胎血Thy-llowc-Kitlhigh 细胞在形态发生学上被证实为早期的始祖肥大细胞 ［3］。它含有胞浆颗粒，表达RNAS编码的肥大细胞相关蛋白酶，缺乏高亲和力的免疫球蛋白IgE受体的表达。Thy-llowc-Kitlhigh细胞在体外能产生功能活性，当转移到腹膜内能再生腹膜肥大细胞。这种肥大细胞前体在形态和功能上都有别于造血干细胞。为了评价造血潜能，在体外培养了胚胎血Thy-l-c-Kit+ 和胚胎血Thy-llowc-Kitlhigh细胞［4］。胚胎血Thy-l-c-Kit+ 细胞在仅有IL-3时就能产生集落群，在SCF作用下能产生放大效应。而胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞在IL-3或SCF单独作用下并不产生集落群，而需二者同时存在。大量实验证明胚胎血Thy-l-c-Kit+细胞比胚胎血Thy-llowc-Kithigh 细胞更能产生多细胞系发育。分离胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞，通过电镜观察［5-9］，刚分离的胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞具有未成熟肥大细胞的典型特征，细胞核，胞浆，高尔基体，内质网等超微结构不同于嗜碱性粒细胞［6 、8、9］。在 IL-3 和SCF 作用下培养, 胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞成为少核浆比例，较多甲苯胺蓝染色阳性的颗粒的未成熟肥大细胞。培养了13天后胚胎血Thy-llowc-Kithigh 细胞就具有更丰富的胞浆和更多的胞质颗粒。肥大细胞的常见特征是表面特异性蛋白酶［10］，故利用半定量RT-PCR，特异蛋白酶(MCCPA,MMCP-2, and MMCP-4) RNA的表达来分析两种胚胎血肥大细胞。胚胎血Thy-llowc-Kithigh 细胞表达这三种蛋白酶，而胚胎血Thy-l-c-Kit+细胞要在上述细胞因子培养后才被表达。成熟的肥大细胞高表达IgE 受体(FcεRI) ,分析胚胎血Thy-l-c-Kit+和Thy-llowc-Kithigh 细胞编码FcεRIα 链RNA的表达， FcεRIα RNA 在体外两种胚胎血细胞均不表达，而在培养后均表达。在胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞后代的表达量是10-100倍，FcεRIα RNA的表达等同于其结合细胞表面IgE的能力。为了评价体内发育潜能，转移胚胎血Thy-llowc-Kithigh细胞到c-Kit、肥大细胞缺陷的W/WV 小鼠［11、12］。 腹膜内转移5 x 10-3细胞, W/WV 小鼠腹膜腔CTMT重建到野生型小鼠水平，且胞浆颗粒染色为典型的CTMC。
（二） 小鼠骨髓未分化肥大细胞鉴定
以前所使用免疫学方法鉴定定向始祖肥大细胞，但并不是使用肥大细胞特异性的抗体，故也可以识别其他细胞，得到的是混合有多项潜能分化的细胞［13-15］。人类造血干细胞亚群, CD34+, c-kit+,和 CD13+, 经流式技术从骨髓中分选出来.这种方法获得的细胞群经细胞培养最终产生的不仅是肥大细胞，还有单核细胞。而通过两种单克隆抗体mAb-AA4和mAb-BGD6连续免疫磁性分离成年小鼠骨髓未分化肥大细胞［16］(AA4-/BGD6+)不包含这些杂细胞。mAb-AA4］识别小鼠肥大细胞表面特有的神经苷脂GD1b的两种衍生物，同时 mAb-BGD6］结合到与FcεRI 不相关位点的RBL-2H3肥大细胞表面。在骨髓肥大细胞成熟的各个阶段 mAb-AA4和 mAb-BGD6 均结合到颗粒肥大细胞。但mAb-BGD6还结合并不被mAb-AA4识别的未成熟肥大细胞。就是这两种单克隆抗体结合肥大细胞形式的差异被用来分离成年小鼠骨髓未分化的肥大细胞(AA4-/BGD6+)。AA4-/BGD6+细胞占骨髓细胞的0.02%、形态特征是细胞核大，胞浆少，细胞器少，无胞质颗粒。刚分离的AA4-/BGD6+ 肥大细胞含有FcεRI α和β 两个亚单位的mRNA。但这种受体并没有在此时期表达在肥大细胞表面，而是在白细胞介素-3（IL-3）和干细胞生长因子（SCF)培养下，分化为表达CD13、c-kit、肥大细胞特异神经节苷脂和FcεRI，具有异染性颗粒的成熟肥大细胞，并能结合免疫球蛋白E(IgE)。聚合酶链反应（PCR）显示骨髓未分化细胞含有肥大细胞特异性蛋白酶和羧肽酶α和β两个亚单位。这些无疑证明了AA4-/BGD6+是肥大细胞的始祖细胞。脾脏是c-Kit、肥大细胞缺陷］的W/W" 小鼠［11、12］成熟肥大细胞出现的第一个部位［17、18］，AA4-/BGD6+ 肥大细胞能在受致死性辐射小鼠脾脏内重建，进一步证明了这些细胞代表了肥大细胞祖。
（三）组织肥大细胞分离鉴定
肥大细胞在组织中是其分化成熟的最后阶段，表达一整套特异蛋白酶［10］，发挥各种功能活动。酶消化联合密度梯度离心法已被用来分离人类肺脏、皮肤肥大细胞。肥大细胞的活性经台盼兰染色和血球计数板计数，纯度经细胞离心涂片和甲苯胺蓝染色证实，此方法获得的肥大细胞活性和纯度（约10-30%）均下降。温和酶消化联合FcεRI阳性选择技术大大改善了此状况，成功地从乳腺组织和人类前额皮肤以及肺脏中分离出肥大细胞［19、20］。获得的肥大细胞数量和纯度足以用来研究肥大细胞受体诱导的介质释放，受体依赖的趋向性反应及增殖等活动。但通过定量PCR和微阵列分析遗传特征需要更纯的（>99%）肥大细胞，而流式细胞分选术(FACS)和免疫磁珠分选很好的解决了这一难题。FACS利用肥大细胞表面标志FcεRI或KIT ，抗体anti-FcεRI-APC (或其同型物对照;小鼠 IgG-APC)或 抗体anti-CD117-PE (或同型物对照;小鼠 IgG1-PE)经标准分选程序分选出FcεRI+/CD117+细胞 ;免疫磁珠分选利用抗体识别FcεRI.分选富集组织中肥大细胞［29］。
综上所述，MC是一种具有高度异质性的细胞群, 其生物学作用也多种多样。MC的异质性与其免疫功能又有怎样的联系, 以及MC异质性的机制、原因等问题尚不清楚。因此，对于肥大细胞各时期分离鉴定，将有助于鉴定肥大细胞祖的候选基因，进一步分析其功能;更加明确肥大细胞和其他血细胞（包括嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞）的关系，更加了解肥大细胞发育分化，迁徙成熟的轨迹，为研究肥大细胞在病理生理情况下的功能打下基础。
参考文献
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细胞器范文4
关键词：再狭窄；中药；过氧化氢；血管内皮细胞凋亡
中图分类号：R285.5
文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2008)03-0549-02
The Effect of Traditional Chinese Medicine on the Injured Human Umbiblical
Vein Endothelial Cell Line Induced by Hydrogen Peroxide
CHANG Yan-yan，LU Xiao-dong，WANG Le-ting，ZHAO Li-juan
(Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)
Abstract：Objective：Approach on the protection and possible mechanism of traditional Chinese medicine on the injured human umbiblical vein endothelial cell line (ECV-304) induced by hydrogen peroxide. Methods：Electron microscope and flow cytometry etc. are used to observe the injured pattern of hydrogen peroxide and the effect of traditional Chinese medicine on the ECV-304 cultured in vitro.Results：Hydrogen peroxide group comparing with the control group，apoptosis obviously increase，significant difference (P
Keywords：restenosis；traditional Chinese medicine；hydrogen dioxide；vascular endothelial apoptosis
血管内皮细胞(VEC)在PCI术中的损伤，是造成在组织缺氧缺血，导致内皮细胞的结构功能等病生理变化的主要原因之一。因此，探讨缺氧环境下内皮细胞功能的变化，对预防“再狭窄”具有重要的意义。笔者用不同浓度的过氧化氢(H2O2)作用于体外培的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)中，并利用中药干预，观察VEC的损伤方式及中药调控凋亡的可能机制。
1材料与方法
1.1 材料 人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)购于武汉细胞保藏中心。DMEM和10%胎牛血清(美国Gibco公司)过氧化氢终浓度200mmol/L(本实验室提供)中药复脉浓缩剂(自备)Annexin-V细胞凋亡试剂盒，(北京宝赛生物技术有限公司产品)mini Galaxy-A低氧培养箱，(英国公司出品)；流式细胞仪FACS Cablibur，生产商BD(美国)。
1.2 人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的培养细胞用PBS冲洗1～2遍后，离心后弃上清液，加入0.25%胰蛋白酶1.5mL，充分吹打使之混匀消化，约3～5min，终止消化，加入5mL含有10%胎牛血清的培养液，充分吹打混匀，镜下细胞计数，置孵箱(37℃，5% CO2 )培养。待细胞达对数增长期，实验共分3组：过氧化氢组(以过氧化氢终浓度200mmol/L加入培养液中)、中药对照组(加入等量浓度过氧化氢+等量的复脉浓缩剂)、正常对照组(加入等量的注射用水)分别置于常氧24、48h，低氧24、48h观察细胞变化。
2结 果
2.1透视电镜下观察 常氧组 ECV304细胞膜及核轮廓清晰，细胞卵圆型，胞质内细胞浆丰富，胞质内，MI、HER、GO、Ri等大量电子密度高度分泌颗粒，外有膜包绕，核为圆形，可见核仁；低氧 24～48h组 ECV304细胞体积显著减小。部分细胞肿胀变大，坏死，裂解；过氧化氢组部分细胞核电子密度增高显著固缩，染色质呈大的团块状凝集，边缘化，并沿核膜浓聚成多形性高密度颗粒区。部分细胞胞质内细胞器崩解，释放凋亡小体。线粒体肿胀变大，结构变得模糊不清。胞质内出现空泡变性。见图1。
2.2 ECV-304细胞各组凋亡对比 (按Annexin-V细胞凋亡试剂盒说明进行)低氧后过氧化氢组及中药组与正常对照组在24～48h内，细胞凋亡率分别为30.735±11.38、20.48±7.12、9.24±1.828，各组间差异显著(P
3讨 论
在PCI术后，内皮细胞的损伤诱导体内可产生大量活性氧，由于活性氧导致血管内皮细胞发生凋亡，而凋亡细胞又表现为胞质浓缩，体积变小[1]，因此推测内皮细胞受过氧化氢刺激发生的这种变化，导致血管内皮细胞损伤程度加重[2-3]。笔者实验室的研究发现，一定剂量H2O2对体外培养ECV304细胞发生损伤效应24h以后开始出现，其表现为透视电镜下“内皮细胞结构上出现核固缩、细胞凋亡小体，部分可见细胞裂解”，流式细胞仪[4]检测“细胞凋亡24h后阳性率增加，中药浓缩剂组(红参、黄芪、麦冬、姜黄等)阳性率明显下降”。由此推断作用机制，当组织低氧缺血时，过氧化程度增大，活性氧(H2O2)含量增多，使抗氧化酶(SOD)活性降低。活性氧的应激，对死亡受体通路的活化，而导致细胞凋亡速度加快，而红参、黄芪、枸杞、苦参等有效成分，可拮抗由过氧化程度的增大及活性氧(H2O2)含量的增多，并且可上调抗氧化酶(SOD)的活性 [5]。笔者利用强抗氧化的中药复方合剂成功阻止了H2O2 的氧化作用，在降低内皮细胞中活性氧生成的同时，对内皮细胞具有一定的保护作用。
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细胞器范文5
暑假期间，通过同学介绍，我找到了一份既能赚点小钱又能与自己专业搭得上边的工作。工作系“精品购物指南”旗下唯一一本的商业杂志——《数字商业时代》的……推广工作。说白了，就是为《数字商业时代》这本杂志做促销。但说实在的，我并不认为这是一份单纯的体力活，我们的工作任务是每天在不同的报刊亭售卖这本杂志，在此期间，我看到了一些有关报亭的运营以及报刊杂志销售的现状。
首先简单介绍一下《数字商业时代》这本杂志，它是半月刊，每月5号，20号发刊，我们则是在它自然销售二至三天后开始为期四天的报亭促销活动。它的单本售价15元，是一本定位在商业杂志方向上的杂志，由于受众较窄再加上知名度不够，就只能依靠促销和随刊附赠礼品来吸引顾客。和该杂志比较符合，他们随刊附赠的是《明朝那些事》mp3正版有声光盘，包装比较精美，在促销期间，大部分的顾客都是冲着《明朝那些事》的名气买的。当下的杂志，我们不难发现很多派送礼品的小品，例如《瑞丽》送包，《昕薇》送香皂、护肤品等等，这些都屡见不鲜，但大都出现在时尚杂志中。而商业杂志例如《第一财经周刊》、《生活三联周刊》等，还是很少搞这种噱头的。当然，我们要考虑到的是这本杂志并不像之前所提的那些杂志一样，拥有强大的知名度以及固定的受众群，这本杂志已经被“精品购物指南”从台湾收购到大陆发行已经七八年了，仍旧没有什么起色，着了急的“精品”开始花大价钱誓要让他起死回生。
让我们来看看，这本杂志由于发行量不大，知名度不高，广告自然不多；其次，我想运营一份商业杂志的资金远远要超过一份时尚杂志，因为它针对的是专业人士，不能胡编乱造，甚至有时候花重金请一些专家在其实中发表言论以显示其杂志的专业性；要冲销量自然要促销，要打名声自然要做广告，这样一来它的运营成本就大大提高了。我当时粗略算过，它杂志雇佣的记者编辑，杂志随刊的赠品与印刷费用，加上促销员的工钱以及在报亭投放需交给邮局的费用，就算卖了也赚不了钱，卖的越多，亏得越多。
没错，“小报靠发行，大报靠广告”，可这份小报招不来广告，而发行等于亏损，他们的运行在于他们身后大财团“精品购物指南”！这是怎样的一种畸形运作啊！也听里面的工作人员说过，现在最难得做的就是杂志，没有强大的经济支柱，根本做不起来，看来他们的杂志已经把这条规律体现的淋漓尽致了。
二、我看：北京各报亭销售
在报亭实地促销的过程当中，也不难发现销量最大的是法制晚报、新京报、北京晚报、精品购物指南等价位在一元且信息量大报纸。就《精品购物指南》来看，在朝阳区较繁华地区，一般每天有五十份以上，有促销员促销时一个早晨就能达到一百二十份，甚至更多。不同的地区销售的报刊杂志天差地别，例如在国贸一带，除了便宜的报刊，杂志走的也相对较快，像我当时所促销的《数字商业时代》也是最好卖的，那一带的人群相对容易接受更有深度的东西，而不是是些街边新闻，或者法制消息。与之相反的，在劲松桥一带的报亭，即陈旧的小区边上，走的好的一般都是一元一份的新京报、法晚、北晚、参考消息等，连精品都很少卖。还有一种，则是在工体一带，会有一些时尚人士，走得相对较好的就是瑞丽、昕薇、coco等时尚杂志，这些人一般不太看重价钱，看上眼了就直接拿走，而他们也是除了商业人士以外促销的“攻击”对象，因为他们购买杂志时相对较为盲目，只要你口才过得去，抓住他们的需求点，成功率会很高。
在这个暑期实习当中，虽然没有进大报社，但在与报刊亭主的闲聊之中可以发现在报亭和杂志社之间，有一个重要的环节，那就是——邮局。报刊亭主大多是外地人，常常也听他们对我吐苦水，他们语言质朴，大多是些“邮局黑心”之类的抱怨。每份杂志如果要上报亭每年必须交给邮局5万块钱，而其他的杂志如果和亭主协商好，能够放上报亭，则有可能等来被抄报的命运。还有许多报刊是有“任务”的，例如，双井桥一带的一个报亭，法晚、北晚、新京报等都有各20份的“任务”，如果卖不掉那就只能报刊亭自己吃了，如果有亏损，也只能哑巴吃黄连的份儿，而邮局每天都稳稳拿着这些销量。
三．我看：《北晚》、《法晚》、《新京报》
法晚、北晚、新京报，是我在报亭的时候卖的最火的三份报刊，无论在哪一个报亭，“来份儿法晚！”，“来份儿北晚！”，“来份儿新京报！”的声音不绝于耳。于是，我购买了几天这三份报刊准备一看究竟。
（以下的三份报纸均拿8月25日的为例）《北晚》的版块布置，首先是各类新闻：今日要闻、科教新闻、北京新闻、财经新闻、警法新闻、热线新闻，接下来是娱乐版块，此版块所占篇幅较大，接下来是小规模的文学散文，智力休闲，最后是世界新闻、体育新闻。
《法晚》的编辑排版大致与《北晚》相同，但多出了名为“车尚”这一个板块，里面是一些车子的信息，占用了10个版面，而《法晚》当期共60个版面。其中与《北晚》还有些不同的，他里面有连载的小说，虽然只占用了一个版面，却也体现出该报纸的特色，这可是一个长期工啊！
《新京报》并没有什么特别突出的版块设置，但总体编辑排版上相对那两份报纸要舒服，彩板页面较多，图片较为丰富，这个不可否认的比其他两份报纸要出色的地方。
而就内容上来说，这三份报纸的内容是存在很大差异的，同一天的报纸，却很少看到相同的消息，但报头在当天却比较一致，都是有关国庆庆典安排的新闻。这样一来媒介则发挥了它最原始的功能，国家统治工具喉舌，传播着至上而下的重大事件。
在数字新闻飞速发展的今天，街边的报刊亭仍旧屹立不倒，证明了纸媒介在当今社会的地位。而如何发展好一份纸媒介，说到底要看最底层的销售，从那里摸索销售模式，再上升到如何设置报刊内容，最后到经营管理。
并不是每一个经营者都看到过报亭销售，纸上谈兵有可能葬送一个杂志社的前途；并不是每一个编辑都了解过受众的需求，闭门造车有可能造成孤芳自赏的结局！于是，我很庆幸，这一个暑假我没有白过，在推销的期间，我看到各种人群的需求，各色报刊杂志的销售情况，利用闲下来的事件翻看过部分报刊内容，看到它们之中的闪光点。
细胞器范文6
此外，手部运用亦有所精进。玩玩具时，除了用拍、丢、敲打等方式挑战不同玩法外，也试着以大拇指和其它手指合作抓握物品，或是单独伸出食指触摸，偶尔还能用拇指、食指配合捏拿，这些突破，都是未来灵活操作工具的关键指标。
当眼前的人或物突然不见了，小宝贝会努力尝试翻弄寻找。有时玩具或奶嘴掉了，孩子能目视掉落的物品，并发出声音示意；当旁人拣起后，宝贝又刻意弄掉，希望东西再度被拾回。
由于听音辨声和视觉观察的能力愈来愈强，孩子对于旁人的嘴形特别留意，当有人说话时，小宝宝不但专心注视其嘴部的变化，还会努力模仿发音，或以肢体语言积极响应。像是想要抱抱，便张开双臂往前；对于“再见”、“谢谢”等指令，会搭配特定的动作展现。
为了帮助7～9个月的宝贝更快乐地成长，我们特别设计了多种亲子游戏，只需要一点点时间和简单的道具，就能让你和宝宝玩得很开心！
7个月
名称：自由落体
材料：亲子熟悉的歌谣数首
步骤：1.亲子面对面。
2.大人坐在地板或床上，伸直双腿，让宝宝坐在自己的膝盖上。
3.大人一边唱歌，一边缩回小腿、抬起膝头。
4.当膝盖抬到最高点时，大人停止唱歌，看着宝宝，说：“一，二，三！”
5.大人数到三时，同时把腿放平，并发出“哇！”的音效。
6.假如小孩的反应良好，可以重复几次。
好处：听觉刺激、平衡练习、期待情绪。
8个月
名称：秋千保龄球
材料：干净的中型宝特瓶三个
步骤：1.大人先将宝特瓶三个依序摆好，间距不要太大，然后扶着宝宝面对瓶子站好。
2.接着由大人扶握孩子腋下，并抱起离地悬空，前后轻轻摇晃，好像荡秋千一样。
3.当宝贝习惯了摇晃的感觉，大人可稍微用力，并在往前时，协助小宝宝踢倒球瓶。
4.球瓶倒了，大人要抱着孩子高声欢呼，并观察其表情。
5.如果小宝贝喜欢玩，不妨重复进行，并试着增加瓶数或调整瓶子之间的距离。
好处：下半身力量、平衡练习、触觉刺激。
9个月
名称：健康步道
材料：薄被一条、袜子数双
步骤：1.大人先把一双一双的袜子对折反套，形成数个扁扁的袜子球。
2.接着在孩子注视下，把袜子球铺在地面，并盖上薄被，变成安全的健康步道。
3.大人扶着宝宝腋下，先在平坦的地方练习迈步移动。等孩子适应了，再走健康步道。
4.有时宝贝走着走着，会突然趴下，并尝试翻动背面，寻找藏在底下的袜子球，大人可以一起帮忙。
