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青春的童话范文1
一、阳光下的眼眸
他笑，眼里泛着我熟悉的光芒。他说：“高三了，要加油啊！”当他说这句话的时候，我与他已经相识两年了，否则也不会觉得如此熟悉。我转身，湿了眼。
他长的很好看，也很壮实，这是我对他的第一印象。日记本零乱的几行字，怎么拼凑，都是一种前所未有的安心。就像是有一天，他会像我的王子一样，给我安全感，保护我。我在乎的，只是那眉间熟悉的温暖。
二、起初，只是如此
我到现在都还记得，那是一个有着刺眼阳光的中午，排着长长的队伍，报了名后，我倔强的抢在父母前面，拎着大包大包的行李，向着宿舍楼走去。在家里，我很活泼，没有拘束。事实上，和大多数人一样，在学校里，我是个很要强的学生。
那天下午，我们就开始正式上课。教室里，前排的座位永远都不是我向往的。准确的说，我是个好学生。但是很多时候我很贪玩。靠近窗台有一张空桌子。也许是太破旧暂时没人选。我默默走过去。我不得不说学校的传统政策：每学期开学都要分班！又一次进入冰冷的世界，我的心很安静。或许是早已预料。
那天，他比我晚来1小时。前排稀稀落落的被课本、铅笔侵占了。窗外的阳光照到他的脸上，我抬起头，他笑，眼里泛着我熟悉的光芒。
三、往后，却才开始
不知道从什么时候，我就不喜欢数学。莫名其妙的不喜欢。看到它们就烦，尤其是让我心烦的证明题。那天刚结束数学课，而我也正好放弃了一道十二分的证明题。
“不想学了就休息一会儿，这么低的效率，这么热的天气，谁都没心情做题。”好像是他很懂我似的。我随即转过身，我们出去玩吧，呵呵，我听到他在后面的笑声，安静，不容反抗……日记本里写着这段话。却因此忘记了第二天要交的数学作业。只是偶尔贪玩而已！
同桌的那段日子，总是喜欢在无聊的时候听他讲山里的故事。我们头对头，脚并脚，因为那样，可以感觉到自己和他是在一起的，不会孤单，不会害怕。仿佛心里，有些许依靠。下课后，他喜欢打篮球，所以他的衣服总会有断线裂开一条“伤疤”，那天又是数学课，我摸着早自习从宿舍带来的针线，偷偷给他缝衣服。他总是对我说：小丫头上课好好听讲呀！我只是笑笑不说话。
四、教室里的彩虹
教室里是不可能出现彩虹的。这一点我比谁都清楚。晚自习下课后，他带着我去买冰糖葫芦，我们一起滑旱冰，我在他双手提水果和礼物时给他穿外套…太多太多，这些细微的一切，我都记忆犹新。在她身旁，我就是一个小丫头。他会带走我所有的烦恼。他会买给我喜欢的水果。他会给我讲山里的故事。
我得承认，我喜欢他。喜欢和他在一起。那天，他送我一条纯银项链。他亲自给我戴上。他的手指穿过我的头发，我忽而脸微热。应该是第一次，第一次脸红。不是因为距离，而是因为温暖。在他身边的温暖，让我不禁脸红。我侧过身，转来转去，不让他看到我的尴尬。
那天，他说外面下雪了！我一脸迷惑，他敲着我的头说：“小丫头，又在想啥呢？发啥楞，你扭头看看不就知道了！”这时我才发现，我一直都在看着他。我莫名的心虚，然后拉着他的手，跑去操场看雪。我对他的感觉，开始有了微妙的变化。
五、流动的光点
六月夏至，依依不舍的春天。最冷的时候，是他拉着我的手替我塞进他的口袋。最热的时候，也是他，带着我去河里，在有树荫的岸旁，轻轻地掀开石头，然后捉起小螃蟹递给我。好像我的意识里全部是他，很幸福，很简单，想永远在他的爱护下，一起上学，一起打闹。
于是，我望着他印在河里的倒影，发起呆来。那天，不知道什么原因，我把那条项链给弄丢了。为此我哭了，一向很坚强、乐观的我哭了。耳旁姐妹们的劝告都被他的声音覆盖。我躺在床上，第一次失眠。脑子里，全部都是他送给我项链时的画面：“小丫头，我买了这条项链给你，这样我就可以永远陪着你了”他一边说，一边轻轻拨开我的长发，替我戴上项链。那一刻，我想是我这么多年最幸福的。所以这会儿才会如此难受。
六、柳絮的世界
那天，他又一次叫我的名字：清，我的座位被调动了，我被分到靠外走廊那里了。他没有再说什么，因为我的眼角流淌出滚烫的泪水，他要帮我擦掉。我是第一次拒绝他，挥手打掉他将要触及我额头的手掌。
挥手之后，我后悔了。那双熟悉温暖的手掌，被我硬生生的打掉。他迟疑了一下，并没有生气。只是静静的看着我。随后，预备铃声响了，我趴在桌子上，独自流泪。还会有机会同桌吗？我不知！
他离开以后的日子，我开始习惯望着窗外。偶尔会被数学老师抓住，然后站起来发懵。于是从那天起，他还是给我传纸条。我以为自己可以安静，即使整天不说话，我也知道自己是无论如何也安静不下来的。怀念那双让我温暖的抚摸过我额头的手掌。怀念那让我双手掰手腕都不能取胜的大手。怀念那个替我戴项链轻轻挑起我长发的双手。
我又看到他认真做题的表情了，那么淡定。他也不是数学特棒，只是他会耐心慢慢琢磨。而我会把放弃的时间，用来看他，可是每一次看到他的背影，我的泪水就会悄悄滑落。我多么想告诉他：离开你以后所有的意外，一半是属于留在我心底的你，一半是有你的那些甜蜜回忆。
青春的童话范文2
我开始察觉到男生追随着我背影的目光。同桌小米说，你应该骄傲，全校没有一个女生的身材比你更好了。但我却是惶恐的，那些目光非但没有让我骄傲，反而让我无所适从，我总感觉他们那些目光仿佛剥开了我的衣服，有时候这种感觉让我不断地低下头来检查自己是不是扣子没有扣好，尽管很清楚地知道自己穿的是很规矩的T恤，根本就不可能出现没扣扣子这种情况，我想或许是我的感觉神经太过于敏锐，我的想象太过于下流。
而杨磊的目光正是我浑身不自在的主因。我含着胸走在校道上，杨磊常常从后面跑过来，或者不跑，而是骑着他的自行车，从我身边飞驰而过，我会听到他的口哨，或者别班一些问题男生的口哨，此刻的我会惊恐地听到杨磊说：叶蔷薇，抬头站直!我居然还会“哦”一声，然后条件反射地站得笔直。再然后我会听到杨磊爽朗而大声的笑，那种笑声在校道上的枝叶间缠缠绕绕，让我的心忽然生出一些无名的忧伤，甚至感觉天就要暗淡下来了。那些日子，我发现青春真的很长很长，讨厌自己为什么还没有长到能够接受变化，长大到可以骄傲。
我仍然含着胸、低着头走路，原来，对于一个原本就内向的人来说，美丽或者张扬都是一种无形的伤害。这个认识让我更加沮丧。而这时，我收到了人生的第一封情书。那是隔壁班一个男生写的，他像他的文笔一样差，他提到了喜欢我的理由：因为你的胸很大。
看着这7个字，我感觉自己的血液全都涌上了脑袋，我不知道我的脸是不是红得特别可怕，我只知道有一种无以言喻的羞辱令我浑身颤抖，甚至没有办法思考。我能想到的就是冲到隔壁班去，当着那个男生的面撕碎这封信，然后狠狠地甩他一个耳光，然后再语无伦次地骂他不要脸什么的。
我忘记了自己是不是因为这种羞辱的感觉而哭着，冲动地跑出了教室，不知道在走廊里撞倒了谁，我几乎是手脚并用，混乱而准确地把那封信丢到那个男生的脸上，然后甩给他一个耳光，或者因为我的力道太大，那已经不能算单纯的耳光，而是一个拳头。
那个男生好像被我打得流了血，我的泪水让我的视线模糊得可怕，几乎是跌跌撞撞地跑离了那里。
那个让我感觉耻辱的黄昏，我蹲在教学楼下的球场阶梯上哭泣。
空旷的球场上，我听到自己回荡着的抽泣声，还能听到我大颗大颗泪水滴落在水泥地上的响声。
这有什么好哭的。你很丰满呀，我也很喜欢。
我猛地从泪水中抬起头，居然看到了杨磊。我瞪着他，用一种耻辱的、可怕的并且充满了憎恨的眼光看着他。他没有再说话，脸是红的，也瞪着我，我读不懂他的眼里是什么样的情绪，但我想我眼里一定充满了厌恶的愤怒的火光，它们烤干了我眼睛里原本充盈的泪水，让我的眼睛变得异常干涸。
我直直地瞪着杨磊，忽然发现此刻的他跟那个写信给我的男生没有什么两样。这样的认知让我的眼神渐渐地空洞起来。
我慢慢地站起来，不再瞪他，我感觉自己很冷，很空，像一具丢失了灵魂的躯体。我轻飘飘地经过杨磊身边，迎着荒凉的夕阳，我是这样的空洞、伤心。
我找来一条长长的白色棉布。缠紧了我那像我的伤心一样疯狂生长的胸部，这让我的17岁全是疼痛的记忆。因为打人事件，我在学校里很是出名，而这样的出名，是一种难以名状的难堪。我对此的直接表现，除开那根让我无限疼痛的白色棉布，就是一种沉默。我甚至不和小米聊天了。对于她的话，我甚至开始用“哦”来回应。而对于杨磊，对于他的任何言语，我连“哦”都不用。我想我会在沉默中死去。有那么多的东西没有人懂，我也不懂，无疑就只有沉默。在这种孤独的、沉默的、疼痛的、有很多说不出的忧伤时光里，那一条同样沉默同样疼痛悲伤的白色棉布牵着我同样疼痛的青春，陪着我走到了高三。
还有43天就要高考了，而我最后一次模拟考试居然连本科线都没有上。可想我是怎样的忧伤，放学后我没有回家，一个人在河边独自流泪，其实也只是想一个人静静。身后却有人焦急地喊：叶蔷薇，你不要做傻事啊。我一惊，真的就失足掉进了冰冷的河水里。有那么一瞬间，我觉得自己离死亡很近，我甚至不去挣扎。河水开始变得很蓝，透明清澈纯净的蓝，让我想永远这样冰冷地睡过去。
等我醒过来，看到了杨磊滴水的头发，还有他潮湿的目光，他说，你这样，不痛吗?
我散开的扣子，还有那一条松开了的白色棉布，都像我此刻的心情一样，潮湿而冰冷。
因为这一种不为人知的尴尬，让我在面对杨磊时更加沉默。我甚至不再看他。
杨磊曾经偷偷地塞我文具盒里一张纸条，那上面的地址，我去过的，是一间在角落里卖一种叫做文胸的小店，在这么偏僻的小镇上是独一无二的。那里进出着一些年龄比我大的骄傲的女孩子，去了好几次，我都没有勇气踏进去，成为她们其中的一个。
半年后的大学校园里，我丢弃了那一条已经不再洁白的棉布，我离那个偏僻的小镇已经很远很远了，这个城市里的女孩子，全都妖娆美丽得像怒放的玫瑰。这个城市里，也有很多更漂亮的内衣小店，已经有很多与我同龄的女孩常常很快乐地从里面走出来，我开始成为其中的一个。
青春的童话范文3
关键词:蝉拟青霉;总多糖;腺苷;肿瘤;体外
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0760-05
Research of Anti-tumor Effects of Different Purified Components of Cordyceps Cicadae in Vitro
CAI Jufen, JIANG Zhiming, LU Hongyang, LU Bozheng
(Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022, Zhejiang, China)
Abstract:Objective: To further study anti-tumor effect in vitro of polysaccharides and adenosine respectively, or combined with cisplatin (DDP) or adriamycin (ADM). Methods: Detection of inhibition of human lung adenocarcinoma (PAA-1) cell growth with DDP, ADM, polysaccharides and adenosine respectively or combined administration by MTT assay, cell cycle by flow cytometry on cultured cell lines, colony-forming rate of PAA-1 cell in vitro by light microscope examination, and lymphocyte subsets by flow cytometry. Results: IC50 of DDP, ADM, total polysaccharides, and adenosine on growth inhibition of human lung adenocarcinoma (PAA-1) cell were 9.05μg/mL, 36.21μg/mL, 1086mg/mL and 7.81mg/mL. It is antagonist of Polysaccharide combined with ADM or DDP on growth inhibition of PAA-1 cells. Adenosine with 8mg/mL combined with ADM with 4μg/mL indicate synergism. It is no different between different concentrations of adenosine alone and combined with DDP on cell growth.With the increase of concentration of adenosine, G0/G1 phase cells decreased, while the G2 / M phase relative increase when adenosine combined and ADM. It is no different between polysaccharide group and negative control group on colony-forming rate of PAA-1 cell in vitro. Adenosine groups were slightly lower than negative control group on colony-forming rate. With a gradual increase in the concentration of adenosine, the rate of colony-forming gradually decreased. Polysaccharides had no effect on on lymphocyte subsets of PAA-1 cell in vitro. Conclusion: The polysaccharides and adenosine has a certain anti-tumor effects in vitro. Polysaccharide combined with ADM or DDP can not increase their anti-tumor effects in vitro, adenosine combined with ADM can increase anti-tumor effects in vitro.
Key words:Cordyceps cicadae; total polysaccharides; adenosine; tumor; in vitro
收稿日期:2009-11-10
基金项目:浙江省中医药管理局资助项目(2007CB186)
作者简介:蔡菊芬(1953-),女,浙江萧山人,主任医师,研究方向:肿瘤化疗及中西医结合诊治。
蝉花是一传统名贵中药,含有多种必须氨基酸、真菌多糖、腺苷、生物碱、麦角甾醇、虫草素酸等成分,具有滋补强壮,抗疲劳抗应激以及免疫调节作用等。笔者前期工作已经从蝉花中提取了总多糖和腺苷,笔者进一步研究了其在体外的抗肿瘤作用。
1 仪器与材料
1.1 仪器
[BW(S(Z,1,2)MD2]
[WT5”FZ〗中华中医药学刊
TU-1800PC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。高效液相色谱仪Shimadzu LC-20AT型、SPD-20A(VWD检测器),N2000工作站。CO2培养箱(德国Heraeus公司),流式细胞仪(型号FACS Calibur,美国BD)。荧光倒置显微镜(Olympus)等 。
1.2材料
腺苷、虫草素对照品:由中国药品与生物制品检定所提供。CycleTest细胞周期试剂盒(美国BD公司),RPMI 1640培养液(美国GIBCO),小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所),(简称DDP,云南个旧生物制药有限公司产品,批号:070101),阿霉素(简称ADM,浙江海正药业股份有限公司,批号071105),总多糖和总腺苷(由浙江省医学科学院药物研究所天然药物研究室提供,苯酚硫酸法检测,未减去水分含量的蝉花中总多糖含量为51.6%,蝉花总多糖中的水分含量为8.7%。蝉花中腺苷在210 nm检测时,纯度为19.88%;在260nm检测时,纯度为31.82%。),CD25,CD19,CD3,CD4,CD8,CD56,CD44抗体(美国BD)淋巴细胞分离液,PBS缓冲液,RPMI 1640培养液(美国GIBCO)等,
1.3细胞株
人细胞肺癌细胞系PAA-1。
2方 法
MTT法检测DDP、ADM、总多糖、总腺苷单独及联合用药对人肺腺癌(PAA-1)细胞的生长抑制能力。
2.1 实验分组
DDP采用浓度为0.3125μg/mL,0625μg/mL,1.25μg/mL,2.5μg/mL,5.0μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL,80μg/mL和160μg/mL;ADM采用浓度为0.25μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,4.0μg/mL,8.0μg/mL,16μg/mL和32μg/mL;总多糖采用浓度为:0.3125mg/mL,0.625mg/mL,1.25mg/mL,2.5mg/mL,50mg/mL和10.0mg/mL;腺苷采用浓度为:0.0625mg/mL,0125mg/mL,0.25mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg/mL,2.0mg/mL,4.0mg/mL,80mg/mL,16mg/mL和32mg/mL;DDP与多糖联合作用,分别为:阴性对照组,DDP16.0μg/mL,DDP 8.0μg/mL,DDP 40μg/mL,DDP 2.0μg/mL,DDP 16.0μg/mL+多糖5mg/mL,DDP 8.0μg/mL+多糖5mg/mL,DDP 4.0μg/mL+多糖5mg/mL,DDP 2.0μg/mL+多糖5mg/mL;DDP与多糖联合作用,分别为:阴性对照组、ADM16.0μg/mL、ADM 8.0μg/mL、ADM 4.0μg/mL、ADM 2.0μg/mL、ADM 16.0μg/mL+多糖5mg/mL、ADM 8.0μg/mL+多糖5mg/mL、ADM 4.0μg/mL+多糖5mg/mL、ADM 2.0μg/mL+多糖5mg/mL;DDP与腺苷联合作用,分别为:阴性组、DDP 8.0μg/mL、腺苷8mg/mL、腺苷05mg/mL、腺苷0.25mg/mL、DDP8.0μg/mL+腺苷8mg/mL、DDP 8.0μg/mL+腺苷0.5mg/mL、DDP8.0μg/mL+腺苷0.25mg/mL;ADM与腺苷联合作用,分别为:阴性组,ADM40μg/mL、腺苷8mg/mL、腺苷0.5mg/mL、腺苷0.25mg/mL、ADM4.0μg/mL +腺苷8mg/mL、ADM4.0μg/mL +腺苷0.5mg/mL、ADM4.0μg/mL +腺苷0.25mg/mL。
2.2细胞实验处理
对数生长期PAA-1细胞用025%胰酶+0.02%EDTA消化后悬液配成7×105/mL,96孔板每孔加100μL,每孔7000细胞,培养24h后加药处理。每个处理组设6复孔。阴性对照组加100μL培养液;依照各实验分组加不同浓度药物,各孔终体积为200μL;处理24h后加20μL MTT,37℃ 5%CO2培养4h后离心,小心弃去上清,加150μL二甲基亚砜,微振荡1min使之充分溶解,酶标仪双波长(570nm/690nm)检测吸光度OD值。
2.3数据处理
对各组OD值取平均值,计算抑制率(IR)。药物抑制率= (1-药敏组平均OD值/阴性组平均OD值)×100%。对结果应用直线回归法分析IC50,并作相关性分析求r值。
2.4对体外培养细胞系细胞周期的影响
细胞分成15组,分别为:阴性组,腺苷8.0mg/mL组,腺苷0.5mg/mL组,腺苷0.25mg/mL组,DDP 8.0μg/mL组,DDP 8.0μg/mL+腺苷8mg/mL组,DDP 8.0μg/mL+腺苷0.5mg/mL组,DDP 8.0μg/mL+腺苷0.25mg/mL组,ADM 4μg/mL组,ADM 4μg/mL+腺苷8mg/mL组,ADM 4μg/mL+腺苷0.5mg/mL组,ADM 4μg/mL+腺苷025mg/mL组,多糖5mg/mL组,DDP 8.0μg/mL+多糖5mg/mL组,ADM 4μg/mL+多糖5mg/mL组。
PAA-1细胞按照1∶3传代,24h后加药换液,继续培养24h,0.25%胰酶+0.02%EDTA消化收集,PBS漂洗,离心,收集细胞沉淀75%冷酒精固定,按照Cyclone DNA试剂盒说明书操作,BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析细胞周期。
2.5 对体外培养PAA-1细胞系集落形成率的影响
2.5.1实验分组阴性组,多糖5mg/mL组,DDP 8.0μg/mL组,ADM 4μg/mL组,腺苷0.5μg/mL组, DDP 8.0μg/mL+多糖5mg/mL组,DDP 8.0μg/mL+腺苷0.5mg/mL组,ADM 4μg/mL+多糖5mg/mL组,ADM 4μg/mL+腺苷0.5mg/mL组。
2.5.2 实验方法 对数生长期PAA-1细胞胰酶消化后培养24h,每组1瓶细胞分别处理24h,胰酶消化计数细胞,每组3瓶,每个培养瓶中加入400个细胞,加足量培养液,静止培养10天。然后倒去上清液,PBS小心漂洗2次,甲醇∶冰醋酸3∶1固定10min,PBS漂洗2次,加2%Giemsa染色10min,PBS漂洗2次,阴干后光镜检查,大于30个细胞的团块记为一个集落。
2.6对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响
2.6.1 实验分组 阴性组,多糖5mg/mL组。
2.6.2实验方法无菌抽取人外周血100mL,加肝素抗凝,使肝素的终浓度为25 IU,轻轻摇晃5min,使其抗凝完全。50mL离心管中加35mL淋巴细胞分离液,小心在上层加15mL抗凝血,2000r/min离心30min。小心吸取中间层淋巴细胞,PBS漂洗2次,1500r/min离心10min,收集沉淀细胞,计数,取3000万总细胞,加含有重组人白细胞介素-4(rhIL-4)10ng/mL,重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)1000IU/mL的培养液10mL,37℃ 5%CO2培养3h。轻轻倾斜液面,使悬浮细胞漂浮,小心吸取,37℃ 5%CO2培养过夜。按照分组,加药培养24h,离心收集细胞,PBS漂洗2次,分5小管,4管分别加CD25/CD19,CD4/CD8,CD56/CD3,CD44抗体10μL,5号管作为阴性对照不加抗体,避光孵育30min,流式细胞仪检测。
3结 果
3.1 MTT法检测DDP ADM 总多糖 总腺苷对PAA-1细胞的生长抑制能力
见表1。
表1DDP ADM 总多糖 总腺苷对PAA-1细胞的生长抑制情况
组别IC50r
DDP9.05μg/mL0
ADM36.21μg/mL20.66
总多糖10.86mg/mL54.52*
总腺苷7.81mg/mL39.51**
3.2 各药联合对细胞生长的影响
3.2.1 多糖和顺铂联合对PAA-1细胞的生长抑制作用 5mg/mL多糖联合16μg/mL,8.0μg/mL,4.0μg/mL顺铂作用时,对PAA-1细胞也有一定的抑制作用,但是与16μg/mL,8.0μg/mL,4.0μg/mL顺铂单独作用的效果分别相比,抑制率均降低,差异有统计学意义(P=0.000188, 639E-06, 0.000526);而5mg/mL多糖联合2μg/mL顺铂与2μg/mL顺铂单独作用相比,两者抑制率无显著差异 (P=0.099>0.05)。总之,5mg/mL多糖和顺铂表现出强烈的拮抗效应,见表2。
表2 顺铂及顺铂联合多糖对PAA-1
细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
阴性对照组0.9745±0.0986 0.00
DDP 16.0μg/mL0.4432±0.052354.52*
DDP 16.0μg/mL +多糖5mg/mL0.6798±0.086430.24*
DDP 8.0μg/mL0.5895±0.058639.51**
DDP 8.0μg/mL +多糖5mg/mL0.8277±0.034615.07**
DDP 4.0μg/mL0.7652±0.0424 21.48***
DDP 4.0μg/mL +多糖5mg/mL0.8802±0.04439.68***
DDP 2.0μg/mL0.8464±0.039613.15
DDP 2.0μg/mL +多糖5mg/mL0.9015±0.0756 7.49
3.2.2 阿霉素联合多糖对PAA-1细胞生长抑制作用 与16μg/mL阿霉素单独作用相比,5mg/mL多糖与阿霉素联合作用时,对细胞的生长抑制率降低,差异有统计学意义(P=0.0308),而与8.0μg/mL、4.0μg/mL、2.0μg/mL阿霉素联合作用时,对应各组的抑制率没有显著性差异(P=0909,0.987,0.891)。总之,5mg/mL多糖与阿霉素表现出拮抗效应,见表3。
3.2.3 顺铂联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用与8.0μg/mL DDP单独作用相比,8mg/mL、0.5mg/mL、025mg/mL浓度腺苷与其联合作用时,对细胞生长抑制作用均无显著差异。因此,腺苷和DDP表现出拮抗效应,见表4。
表3 阿霉素及阿霉素联合多糖
对PAA-1细胞生长的影响(±s)
注:阿霉素16.0μg/mL+多糖5mg/mL与16μg/mL阿霉素单独作用相比,*P=0.0308
表4 顺铂联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
3.2.4 阿霉素联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用 8mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL浓度腺苷与4.0μg/mL阿霉素联合作用和4.0μg/mL阿霉素单独作用相比,对细胞生长抑制作用均显著增加,差异具有统计学意义(P=230524E-08, 0000116,9.8488E-05)。数据显示,0.5mg/mL、0.25mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联合作用时,显示出拮抗效应;而当8mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联合时,对细胞显示协同效应,见表5。
表5 阿霉素联合腺苷对PAA-1细胞生长抑制作用(±s)
组别OD值平均抑制率(%)
注:与4.0μg/mL单药阿霉素作用相比,*P2.30524E-08,**P=0000116,***P=9.8488E-05。
3.3 对体外培养细胞系细胞周期的影响
单DDP组,各浓度腺苷组,DDP和腺苷联合组,多糖组,多糖和DDP,多糖和ADM组中,细胞各周期并未出现明显变化。ADM组,ADM和腺苷联合组的G0/G1期细胞明显减少,特别是单用ADM组,G0/G1细胞特别少,而G2/M期细胞特别增多。ADM和腺苷联合作用,随着腺苷浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐减少,而G2/M期相对增加,见表6。
表6各组处理对体外培养细胞系细胞周期的影响
3.4 对体外培养PAA-1细胞系集落形成率的影响
加化疗药各组,及联合使用各组的集落形成率远低于阴性对照组,而多糖组的形成率和阴性对照组未见明显差异。不同浓度腺苷组的集落形成率略低于阴性对照组,随着腺苷浓度逐渐增加,集落形成率逐渐下降,见表7。
表7 各组处理对体外培养细胞集落形成率的影响(±s)
组别集落数P值
3.5 对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响
多糖5.0mg/mL体外处理淋巴细胞24h后,各组加抗体孵育后,流式测分型。经多糖处理和阴性对照组两者之间未看到明显差别,见表8。
表8多糖处理对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响
组别阴性对照组(%)多糖5.0μg/mL(%)P值
4讨 论
蝉花是麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae Shing)寄生于蝉科昆虫山蝉(Cicada flammata Dist)若虫上的子座及若虫尸体的干燥复合体。蝉花药用已经有1000多年时间,含有多种必须氨基酸、真菌多糖、腺苷、生物碱、麦角甾醇、虫草素酸等成分,具有滋补强壮,抗疲劳抗应激以及免疫调节作用,所含的虫草多糖具有抗肿瘤作用[1]。与冬虫夏草相比,两者的菌株均为蝉拟青霉[Paccilomyccs cicadac (Miqucl.)Samson],含有相近的成分,因此蝉花常被用作冬虫夏草的代用品[2]。目前在市场上流通的蝉花药材基本上为无性型的蝉拟青霉药材。
化疗是治疗肺癌的主要手段之一。但是化疗药物都有较强的毒副作用,并且治疗中癌细胞容易产生耐药性。为了增加肿瘤细胞对化疗的敏感性,降低药物的毒副作用,许多医生在应用化疗药物的同时给病人进行中医中药扶正治疗。多年的研究观察表明, 化疗同时配合中医中药辨证治疗, 能减轻化疗的毒副反应, 增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性, 提高机体对化疗的耐受性, 尤其在延长中位生存期和生存率方面有良好的疗效。
蝉花作为一味名贵中药,在临床上多用于镇痛,镇静,提高机体的免疫能力,改善病人的营养状况,实践中也有将蝉花应用于中药抗肿瘤[2],但是蝉花的直接杀伤肿瘤作用有待开发。
蝉拟青霉中主要的活性成分包括虫草多糖、腺苷以及虫草素。本项研究表明蝉拟青霉中多糖和腺苷成份含量较多,但是未提取到虫草素。多糖和腺苷在一定的浓度下对癌细胞的生长有明显的抑制作用,且存在剂量关系,随着作用时间的不断增加,但是两者的使用量都较大,在临床上较难应用于直接杀伤。
多糖和DDP和ADM联合应用未见有明显的抑制效率提高,反而使同浓度下DDP和ADM的杀伤降低。这和我们前期的研究一致[3]。这表明多糖对直接杀伤肿瘤细胞这方面没有协同增效作用。多糖单独使用和DDP、ADM联合使用与阴性对照相比,细胞的周期分布未见明显变化,但是和单独使用ADM相比,细胞G0/G1期变化较大。这和我们前期工作有一定的分歧,可能的原因是粗提物和纯总多糖相比,含有一定量的未知物质,今后将对这部分物质继续进行分离鉴定。
单独使用多糖对集落形成率有一定的影响。但是多糖联合化疗药物和单独使用化疗药物两者之间未见有明显差异。
腺苷在0.25mg/mL～8mg/mL浓度,对细胞的抑制率保持大约35%,出现此平台效应。在和DDP联合时,显示出明显的拮抗作用。而当联合ADM时,ADM4.0μg/mL+腺苷8mg/mL对细胞出现协同杀伤作用,ADM4.0μg/mL+腺苷0.5mg/mL、ADM4.0μg/mL+腺苷0.25mg/mL时,腺苷出现拮抗作用,表明腺苷在这个浓度范围内,对细胞的作用可能存有2种不同的机制,单用低浓度腺苷时,抑制效应占主要,但是遇上ADM时能起到拮抗ADM的作用。单用较高浓度腺苷时,促进细胞生长的机制逐渐加强,但是和ADM联合时显示出协同作用。此现象尚未见文献报道。具体的作用机制有待更深入研究。
腺苷联合ADM时,能使细胞周期向对照组比例转化,削弱ADM的改变周期效应,随腺苷浓度降低,这个削弱效应越明显。这与低浓度腺苷和ADM有拮抗效应相吻合。
多糖对体外培养的淋巴细胞亚群分化没有明显效果。而文献中,在大鼠身上使用的多糖能显著影响机体的免疫能力,这表明多糖对免疫能力的促进功能依赖整个机体来发挥作用,或者是多糖对免疫能力的影响主要作用于淋巴细胞以外的其他免疫相关细胞群。
实验表明,蝉拟青霉总多糖和总腺苷有一定抗肿瘤的能力,能够在体外发挥明显的抑瘤作用,有进一步研究和开发的必要。但是总多糖和总腺苷的各自作用机制有所不同,高浓度和低浓度的腺苷作用也不尽相似,需要有进一步实验研究来指导临床应用。
参考文献
[1] 史宇翔.冬虫夏草药理作用研究概况[J].中国药业,2005,14(2):72-74.
[2] 秦葵,陈红英.蝉花的研究概况[J].基层中药杂志,2002,16(6):54-55.
青春的童话范文4
耳边，妈妈的童话故事不知什么时候停止了，余音仍在心房回荡。老师笑着告诉我们我们长大了将要毕业了。童话伴随着我们的童年逝去了。
我们笑着领取毕业证，笑着填同学录，但是每个人都感觉得到，笑容依旧，梦幻般的童年回不来了，一种悲伤在空气中蔓延，泪水应颊而下，亲爱的同学，敬爱的老师，分别了，几个春秋悄然逝去了，走向童话的尽头。
长大了，是的，白雪公主的舞裙不再华丽，小矮人的友谊还在延续。童话的尽头，是悲伤，是青春的忧郁。
青春，回首，是无知。
青春的童话范文5
燕子去了，不会再回来：
曾经认为，
桃花谢了，不会在盛开：
曾经认为，
月儿走了，不会再出现：
我想童话王国的孩子，
总在梦境中徘徊。
然而有一天，
当我发现那风中摇曳的较弱花蕾，
当我望到那群星闪耀的璀璨夜空，
当我看到雨过天晴之后，
圣洁的云朵又绽开在蓝天。
我，终于走出了那童话的王国，
走进了青春的纯色果园。
在阳光如包中感受温暖，
在风雨如磐中体会失落，
在冰雪茫茫中经受考验。
终在一天，
那青春德国的展现青春的红颜。
人生是河，青春似流水，
河流永不停息，
流水逝而不返：
人生是列车，青春是驿站，
列车呼啸而过，驿站只是瞬间；
只是，当我们蓦然回首，
青春的童话范文6
新阳已经升起
暮光早已逝去
白鸽掠过头顶
阳光少年
轻狂际你短发飞扬
炽红的长剑犹胜新日
缕缕阳光抚摸眼角眉梢
亦似王子
记忆好似开始飞翔
飞得很远很远
剑梢仿佛仍在手中
抬眸时却发现
你的世界已没有它的痕迹
却必须承认
青春是一场如实如梦的童话
你们
