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欢度中秋范文1
中秋节,又称月夕、秋节、女儿节或团圆节,是流行于中国众多民族与汉字文化圈诸国的传统文化节日,下面是小编为大家整理的关于2021年欢度中秋节优秀作文，如果喜欢可以分享给身边的朋友喔!
2021年欢度中秋节优秀作文1农历八月十五，是我国传统的中秋节，也是我国仅次于春节的第二大传统节日。
中秋节的习俗很多，形式也各不相同，但都寄托着人们对生活的热爱和对美好生活的向往。中秋节是人们一直都喻为最有人情味，最有诗情画意的一个节日。有人说，每逢佳节倍思亲，中秋节这一份思念当然会更深切，尤其是一轮明月高高挂的时刻。
说起中秋节，民间一直流传着多个不同的传说和神话故事，最为人熟悉当然是嫦蛾奔月，嫦娥偷了丈夫的不死仙丹，飞奔到月宫的故事也有许多说法。在较早的记载中，嫦蛾偷吃了仙丹，变成了癞蛤蟆，被叫月精，奔月后，嫦蛾住在月宫其实是一个寂寞的地方，除了一棵树和一只兔子，就别无他物了。
每年农历八月十五，是一年秋季的中期，所以被称为中秋。在中国的农历里，一年分为四季，每季又分为孟、仲、季三个部分，因而中秋也称仲秋。八月十五的月亮比其他几个月的满月更圆，更明亮，所以又叫做“月夕”。此夜，人们仰望天空如玉如盘的朗朗明月，自然会期盼家人团聚。远在他乡的游子，也借此寄托自己对故乡和亲人的思念之情。所以，中秋又称“团圆节”。
今天是中秋节，我和爸爸妈妈一起坐在阳台上，吹着凉爽的秋风，一边赏月一边吃月饼。我问妈妈：“为什么中秋节要吃月饼呀?”妈妈就给我讲了观于中秋节的习俗。
每年8月15日，是传统的中秋佳节。这是的中秋是一年四季的中期，所以被称为中秋。在中国的农历里，一年分为四季，每季又分为孟。仲。秀三个部分，因而中秋也称仲秋。8月15的月亮比其他几个月的月亮更圆满，更明亮，所以又叫月夕，八月节。此夜人们仰望玉如盘的朗朗明月，自然会期盼家人团聚。所以又叫团圆节。
在我国，城乡群众过中秋都有吃月饼的习俗，俗话中有：“八月十五月正圆，中秋月饼香又甜。”月饼最初是用来祭师月神的祭品。月饼一词，最早见于南宋吴自牧的《孟良录》中，那是它也只是象菱花饼一样的食品。后来人们逐渐把中秋赏月与品尝月饼结合在一起，寓意家人团圆的象征。
2021年欢度中秋节优秀作文2今天是八月十五日，是什么日子呢?是中秋节!
中秋节可是我国传统节日呢!我要好好地过这个象征着团圆的佳节。
夜幕降临，在黑幕中一轮玉盘渐渐升起。啊!多么明亮的月亮，月亮映着一家团圆。
我和爸爸妈妈一起吃月饼，在中秋节里吃着月饼是多么甜蜜，滋润人的心田，月饼也像月亮一样，在中秋节里，是象征团圆。我们坐在桌边上吃着饭，这样真得很高兴，平时父母都是早出晚归，吃一顿饭要吃得很快，没有能一起说说话，聊一聊天。可今天不一样，平时不太搞笑的爸爸今天也开起了玩笑，还说笑话。吃完饭，我本想去赏月，但是妈妈说;“你还是先待会去吧，姥姥在家里，很孤独，你去打个电话，和姥姥说说话。”我和姥姥在聊天中，我听到姥姥笑得很高兴，如收到最好的礼物。
我和爸爸妈妈一起看月亮。今天的月亮比其它几个月出国的满月更亮更圆。许多诗人给这明月作诗，里面都含有对家人、对亲人的思念。对啊，每次见到这圆圆的月亮，都会想起亲人和家人，又想起自己的孤独，一种缺少爱的滋味，多么不好受。我觉得我是幸福的，也是幸运的。许多人因为工作忙，不能和家人团聚，只能仰望天上的明月。更可怜的是没有父母的孤儿，他们不明白，为什么中秋节我就不能与家人团聚。
这个团圆的中秋，给多少人带来幸福、美满的回忆，我真想把时间永远地停在那一刻。
2021年欢度中秋节优秀作文3中秋节，有许多的游戏活动，首先是玩花灯。中秋是我国三大灯节之一，过节要玩灯。当然，中秋没有像元宵节那样的大型灯会，玩灯主要只是在家庭、儿童之间进行的。
早在北宋《武林旧事》中，记载中秋夜节俗，就有‘将“一点红”灯放入江中漂流玩耍的活动。中秋玩花灯，多集中在南方。如前述的佛山秋色会上，就有各种各式的彩灯：芝麻灯、蛋壳灯、刨花灯、稻草灯、鱼鳞灯、谷壳灯、瓜籽灯及鸟兽花树灯等，令人赞叹。
在广州、香港等地，中秋夜要进行树中秋活动，树亦作竖，即将灯彩高竖起来之意。小孩子们在家长协助下用竹纸扎成兔仔灯、杨桃灯或正方形的灯，横挂在短竿中，再竖起于高杆上，高技起来，彩光闪耀，为中秋再添一景。孩子们多互相比赛，看谁竖得高，竖得多，灯彩最精巧。另外还有放天灯的，即孔明灯，用纸扎成大形的灯，灯下燃烛，热气上腾，使灯飞扬在空中，引人欢笑追逐。另外还有儿童手提的各式花灯在月下游嬉玩赏。
在广西南宁一带，除了以纸竹扎各式花灯让儿童玩耍外，还有很朴素的柚子灯、南瓜灯、桔子灯。所谓柚子灯，是将柚子掏空，刻出简单图案，穿上绳子，光芒淡雅。南瓜灯、桔子灯也是将瓤掏去而成。虽然朴素，但制作简易，很受欢迎，有些孩子还把柚子灯漂入池河水中作游戏。
广西有简单的户秋灯，是以六个竹篾圆圈扎成灯，外糊白纱纸。挂于祭月桌旁祭月用，也可给孩子们玩。
如今广西广东的不少地区，在中秋夜布置灯会，扎制用电灯照亮的大型现代灯彩，还有用塑料制成的各式新型花灯供儿童玩，但却少了一份旧时灯彩的纯朴之美。
另外南方还广泛流传着烧瓦子灯(或称烧花塔、烧瓦塔、烧番塔)的游戏，在江西、广东、广西等地都有流传。如《中华全国风俗志》卷五记：江西“中秋夜，一般孩子于野外拾瓦片，堆成一圆塔形，有多孔。黄昏时于明月下置木柴塔中烧之。俟瓦片烧红，再泼以煤油，火上加油，霎时四野火红，照耀如昼。直至夜深，无人观看，始行泼息，是名烧瓦子灯”。广东潮州的烧瓦塔，也是以砖瓦砌成空心塔，填入树枝烧起火来。同时还燃烟堆，就是将草柴堆成堆，在拜月结束后烧燃。而在广西边疆一带的烧番塔，亦类似这种活动，但民间传说是为了纪念清代抗法名将刘永福将逃入塔中的番鬼(法国侵略者)烧死的英勇战斗，颇有爱国的思想。福建晋江亦有“烧塔仔”的活动。
传说这种习俗与反抗元兵的义举有关。元朝确立后，对汉人进行了血腥的统治，于是汉人便进行不屈的反抗，各地相约中秋节起事，在宝塔的顶层点火为号。类似于峰火台点火起事，这种反抗虽被打压下去，却遗存了烧宝塔这一习俗。这个传说与中秋吃月饼的传说有异曲同工之妙。
2021年欢度中秋节优秀作文4提起中秋节，谁都知道，“八月十五中秋节”嘛。可我们舟山人过中秋节却在农历的八月十六日。那么，我们舟山人过中秋节的习俗是什么呢?吃月饼、赏月、和家人团聚……这些都已成为我们舟山人必不可少的习俗。
在八月十六这一天，多数人家的餐桌上都会有一碗传统小菜“芋艿鸭”。这是怎么一回事呢?传说在很早以前舟山人不知有芋艿，到后来食用芋艿，这中间与明爱国将领抗倭有关。明嘉靖三十二年八月十六，琼州参将俞大猷奉命在舟山围歼倭寇，不料在离舟山不远的海面上遭到袭击。
幸亏俞大猷指挥有方，将部队安全撤退到普陀山附近一个小岛驻扎，只是运粮船被倭寇劫走，吃饭成了问题，当时实行海禁，岛屿上居民已被强迫迁走，岛已变为荒岛，部队面临粮草断绝的困境。士兵们饿得发慌，遍地去找可吃之物，发现沼泽地里有种野生植物，根部长有球茎，于是便挖来煮着试吃。一吃味道很好，且又耐饥。俞大猷得知后发动大家都去采挖。就靠这种球茎，俞大猷的部队渡过了难关。所以俞大猷把这种不知名的食物取名为“遇难”。第二天，俞得到情报，那些枪粮的倭寇在普陀集结，设计水陆夹击大败倭寇，普陀山潮音洞畔到今留有纪念明将抗倭石刻，上镌“明嘉靖癸丑秋，副使李文进，参将俞大猷，都司刘恩至，督兵灭倭于此”字样。
舟山人过中秋都有吃月饼的习俗，俗话中有：“八月十五月正圆，中秋月饼香又甜”。月饼最初是用来祭奉月神的祭品，“月饼”一词，最早见于南宋吴自牧的《梦梁录》中，那时，它也只是象菱花饼一样的饼形食品。后来人们逐渐把中秋赏月与品尝月饼结合在一起，寓意家人团圆的象征。
中秋节的习俗很多，形式也各不相同，但都寄托着人们对生活无限的热爱和对美好生活的向往。
2021年欢度中秋节优秀作文5早晨，我从床上起来，看了一下日历，啊!今天既然是中秋节。我马上吃完了早饭坐在电视前，兴奋地看着中秋的节目……
晚上，我吃完饭，就和爸爸妈妈一块去阳台赏月。金灿灿的晚霞好迷人呀，有点像一只也来赏月的狼。我看着看着，这只狼慢慢变成了白狼，哈，原来是我等待已久的月亮升起来了。
我抬头仔细瞧着，一轮洁白无暇的明月悬挂在点点闪烁的夜空，此时，我不由得想起了李白写的一首诗：“小时不识月，呼作白玉盘。又疑瑶台镜，飞向青云端。”
那月光多轻柔，犹如轻纱般撒向人间;那月亮多可爱，犹如白玉让我们欣赏;那夜空多美，在月亮的衬托下，犹如人间仙境。你瞧，那月亮里灰暗的影子，不正是传说中的吴刚在桂花下乘凉吗?不远处，美丽的嫦娥姐姐怀里正抱着一只惹人喜爱的玉兔呢?
欢度中秋范文2
一年一度的促销大好机会"中秋节"即将到来,另外今年又和2011年一样,中秋节和国庆节相距甚近,对于商家来说,更具挑战意义.因此,能否搞好本次活动,对是否能达到整年度的销售目标等都显得尤为重要,同时抓住消费者的消费心理,在中秋,国庆期间,最大限度的提高人流量,提升人气,扩大商场的销售额,势必提高爱家各分店的市场占有率,增加iga的美誉度.
以下为本次活动的策划方案,以供参考:
二,活动主题:"喜迎国庆 欢度中秋"
三,活动时间:2011.09.05 — 2011.10.7
四,活动目的:
1)以"中秋节,国庆节"为契机,通过策划一系列活动,进一步宣传企业的整体形象,提高企业在顾客及供应商中的知名度和美誉度;
2)借助"中秋节","国庆节"等节日的到来,策划实施一系列大型促销活动,刺激消费群,吸引目标消费群及潜在的消费群,最大限度地扩大销售额;
3)通过策划一系活动,加深爱家超级广场与消费者的相互了解与情感沟通;
扩大企业知名度,进一步树立爱家"关爱社区居民 共建温馨家园"的社会形象.
五,活动对象:顾客,供应商,员工
六,活动广告语:
七,活动广告语:
1)喜迎国庆 欢度中秋
2)月圆中秋 情系iga
3)情满月圆 举国同庆
4)中秋佳节 iga浓您家乡情!
5)中秋合家欢 佳节大献礼
6)望月怀远 花好月圆
7)每逢佳节倍思亲 iga为您送温情
8)礼情款款 欢度佳节
9)热烈庆祝60周年!
10)爱是挚诚 家乃至亲
11)品质,服务,物有所值!
12)关爱社区居民 共建温馨家园
七,活动布置与宣传
(一)场内外布置
1,场外:
1)巨幅:各分店根据物业实际尺寸联系制作,内容为中秋节各项主题促销活动和全场月饼优惠大酬宾的信息;
2)展板:主要公布此次各项主题促销活动的所有内容,传达活动信息,吸引顾客;
3)橱窗玻璃:设计制作中秋节及国庆节的主题橱窗广告,增加节日的喜庆气氛;
4)大门口上方悬挂大红灯笼.
2,场内:
1)吊旗纸:设计制作以传统佳节"中秋节"及国庆节为主题的一款吊旗纸,烘托喜庆的节日气氛,美化卖场环境;
2)牌楼:采购部联系供应商提供赞助中秋牌楼,置于月饼一条街,突出月饼区域特色布置;
3)收银台布幔:收银台使用红色布幔布置,突出喜庆气氛;
4)手工吊旗纸:在卖场显眼的区域,制作各种主题促销内容的手工吊旗纸;
5)全场悬挂纸红灯笼布置卖场,制作"月饼一条街"宣传牌,突显传统的特色,美化购物环境;
6)根据卖场实际情况,适当设计制作一系列广告宣传牌,美化卖场,传达信息.
(二)活动宣传
1,海报4期:
第一期:中秋1期手招,时间9月3日—9月16日,a4,4p彩色;
第二期:劳保品百货周手招,时间9月10日—9月23日,a4,4p彩色;
第三期:中秋节2期手招,时间9月17日—9月30日,a3,12p彩色;
第四期:国庆节手招,时间9月24日—10月7日,a3,12p.
2,场内广播:商场内广播滚动式宣传中秋国庆的酬宾信息,刺激顾客的购买欲望,增加销售额.
3,堆头促销:场内特别推出 "月饼一条街","旅游食品一条街",并配上叫卖,方便顾客选购,刺激顾客消费,在场内形成热闹喜气的购物气氛.
4,人员广告:所有人员必须充分了解此次开展的促销活动,做好每一位顾客的活动解释工作;
《1》
5,报纸广告:6期.
6,电视广告:3期
八,活动内容
第一波:教师节 (2011年9月4日——9月10日)
1)桃李满园 师恩永存
活动时间:2011年9月10日
活动内容:为庆祝教师节的到来,答谢广大老师对人类社会作出的巨大贡献,
活动当天凡凭教师证和身份证即可到爱家服务台免费领取柚子一个,每人限领一份,送完即止.
2)教师节,爱家为您传情达意
活动时间:9月4日—9月7日
活动内容:活动期内,在爱家购物的学生,可免费获得祝福贺卡一张(您只要在卡片上写上您想对您的老师所说的话,iga将于9月9日前将您的祝福寄到您的老师处).每单 限送1张贺卡.(促销组负责购卡,邮寄)
第二波:中秋节 (2011年9月11日——9月28日)
3)中秋情满iga 购物即送"iga亲情电话卡"
活动时间:2011年9月11,12,17,18,19,24—28日(10天)
活动内容:也许您与亲人,朋友分别了几个月或者几年,中秋节到了,别忘给自己的亲人,朋友拨个电话问候一下.活动期间凡在我商场购物满38元的顾客朋友,均可凭购物电脑小票到商场服务台免费领取面值8元的"iga亲情电话卡"一张,每单限送两张,使用"iga亲情电话卡"可免费拨打长途电话,每天限量赠送,送完即止.
4)iga中秋灯谜会
活动时间:2011年9月27日,28日(两天)
活动内容:活动当天,凡在iga消费的顾客朋友凭电脑小票均可参加中秋猜灯谜的游戏,猜中者奖精美礼品一份!采购部负责落实猜迷礼品,促销部负责活动现场的布置与活动现场的组织.
5)浓情中秋 好礼相送
活动时间:2011年9月25日——28日(两天)
活动内容:
a,凡于9月25日,26日两天在我商场一次性购物满28元即送迷你月饼一个,每人每单限送1份(自制月饼,60克).
b,凡于9月27日,28日两天在我商场一次性购物满28元即送柚子一个,每人每单限送1份.
以上赠品每天限送200个,送完即止.
6)中秋月饼一条街
活动时间:2011年9月10日——9月28日
活动内容:活动期间推出以中秋月饼,补品,保健品,节日礼蓝等商品集中陈列,突出一条街的展示特色,以此营造喜庆的节日气氛,方便顾客选购.促销组负责做好"中秋月饼一条街"的布置与场内外的宣传,采购部与门店负责商品资料的落实与陈列.
7)大宗购物
活动时间:2011年9月10日——9月28日
活动内容:今年不制作八折卡,改做邮信的格式,不写明多少折,仅是提醒顾客凡到我商场大宗购物,与我们联系,可享受特别优惠.
第三波:国庆节 (2011年9月29日——10月7日)
8)"欢庆中秋,国庆 购物抽大奖" 送金月饼
活动时间:2011年9月10日——10月7日
活动内容:为回报广大顾客朋友,凡于活动期间在我商场一次性购物满18
元,均可凭电脑小票到商场顾客服务中心参与"购物抽奖中金月饼"活动,您仅需填写好您的姓名,联系方式,身份证号码,投入到抽奖箱内,即可有机会免费获得我商场送出的价值3000元的金月饼一个.
9)中秋国庆 爱家送大礼
活动时间:2011年9月17——9月30日
活动内容:在公司第四期促销手招(中秋2期手招,时间:9月24日—10月7日)封面上印刷中秋,国庆现金券,现金券面值10元,凡顾客拿到我们的手招,剪下现金券到我商场购物满100元可使用一张,直接省8元现金,购物满200元可使用两张,现金券不可兑换现金.『 2
10)买99元送30元现金
活动时间:2011年9月31日——10月7日(八天)
活动内容:为庆祝国庆节的到来,回报广大顾客朋友,活动期间,凡在iga购买服装,鞋类商品满99元即可返回30元现金,满198元可返回60元现金,多买多返,依此类推,欢迎广大顾客朋友前来选购.(注:此时刚好到了换季的时候,又正值国庆,顾客也为选择在哪里购买服装而忧郁不决的时候,吸引顾客,不让顾客外流,拉动人流,推动销售).
11)黄金周 旅游商品大展销
活动时间:2011年9月25日——10月7日
活动内容:活动期间推出以户外旅游小食,护肤品套装等为主的30款特价商品集中陈列,突出国庆旅游特价商品的优越性,促进销售.分部采购部与百货部负责落实旅游商品资料与陈列,促销部负责落实现场布置与场内外的宣传.
12)九州同庆国庆日
活动时间:10月1日至10月3日
活动内容:由采购部联系供应商到门店搞场外促销活动,活跃场内外气氛.
九,费用预算:(见附表)
十,活动操作:
1)活动总负责:iga
2)组成人员:各部门负责人
欢度中秋范文3
一、思维角度变化与空间转换特点（以经典图形为例）
（1）从透视、侧视到俯视、斜视。学生习惯于识读完整可透视且是侧视状态的地球经纬网图，实际教学中则需要进行多方位、多视角的经纬网识读训练，如图1所示。
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（2）从立体到平面。现实状态的地球运动图是立体、动感的，而表现在练习试卷上则往往是平面、静止的图像。正确进行二者之间的转化是学习地球运动必备能力之一，如图2所示。
（3）从整体到局部。通常教学过程中演示的是地球的整体，而命题者往往会选取地球经纬网的局部考查思维转换能力。在解答局部光照图时通常要把它放入整体的太阳光照图中去理解，如图3所示。
（4）由运动到静止。任何一幅地球光照图都反映地球在运动轨道上某一时刻某一点上的光照情况，把运动中的每一刻看作静止的图示来解答，同时又把静止的图片放入动态的公转与自转过程中理解，二者缺一不可。
（5）由中纬到高低纬。我国绝大多数地区位于北半球中纬度，很多光照实例都反映中纬度情况。在正确认识中纬度地区光照变化规律后，逐步引申尝试探讨理解低纬度（赤道附近）和高纬度（极地地区）太阳光照及其变化规律，真正实现知识迁移和灵活运用，如图4所示。
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（6）从理论到实际。化知识为能力、化理论为实践，能把所学知识在生活实践中进行验证，并能解释身边相关自然现象（如影子朝向、太阳高度、房屋走向、日出日落时间等），不仅是理解与掌握知识的体现，同时也能使理论基础不断加强，个人相关能力进一步提升。
【例1】从图5推测甲图所示地区所处的大致纬度是-----，该地正午时刻人影的朝向是----，乙图所示四个地区的大致纬度是甲----、乙----、丙----、丁----。
【例2】北京时间下午3时，某兴趣小组在本地借助太阳的位置用手表确定正南方向（表面朝上）。图6所示四种方法正确的是____。
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【例3】表1所示为6月22日三个地区日出日落时刻（表内为北京时间），判断三个地区所在经、纬度范围。
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二、地球光照教学突破方法
欢度中秋范文4
1. 月是故乡明,饼表思亲情! **中秋月饼
2. 传统风范,回味无限!**中秋月饼 3. 月色柔和的凉爽中秋. **中秋月饼
4. 十五团圆合家欢,中秋月饼话神仙! **月饼
5. 每逢佳节倍思亲,中秋之月大团圆! **月饼
6. 月是故乡明,**月饼表浓情! **月饼
7. 月圆中秋,人圆月下.xxxxx 月饼,送给你最真情的邂逅.
8. 佳节共赏天上月,中秋一品人间情. xxxxx 月饼,送给你最真情的中秋 .
9. 月圆全国,品尝甘旨.xxxx 月饼,你中秋的最好选择.
10. 一份好心情, 尽在品味中 .xxxxx 月饼,送给你最真情的人的生活品味!
11. 海角共此时 婵娟
12. 海上生明月 海角共此时
13. 中秋合家欢 佳节大献礼
14. 伴着一轮明月，就可以浪漫平生，嫡亲月饼——月亮代表你的心
15. 月是故乡明，情是亲人浓，一份嫡亲好礼转达永恒的祝福!
16. 中秋神州庆，帝牌催销风暴!
17. 双节连壁、喜庆回馈——民主国生日烛光里的中秋浓情
18. 喜迎国庆、欢度中秋
19. 平分秋天的景色——**月饼迎国庆催销勾当
21. 三喜临门——『贺中秋 『迎国庆 『**隆重开幕
22. “欢喜三重奏”--中秋国庆喜邂逅 小家大家共欢喜
23. 礼情款款 欢度佳节
24. 欢喜国庆欢喜颂 全堂彩礼乐翻天
25. 花好月圆夜的世界 中秋情浓意更浓
酒类中秋催销广告语：
1. 品华夏五千年干红，传华夏五千年文明
2. 中秋团圆金六福酒
3. 常饮劲酒，精力抖擞(劲酒)
超市中秋催销广告语：
1. 喜迎国庆 欢度中秋
2. 月圆中秋 情系 iga
3. 情满月圆 举国同庆
4. 中秋佳节 iga 浓您家乡情!
5. 中秋合家欢 佳节大献礼
6. 望月怀远 花好月圆夜
7. 每逢佳节倍思亲 iga 为您送温情
8. 礼情款款 欢度佳节
9. 同喜同贺中秋国庆，同欢同乐精彩华联
10. 名月贺中秋——出名的牌子月饼大联展
11. 欢喜在华联，情浓意更浓
欢度中秋范文5
【关键词】 葡萄球菌B型肠毒素
Screening inhibitor of Staphylococcal enterotoxin B from random circular 7mer peptide library displayed on phage
【Abstract】 AIM: To obtain the specific peptide which can bind with SEB and inhibit SEBs enterotoxin activity by panning from the random circular 7mer polypeptide libraries. METHODS: The affinity of peptide and the competitive activity of the synthetic peptide with that of antiSEB monoclonal antibody (McAb) were detected respectively by PhageELISA and competition ELISA. Animal experiment was performed to assess the suppressive effect of the screened peptide on the toxicity of SEB and its enterotoxin. RESULTS: The circular 7mer peptide obtained by panning suppressed the multiplication of spleen lymphocytes in mice. At the ratio of 160:1 (SEB: synthetic 7mers peptide)， the peptide protected the little cats from attack of enterotoxin and the survival rate of mice treated with the screened peptide was significantly higher compared with that of the control group. CONCLUSION: The obtained peptide specifically combines with SEB and suppresses its enterotoxin activity， which paves the way for the development of SEB inhibitors.
【Keywords】 staphylococcal enterotoxin B; peptide library; screening; inhibitor
【摘要】 目的： 拟通过生物淘选从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选出与葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B， SEB)结合并能抑制该毒素毒性效应的特异性短肽. 方法： 采用PhageELISA来鉴定所得目的肽的亲和性；利用竞争ELISA研究合成肽与SEB mAb竞争结合SEB的情况；通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况. 结果： 筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活；合成肽与SEB质量比160∶1下，合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性，并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用. 结论： 得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.
【关键词】 葡萄球菌B型肠毒素；肽库;筛选;抑制剂
0引言
葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B， SEB)［1］是超抗原(SAg)家族的主要成员之一，该毒素可以造成食物中毒，严重时甚至导致致死性休克. SEB中毒后缺乏特异的治疗手段，因此研究SEB的特异高效抑制剂具有重大的意义. 我们利用固相筛选方法，即以SEB作为亲和靶标蛋白，从环状7mer肽噬菌体文库中筛选到与SEB结合，并能抑制该毒素毒性效应的噬菌体克隆. 结果表明，所筛选环状7mer肽在细胞水平上可抑制SEB对小鼠脾细胞的激活，在整体动物水平上对SEB导致的毒性具有一定保护作用.
1材料和方法
1.1材料
环状7mer肽噬菌体文库( Random circular 7mers peptide library displayed on phage)为New England BioLabsInc产品; M13噬菌体单链DNA提取试剂盒为Qiagen公司产品； SEB单克隆抗体由本室保存; DGal(D半乳糖)为Sigma产品；抗M13噬菌体mAb、CM Sepharose FF为Amesham产品; BCA蛋白定量试剂为Pierce产品.乳猫BALB/C实验动物由军事医学科学院丰台实验中心提供并饲养.
1.2方法
随机肽库的扩增、定量按照所附试剂盒说明书进行；纯化按QIAprepM13 Handbook进行. 亲和靶标蛋白SEB的分离纯化与定量按文献［2］方法进行. 依据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应的多肽，由军事医学科学院六所合成， 并进行了多肽纯化和脱盐处理，合成多肽的纯度达95%以上. 将纯化的SEB与0.1 mol/L NaHCO3(pH 8.6)相混合， 制成质量浓度为1 g/ L的溶液，取100 μL混合液加于酶联条微孔进行包板固定，于4℃过夜；次日弃包被液后，加200 μL浓度为 50 g/L BSA于酶联孔中进行封闭，37℃结合2 h，间隙振荡；弃封闭液，取100 mL/L TBST液200 μL洗涤6次，间隔为5 min/次，然后将10 μL肽库原液加于含有100 μL TBST的酶联孔中，室温轻摇过夜;次日弃未结合的噬菌体，取100 ml/L TBST 200μL洗涤10次，间隔为3 min/次，最后加80 μL洗脱缓冲液，室温轻柔吹打10 min后，将洗脱得到的噬菌体转入微量离心管中，立即加入15 μL 1 mol/L TrisHCL(pH 9.1)进行中和. 将所得噬菌体进行感染、扩增、纯化后进行下一轮筛选. 在后续的筛选中TBST的浓度增为500 mL/L. 随机挑取第3轮噬菌体单克隆进行培养后进行PhageELISA分析及DNA序列测定. 将SEB包被酶联板，经30 g/L BSA封闭后加入培养好的单克隆上清，采用PhageELISA法检测SEB与噬菌体的结合情况. ssDNA的提取按照QIAprepM13 Handbook进行，纯化好的ssDNA送往上海博大基因公司进行序列测定.
1.2.1活性测定① 采用竞争抑制ELISA考察多肽与SEB的结合情况， SEB包被量为25 μg. 取100 g/L mAb 100 μL，分别与噬菌体单克隆上清200， 100， 50， 25， 0 μL，其中不足200 μL的以8.5 g/L NaCl补齐，然后加兔抗鼠抗体标记的HRP显色，A450 nm比色，观察竞争效果. 结果判断的依据为A值下降，说明多肽抑制了mAb的结合. ② 以鼠脾淋巴细胞为靶细胞，采用噻唑蓝（MTT）法评价合成肽对SEB超抗原的体外抑制活性.
1.2.2动物实验① 幼猫腹腔接种保护实验： 所用幼猫体质量约为450 g. 将纯化SEB 5 μg溶解于5 mL生理盐水，制成实验对照用液；合成肽与SEB按160∶1质量比进行混合用药. 实验用量为每只4 mL，在5 h内发生呕吐、腹泻者为阳性. 单纯使用SEB的组称为对照组，使用合成肽与SEB的组称为实验组. ② 合成肽对小鼠的保护实验［3］： 实验所用动物为体质量18~22 g的雌性BALB/c小鼠，随机分为4组，每组8只，分别为单纯使用SEB组、使用致敏剂D半乳糖（DGal）组、使用SEB+ DGal+synthetic 7mer peptide组与使用SEB+ DGal组. 合成肽与SEB的比例按照160∶1进行混合用药，SEB用量5 μg/鼠. 致敏剂D半乳糖（DGal）母液浓度为20 mg/鼠.
统计学处理： 应用SPSS统计软件，利用单样本t检验对单克隆原种亲和性进行分析， 合成肽对小鼠的保护抑制利用成组设计多样本比较的秩和检验进行分析，以P
2结果
将本室重组表达的蛋白进行CMFF离子交换层析. 纯化产物进行SDSPAGE分析，可获得高纯度的SEB(Fig 1)， 为证明噬菌体肽库淘选的有效性，即有富集现象出现，需计算每轮淘选产量，每次加入噬菌体数固定. 通过3轮淘选发现，随着淘选次数的增加，出现了富集，噬菌体环状7肽肽库第3轮比第一轮的产量高出1.375倍. 经过3轮亲和筛选，随机挑选14个分隔良好的单克隆制备原种，进行PhageELISA鉴定，以高出阴性对照5倍的单克隆作为阳性克隆，结果如Fig 2，其中15为阴性对照. 对噬菌体单克隆原种A450进行单样本t检验，t0.05/2（13）=2.160＜t=10.85， P＜0.05，相对于阴性对照A450，噬菌体单克隆原种A450具有显著性差异. 从以上结果可以看出，经过3轮筛选噬菌体得到了明显富集，可见亲和筛选的方法是有效的，已得到与SEB特异结合的短肽. 选取10个阳性克隆进行测序 ，推导出相应的氨基酸序列. 即为噬菌体外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合展示的环状7肽. 通过筛选得到的阳性克隆序列具有很好的一致性，均为CLPRQSSFC.
2结果
2.1合成肽对SEB超抗原作用的体外抑制活性合成多肽的纯度达实验要求，质谱分析测定的分子量与理论值相符，说明合成的多肽结构正确，合乎测试要求，可用于生物学活性的检测和评定. 将与SEB高亲和力的噬菌体单克隆原种培养上清做系列稀释，与SEB单抗进行竞争抑制ELISA实验，结果在一定稀释梯度内竞争抑制呈线性上升(Fig 3). 这说明筛选所得短肽与SEB结合位点与SEB mAb结合位点一致. 以鼠脾淋巴细胞为效应细胞，MTT法测试，SEB在低浓度下，合成的短肽抑制效果较为明显，随着SEB浓度的递增，这种抑制作用逐渐减弱（Fig 4）.
2.2动物实验结果幼猫腹腔接种后1 h左右，对照组出现呕吐、腹泻、精神萎靡、行走困难症状；18 h后，幼猫开始饮水进食，并恢复好动习性；而实验组则无上述症状的出现. 显示，合成肽可以保护幼猫免受SEB肠毒毒性攻击，证明筛选所得环状7肽有效. 为进一步证明肽的有效性，将合成的肽与SEB混合进行动物实验. 结果如Fig 5，秩和检验χ2=18.459， P＜0.05，可认为利用肽进行保护组存活率优于单纯使用DGal+SEB组，在用药后的10 h内，这种保护作用尤为明显，随着用药时间的延长，保护作用逐渐减弱. 结果证明，筛选所得肽在一定时间范围内对SEB具有明显的抑制作用.
3讨论
肽库技术是引入组合策略和模拟进化思想，建立起的一种筛选药物先导化合物的新方法. 从噬菌体表位随机肽库中筛选药物先导化合物，可以快速筛选生物活性肽，这一方法具有传统的药物筛选方法无法比拟的优越性［4］.
PhageELISA检测结果显示，单克隆原种多数A450 nm比阴性对照高出9~10倍，而一般认为高出阴性对照5倍即为阳性，且筛选得到的单克隆序列具有很好的一致性，因此以固相的SEB进行亲和筛选是成功的，这也与文献报道相符［5，6］. 利用SEB单抗进行竞争抑制，在一定浓度范围内，抑制效率基本呈线性关系，这就说明筛选得到的短肽与SEB的结合位点和单克隆抗体与SEB的结合位点重叠. 已有实验证明，SEB可促进脾淋巴细胞增殖［7］，而在本实验中，SEB的超抗原活性体外实验证明，在一定浓度范围内合成肽可以抑制脾淋巴细胞的增殖，这就间接证明合成肽对SEB具有较好的抑制作用，这也与文献报道相一致［8］. 幼猫腹腔实验显示，合成肽对SEB的肠毒活性有较强的抑制作用. 小鼠的致死实验表明，合成肽可以延缓小鼠死亡时间，表现出一定保护作用. 在用药的10 h内，保护组小鼠没有出现死亡，而实验组存活率仅为25%，但随着时间的延长，保护作用的减弱估计与合成短肽半衰期短，在体内不稳定，易受体内环境影响发生降解有关.
参考文献
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欢度中秋范文6
又是一年国庆节，花开一片片！国庆又逢中秋，我衷心祝福我心中的你心情愉快，开心的时刻永远都在。上帝赐给人类的爱是永恒的。
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