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表白的情书范文1
其实在很早之前我就想跟你写这封信了,但是一直没下定决心,没勇气写出来。今天,又是一年的光棍节,2012年的光棍节,突然有预感,如果我再不写的话可能就没机会写了,再不告诉你,恐怕就永远没机会告诉你我爱你的事实了。今天,无论你是怎么想的,无论你会做什么样的决定,我都要告诉你一个事实:我爱你,我要你当我的女朋友,将来成为我的新娘。
说起来,我要感谢上苍,是它让我遇见了你,并且与你相识、相知,与你相识是我这一生最幸运的事了。和你在一起的日子真的很开心,很轻松,可以把所有的烦心事抛开和你一起疯,我喜欢这种感觉。琳紫,请允许我这么称呼你,也许,我之前没这么叫过你,但是在我心中,却是天天这么叫你的,我想,以我们现在的关系,你应该不会介意的。琳紫,我这上周下了场大雪,很漂亮,可惜,你我相距千里,不能与你一通雪景,我记得,你是最喜欢雪的,以前在学校的时候,每次下雪,你都要找我去当摄影师,给你拍照,每次冻的脸都红扑扑的,却依然非常的开心,当时的我们,是无话不谈的铁磁,只把你当时的男朋友羡慕的要死,甚至还有被你男朋友威胁的事情,哈哈,想想都开心。
琳紫,我知道,现在你也是单身,你一个人在那陌生的城市,还习惯吗?虽然,我们经常通电话,发信息,聊QQ,但是,我还是想知道你的一切,我喜欢与你分享快乐,愿意与你分担烦恼,想来,我们也应该是最了解对方的人了。当初,你一次一次的恋爱,虽然当时我也鼻子酸酸,但是也是经常与你分享你的快乐;当你一次一次的失恋的时候,我也与你分担这份失恋的痛苦,我多次想要去把那个男生狠狠揍一顿的冲动。等到毕业出来工作以后,你去了南方,而我到了北方,也学会了追求女孩的话好多句了,这样,我们相距千里,每天用通讯工具保持联系,但是,思念之情,却越来越浓,我想把现在的工作辞了,去南方你那个城市,可是却不知道你是怎么想的,怕你不同意,怕你说我荒废前途,所以一直憋在心里。
今天,我们着虽然温度不高,不过,下午的太阳很暖和,我附近的一个草坪上趟了一下午,享受这冬日里这太阳给我带来的温暖。同时,下午我也想了很多事情,有过去的,有现在的,也有将来的。真的很怀念过去我们在一起的时光,那个时候我们无忧无虑,全凭心情做事,一想到,当初有几个追求你的男生,被你我耍的团团转的时候的表情就想笑,当然,那是我装成是你哥哥,每次陪你去应那些家伙的约会,结果我都想办法把约会给搞砸,哈哈。今天,我在想,我如果现在直接把工作辞了,去南方,去找你,你会不会生我气,会不会不理我,这也是今天我写这封信的其中一个小小的原因,所以我要先得到你的允许。
琳紫,我现在要问你一个非常重要的问题,你要非常认真的回答我。我们相遇、相识、相知这么多年,你除了把我当知心朋友,知己,铁铁磁之外,有没有一点男女之间的感情?说实话,我心里有一点点的底,只是没得到你亲口承认之前,我不敢太自以为是,一厢情愿。不过,我现在很明确,我爱你,在毕业之前,我就爱上你了,只是当时没有发现,原来我们分开之后,我会这么想念你,也许是当时我们每天都在一起,没有发现,原来我已经爱上你了,如果你也有这种感觉,我希望你看到这封信之后能够给我回复,或者我一点暗示。
表白的情书范文2
也许曾有人这样叫你,你也这样称呼某些人,但总觉得还是我这样叫你最安心。因为你不用担心这样的称呼会带给你哪些沉重的压力或负担,至少在这个世界上,只有我最靠近你,只有我知道你真正的感受。你快乐我会想笑,你难过我会想哭。
那天,我打开一个网页,看到一个主题为“遇见十年前的自己,你会对她说什么”的论坛。这时,我仿佛看到你这个笨小孩坐在我面前,感触良多,有很多话想对你说。
记得十年前的自己是一个小学生,却是一个很倔强的小孩。蝴蝶形的风筝断了翅膀,失去平衡飞不起来,自己却拉着它一直跑,以为只要努力就会有奇迹出现。直到自己累到跑不下去,失望变成绝望,才放开手,难过到哭了。如果我遇见十年前的自己,我一定会告诉她,有些事情不是你努力就可以做到,自己不能随随便便地失望、绝望,因为那只是一个事实,与能力无关。
表白的情书范文3
夏天,又到夏天,难以忘记那年夏天,你浅色的披肩,淡妆素颜,长裤短衫,渐行渐远,余下清香淡淡,夏天使麦子成熟,你使我成熟,夏天逝去了,青春不再了,前程渺茫了,只有你让我刻骨铭心,我的初恋情人,夏天到了,祝你好运!
春的影子还未走远,夏的歌谣欢声震天,你的名字刻骨铭嵌,我的爱情可比金坚。夏日临前,倍加思念,短信来电,寄托爱恋。宝贝,我爱你一万年!
聪明的女孩渴望爱情,却比一般女孩多一分冷静和理智,她不会为了恋爱而恋爱,她要的是一个爱她的同样值得她去爱的男人,她对自己的感情负责,也对别人的感情负责。她不会去计较你送的礼物有多贵重,更不会不依不挠的让你为他买昂贵的东西,因为她爱的是你的人,而不是你的钱,她的爱情是纯粹而简单的。
世界那么大,爱上一个人那么容易,被爱也那么容易,但要互相相爱,竟这么难。当自己最爱的人和最爱自己的人是同一个人的时候,那么你就是世界上最幸福的人。
女人 你不知道你有多么珍贵:你若不相信时光,那么首先被时光辜负的就是你自己。一生中最好的年龄是,那一天,你终于知道并且坚信自己有多好,不是虚张,不是夸浮,不是众人捧,是内心明明澈澈知道:是的,我就是这么好。
宝贝,听我说:纵使你失去全世界,你还有我,纵使没有人喜欢你,我还是会喜欢你,我还会不离不弃地在你身边,给你依靠。你要记得,哪怕全世界已经没有人当你的宝贝,你还是我的宝贝,还是我王国里的公主。所以抓住我的手,跟着我的脚步。宝贝,别人放开你的手,可是我永远不会放开。所以,放心跟我走。
最宝贵的东西不是你拥有的物质,而是陪伴在你身边的人。不能强迫别人来爱自己,只能努力让自己成为值得爱的人,其余的事情则靠缘分。
多少人在说,我会等你,等你回心转意的那一天;我会等你,等你愿意和我在一起的那一天;我会等你,等你离开那个人来到我身边的那一天;我会等你,等你……然而人们可曾知道,世上的爱情,没有几份真的经得起等待!
在爱情没开始以前,你永远想象不出会那样地爱一个人;在爱情没结束以前,你永远想象不出那样的爱也会消失;在爱情被忘却以前,你永远想象不出那样刻骨铭心的爱也会只留淡淡痕迹;在爱情重新开始以前,你永远想象不出还能再一次找到那样的爱情。
人一定要旅行,尤其是女孩子。一个女孩子见识很重要,你见的多了,自然就会心胸豁达,视野宽广,会影响到你对很多事情的看法。旅行让人见多识广,对女孩子来说更是如此,它会让自己更有信心,不会在物质世界里迷失方向。
初识时,他给她的第一份礼物是价值不菲的LV包;热恋时,他给她的礼物是一栋豪华奢侈的别墅;订婚时,他生意失败一贫如洗,给不起任何礼物。摸着手中屈指可数的一角硬币,他说:对不起!我给不了你幸福了。她摇摇头,轻轻掰开他的大手:虽然只有一角,可这是“十分”了。
“我爱你”的含义是:无论贫穷,富贵,生老,病死,天灾,人祸我都不离弃的爱你。当你说出这表白情书大全三个字的时候,你是否有足够的勇气和顽强的毅力去承受他的人生。爱,不要轻易说出口。
我想要一套小房子,能做你的小妻子,一起提着菜篮子,穿过门前的小巷子,饭后用不着你洗盘子,可你得负责抹桌子,再要个胖胖的小孩子,可爱得就像小丸子,等你长出了白胡子,坐在家中老椅子,可会记得这好日子,和我美丽的花裙子。
有一种火热的季节是夏季,有一句温暖的话语很甜蜜,有一个古老的故事很神奇,有一位深爱的姑娘就是你。夏日凉风习习,爱你永世不移!
表白的情书范文4
【摘要】 目的 探讨清热燥湿方对细菌脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制因子(TIMP-2)基因表达的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS模型组、地塞米松组和清热燥湿方组,每组再分为4 h和8 h两个亚组。分别用地塞米松和清热燥湿方在LPS诱导ALI模型前预处理大鼠,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织MMP-2及TIMP-2 mRNA表达。结果 与模型组相比,4 h清热燥湿方组MMP-2 mRNA表达明显降低(P
【关键词】 清热燥湿方;急性肺损伤;细菌脂多糖;基质金属蛋白酶2;基质金属蛋白酶2抑制因子;大鼠
Abstract:Objective To investigate the effects of Qingrezaoshi decoction on the expression of MMP-2 and their mRNA (MMP-2 mRNA), tissue inhibitor of MMP-2 and its mRNA (TIMP-2 mRNA) in the rats with acute lung injury (ALI) caused by LPS. Methods Forty male Wistar rats were randomly pided into 4 groups:normal control group, LPS model group, dexamethasone group and Qingrezaoshi decoction group. Each group had two subgroups, 4 h and 8 h after LPS injection. All rats, except normal control group, were administrated with LPS by intravenous injection to induce ALI. The rats in dexamethasone group and Qingrezaoshi decoction group were treated by dexamethasone (oral) and Qingrezaoshi decoction (oral) respectively before LPS-induced ALI. The expression of MMP-2 and TIMP-2 were measured by immunohistochemistry ABC, and their mRNAs were measured by real-time fluorescent PCR, while the histopathology of the lung injury was observed by light microscope. Results In 4 h Qingrezaoshi decoction group, the expression of MMP-2 mRNA was significantly decreased while the expression of TIMP-2 protein and its mRNA were significantly increased compared with model group (P
Key words:Qingrezaoshi decoction;acute lung injury;lipopolysaccharide;MMP-2;TIMP-2;rats
在急性肺损伤(ALI)的发病过程中,细胞外基质(ECM)的降解是一个关键问题,许多蛋白酶参与了这一过程。研究表明,基质金属蛋白酶(MMPs),特别是MMP-2及其抑制因子(TIMPs)在实验性ALI和临床患者中起了重要作用[1]。因而研究MMPs及TIMPs对于防治ALI及急性呼吸窘迫综合征(ARDS)具有重要价值。先前的研究表明,清热燥湿方对内毒素休克肺有保护作用,其机制可能与其调控肺组织核子-κB p65 (NF-κB p65)蛋白表达有关[2]。在此基础上,本研究观察了清热燥湿方对ALI大鼠肺组织形态及肺组织MMP-2及TIMP-2 mRNA表达的影响,旨在寻求治疗ALI的有效方法并初步探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
清洁级Wistar雄性大鼠40只,体重(220±20)g,上海中医药大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(沪)2007-005。
1.2 试剂及药物
大肠杆菌脂多糖(LPS O111B4)购自美国Sigma公司。大鼠MMP-2和TIMP-2免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠MMP-2、TIMP-2和GAPDH引物和探针序列由广州达辉生物技术有限公司合成。MMP-2上游引物:5’-CCC ATG AAG CCT TGT TTA CCA-3’,下游引物:5’-TGG AAG CGG AAC GGA AAC T-3’,探针序列:5’-TGGCAATGCTGATGGACAGCC–3’,5’端FAM修饰,3’端Tamra修饰;TIMP-2上游引物:5’-CTC ATC GCG GGC CGT TTA AG-3,下游引物:5’-GAA GGC TTC GGG TCA TCG AG -3’,探针序列:5’-CATGGAGAGCCTCTGTGGAT-3’,5’端FAM修饰,3’端Tamra修饰;GAPDH上游引物:5’-CCG AGG GCC CAC TAA AGG -3,下游引物:5’-GCT GTT GAA GTC ACA GGA GAC AA-3,探针序列:5’-CATCCTGGGCTACACTGAGGACCA-3,5’端FAM修饰,3’端Tamra修饰。Trizol总RNA提取试剂、反转录和PCR扩增所需的酶及其他试剂均购自美国Invitrogen公司。清热燥湿方由厚朴、草果、黄芩、柴胡等中药按一定比例组成,浓缩成1 g原药材/mL的水煎液,高温高压灭菌,4 ℃冷藏备用。中药饮片均购自上海曙光医院东院,地塞米松片购自上海医药有限公司信谊制药总厂。
1.3 分组、造模及给药
大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、地塞米松组(C组)、清热燥湿方组(D组)。每组再分为4 h和8 h 2个亚组。除正常对照组外,其余各组大鼠均经尾静脉注射10 mg/kg的细菌脂多糖(LPS)复制ALI模型,其中C组、D组在造模前以相应药液灌胃3 d,2次/d,第3日灌胃后3 h,经尾静脉注入LPS(10 mg/kg)。A组和B组在相应的时间点给予等体积的蒸馏水,各组动物用药量按人与动物的体表面积换算,地塞米松灌胃量为0.45 mg/kg,清热燥湿方灌胃量为6.48 g原药材/kg。所有动物均于设定的相应时相点,用25%乌拉坦1.0 g/kg腹腔麻醉,开胸分离右肺上叶,10%甲醛溶液固定,用于病理检测及肺组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达检测;右肺下叶置于液氮罐中作MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA表达检测。
1.4 观察指标及检测方法
1.4.1 免疫组织化学ABC法检测 采用IMS细胞图像分析系统医学图像分析软件,对免疫组织化学结果进行图像采集和定量分析。每张切片在高倍镜下随机选择不相重叠的3个视野,细胞核为蓝色,MMP-2和TIMP-2阳性细胞为棕黄色。计算出每例样本的蛋白染色阳性面积率(蛋白染色阳性面积率=阳性细胞面积/总面积)作为比较参数。
1.4.2 实时荧光定量PCR检测 按Trizol法提取总RNA后,反转录合成cDNA,在20 ?L的反应体系中分别加入样本RNA 2 ?g,RT buffer(5×)4 ?L,10 mmol dNTPs 1 ?L,N9随机引物1 ?L,反转录酶MMLV 1 ?L,RNA酶抑制剂1 ?L,0.1 mol/L DTT 2 ?L,加DEPC处理水到20 ?L,混匀后于下列温度反应:37 ℃ 1 h, 95 ℃ 5 min,灭活MMLV,产物即为cDNA。PCR扩增:在50 ?L反应体系中加入cDNA 5 ?L,ddH2O水32 ?L,PCR buffer(5×) 10 ?L,荧光探针0.5 ?L,Taq DNA聚合酶1 ?L,dNTPs 0.5 ?L, MMP-2和TIMP-2上下游引物各0.5 ?L;扩增条件:①93 ℃,2 min。②93 ℃,45 s;55 ℃,1 min,10 Cycle。③93 ℃,30 s;55 ℃,
45 s,30 Cycle。扩增产物分析:数据采用仪器自带软件ABI Prism 7300 SDS Software分析。MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA表达水平以其与GAPDH的相对表达量计算。
1.4.3 肺组织病理学观察 常规HE染色,光镜观察。
1.5 统计学方法
计量数据以—(—数)±s表示,组间差异采用SPSS13.0统计软件中ANOVA进行统计学分析,P
2 结果
2.1 大鼠肺组织基质金属蛋白酶2及其抑制因子蛋白表达(见表1)表1 各组大鼠肺组织MMP-2、TIMP-2蛋白染色阳性面积率比较(—(—染)±s)P
2.2 大鼠肺组织基质金属蛋白酶2及其抑制因子基因表达(见表2) 表2 各组大鼠肺组织MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA表达比较(—(—比)±s,×10-4)
2.3 各组大鼠肺组织病理形态观察
光镜观察:A组大鼠肺泡结构清晰,肺泡壁薄,肺泡内未见水肿液,肺间质无炎细胞浸润。B组大鼠肺泡腔内充满炎性渗出物和出血,肺泡壁毛细血管扩张充血,细支气管黏膜上皮损伤部分脱落,管壁上大量淋巴细胞浸润,管壁增厚,可见肺不张、肺气肿。C组和D组局部肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡腔内见红细胞和少量渗出物。
3 讨论
MMPs是由许多主要降解ECM各种组分的酶构成的一个大家族,MMPs能特异性降解变性胶原、基底膜Ⅳ型胶原及弹性蛋白,它们通过破坏基底膜、促进炎症过程中有关细胞的迁移以及ECM重建,在ALI的发病过程中发挥重要作用。临床上在ARDS患者肺组织中同样发现了严重的基底膜破损[3],因而, MMPs的过度产生及活化使肺泡毛细血管屏障的通透性明显增加,从而引起肺水肿及严重的炎症反应。有研究表明,MMP-2和MMP-9通过降解基底膜的主要组分Ⅳ型胶原,从而在细胞周围基底膜转变及重塑中起重要作用[4]。
TIMPs是MMPs的主要内源性抑制因子,广泛分布于组织和体液中,共价结合MMPs而抑制其活性。研究表明,MMP-2和TIMP-2的相对浓度决定了MMP-2对胶原降解的能力。MMP-2表达和活性受TIMP-2影响,二者活性平衡对维持ECM稳态具有重要意义。MMPs和TIMPs的平衡被破坏时,肺泡上皮基底膜被破坏之后可导致肺泡上皮细胞受损,富含蛋白和蛋白酶的水肿液充满肺泡,使表面活性物质灭亡。此外,基底膜完整性受到破坏后,各种损伤因子易于进入肺间质和肺泡腔,加重肺间质和实质损伤,进而引起肺功能障碍,导致肺泡萎陷和顽固性低氧血症[5]。
本实验结果表明,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,提示造模成功。与正常组比较,模型组大鼠肺组织MMP-2蛋白及其mRNA明显升高,TIMP-2蛋白及其mRNA明显降低,提示ALI的病理变化与MMP-2和TIMP-2表达的平衡失调有关。用清热燥湿方预处理大鼠,能使LPS诱导的ALI肺组织水肿、出血等损伤程度明显减轻。与模型组相比,清热燥湿方组4 h MMP-2 mRNA表达明显降低(P
参考文献
[1] 杜 悦,蔡栩栩,吴玉斌,等.内毒素对新生大鼠肺组织金属基质蛋白酶2及其抑制因子2表达影响的研究[J].中国围产医学杂志,2004,7(6):356.
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[3] Torii K, Iida K, M iyazaki Y, et a1. Higher concentrations of matrix metalloproteinases in bronchoalveolar lavage fluid of patients with adult respiratory distress syndrome[J]. Am J Respir Crit Care Med,1997,155(1):43-46.
表白的情书范文5
【关键词】 热证/中药疗法
摘要:【目的】探讨清热复方对大鼠热休克蛋白70(HSP70)表达的调控作用。【方法】将70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组,每组10只。采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70 mRNA表达的检测,观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤分别对两种模型大鼠肝、肺组织HSP70 mRNA表达的影响。【结果】热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70 mRNA的表达高于正常对照组(P<005);热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组(P<005);内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70 mRNA表达以及与正常对照组相比均无显著性差异(P>005)。【结论】提示不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达不一致,清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加,从而提高细胞的耐受力,避免细胞组织的损伤。
关键词:热证/中药疗法;白虎汤/药理学; 黄连解毒汤/药理学;
热休克蛋白70;疾病模型,动物
生物体在高温或其他因素刺激下会诱导基因开放而合成一组新的蛋白质―热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)。许多研究证实整体动物的热处理可预防随后的心、脑、肺、视网膜等损伤,并认为全身热处理对这些器官的保护作用与HSPs的表达有关[1]。HSPs作为分子伴侣,在维持细胞的正常形态及功能中起着重要作用,参与其他蛋白质的折叠、转运、合成等过程,与细胞内的其他肽类蛋白质结合,参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程,其在多种疾病过程中的重要作用已经被大量证据证实。本研究主要采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)观察白虎汤和黄连解毒汤对热休克、内毒素两种大鼠热证模型的HSP70基因表达的调控,以探讨清热解毒中药对HSP70表达的影响。
1 材料与方法
11 研究对象
清洁级健康雄性SD大鼠70只,体重(200±10)g,由中山医科大学实验动物中心提供,动物合格证号:2696001。
12 药物与试剂
药物:白虎汤(石膏30g、粳米9g、知母9g、甘草3g),每剂水煎浓缩至50mL,相当于生药1g/mL;黄连解毒汤(黄连9g、黄芩6g、黄柏6g、栀子9g),每剂水煎浓缩至30mL,相当于生药1g/mL,4℃保存备用。
主要试剂:总RNA提取试剂盒和逆转录PCR反应试剂盒(大连宝生物工程有限公司提供);RTPCR引物(Canada,Stress Gen Corp,STM507);βaction引物(上海生工生物工程公司提供);DL2000 DNA Marker(大连宝生物工程有限公司提供)。
13 主要仪器
TGL16G型台式高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);DNA/RNA纯度检测仪(Gene Quant American Pharmacia Biotech Corp);PE9600型PCR扩增仪(American Perkin Corp);EDAS120电泳凝胶图象分析系统(American Kodak Corp)。
14 动物分组及处理
70只雄性SD大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组、正常对照组7组,每组10只。
141 热休克组大鼠模型的制备与处理
将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg),1h后进行第2次灌胃,再经1h将大鼠置恒温烤箱中进行热休克处理,参考Cruiie方法[2],温度控制在约55℃,测量大鼠肛温达到42℃,维持10~15min,密切观察大鼠动态,大鼠出现烦躁、乱窜动、毛发竖立、爪底湿润后,断头处死,取肺、肝组织备用。
142 内毒素组大鼠模型的制备与处理
将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg),1h后于尾静脉注射内毒素(15mg/kg),1h后再重复灌胃,3h后观察大鼠出现烦躁、乱窜动后,断头处死,取肺、肝组织备用。
143 正常对照组
生理盐水灌胃,不经其他任何处理,断头处死,取其肝、肺组织备用。
15 实验方法
采用RTPCR法检测各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA的表达。
βaction引物序列:Sense Primer 5′ ACCACAGTCCATGCCATCAC 3′;Antisense Primer 5′ TCCACCACCCTGTTGCTGTA 3′。
HSP70引物序列:Sense Primer 5′ CTCCAGCATCCGACAAGAAGC 3′;Antisense Primer 5′ ACGGTGTTGTGGGGGTTCAGG 3′。
βaction扩增片段长度为450个碱基对(base pair,bp),HSP70扩增片段长度为234bp。
RTPCR反应体系组成:MgCl2 60μL,10×RNA PCR Buffer 80μL,TaKaRa LA Taq05μL,HSP70上下游引物各1μL,βaction上下游引物各1μL,Rnase Free dH2O 615μL,总反应体积为80μL。PCR扩增反应条件为:前预变性94℃ 2min,1个循环;95℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸30s,共28个循环;后延伸15min。取出反应液约10μL,在2%琼脂糖凝胶上电泳,溴乙锭染色,将电泳结果置于EDAS120电泳凝胶图象分析系统内扫描并摄片。采用Gelbase电脑软件对HSP70 DNA与βaction DNA条带进行光密度扫描,计算HSP70 DNA和βaction DNA吸收峰面积之比,即D值,以此估计HSP70 mRNA的表达情况。
16 统计学处理
用SPSS100软件进行多组间两两比较。
2 结果
各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA转录水平的比较结果见表1。表1 各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA转录水平(略)
结果显示,热休克各组与内毒素各组大鼠的肝、肺组织中HSP70 mRNA表达不同,热休克各组HSP70 mRNA表达均比正常对照组高(均P<005),而内毒素各组的表达与正常对照组相比均无显著性差异(P>005)。说明热刺激(热休克)比致热源更容易刺激细胞组织合成热休克蛋白,从而增加对组织细胞的耐热性和保护作用。热休克加白虎汤组及热休克加黄连解毒汤组的HSP70 mRNA的表达高于热休克模型组(P<005);热休克加黄连解毒汤组大鼠在肝、肺组织中HSP70的表达与热休克加白虎汤组相比有显著性差异(P<005)。表明白虎汤和黄连解毒汤均能诱导HSP70表达的增加,从而增强对肝、肺组织的保护作用。相比之下,白虎汤较黄连解毒汤在肝、肺组织中更能诱导HSP70的表达。内毒素模型各组HSP70的表达与对照组相比差异无显著性(P>005),内毒素模型各组之间HSP70的表达亦无显著性差异(P>005)。表明给大鼠静脉注射内毒素不能诱导HSP70表达的增加,中药清热复方亦不能诱导内毒素模型组中HSP70表达的增多,提示内毒素导致的炎性发热不能刺激组织细胞合成对细胞有保护作用的HSP70。
3 讨论
一切生物在受到高温、缺氧、感染、创伤及乙醇等因素的刺激时,会发生细胞应答反应,其共同特点是产生一组具有生物活性的蛋白――热休克蛋白。HSPs是一组高度保守的伴随细胞蛋白,可使细胞非特异性抗损伤能力增加,能对抗更为严重的应激损伤。HSPs与一些基本的细胞功能有关,如蛋白转运、折叠和装配,是存在于细胞内的一种主要“分子伴侣”,在维持组织细胞的自身稳定和环境适应性方面有重要作用,对细胞抗御外界损伤具有保护作用,在生理和应激条件下均能表达。据报道,热休克时细胞中许多编码正常功能蛋白质的基因关闭,使大部分蛋白质的合成受抑制,而热休克基因被开启,HSPs合成增加[3]。自20世纪70年代以来,按照分子量的大小HSPs有HSP90、HSP70、HSP60及小分子HSP等家族,其中HSP70是目前国内外研究较多的,也是最重要的一类热休克蛋白。
目前认为HSP70有多种功能,是一种非特异性保护蛋白,人体在高温及各种有害因素刺激下,HSP70合成明显增加,以提高机体耐热和抗病毒能力,其广泛的生理和病理作用已成为当今生命科学研究的热点[4]。王燕如等[5]采用Western印迹法发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞(PAMs)中HSP70 mRNA表达增多,且获得抵抗H2O2损伤的能力;用放射菌酮和放射菌素D分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克基因的表达,能取消热休克对H2O2所致PAMs损伤的保护作用。李国成等[6]发现其自制健脾益气方能诱导大鼠提高HSPs的表达,防止胃粘膜损伤,促进溃疡的愈合,认为HSPs可能介导胃粘膜防御。
本研究结果表明,不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达是不一致的,热休克反应更类似中医所说的“阳明气分热盛证”,其表达的增强是细胞保护作用的体现,而白虎汤诱导其表达的进一步增强,一方面从HSP70的角度阐明了白虎汤对“实热证”的治疗效应;另一方面更证实了中医辨证论治的正确性。
参考文献:
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表白的情书范文6
929用来表白的意思是:久爱久,即象征天长地久。类似的还有520,代表我爱你。
表白或称告白,意为向他人表示自己的想法或心意,特指表达爱意,又称示爱,在这种情况下通常被认为是建立恋爱关系的方式。表白可以通过各种方式,如当面表达,写情书,打电话,网络即时通讯,送礼物如送花等。除了这些比较传统的表白方式之外,还有人为了追求创意,而创造出很多另类的表白方法。
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