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纳米微粒范文1
[关键词] 表阿霉素；聚电解质复合法；载药纳米微粒；肝癌；血管内皮生长因子；靶向给药
[中图分类号] R735.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（c）-0021-03
目前原发性肝癌的治疗是以手术为主的综合治疗，但总的手术切除率仅有20%～30%，且术后2年复发率高达50%[1]，因此化疗依然是肝癌治疗重要的辅助手段。为提高传统化疗药物的疗效并减少其毒副作用，靶向给药日益成为治疗肝癌的有效方法，而单克隆抗体和载药纳米微粒则是当前研究的热点[2-4]。笔者在前期研究中选择生物相容性好、可生物降解的天然高分子材料海藻酸钠和阳离子瓜尔胶，利用聚电解质复合法制成具有良好缓释性能的载表阿霉素纳米微粒（E-ADM-NPs）[5]。本研究将进一步探讨E-ADM-NPs与抗VEGFR2单克隆抗体的交联，并观察交联物（E-ADM-Ab-NPs）对荷人肝癌裸鼠模型的抗肿瘤作用，以期用于原发性肝癌的靶向治疗。
1 材料与方法
1.1 试剂与动物
海藻酸钠（温州东升试剂厂）；阳离子瓜尔胶（美国Economy公司）；盐酸表阿霉素（法玛西亚有限公司）；抗VEGFR2单克隆抗体（美国Biodesign公司）；碳化二亚胺（EDC）（美国Pierce公司）；人肝癌Bel 7402细胞株（由中科院上海细胞生物研究所提供）；三级BALB/c裸鼠（由中山大学医学动物实验中心提供）。
1.2 E-ADM-Ab-NPs的制备及抗体活性的检测
依据文献方法[5]，利用聚电解质复合法制备E-ADM-NPs和未载药NPs。称取10 mg E-ADM-NPs和2 mg抗VEGFR2单抗溶于pH值7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中，缓慢加入5 mg EDC，4℃条件下搅拌2 h而后静置过夜。将所得溶液离心后用蒸馏水洗涤3遍，冷冻干燥即可制得E-ADM-Ab-NPs。依法制备未载药Ab-NPs，参考文献[6]利用酶联免疫测定法（ELISA）对E-ADM-Ab-NPs和未载药Ab-NPs中抗VEGFR2单抗的活性进行检测。
1.3 荷人肝癌裸鼠模型的建立
取对数生长期的人肝癌Bel 7402细胞，用含15%小牛血清的PRMI 1640培养液按1×107/mL的浓度配成细胞悬液供皮下接种。取一定数量4～6周龄的三级BALB/c裸鼠，分别于右侧肩胛部皮下种植0.1 mL细胞悬液，饲养2周后选择生长良好、皮下肿瘤直径0.5～0.7 cm的裸鼠用于肿瘤治疗试验，饲养6周后选择生长良好、皮下肿瘤直径约1.0～1.2 cm的裸鼠用于药物的组织分布试验。
1.4 E-ADM-Ab-NPs在荷瘤裸鼠体内的分布
取体重为（20±2）g/只的荷人肝癌裸鼠12只（雌雄各半），随机分为E-ADM-Ab-NPs组和E-ADM-NPs组，两组按含E-ADM 5 mg/kg的剂量分别经尾静脉注射E-ADM-Ab-NPs及E-ADM-NPs。每只裸鼠给药后1 h经眼静脉窦取血1.0 mL作样品，然后断颈处死裸鼠，手术分别取出肿瘤、心脏、肝脏、肾脏等组织作样品。利用高效液相色谱法（HPLC）检测荷人肝癌裸鼠组织和血液中E-ADM的浓度。
1.5 E-ADM-Ab-NPs在荷瘤裸鼠体内的抑瘤试验
取体重为（18±2）g/只的荷人肝癌裸鼠48只（雌雄各半），随机分为8组，每组6只。A组：E-ADM-Ab-NPs组；B组：E-ADM-NPs组；C组：Ab-NPs组；D组：E-ADM原药加抗VEGFR2单抗组；E组：E-ADM原药组；F组：抗VEGFR2单抗组；G组：未载药NPs组；H组：空白对照组。各组制剂分别溶于生理盐水中，按E-ADM每次10 mg/kg、抗VEGFR2单抗每次0.1 mg/kg的剂量经荷瘤裸鼠尾静脉注射，空白对照组注射生理盐水，每隔2天给药1次，共5次。于治疗第11天断颈处死裸鼠，取血清检测谷丙转氨酶、肌酐及白细胞计数。完整剥离瘤体测量长径及短径并称重，用体积=（长径×短径2）/2计算肿瘤体积，观察瘤体积抑制率及瘤重抑制率。瘤体积抑制率=[（对照组平均瘤体积-实验组平均瘤体积）/对照组平均瘤体积]×100%，瘤重抑制率=[（对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/对照组平均瘤重]×100%。
1.6 统计学方法
采用SPSS 11.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，采用t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 E-ADM-Ab-NPs的抗体活性
ELISA法检测表明，E-ADM-Ab-NPs浓度稀释至1∶1600时，其抗体仍表现出对靶抗原良好的免疫结合活性，其效价与游离抗VEGFR2单抗基本相当。
2.2 E-ADM-Ab-NPs在荷瘤裸鼠体内的分布
E-ADM-Ab-NPs组肿瘤组织中的E-ADM浓度为（31.85±4.78）mg/kg，其显著高于E-ADM-NPs组（P < 0.05），而血液、心脏、肝脏、肾脏等组织中的E-ADM浓度分别为（5.21±0.49）mg/L、（4.40±0.33）mg/kg、（3.14±0.27）mg/kg、（2.38±0.39）mg/kg，均显著低于E-ADM-NPs组（P < 0.05），见表1。
2.3 E-ADM-Ab-NPs对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用
治疗11 d后与空白对照组相比，除未载药NPs组外其余各组的肿瘤体积和重量均明显下降，差异具有统计学意义（P < 0.05）。E-ADM-Ab-NPs组的平均肿瘤体积及瘤体积抑制率为（79.17±18.63）mm3和60.69%，平均肿瘤重量及瘤重抑制率为（0.51±0.16）g和58.54%，显示其抗肿瘤作用强于其他组（P < 0.05）。见表2、3。
2.4 毒副作用统计结果
E-ADM-Ab-NPs组的血白细胞计数及血清谷丙转氨酶水平为（6.82±1.09）×109/L和（40.26±15.27）U/L，与空白对照组相近，差异均无统计学意义（P > 0.05）。E-ADM原药组及E-ADM原药加抗VEGFR2单抗组的血白细胞计数分别为（3.95±0.84）×109/L和（4.08±0.91）×109/L，明显低于其他组，而血清谷丙转氨酶水平则分别为（72.46±17.02）U/L和（68.51±15.94）U/L，显著高于其他组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。血肌酐水平在各组中的差异无统计学意义（P > 0.05）。见表4。
3 讨论
原发性肝癌化疗的总体疗效一直不甚理想，传统的全身静脉化疗对机体有较强的毒副作用，限制了化疗药物在肿瘤局部达到有效浓度，而局部化疗如肝动脉栓塞化疗（TACE）等往往需要创伤性操作才能实现。如何在提高肿瘤组织药物浓度的同时降低正常组织中的药物浓度，是目前肿瘤化疗研究的热点，因此载药纳米微粒靶向治疗具有广阔的前景。
本研究利用聚电解质复合法合成载E-ADM纳米微粒，其载体材料海藻酸钠的分子链上富含羧基和羟基，可通过化学交联与抗VEGFR2单克隆抗体相结合，ELISA法检测表明在E-ADM-Ab-NPs制备过程中抗体活性无明显丧失。VEGFR2主要分布于肿瘤血管内皮表面及原发性肿瘤细胞表面，而在正常组织及良性血管增生性组织中仅呈低水平表达，是介导血管内皮生长因子（VEGF）在肿瘤新生血管形成中发挥功能的主要受体[7-9]。原发性肝癌组织的VEGFR2阳性表达率达60%～70%[10]，而抗VEGFR2单抗是针对VEGFR2的特异性抗体，能将化疗药物携带至肿瘤组织中发挥免疫靶向治疗作用[11-13]。荷人肝癌裸鼠模型体内的分布试验表明，E-ADM-Ab-NPs可选择性地集中于肿瘤组织，而在血液、心脏、肝脏、肾脏等正常组织中的分布较少。E-ADM-Ab-NPs具有的良好缓释性能可使肝癌组织较长时间处于有效的药物浓度中，同时抗VEGFR2单抗可竞争性抑制VEGF与VEGFR2结合，从而抑制肿瘤血管的生成[14-15]。荷人肝癌裸鼠模型的体内治疗发现，E-ADM-Ab-NPs组的瘤体积抑制率和瘤重抑制率明显高于E-ADM原药组，有助于临床上减少化疗药物的单次用量，并避免长时间持续静脉用药所带来的不便。包含E-ADM原药各组的荷瘤裸鼠血白细胞计数明显低于空白对照组，血清谷丙转氨酶水平明显高于空白对照组，而E-ADM-Ab-NPs组的血白细胞计数和血清谷丙转氨酶水平则与空白对照组相近，表明E-ADM-Ab-NPs可减少E-ADM原药的骨髓抑制和肝功能损害等毒副作用。
综上所述，本研究合成的E-ADM-Ab-NPs由于纳米微粒的缓释性能及抗VEGFR2单抗的导向作用，可明显提高其对荷人肝癌裸鼠模型的抗肿瘤效应，并降低E-ADM原药的全身毒副作用，是一种安全有效的新型肝癌靶向治疗制剂，具备良好的临床应用前景。
[参考文献]
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纳米微粒范文2
2014年2月中旬，在佛罗伦萨某所修道院的祭坛边，意大利考古学家揭开地板，打开一座古墓。墓室里躺着的妇女，极有可能是文艺复兴时期意大利一位绸缎商人的妻子丽莎・盖拉尔迪尼。
没有人对这个名字有印象，但可能人人都知道她的模样：达芬奇名画《蒙娜丽莎》据说是以她为模特画成的。在那幅画中，身着深色服饰的端庄女子面带微笑，这笑容每年都吸引数以百万计的游客前去卢浮宫一探究竟。
恰如她那丝似有若无的微笑，即便是醉心于研究达芬奇的历史学家，对盖拉尔迪尼的了解也极为有限。她在1495年3月5日与丝绸商人乔贡多登记结婚，当时她才16岁，而丈夫已经30岁了。婚后她生了至少5个孩子。在丈夫的遗嘱中，她被描述为一个“可爱”、“天真无邪”的妻子。这样的形容词，在那个年代意味着品行高洁、忠诚。
如今，打开盖拉尔迪尼墓室的科学家们，不会看见达芬奇名画上的微笑。眼前那副被泥土掩去真容的白骨，双手还保持着交叉放在胸前的姿态。
意大利历史学者希尔瓦诺・文塞蒂带领他的考古团队拾起她的遗骨，希望能通过DNA测试与面目复原技术去发掘答案：达芬奇生前挚爱的画作，与这个佛罗伦萨女人有着多少联系？
蒙娜丽莎很可能就是丽莎・盖拉尔迪尼，但又一定比盖拉尔迪尼复杂得多。
1516年，来自佛罗伦萨的艺术家兼科学家达芬奇迁居法国，在他随身携带的行李中，就包括画在木板上的《蒙娜丽莎》。这幅画长不足一米、宽刚过半米，虽然达芬奇从50岁刚过的时候就开始绘制这幅画，但抵达法国时，64岁的他应该还没能完成最后的润饰。
直到达芬奇3年后去世，《蒙娜丽莎》一直都陪伴在这个老头儿身边。这幅作品与他共同旅行过半个欧洲，经历过许多画作的完成，承受过来自贵族的掌声与冷落，直到最后被进献给法国王室，开始另一段传奇旅程。
有许多人好奇于达芬奇对这幅作品表现出的厚爱，一些人相信症结就在“画中人”身上。《蒙娜丽莎》曾经被猜测是意大利某位名叫“伊莎贝拉”的的画像（因此笑带讥诮），或是某个深得达芬奇倾心的爱人的容貌（所以眼含深情）。
历史学者们从未停止过他们的猜测。而利用现代科技，得到答案并没那么难。意大利的考古学家计划对墓室中的遗骨进行DNA检测，如果能确定盖拉尔迪尼的身份，他们就会凭借头骨和《蒙娜丽莎》的细节复原这位佛罗伦萨女性的面容。
还有更多的谜团能够通过墓室内的这副白骨得到解答。不止一个人注意到了蒙娜丽莎笑不露齿的淑女范儿：一位美国医生说，这笑容看起来那么暧昧，因为那是典型的掉了门牙的笑容;另一位来自丹麦的医生确信丽莎的右脸先天性麻痹，她那微微肿胀的手即是明证;还有一种更流行的说法指出，因为正在进行梅毒治疗，她的牙齿变成了黑色，所以不得不紧闭双唇。
“依据当前的医学技术，我们可以复原出她的身体特征，并重现那个为人熟知的姿态。”一位达芬奇专家说。
科技能够为我们还原510多年前的那一刻――大约在1502或是1503年，绸缎商的妻子盖拉尔迪尼坐到了达芬奇的画板前。她那时很可能怀有身孕，也许为了纪念新生命的诞生，也许是庆祝全家人即将乔迁新居，绸缎商找到了老朋友达芬奇，让他为妻子画一幅像。
纳米微粒范文3
1、微信号码和密码可以在微信中的设置即可查看。
2、具体查找步骤如下：进入微信后，点击“我”，再点击“设置”。进入后点击“账号与安全”。微信号在页面第一行即可查看。查看微信密码的话，点击“微信密码”，进入后即可查看。
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纳米微粒范文4
人民东路天翼大厦三楼人民东路。
市内可坐17路、19路、19路、29路、35路等公交汽车，到天翼大厦公交站下车即到。
若自驾车前往，可将开车到八一路找停车位停车，然后往北到人民东路，再往西走50米既到天翼大厦；也可把车停进生源停车场，从人民东路出口向西走80米即到。
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纳米微粒范文5
纳尼负离子卫生巾好处如下：
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纳米微粒范文6
根据《财政部国家税务总局关于试点企业集团缴纳企业所得税有关问题的通知》的规定，自2009年1月1日起一些企业集团取消了合并申报缴纳企业所得税，对于取消合并申报缴纳企业所得税后，对汇总在企业集团总部、尚未弥补的累计亏损应该如何进行处理？国家税务总局《关于取消合并纳税后以前年度尚未弥补亏损有关企业所得税问题的公告》进行了详细规定，以便于该类企业正确弥补亏损。
正确区分合并纳税与汇总纳税
合并纳税是否就是汇总纳税？首先搞懂两个概念，所谓合并纳税，是指大型企业集团的母子公司实施盈亏相抵之后的收益缴纳所得税。大型国企合并纳税始于1994年实施分税制改革，国税总局《关于大型企业集团征收所得税问题的通知》规定，经国务院批准成立的企业集团经批准后，可由其100％控股成员企业选择由核心企业统一合并纳税。2007年实施两税合并时新企业所得税法确立了法人税制的原则，具有法人资格的企业都必须单独纳税，《企业所得税法》第五十二条规定，除国务院另有规定外，企业之间不得合并缴纳企业所得税。所谓汇总纳税，是指居民企业在中国境内跨地区（指跨省、自治区、直辖市和计划单列市）设立不具有法人资格的营业机构、场所（以下称分支机构）的，该居民企业为汇总纳税企业。
两者的区别：合并纳税的各方是一个大型集团下属的各自独立的企业法人，而汇总纳税的各方是一个企业法人下属的不具有法人资格的分支机构。新的企业所得税法实施后实行法人纳税，合并纳税已经取消了，而分支机构都要由总机构进行汇总纳税。
会计亏损与税法亏损口径不同
会计上的亏损是指当年总收益小于当年总支出，根据企业会计准则的规定进行会计核算，如果当年账面利润为负数，即为会计上讲的“亏损”。与实现利润的情况相同，企业应将本年发生的亏损自“本年利润”科目，转入“利润分配――未分配利润”科目，借记“利润分配――未分配利润”科目，贷记“本年利润”科目，结转后“利润分配”科目的借方余额，即为未弥补亏损的数额。然后通过“利润分配”科目核算有关亏损的弥补情况。
《企业所得税法》第五条规定，企业每一纳税年度的收入总额，减除不征税收入、免税收入、各项扣除以及允许弥补的以前年度亏损后的余额，为应纳税所得额。因此，在计算应纳税所得额时，依照税法的规定将纳税年度的收入总额减除不征税收入、免税收入和各项扣除后，其结果有可能小于零，这小于零的数额即税法规定中的亏损。税法中的亏损和财务会计中的亏损其含义不同，处理方法亦不同。
弥补亏损的方式
企业发生亏损时，弥补亏损的渠道主要有三种：一是用以后年度税前利润弥补，企业发生亏损，可以用次年度的税前利润弥补，次年度利润不足弥补的，可以在五年内延续弥补；二是用以后年度税后利润弥补，企业发生的亏损，五年内的税前利润不足弥补时，用税后利润弥补，税法上在计算应税所得时不能扣除亏损余额；三是以盈余公积弥补亏损，企业发生的亏损，可以用盈余公积弥补，借记“盈余公积”科目，贷记“利润分配――盈余公积补亏”科目。
亏损弥补的税务处理
亏损弥补的总体规定。《中华人民共和国企业所得税法》第十八条规定：企业纳税年度发生的亏损，准予向以后年度结转，用以后年度的所得弥补，但结转年限最长不得超过五年。这里亏损弥补的含义有两个：一是自亏损年度的下一个年度起连续五年不间断地计算；二是连续发生年度亏损，也必须从第一个亏损年度算起，先亏先补，按顺序连续计算亏损弥补期，不得将每个亏损年度的连续弥补期相加，更不得断开计算。“自行弥补”是指，纳税人在纳税申报时（包括预缴申报和年度申报）可自行计算并弥补以前年度符合条件的亏损。
取消合并纳税后以前年度尚未弥补亏损的规定。财税[2008]119号的规定，自2009年1月1日起一些企业集团取消了合并申报缴纳企业所得税，对于取消合并申报缴纳企业所得税后，对汇总在企业集团总部尚未弥补的累计亏损，国家税务总局《关于取消合并纳税后以前年度尚未弥补亏损有关企业所得税问题的公告》进一步明确，亏损期限有限制，因《财政部国家税务总局关于试点企业集团缴纳企业所得税有关问题的通知》从2009年1月1日起上述企业集团一律停止执行合并缴纳企业所得税政策。这里的亏损指企业集团取消了合并申报缴纳企业所得税后，截至2008年底，企业集团合并计算的累计亏损。凡单独计算是亏损的各成员企业，参与分配第一条所指的可继续弥补的亏损；盈利企业不参与分配。具体分配公式如下：成员企业分配的亏损额=（某成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额÷各成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额之和）×集团公司合并计算累计可继续弥补的亏损额。并且要求应根据集团每年汇总计算中这些亏损发生的实际所属年度，确定各成员企业所分配的亏损额中具体所属年度及剩余结转期限。
超期申报滞纳金问题。国家税务总局公告2010年7号公布日在8月份，而执行日为2009年1月1日，2009年企业所得税汇算清缴在2010年5月30日已经结束，文件出台的滞后造成部分取消合并纳税的企业，其计算的亏损未在2009年所得税汇算清缴时得以弥补，根据国家税务总局《关于2009年度企业所得税纳税申报有关问题的通知》文件规定，因2010年5月31日后出台的个别企业所得税政策，涉及2009年度企业所得税纳税申报调整、需要补（退）企业所得税款的少数纳税人，可以在2010年12月31日前自行到税务机关补正申报企业所得税，相应所补企业所得税款不予加收滞纳金。
举例：某大型国企是经国务院批准成立的企业集团，下属六个子公司A、B、C、D、E、F，以前根据《关于大型企业集团征收所得税问题的通知》规定，实行企业统一合并纳税，后又根据财税[2008]119号通知要求，从2009年1月1日起，上述企业集团一律停止执行合并缴纳企业所得税政策。在2008年采取合并缴纳企业所得税时，2008年该集团公司合并纳税后亏损为400万元：下属个子公司A2008年盈利1000万元，B公司亏损500万元，C公司亏损600万元，D公司亏损400万元，E公司盈利2000万元，F公司亏损1600万元，集团总部亏损300万元。请根据国家税务总局公告2010年第7号，计算各个子公司应分担的亏损额。
分析：根据国家税务总局公告2010年第7号公告第二条规定，B、C、D、F、集团总部是单独计算且亏损的各成员企业，可参与分配继续弥补的亏损；A、E是盈利企业不参与分配。
首先计算各子公司亏损占总亏损的比例：
成员企业亏损占总亏损的比例=（某成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额÷各成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额之和）×100%
B公司：500/（500+600+400+1600+300）×100%=14.71%
C公司：600/（500+600+400+1600+300）×100%=17.65%
D公司：400/（500+600+400+1600+300）×100%=11.76%
F公司：1600/（500+600+400+1600+300）×100%=47.06%
集团总部：300/（500+600+400+1600+300）×100%=8.82%
再次计算各公司应以分担的亏损额：
成员企业分配的亏损额=（某成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额÷各成员企业单独计算盈亏尚未弥补的亏损额之和）×集团公司合并计算累计可继续弥补的亏损额（单位：万元）。
B公司：400×14.71%=58.84
C公司：400×17.65%=70.6
D公司：400×11.76%=47.04
F公司：400×47.06%=188.24
集团总部：400×8.82%=35.28
