前言:中文期刊网精心挑选了秋天童话范文供你参考和学习,希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感,欢迎阅读。
秋天童话范文1
一阵一阵波浪似的蛐蛐声从屋后森林穿过木窗,在房子里飘荡;“吱吱”的木门声也随之悠扬地传来。小萌知道,又是外婆在锁后门了。因为每晚她都会听到这熟悉的声音,像是夜晚来临的前奏。
夜也深了,仲夏夜的天空高远而深邃,小萌就这么望着。天幕中挂满星辰,像漂浮着的萤火虫;月亮很低,仿佛就垂在她头顶的瓦檐上;月华如水,轻轻洒在散落一地的玉米棒子上,像烤熟的金灿灿的火腿,溢满香气。不知过了多久,小萌就在屋顶上睡着了。
忽然,小萌被一阵窸窣的声音惊醒,她坐起来,哥哥姐姐们都在熟睡。而她面前,有一只白色的兔子一样的动物,手里正捧着一支玉米棒子。
“你是兔子吗?”小萌问。因为她知道外婆养了两只兔子。小萌打量着它,它的眼睛像月光一样明亮而温柔。
“我是松鼠,是这山林的精灵。”
“精灵?”
“对,跟着我。”
小萌就捉着松鼠的尾巴。这时,她发现自己和松鼠都飞起来了。而山林,黑的像一座雕塑;松涛声阵阵,像急促而古老的哨音。松鼠带着小萌在树林里穿梭,四周全是萤火虫,在绿色萤火中小萌清晰地看见大树突起的经脉和铺满落叶的山路。不久,她们就来到山顶,那里有一座石屋,小萌站在屋前,俯瞰山下的一切。外婆家的屋顶还亮着灯,哥哥姐姐们躺在玉米中熟睡·····
第二天,小萌把这件事告诉外婆。外婆笑着说:“萌萌真幸运,祖祖辈辈说只有纯真的人才可看见精灵呢!”
小萌咯咯地笑了,眼睛眯成了一条缝·····
十月雪
盛夏,知了在屋后烦躁地叫着。吃过午饭,哥哥们会去村口的鱼塘游泳。小萌几次尾随而去,都被外婆拖回来了。外婆生气地说:“萌萌啊,游泳危险,何况你还是七岁的女孩子!”小萌嘟着嘴,不搭理外婆。
哥哥们回来,会从鱼塘边摘一个青的核桃给小萌,小萌就去剥那厚厚的果肉的外壳。浆沾到手上,手掌顿时就背染黄了,怎么洗也洗不去。小萌就哭着告诉外婆。外婆又笑了笑·····
夏天终将过去,秋天又来了。外婆到山上砍柴,小萌也跟着去。穿过曲折的垫着松针的山路,小萌忽然想起了那晚的事。现在她自己也搞不清那是真实还是梦境了。不过,她眼前确实有一个用石头砌成的山神庙,就隐藏在机壳大树后面。
小萌跟着外婆来到山顶的一片开阔地带,四周全是荣荣茅草,纷纷飞絮,像葬礼时撒的白色纸钱。草丛下面是一堆堆坟,像一个个勾着腰的龙钟老人。小萌望了一圈,觉得它们都在盯着自己,她害怕了。外婆牵着她的小手:“不要怕,外婆在这。”
冬天在树叶未掉光之前就提前到了,伴随着一场大雪。晚上,就听见竹子折断的声音,次日醒来,茫茫世界全是雪。窗前,屋顶,树林以及更广阔的原野。小萌兴奋地跑去告诉外婆,可外婆已经在清扫院子里的积雪了。这天是小萌最开心的一天,她和伙伴们在院子里垒了一个像雪人的雪堆,又在田里打了一场雪仗·····
追
后来,小萌就去外地上学了。
直到有一天,接到外婆病逝的消息,小萌泪流满面,急忙赶回来。
外婆就葬在那片坟地,小萌曾经很害怕的地方。
秋天童话范文2
王子用心经营着他们的爱情,给天使更多的爱和幸福,甘愿做她的护花使者。天使用心领会,沉浸在他给予的幸福里。渐渐地,她发现自己渴望像小鸟依人般地得到他大哥哥般的呵护,在她的小品表演里总会多了一个他的故事,每天临睡前她都会握着手机等待他晚安的祝福,她每分每秒都会让他快乐无限。她是他的开心果,他捧着她用心呵护,她暗暗庆辛自己是世界上最幸福的人……
光阴轮回,四季交替。一年后,同样的季节,同样的人,却发生了不一样的事……
双休日那天,恰巧是天使和王子相爱的那一天,天使将自己精心梳妆了一番,一身纯白色的长裙勾起了她对往事的美好回忆。
“天使。”
“是。”
“你……你就是……天使?”
“嗯。”
“噢……进去吧。”
“好。”
“嘿!在想什么呢?”
“感觉怎样?”
“就等你电话了,要记得我的电话号码哦。”
……
“嘀铃铃—”桌上的电话铃声打断了天使的回忆,一定是王子打来的,整整一年了嘛,她迅速拿起话筒,嘴角盛满了幸福。
“喂!是天使吗?你……你在干嘛?我……我想……我……我……”
电话的那端,王子低哑着嗓音,语无伦次地说了好半天也没能把话说清楚。
“你想约我出去好好庆祝一下我们相爱一周年。对吧,我没猜错吧?”天使得意地说着,笑得比阳光还要灿烂。
“不……我……我……我是有话想对你说,我妈……我妈让我订婚了,女孩是她的一个小姐妹的女儿……”
他妈妈让他订婚了,而订婚的对象居然不是她是另一个女孩。天使脑袋“轰”地像被雷劈了一下怔怔地张着嘴却说不出一句话来,灿烂的笑容在刹那间仿佛被空气凝固,浮漾的嘴角终于慢慢地垂了下来……
“你……你怎么了?流泪了?”王子好像察觉到了些什么。
“你少臭美了,谁流泪了?我是替你高兴。”天使使劲咽下一口口水,努力挤出一丝笑容。“恭喜你!王子,我们分手吧,我真心地祝你幸福。”
“你……你真的决定了吗?真的考虑清楚了?真的放弃了吗?”
“嗯……我……我考虑清楚了。”
“天使,你……你没事吧?你最好……最好考虑清楚再作决定,不管怎样,我一定会尊重你的选择的。”
“我会有什么事?我是真的考虑清楚了,既然我已经说了分手的话,我就不会再收回的,我再说一遍,我真的考虑清楚了,我不会有事,你放心好了,我们虽然不再是恋人了,可我们还是朋友啊,你仍然是我的大哥啊。”
“真的吗?你真的这样想的吗?如果想反悔的话我会尊重你的选择,你确定你真的没事吗?可我还是有点放心不下。天使,我们见个面吧,就现在,见了面我才会放心。”
“好吧,就老地方吧。”
天使努力地强颜欢笑着挂了电话,她愤愤地“哼”了一声,什么“你真的考虑清楚了吗?”“真的放弃了吗?”“我会尊重你的选择的”都是假惺惺的屁话,尊重我的选择?你打电话来告诉我你妈让你订婚的事,不就是等我说出分手的话吗?我还能做怎样的选择?除了分手我别无选择,没用的家伙,你不是说你父母有多么的爱你吗?你所爱的人不就是他们所爱的人吗?他们会像爱你一样来爱你所爱的人吗?真是没用的家伙,你根本就没有勇气告诉你的父母你爱上了一个比你小九岁的女孩嘛。哼!有什么了不起的,你以为世上除了你好男人都绝种了吗?我才不会为你这种没用的家伙流泪呢!
天使对着话机怒骂以此来发泄心中的恨,她打开抽屉小心翼翼地取出那块黄色手帕轻轻抚摸了一下,然后被狠很地捏在掌心里,似乎很坚强,而泪水却不争气地一涌而出,滑落粉颊。
王子急急赶往他和天使以前常去的地方—那片树林,那里曾经是他们相爱的地方,是他亲口对她说“我爱你”的地方,而现在他却要去那个地方和她分手,结束他们的爱情,是不是太残忍了?王子的心有些痛,有些割舍不下,更多的则是无奈。当妈妈硬逼他订婚遭到了他的反对时,妈妈动怒了,一气之下住进了医院,这下可折煞了一向孝顺的王子,看着妈妈每天躺在病床上打点滴的痛苦表情,王子的心好难过,他真的好无奈,一边是自己最最深爱的母亲,一边是自己最最深爱的爱人,在亲情和爱情之间他只得割舍爱情选择亲情,王子不知道这样做会伤害天使有多深,只有约她出来,确定她真的像电话里所说的那样没事,他的心也许会好受些。
“哥,我等你好久啦。”
见王子来了,她一身纯白色的长裙宛如天使一般向他飘逸而来,一如当年,楚楚动人。王子有些难过,将她紧紧拥入怀里作最后的拥抱。
“你……你真的决定了?想清楚了?”王子不放心地问。
“嗯,哥,恭喜你,祝你幸福。”天使甜甜地祝福他。
“我尊重你的选择。”王子觉得有些对不起她,鼻尖酸酸的。
“哥,你一定要比我幸福哦。”天使抬眸看他,报以灿烂的一笑。
“我也祝你幸福。”在确定她没事之后,王子松开了手。
“哥,记住一定要比我幸福哦,无论我在哪里,我都会祝福哥的。”
天使笑意灿灿,缓缓地挪动脚步往后退着离开了王子的怀抱,她知道这个温暖的心怀再也不属于她了,心,便在无声地流泪。
“我可以抱你吗爱人……容我最后一次这样叫你……你也不得已……我会笑笑的离去……”
天使轻轻低吟着阿妹的歌笑笑的离去了,在她转身的刹那,盛在眼底的泪水再也不是自己所能控制的了,潸然而下。她抬起握紧拳头的手慢慢摊开掌心,黄色的手帕随着一阵秋风飘离而去……
看着她笑意灿灿的离去,王子的心平添了几分放心,在他无奈又不得已地挪动脚步转身背向她而去的刹那,黄色的手帕随着秋风轻轻拂过他的面颊,他伸手接住将它紧紧藏于掌心……
“你也不得已……我会笑笑的离去……”天使伤心地唱着阿妹的歌失声痛哭,漫无目标地走着,此时此刻回家的路走起来却是格外的漫长。突然,她的背后像似被什么东西猛烈地撞击了一下,一双温暖而熟悉的大手从背后将她紧紧抱住。
“我不让你走。”低哑的嗓音在她耳边伤心地哽咽着。“我反悔了,我不让你走,我不能没有你,我的生活里不能没有你,我错了……天使……我错了……留下来……不要走……不要走……”
她又回到了那个温暖的心怀吗?她怔怔地回首不敢置信地凝望他。
“你……你真的决定了?想清楚了?”
“真的决定了,想得清清楚楚了,对不起,是我没处理好,让你伤心难过,对不起……对不起……不要哭……不要哭……”
王子温柔地伸手抚摩她泪迹斑斑的脸以拇指轻轻为她拭擦眼泪,而自己的泪水却不断地溢出眼眶滑落了下来。
“不要哭,原谅我,给我一点时间,我会处理好的,抱紧我,快点抱紧我,否则我会害怕你走的。”
“我……我……”天使的双手在他的背后抬起……放下……又抬起……又放下……最后她终于抬起双手将他紧紧抱住。“我尊重你的选择。”天使含着幸福的泪花,笑意灿灿。
“谢谢你!天使,谢谢你!”王子激动得将她紧紧抱住,仿佛要将她揉入自己的体内。
两人幸福相拥,含泪而笑,甜蜜无限。
天使从天上来到人间和王子相遇,然后他们……
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当秋天快要走的时候,那些所有的关于秋的故事也将会同这个美丽的季节一起
离去了吧?如果是这样,我将留下所有的记忆纪念秋天的美丽,我将留下所有
秋天童话范文3
走进羌寨人家
10月中旬至11月上旬,杂谷脑河两岸的枫、桦树海被染成红色、金黄色,同时可以加入羌寨人家篝火活动。
北京香山
华北最著名的红叶景观
10月中旬至11月中旬,香山方圆数万亩坡地上红艳似火,赏叶绝佳处在森玉笏峰小亭。从亭里极目远眺,远山近坡,鲜红、粉红、猩红、桃红,层次分明,成为北国著名的秋游胜地。
桂林海洋乡
金黄银杏树的世界
每年的11月中旬,在广西灵川县海洋乡“天下银杏第一乡”的银杏海洋里,只要有人烟的地方就一定会有银杏林。这里的100多万棵银杏树的树叶把海洋乡装点成了一个金灿灿的世界。
南京栖霞山
亭台楼阁的山水画
栖霞山上枫林连绵一片,霜降时节,满山红叶,遮天盖地。东峰的太虚亭,正处枫林深处,环亭皆为古枫树林,是栖霞山观赏红叶最佳处。最佳赏叶时间为每年的11月中旬至12月上旬。
云南香格里拉
风吹草低见牛羊
雪山、草甸、牦牛、蓝天,构成了秋天美丽的画面,白云和牛羊与火红的狼毒花相映成趣。此时的普达措国家公园、小中甸,绝能让你相机快门发热。最佳赏叶时间10月中旬至11月上旬。
日本日光 红叶下的寺院
日本人将日光称为日本枫叶的故乡,日光国立公园更是日本火山地形及自然景观的代表。日光也是日本佛教重镇,日光“二社一寺”远近驰名,可满足游客视觉和心灵的需求。平安神宫、清水寺、金阁寺、天龙寺、南禅寺等寺院,都看得到被夕阳染红般的枫叶林。最佳赏叶时间为10月下旬至11月上旬。
芬兰赫尔辛基
枫树林里采蘑菇
芬兰三分之二的土地被森林覆盖,每到秋天,掩映在红红黄黄树叶中的一个个黑色的屋顶,将赫尔辛基(Helsinki)渲染得仿佛童话王国。闲暇时常到森林远足,欣赏着秋色美景,采摘着新鲜漂亮的蘑菇,采蘑菇更成为很多人秋天的一大乐事。最佳赏叶时间为8月下旬至9中旬。
日本北海道
泡着温泉赏红叶
北海道(Hokkaido)拥有温泉地热资源的洞爷湖(Toyako)是一座火口湖,湖水终年不冻,秋天湖畔红叶铺天盖地盛况非凡。来川汤温泉享受温泉和红叶,一边是清澈而温热的温泉,一边是青石院落,斜斜地伸过一枝染红的枫枝,远方是一片斑驳红艳。最佳赏叶时间为10月上旬至11月底。
加拿大魁北克
枫叶之国的美景与蓝鲸
在著名的枫叶之国加拿大,有著名的魁北克(Quebec)赏枫度假区洛朗区(Laurentian)。在圣罗伦斯河(St Lawrence River),数种鲸鱼聚集嬉戏,包括罕见的蓝鲸。泰道沙克(Tadoussac)是乘船欣赏海洋动物的最佳观测点之一,成群结对的候鸟飞来,场面分外壮观。最佳赏叶时间为10月上旬。
韩国雪岳山国立公园 山谷与瀑布间的红叶
雪岳山秋天的丹枫红叶闻名海内外,具有代表性的赏叶景点分别为千佛洞溪谷、水帘洞溪谷和九转谷。石峰间,形成“V”字形峡谷,内有瀑布、深潭、红叶、溪流。最佳赏叶时间为9月下旬至10月中旬。
荷兰阿姆斯特丹 风车之国的金色浪漫
阿姆斯特丹(Amsterdam)的秋天短暂而恬静,金色和红色将阿姆斯特丹运河(Amsterdam Canal)两岸紧紧环抱。去阿姆斯特丹往北15公里处的风车村(Zaanse Schans),看那片恬静的金黄与最著名的风车。如果要体验运河与船屋,可搭乘平底玻璃船,欣赏两岸的秋色与阿姆斯特丹特有的建筑特色和运河风情。最佳赏叶时间为9月至11月。
秋天童话范文4
这是现时要考虑的问题,好长时间不打字连五笔都有些生疏了。这才让我注意到自已不能再这样过下去,如果不学习连起码的生存条件都没有,又怎么能养家糊口呢?虽然总是觉得生活没意思不愿这样过不去,可我却从来没有为此而努力付出过什么。
我还有机会上大学吗?这是我在心里盼望已久的想法,可是眼前的这一切叫我怎能实现呢?孩子还没到上学的年纪而手里也不曾有报名的费用。
这段时间很想写点东西出来可是该写些什么呢?我在细细的追寻寻找着人世间唯一的真情,是的我不断的寻找,所以我的题目有了,就是真情,该怎样提笔写下这份心情呢?
古时候有真情,可在现实生活中却是屈指可数也难找寻。曾经有梁山伯祝英台,董永七仙女千古流传感动天感动地的爱情故事,到今天的二十一世却再已难已找到呢?
我看过好多感人的电视剧,而且当时会感动得泪流满面,可是等到看过了才知道那一切都是假的,人间到底有没有真情可在,我无语问苍天,可我很想以这个题材虚构一个动人的爱情故事。
这个故事发生在九十年代中期,故事的主角是一群刚进入中学校门的学生到他们大学毕业的全部经历。我之所以提笔写些这本小说是因为我相信人间有真情处处有真爱,所以这写了小说的全过程是我想象的但这个故事却是我想告诉世人曾经有这样的一群青年和他们不为人知的感情经历和对世事的看法围绕着主题所发生的一切惊天动地的故事。
这一年的秋天格外的多姿多彩天空是那样的蓝、河水是那样的清,就连树上的小鸟也来分享何家的喜悦,因为就在中秋节的第二天早上何家诞生了一个小小的生命,因为她的到来使得这个故事的女主角也悄悄来到了。
小姑娘生得眉清目秀,何妈妈就给她取名为何清秀,时间就像流水一样的快转眼睛小姑娘就长大成人了,当然也出落得亭亭玉立引来不少嫉妒的目光,当然也少不了小伙子的追求了。记得当初上小学的时候就发生了很多常人难已理解的事,清秀和涵宣是两小无猜长大的好姐妹当然故事中也有她的精彩片断哟!
秋天童话范文5
红叶谷的发现,让人们感受到美的真谛,饱尝到大自然馈赠的空灵脱俗之美。正因如此,国内地理、植物、气象、旅游、建筑、动物、美术、摄影等方面的专家,按照植被、秋色、色彩、规模、震撼力等6条标准,将长白山蛟河红叶谷列于“中国十大秋色”之中。
奇谷红叶
红叶谷是长白山余脉老爷岭的一条山谷,位于吉林蛟河庆岭山区,北起庆岭瀑布,南面濒临松花湖,它是吉林省蛟河市的摄影家无意间发现的。
30年前,喜欢摄影的李建新、程英铁等人,每年都会进长白山拍摄风光片,曾有很多图片获奖。1993年9月末,他们结队来到爱林林场拍照,为了捕捉早上的光线,天刚蒙蒙亮就出发了。爬过无数次的山,没想到这次竟然迷了路,不记得翻了几座山、转了多少圈,突然间,眼前的红艳使他们先惊后喜!身边的树也红了,地也红了,天也红了,红得另类,难有胜出。这就是秋季里最宝贵的自然景观――红叶谷。
驾车前往红叶谷,着实让我煞费苦心。沿途边走边问,最后沿着崎岖的山路迂回辗转,历时6小时,才找到确切位置。
走入大山深处,满眼梦幻般的红叶铺天盖地,让人陶醉,一丛丛、一簇簇、一坡坡、一山山,数不尽的红色。真是天也红了,地也红了,身在其中,人也像喝多了美酒似的。太红的叶、太清的水、太美的山……斑斓的色彩与蓝天、白云、山川、河流构成一幅醉人的金秋画卷,仿佛步入仙境一般。
红叶谷的美,美在它娇艳华贵,不落俗套;美在它不拘一格,色泽纷繁;美在它疏密有致,韵律十足。红叶林不是静止的,而是跳动的。秋风吹过,红叶树摇曳飞舞,极具动感与活力。
据当地人说,近几年,成群结队的游人在山野一夜间呈现出红色之际光顾红叶谷。他们在红叶谷山间建了数座木桥、石板路,又在行人踩出的路旁围上用绳索相连的木桩,还放置了一些垃圾桶来保护这里的原始生态。人们驾驶的车,只能停在红叶谷山外空旷的坡地上。
因观赏而动情之际,我们欲饮酒助兴,奈何“借问酒家何处有”,却无人辟建“杏花村”,只恨自己没像李白一样,酒不离身!在路边的山货摊,山民们用简陋的筐篓盛放的山核桃、榛子、沙果、木耳、蘑菇等销路很好。人们买完“山珍”便席地而坐,迫不及待地品尝起这些土生土长的野果,尽情享受大自然的馈赠。
秋色尽享
路遇游人,发现来此观光游览的人群中,老人和情侣居多。我满腹疑惑地询访了一位已近耄耋之年却不辞辛苦、翻山越谷来此赏景的老人,她说:“这里的红叶如同傍晚的夕阳,又如我们老年人,已近暮年却充满活力。看到这红叶,我们就看到了生命的旺盛,看到了人生的精彩。”
是啊,人活着就要有希望,就要活出精彩来。年轻的情侣们想必也是想借这火红的叶子,表达他们如红叶般赤诚的心,和对伴侣不竭的爱恋吧。
红叶给人以热情,它不仅造就了人与自然的和谐之美,也激起人与人的融合之情。
边走边拍中,巧遇从新加坡飞来抓拍红叶的摄影同行。他是携太太及小儿利用公司假期赶来的,一家人连拍带游,寓乐于游,既完成了摄影作品,又玩出了好心情。我们漫步在红叶林中,像是久别的朋友,从相互问候,到拍摄的线路、使用的镜头和最新数码产品,以红叶为媒,进行了一次心灵的交流。
游走在红叶中拍摄,不时看到些许红叶悄然飘落。因它只有半个月的生命期,且年逢一度。望着眼前这如此短暂易逝的美景,我的内心深处不禁产生难以名状的失落。
其实,红叶已完成了她的使命,她选择了像流星一样,在最美的时刻陨落,用她动人的身躯将天空装扮一新,用红色尽染天地,留下最美的记忆,以此来回报日夜滋养她的大地。
放眼铺满落叶的山谷,几株翠绿的小苗正偷偷地钻出地面,我的心终于释怀――我们无法阻止季节的轮回,那么也就不再怕看到落叶。
美酒美味 妙不可言
傍晚,从红叶谷下来一路往北,过了庆岭瀑布不远,就是庆岭美食一条街。这里有着号称“美食一绝”的庆岭活鱼,一百多家专门经营庆岭活鱼的餐馆一家挨一家地列在302国道两边。
我们挑了一家店面不大,但很干净的餐馆进去。老板娘笑吟吟地迎上来,向我们推荐了几道招牌菜,酱焖嘎牙子、庆岭活鱼、两个当地时令小炒,外加一瓶长白山霜后葡萄酒。只见店家捞出几尾捕自松花湖的大鲤鱼,刀法快速地将鱼收拾妥当,做法与家常做法无二,但有一个细节吸引住我――厨师将一把像南方的艾叶一样的植物放到鱼里。据介绍,“庆岭活鱼”的独特之处在于它取自松花湖活鱼,用庆岭山泉水烹制,厨师放入的是庆岭山间生长的野草“把蒿”,炖的时候一定要用铁锅,烧木架,这样才味道鲜美。随着铁锅里庆岭山泉水渐渐收干,咕嘟咕嘟地冒起泡来,屋中满是鱼香,又夹杂着特有的药香。这时千万别催菜,因为这鱼炖的时间越长越入味。
在返回住处的路上,我看到街道两旁人家的院子里,葡萄藤上挂满一串串深紫色熟透了的野山葡萄,空气中氤氲着葡萄的香气。司机小刘师傅说,这里地处长白山余脉,海拔较高,山中盛产野山葡萄,满语称阿木鲁,也称毛葡萄、刺葡萄、秋葡萄,曾作为贡品,深受清朝皇帝的青睐。
据考证,我国民间用野生葡萄即山葡萄酿酒最早就起源在明末清初的长白山一带,至今已有近400年历史了。现在也有居民在自家院里栽种野山葡萄树,既可观赏、乘凉,成熟的山葡萄又可酿酒,一举两得。
秋天童话范文6
【关键词】天山花楸;超声提取;总黄酮;高效液相色谱图谱;相对积分峰面积
天山花楸SorbustianshanicaRupr为蔷薇科(Rosaceae)花楸属植物(Sorbus),系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药,常用于治疗肺结核、哮喘、咳嗽、胃痛等症[1]。实验研究表明天山花楸叶具有平喘镇咳祛痰、依赖性地抑制心肌收缩和保护心肌缺血等作用[2]。本课题组药效筛选实验发现天山花楸中有效成分主要为黄酮类化合物。
天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值。黄酮类化合物具有消除疲劳、保护血管、预防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、活化大脑及其他脏器细胞的功能[3]。药理作用表现为抗炎镇痛、抗病毒,抗辐射、抗癌抗肿瘤[4],抗氧化、抗衰老、抗心脑血管疾病[5],免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松等。传统的黄酮提取方法有浸渍法、索氏法、回流法等,提取时间较长,并影响提出率。超声提取是目前比较新的技术,超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,都可加速药物有效成分进入溶剂,从而提高了有效成分提出率,缩短了提取时间,节约了溶剂,并且避免了高温对有效成分的影响[6],因此把超声技术用于中药有效成分的提取越来越受到重视。
1材料
美国AgilentHP1100型高效液相色谱系统(配有:四元泵,紫外检测器,HP1100化学工作站);日本岛津UV2401(PC)紫外光谱仪;德国SartoriusBP211D十万分之一电子分析天平;SK5200HP超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司);甲醇、乙腈为色谱纯,水为纯净水,磷酸、乙醇及其它试剂均为分析纯;芦丁对照品由中国药品生物制品鉴定所提供;天山花楸供试品采自新疆玛纳斯林场,海拔2000~2500m,由石河子大学药学院成玉怀高级实验师鉴定为蔷薇科(Rosaceae)花楸属植物(Sorbus)。
2方法与结果
2.1亚硝酸钠-硝酸铝比色法测样品中总黄酮含量芦丁标准曲线的绘制:精密称取芦丁对照品20mg于50ml量瓶中,超声溶解,用60%乙醇定容至刻度,摇匀备用。分别精密移取上述对照品溶液1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0ml于25ml量瓶中加60%乙醇至6.0ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml放置6min,加入8%硝酸铝溶液1.0ml放置6min,加入5%氢氧化钠试液10ml定容,放置15min后以试剂空白为参比溶液于510nm测吸光度。得回归方程为:Y=12.058X-0.0028,r=0.9999,芦丁在0.0162~0.0727mg/ml浓度范围内呈良好线性关系。其平均加样回收率为98.0%;RSD(n=3)为0.95%。
2.2HPLC分析
2.2.1色谱条件WatersC18柱(250mm×4.6mm,5μm);检测波长360nm;温度25℃;运行时间30min;平衡时间10min;进样量20μl,梯度洗脱条件见表1。表1HPLC梯度条件(略)
2.2.2HPLC图谱在上述HPLC色谱条件下,样品中各组分的色谱峰分离度良好。结果见图1。
2.2.3HPLC分析指标建立本课题组药理实验证明,醋酸乙酯提取物为药理实验有效部位。经理化鉴定及TLC分析结果显示该有效部位呈黄酮类化合物阳性反应。通过对比图1中各样品HPLC图谱,在20~30min其共有峰保留时间和整体图貌具有良好的一致性。色谱分析中,化合物保留时间,取决于化合物特定的色谱行为,可以确定20~30min一系列色谱峰为黄酮类化合物色谱峰。因此,本实验选择积分HPLC图谱20~30min各组分色谱峰,计算相对积分峰面积(各组分积分峰面之和与样品质量的比值,记作:A/μg),对指标进行量化,并以此分析样品。
2.3正交实验设计结合预实验实际情况,选提取温度(A)、料液比(B)和乙醇浓度(C)为影响总黄酮提出的主要因素,每个因素取3个水平(见表2),选用L9(34)正交实验表安排实验,其中超声功率60kHz,时间30min,连续提取两次。精确称取天山花楸叶干粉2.0g,加入不同溶剂系统,平行提取条件下操作,按“2.1”项测定并计算总黄酮含量及相对积分峰面积。
表2因素水平
2.4正交实验结果及分析
由表3~4结果分析表明,以总黄酮含量为指标时,因素A对总黄酮提取实验影响显著,影响顺序为A>B>C,最佳提取工艺条件为A2B3C3;由表3,表5分析表明,以HPLC图谱相对积分峰面积为指标时,因素A、C对总黄酮提取实验影响显著,影响顺序为A>C>B,最佳提取工艺条件为A3B1C2。表3结果与极差分析(略)表4总黄酮含量为指标方差分析(略)表5相对积分峰面积为指标方差分析(略)
2.5最佳工艺条件验证实验通过以上实验,综合分析考虑,最终选用相对积分峰面积为指标,最佳提取工艺条件确定为A3B2C2,即提取温度为60℃,料液比为1/10g/ml,乙醇浓度为60%,其中超声功率60Hz,时间30min,连续提取两次。在此最佳工艺条件下平行进行3次实验,总黄酮提取率较高且稳定。
3讨论
3.1浸提溶剂的选择
黄酮类化合物的游离黄酮苷元和黄酮苷极性皆较大,因此较易溶于极性较大甲醇和乙醇以及相应的水溶液中,提出率较高;而醋酸乙酯和丙酮极性较小,相对提出率较低。乙醇相对甲醇而言毒性小,且本身具有杀菌作用,提取样品不易发霉变质,所以本实验选取乙醇为提取溶剂。
3.2检测波长的确定
精密移取芦丁对照品溶液2.0ml于25ml量瓶中加60%乙醇至6.0ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml放置6min,加入8%硝酸铝溶液1.0ml放置6min,加入5%氢氧化钠试液10ml定容,放置15min后于400~800nm波长范围进行紫外扫描。结果表明,芦丁显色后在510nm处有最大吸收峰。
3.3显色条件考察
在预实验中参考有关文献的亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量时,发现短时间内样品吸光度值变化较大,准确度、精密度、重现性及回收率结果均较差。故本实验又重新考察了显色剂加入量、显色温度和显色时间,对比色条件进行了改进,确立了新的测定条件,即“2.1”项中测样品中总黄酮含量的方法。经重复性、回收率等实验分析表明,以此方法测定天山花楸中总黄酮含量,能够取得较为满意的结果。
3.4分析指标的确定
本实验以芦丁为对照品加入显色剂于400~800nm波长范围内扫描,其在510nm具有最大吸收,主要原因是其具有邻二酚羟基可与显色剂显色。但天山花楸叶醇提液中,除含有黄酮类化合物,绿原酸含量也较高[7]。绿原酸也具有邻二酚羟基可与显色剂显色,对天山花楸叶中总黄酮含量测定产生干扰[8]。实验表明以芦丁为对照品,以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色剂,在510nm测定天山花楸叶醇提液中总黄酮含量的方法专属性不强、有局限性、准确性较差。而HPLC图谱显示,样品中各组分的色谱峰分离度良好,可以避免样品中其它组分干扰目标化合物的分析,专属性较强。且经初步实验验证20~30min为一系列黄酮类化合物的色谱峰。因此,本实验选择以HPLC图谱20~30min相对积分峰面积为指标来分析天山花楸叶提取样品。
3.5最佳工艺条件的确定
通过实验,以HPLC图谱中总黄酮相对积分峰面积为指标,确定了天山花楸叶中总黄酮的最佳提取工艺条件,其中料液比为1/8g·ml-1。但考虑到干燥花楸叶粉末吸水性较大,影响样品流动性,不利于循环超声提取,且由表5可知,料液比对总黄酮的提取无显著性影响,综合分析考虑将料液比确定为1/10g·ml-1。
3.6结论
与比色法测定总黄酮含量为指标相比,以HPLC图谱中黄酮类化合物相对积分峰面积为指标对样品的分析方法具有专属性强、准确度高、重复性好等特点,易于生药及制剂质量控制。以其确定的天山花楸叶总黄酮提取工艺合理,提取率稳定。新晨:
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