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肌球蛋白范文1
关键词 鳜鱼；肌球蛋白重链；原核表达；多克隆抗体
中图分类号 Q785 文献标识码 A 文章编号 10002537（2012）06006707
肌球蛋白是肌肉主要构成蛋白质之一．它由Kuhne于1859年首先报道，之后于1864年在研究骨骼肌收缩时发现并命名［1］．肌球蛋白不仅是基础蛋白收缩系统主要成分，也是一种复杂多聚体蛋白，在真核生物肌肉收缩过程中起到很关键作用［23］．在不同的动物种类之间，乃至鱼类不同品种间，肌球蛋白结构和表达存在着种属间差异性．大部分研究工作主要针对脊椎动物骨骼肌肉（主要是兔和鸡）、心脏肌肉、数种平滑肌而进行，同时也包括部分非肌肉系统肌球蛋白的研究．在鱼类中研究较多的是平滑肌组成的心肌肌球蛋白和横纹肌组成的肌肉肌球蛋白［4］．肌球蛋白不同类型的重链基因全序列克隆测序在多种脊椎动物中已经完成，其中包括大鼠（Rattas norvergicus）［5］、鸡［6］、人 ［7］以及鱼类中的斑马鱼［8］、大头鱼、虹鳟［9］、鲤鱼［10］，大黄鱼［11］和鳜鱼［12］等．因此，对鱼类肌球蛋白分子研究已扩展到不同鱼类品种肌球蛋白重链、轻链的基因克隆分析及其表达．Lied和Decken采用生物化学方法分离提取出虹鳟肌球蛋白重链，并采用此蛋白作为抗原制备出多克隆抗体，鉴定出其结合蛋白［11］．Crockford等［13］和Goldspink等［14］采用哺乳动物cDNA序列为引物从鲤鱼基因文库中克隆出其肌球蛋白重链基因，且证实此类基因表达受环境因子所控制；Kato和Konno测定出鲤鱼重链氨基末端和羟基末端分子结构和调节区域［15］．有关鱼类肌肉特异性基因肌球蛋白轻链（myosin light chains，MLC）、肌球蛋白重链（myosin heavy chains，MyHC）的cDNA序列分析所获取的数据，为蛋白质和基因结构进化分析提供基础．这些克隆和分离的基因已经用于研制核酸杂交探针，来研究肌球蛋白基因家族转录产物特异性组织表达、进化，以及染色体定位或突变等．
湖南师范大学自然科学学报 第35卷第6期
刘希良等：鳜鱼肌球蛋白重链基因的原核表达及多克隆抗体的制备本研究旨在通过将鳜鱼肌球蛋白重链基因片段亚克隆到pET32a质粒，构建出重组表达载体，大量诱导表达此蛋白，制备鳜鱼肌球蛋白重链多克隆抗体，为日后分析鳜鱼肌球蛋白重链基因表达对其肉质性状的影响，进而提高鱼类肉质品质提供理论基础和技术支持．
1 材料与方法
1.1 实验材料与主要试剂
体重1 kg 左右的鲜活鳜鱼购买于长沙水产市场，剪腮放血后取背部白色肌肉，-80 ℃冰箱保存备用．大肠杆菌菌种BL21（DE3）和DH5α均购于北京天根公司．原核表达载体pET32a为本实验室保存．限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ购于TAKARA公司；Trizol试剂购于Invitrogen公司；100 bp Marker、MarkerⅢ、PCR扩增所需的试剂以及一抗AntiHis Antiboby 和二抗羊抗鼠购于北京天根公司；T4 DNA连接酶、低相对分子质量标准预染及非预染蛋白质Marker购于Fermentas公司；DNA胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒购于Promega公司；His融合蛋白纯化预装柱购于上海悦克生物科技有限公司．羊抗兔辣根过氧化物酶标二抗、DBA显色试剂盒购于武汉博士德生物公司．其余化学试剂均为国产分析纯．
1.2 试验方法
1.2.1 引物设计 根据作者已克隆得到的鳜鱼MyHC全长序列（GenBank：HQ829291）及原核表达载体pET32a的载体图谱，利用Primer Premer5.0软件设计一对引物，其序列分别为：
上游引物P+ 5′CAGAATTCATGGAAGAGTCCATTGAGGCTG3′（双下划线部分为引入的EcoRⅠ 酶切位点，粗体字为引入的起始密码子）；
下游引物P-5′GCGAAGCTTCTAGTTCCTCTTGATTTGCTCC3′（双下划线部分为引入的Hind Ⅲ 酶切位点，粗体字为引入的终止密码子）．
1.2.2 目的基因PCR扩增 采用Trizol一步抽提法提取鳜鱼肌肉组织的总RNA后根据反转录试剂盒（Fermentas）合成第一链cDNA，并以其为模板进行PCR扩增．PCR扩增条件为：94 ℃预变性 5 min； 94 ℃变性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35个循环；72 ℃反应10 min．PCR产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测后用DNA胶回收试剂盒进行纯化．
1.2.3 原核表达载体构建 pET32a质粒经EcoRⅠ和Hind Ⅲ 双酶切处理回收后与同种酶双酶切后的PCR纯化产物在T4 DNA连接酶的作用下16 ℃过夜，将目的基因定向连接到pET32a载体上，再转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞，接种于含50 mg/L氨苄青霉素LB固体培养基平板上37 ℃过夜培养，挑取单菌落进行菌落PCR鉴定，提取质粒进行双酶切鉴定，挑选阳性克隆送上海生工生物有限公司测序．
1.2.4 重组质粒的原核表达及重组蛋白的纯化 把构建好的表达载体pET32aMyHC转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，取单个菌落接种到LB液体培养基中，37 ℃振荡过夜，取上述培养物以体积比1∶ 100比例接种于200 mL LB液体培养基，37 ℃振荡培养3 h左右，至OD600 值达0.5时，取1 mL菌液作为诱导前对照，分别加入终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.2 mmol/L的IPTG，37 ℃分别诱导1、2、3、4、5 h，收集菌液进行150 g/L SDSPAGE电泳，观察不同IPTG浓度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响．
1.2.5 抗血清的制备 用 NiNTA 纯化表达的鳜鱼MyHC融合蛋白，然后将纯化的MyHC融合蛋白皮下多点注射新西兰兔，共免疫3次．注射的抗原均为MyHC蛋白与弗氏完全佐剂按体积比1∶ 1混合液．首次免疫后，每隔两周加强免疫一次．末次加强免疫后两周采集少量血液，ELISA检测血清抗体效价．之后，颈动脉放血，离心分离血清，即得到鳜鱼MyHC蛋白的多克隆抗体，分装后-80 ℃保存．
1.2.6 Western blot分析抗体特异性 使用哺乳动物细胞蛋白提取试剂盒提取鳜鱼肌肉组织总蛋白，-20 ℃保存备用．分别取空白质粒pET32a细菌裂解液、鳜鱼肌肉总蛋白、纯化的MyHC蛋白，经100 g/L SDSPAGE电泳后湿法转到NC膜上，使用50 g/L脱脂奶粉/TBST 4 ℃封闭过夜．加入一抗（兔抗MyHC血清，浓度比1∶ 1 000稀释）4 ℃过夜孵育，TBST清洗3次后加入二抗（HRP标记的羊抗兔IgG，浓度比1∶ 2 000稀释），TBST清洗，HRPDAB显色，至出现明显条带后终止反应．
1.2.7 免疫组化分析抗体的特异性 石蜡切片脱蜡、水化；3%（体积分数）H2O2 室温孵育15 min；蒸馏水冲洗，微波炉内抗原修复15 min；自然冷却后，蒸馏水冲洗；PBS冲洗3次，每次5 min；50 g/L BSA室温封闭30 min；倾去封闭液，滴加浓度比1∶ 2 000稀释的兔抗MyHC多克隆抗体（一抗），室温孵育1 h；PBS冲洗3次，每次5 min；滴加二抗生物素标记兔IgG（浓度比1∶ 1 000），室温孵育20 min；PBS冲洗3次，每次5 min；BCIP/NBT显色；自来水冲洗，核固红轻度复染，水洗，干燥后水溶性封片剂封片，镜检．用PBS代替一抗作为阴性对照．
2 实验结果
2.1 重组表达载体pET32aMyHC的构建
将重组表达质粒pET32aMyHC经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定结果如图1．其中，大于4 500 bp条带为酶切载体大小，500 bp左右的条带为目的基因片段大小．同时以单菌落为模板，经菌落PCR鉴定，结果如图2，可见在500～600 bp间有一条明显的特异条带。
2.2 鳜鱼MyHC原核表达及条件优化
将重组表达载体pET32aMyHC（实验组）和空载体pET32a（对照组）转化到宿主菌BL21中，分别利用IPTG诱导，经SDSPAGE检测结果如图3和图4．其中，对照组显示一条相对分子质量约为17 000的特异性条带，即为pET载体的His标签蛋白；而实验组在相对分子质量约40 000处出现一条较明亮的条带，即为HisMyHC融合蛋白．His标签蛋白的相对分子质量约为17 000，而插入的小清蛋白目的片段预测其蛋白相对分子质量大约为25 000，因此，MyHC融合蛋白的相对分子质量理论上接近40 000，这与SDSPAGE电泳结果一致，表明重组表达质粒pET32aMyHC经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中成功表达出HisMyHC融合蛋白．
M：蛋白Marker ； 1～5：不同IPTG浓度诱导的含pET32aMyHC的BL21菌体，其IPTG浓度依次为0，0.2，0.6，0.8，1.2 mmol/L；6：0.8 mmol/L IPTG诱导的含pET32a的BL21菌体
为了获得稳定的目的基因片段和可溶状态的重组蛋白，克隆片段起始位置应位于保守性较高且亲水性高的区域．作者在设计引物前利用DNAstar软件对鳜鱼肌球蛋白重链基因进行亲/疏水性预测［16］，结果显示鳜鱼肌球蛋白重链基因亲水性氨基酸多集中于850～1 983位．分析鳜鱼MyHC的保守结构［17］，作者选择在Myosin_tail_1亲水性氨基酸集中的区域（1 404～1 592位氨基酸）对应的核苷酸序列进行克隆和表达．基因的高效表达是在载体、基因和受体细胞的协同作用下完成的，主要受启动子、SD序列、转录终止序列、载体系统等因素的影响［1821］．宿主的选择及培养条件的控制等因素对外源基因在原核细胞中的表达效率也有很大影响．本实验所选用的表达载体大肠杆菌BL21具有T7启动子，可通过化学诱导高效地表达外源蛋白，目的蛋白前端的促溶蛋白（相对分子质量约为17 000）可以增加蛋白的表达及可溶性．同时，BL21含有6个组氨酸标签，可以提高外源表达蛋白的表达效率而不影响目的蛋白的高级结构，从免疫组化和免疫印迹结果来看， 作者表达出的带有His标签的蛋白也没有影响到抗原抗体特异结合的性质［22］．同时多聚组氨酸标签对外源重组蛋白的纯化也具有一定的作用．
进行融合蛋白诱导时， 蛋白极易以包涵体的形式表达， 而包涵体形成后的缺点是需变性、 复性等复杂处理过程后才能得到可溶性融合蛋白质．为了避免变性复性等复杂过程，通过改变诱导的时间和 IPTG的浓度，摸索到最适宜的条件为0.8 mmol/L IPTG诱导3 h．
肌球蛋白重链（ MyHC）具有ATPase活性、肌动蛋白结合位点以及a螺旋卷曲螺旋尾部等重要特性，是决定肌纤维收缩性质的主要分子之一．本研究以前期研究中已经克隆的鳜鱼MyHC序列［2324］为目的基因，利用大肠杆菌BL21作为表达载体，对目的基因进行原核表达载体的构建和多克隆抗体的制备．研究成果为进一步研究肌球蛋白重链对肉质的影响，提高优良肉质性状提供理论支持．
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肌球蛋白范文2
这样一座城市，不仅旅游业发达，吸引着周边的人群来这里贴近大自然，还积极地发展着体育事业。作为一个县级市，安吉自2001年以来承办了包括国际、全国的山地极限挑战赛、户外运动锦标赛、WCBA全明星赛等项目，标志性场馆设施――龙山体育中心更是投入1.2亿元，集体育馆、训练健身馆、游泳池、户外拓展为一体。这样一个具有优势地理位置和体育氛围的地方，自然成为了百片网球学校的落户地。
一百片网球场是什么概念?著名的尼克-波利泰尼网球学校有5l片网球场，举办过戴维斯杯和联合会杯的拉曼加度假村有28片网球场。国内连十片以上的网球场都屈指可数，安吉这个地方却要造一百片?带着这样的疑问记者来到了安吉一探究竟，看看这百片网球场是如何诞生的。
网校的投资人兼校长老胡有着十多年的球龄，曾经打网球把体重从240多斤减到170斤，从商数十年带来的健康问题也都被“打”掉了。因为之前网球给自己带来的好处太多，所以老胡在金融危机后毅然离开美国，用上半生积攒的财富投入到计划后半生运营的网球事业中去。
忙而不乱的施工
为了实地考察，记者从上海出发坐大巴前往安吉。目前安吉还没有通火车，到达这里比较方便的交通工具就是汽车，一路过来走高速路四通八达非常便利，驱车需要两个多小时。安吉县管辖着lO个镇、5个乡，其中的上墅乡就是正在修建的网球学校所处之地。从安吉县汽车站到上墅乡大约是二十分钟的车程。
这里的前身是上墅乡的一所中学，门口还挂着中学的牌子。在大门的一面墙上，有油漆绘成的几个大字：“浙江安吉国际网球学校”。走进学校，一片热火朝天的忙碌景象。十几个工人有在清理沙石，有在平整土地，有在焊接铜板。“整个中学大概是20亩地，一期工程将修建5片标准网球场和lO片短式网球的场地。”徐新康主任介绍道。整个学校是方形的结构，正中间的位置是大操场和椭圆形跑道，这里将是网球场的主要落脚之地。周边的两片宿合楼将相应地改造成为学生公寓和酒店式公寓，一栋教学楼将改造成为多功能，多媒体的教学活动区，食堂也将会重新进行修整。
由于计划在6月份完成第一期工程为招生做准备，工人们已经开始加班加点。监督工程进展的徐主任干脆就住在了工地里。在中学的周边还有140亩地是在网校用地的规划当中，这项总投资6000万元、占地面积约160亩，包括青少年网球学校、网球训练基地、高档网球会所在内的工程将计划用4年的时间分三期完工。
“这些人肯定是来‘圈地’的。”这是大多数安吉人听到这网校的“风声”时最直接的反应，包括在水利局工作的网球爱好者祁凯在内。尽管在外地人心目中，安吉还是享有很高的声誉，它是旅游休闲度假的不二之选，可是在本地人眼中，还是有很多相对闭塞的观念。当工程真正开展起来，祁凯到实地一睹为快后才开始有几分相信。
安古人打网球主要是到体育中心，那里有一片室内网球场和四片室外场，都是向公众免费开放的，可是打网球的人并不多，场地经常空置着。“主要是政府、机关的领导或是工作人员打球。”祁凯告诉记者，此外，这里离中心区有几分钟路程，当地人觉得太偏僻了。在这样的氛围下，想要改变人们的生活和娱乐习惯，把他们吸引到网球场甚至是将来的上墅网球场来，的确是巨大的挑战。
“这正是我们的机遇。在房地产一片大好的形势下你来做房地产，不一定就能经营好，网球从零开始，我们的思路也更宽广。”老胡说道。为了投身网校，在美国10多年的老胡正准备把国内的先进理念带回国，推动网球事业的发展。
目前尽管学校还是雏形的阶段，但已有两位专业教练开始对网球爱好者进行培训。“网校一旦建成，第一期暑期网球夏令营活动动会正式启动，届时将会把上海、温州、杭州等地的学生吸引到安吉来。”网球旅游成为休闲度假新选择
记者到达安吉的当天，上海有一家三口正驱车来旅游，并在安吉体育中心的网球场打了一场球。像这样旅游与网球的结合，也正是老胡对网校的发展思路之一。“对于安吉来说，网校的建成，将会在社会效益和休闲旅游方面起到助推的作用，它将带来新一轮的休闲经济发展。”安吉相关负责估量道。
安吉山青水秀、环境优美，是长江三角洲经济区内一颗璀璨的绿色明珠。在这里，“川原五十里、修竹半其间”；在这里，“修竹拂云当户耸，暗泉明玉绕亭飞。”这座有着1800年历史的县城以“竹”而闻名天下，素有“中国竹乡”之美誉。
由于安吉生态环境优越，旅游资源丰富，属于理想的人居住地。中国大竹海、白茶谷、九龙峡、芙蓉谷等旅游景区，是吸引不少游客到此一游的筹码。为了远离大城市的喧嚣，寻求一片净土，安吉是不错的养生之选。记者在采访中了解到，长江三角洲附近城市的网球爱好者在设计自驾游线路时，安吉总是时常被提及并纳入行程的一站。今后，如果安吉的网球与旅游能够做到完美融合，确实是发展休闲经济的新思路。
近十几年来，在安吉县委、县政府的领导下，安吉县风景与旅游管理局大力发展生态旅游、休闲旅游。从1997年起，旅游人次、门票收入、旅游收入每年都以40％以上的速度快速递增。安吉全县山峦叠嶂，绿荫环抱，林海茫茫，70％的森林覆盖率让这里成为了一个天然的绿色世界。安吉，正以其独特的生态魅力，吸引着越来越多的海内外游客前往休闲度假与观光。坚定前行
近几年来，随着中国女子网球在世界的名气逐渐增大，网球的发展也提速了。全国也有不少网校存在，老胡其中也走访了江门天力网球学校、保定的超达网校、浙江万祥网球学校等。办网校，办好网校，这是很多网球人仍然在积极探索的难题，甚至其中暴露的一些弊端目前还无法去调节。
肌球蛋白范文3
【关键词】 妊娠;白蛋白;球蛋白
The change of prenatal serum globulin concentration and clinical significance
PENG Qi cai,ZHOU Shui sheng,WU Ling.
Department of Obstetrics,the Third Affilated Hospital Of Zhongshan University,Guangzhou 510630,China
【Abstract】 Objective To evaluate the antenatal serum globulin concentration and clinical significance.Methods A random sample from July 2009 to March 2010 into full term pregnancy in our hospital 108 cases of obstetric patients,said the prenatal group,and randomly selected the same period 40 cases of non pregnant women of childbearing age for the control group.Admitted to hospital to collect serum albumin、globulin data of two groups patients,and analysis of data recorded.Results The prenatal group albumin(37.35 ± 2.11)g/L,control group(45.12 ± 3.55)g/L,the difference was significant,P
【Key words】 Pregnancy;Albumin;Globulin
正常妊娠中期后血清白蛋白因孕期血液稀释其降低,约为35 g/L[1],但有关妊娠期血清球蛋白的变化情况报道较少。妊娠被认为是成功的自然同种异体移植[2],必然涉及细胞免疫和体液免疫反应,而球蛋白与机体免疫功能和血浆粘度密切相关[3],所以,了解妊娠期球蛋白的变化相当重要,但目前人们对妊娠后球蛋白变化的研究不足,为此本项目通过对产前孕妇和正常育龄妇女的血清白蛋白和球蛋白浓度分析,了解妊娠期球蛋白质的变化情况,为进一步研究妊娠免疫提供临床依据。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 随机抽取2009年7月至2010年3月孕足月入我院产科待产病例108例,排除妊娠合并症如妊娠合并肝炎、心脏病、糖尿病等和妊娠并发症如先兆子痫等,同时随机抽取非孕期正常育龄妇女40例作对照。
1.2 方法 孕妇入院后确定孕周,抽静脉血2 ml放干燥管送检测,对照组同样抽静脉血2 ml放干燥管送检,用全自动生化检测仪进行检测,记录检测结果。
1.3 统计学方法 采用EXCEL内统计软件进行数据处理,计量资料用t检验,计量资料用χ2检验,以P
2 结果
2.1 产前组孕妇平均年龄30.2岁,最大38岁,最小20岁,平均孕周39周,最大41孕周,最小37孕周。对照组妇女平均年龄29.7岁,最大40岁,最小16岁,两组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 两组血清白蛋白和球蛋白检测结果(表1)。
表1
两组血清白蛋白和球蛋白检测结果(x±s,例)
例数白蛋白x±s(g/L)球蛋白x±s(g/L)
产前组10837.35±2.11 28.73±3.78
对照组10045.12±3.55 26.47±3.37
P值
表1说明:产前孕妇血清白蛋白浓度比对照组明显降低,而球蛋白浓度却明显升高。
3 讨论
我们的研究结果提示,与正常育龄妇女比较,妊娠晚期血清白蛋白浓度降低极为明显(P
球蛋白与机体免疫功能和血浆粘度密切相关[3],而妊娠被认为是成功的自然同种异体移植[2],这必然涉及细胞免疫和体液免疫反应。正常人血清蛋白电泳显示白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白五个区带[3],a1球蛋白区带是以a1酸性糖蛋白、a1抗胰蛋白酶为主,a2球蛋白区带是由触珠蛋白、a2巨球蛋白、铜蓝蛋白等组成,β球蛋白区带是由转铁蛋白、 脂蛋白、补体C3等组成,γ球蛋白主要是由免疫球蛋白IgG等组成。球蛋白包括a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白,妊娠期血清球蛋白蛋白浓度增加,是哪些球蛋白增加呢?王玉洁[4]对待产妇血清蛋白电泳研究提示妊娠期a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白均增加,而γ球蛋白减小,郑玉玲[5]对妊娠期妇女血清蛋白电泳研究提示妊娠期a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白均增加,而γ球蛋白无变化。两位研究者均认为血清蛋白的变化是正常妊娠生理现象,认为a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白均增加主要是适应胎儿生长发育对脂类及铁、铜等微量元素的需要,而γ球蛋白减少可能与免疫球蛋白IgG经胎盘进入胎儿体内有关。但这些推论都没有实验结果支持,尤其IgG变化机制,会不会与妊娠属同种异体移植有关?这个问题值得我们去进一步探索。
妊娠后血液稀释了,而血清球蛋白浓度比正常育龄妇女增加了,目前其原因还不是很清楚,研究其产生机制对了解妊娠生理及妊娠相关疾病如流产、子痫前期等的处理都有重要意义!
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肌球蛋白范文4
摘要本文对2011年伦敦羽毛球世锦赛男单决赛中李宗伟与林丹的技术进行统计分析。为了明确差距、找出不足，主要从网前球、扣杀球等得失分方面与对手进行比较分析。结果表明：李宗伟在整场比赛情况发挥正常，比以前进步很快，技术和林丹不相上下，但是还是败阵林丹。这和体力技术有相关关系，一度被动地陷入对方的战术。通过比较分析，找出问题，分析羽毛球技术战术中合理利用体能与心理，向羽毛球最高水平进军。
关键词伦敦羽毛球世锦赛男单决赛李宗伟扣杀球
现代羽毛球运动诞生于1873年，约有一百多年的历史，它是国际重大体育比赛中不可缺少的项目，在奥运会上，羽毛球运动也是进行国际文化交流，增强与各国人民的相互了解和友谊的有效手段。其特点在战术上表现以我为主、以攻为主、以快为主，基本技术全面、熟练，特点突出，进攻点多，封网积极，劈杀凶狠，防守稳中有刁，守中有攻，能攻善守，力求“快、狠、准、活”的有机结合。总的来说，世界羽毛球运动将朝着“更加积极主动，特长非常突出，技术比较全面、战术变化多样”的趋势发展。
随着羽毛球运动的发展，尤其在实行新赛制以后，比赛的偶然性大大增加，受到了各国优秀羽毛球运动员的强烈冲击，晋级之路颇为坎坷。李宗伟是典型的拉吊突击型打法的选手，防守稳健，技术细腻，无论是从个人能力，还是从技、战术方面，都是世界一流的。但经常被我国林丹的气势所压制，网上流传“既生李何生丹”的言论，问其原因，所谓“知己知彼，百战不殆”，有比较才有鉴别，本文通过与我们过优秀羽毛球运动员林丹的比赛中，主要从前场网前球、中场平高球、后场扣杀球等得失分情况，认真、细致地对李宗伟的技术进行比较分析，找出不足与存在的问题，取人之长，补己之短。
一、研究对象与方法
（一）研究对象
李宗伟――目前世界排名第一，本世锦赛的一号种子选手，对手林丹为二号种子。
（二）研究方法
1．文献资料法
本文查阅了大量与本研究相关的专著，期刊，为本研究提供了科学的理论依据。
2．录像统计法
观看2011年伦敦羽毛球世锦赛男单决赛李宗伟与林丹的比赛录像，对其中主要技术进行数据统计与分析。
3．对比分析法
将观看录像所统计出的数据进行对比分析。
二、结果与分析
李宗伟与林丹主要得分技术的比较分析如下：
表1李宗伟与林丹网前扑杀球情况一览表
头顶直线 头顶斜线 正手直线正手斜线正手追身 总计
李宗伟 0 3 552 15
林丹 102 3 40 19
网前扑杀球是网前技术的一种，它不但可以直接得分，而且可以提高运动员的自信心和在气势上的鼓舞。从表1的统计数字来看，李宗伟在比赛中头顶直线得分为0，头顶斜线得分为3，相比较对手而言实力薄弱，但是正手直线斜线以及追身得分优势大于对手。在以上的统计数字对比中，李宗伟在扑杀球得分上少于对手，相差4分，说明在网前扑杀球技术上仅次于林丹。网前扑杀球得分少也是李宗伟败阵林丹的主要原因之一。
表2李宗伟与林丹吊球情况一览表
头顶直线 头顶斜线 正手直线正手斜线 总计
李宗伟 0 1 124
林丹 10 0 01
吊球是把对方击过来的高球，从后场轻击或轻切、轻劈到对方的网前附近。它是羽毛球比赛中常用的基本技术，通常与高远球相结合，来充分拉开对手或者消耗对手体能，从而获得突击进攻的机会。从表2可以看出，李宗伟吊球得分为4分。对手吊球总直接得分1分。结果表明：李宗伟在吊球上发挥了优势，说明与队手拉吊的场面处于主动优势，直接得分也比对手多了3分。
表3李宗伟与林丹网前球技术分析情况一览表
扑球 对角对手下网推球 总计
李宗伟 4 27 0 13
林丹 6010 2 18
勾网前对角是使突然改变来球的飞行路线，用勾的动作回击到对角网前区，球飞行速度快，贴网而过，弧线恰到好处，是一项动作要求非常细腻，技巧性很强的技术。搓网前球是击球后球在过网的瞬间有强烈的不规则旋转和翻滚，飞行距离短，落地快。由表3可以看出，李宗伟在本场比赛扑球得分4分，对角2分推球0分，结果表明：李宗伟在扑球、勾对角均低于对手13：18.两人在搓网前球技术上反手都比正手略强，主要从搓球成功的次数和失误率两方面。对李宗伟来说网前小球技术细腻没有发挥好，也是失误增多的主要因素。
表4李宗伟与林丹对手失误得分情况一览表
对手判断错对手出边线对手杀球下网对手扑球下网 总计
李宗伟 1 8 5 216
林丹 5 11 4 121
羽毛球比赛中，得分形式主要包括两种：第一，直接得分，就是直接打死对方而得分，如：扣杀球、网前扑球、吊球等；第二，失误得分，就是靠对手出现的主动、判断失误等得到的分数。从表4的统计数字可以看出，李宗伟在三局比赛中靠对手的失误得分共16分；反观对手直接得分21分。结果表明：李宗伟在比赛中主动进攻机会比较少，得分能力也比较差，比对手少了5分，失误也比较多，在比赛中也暴露出步法不够灵活、技术特点没有发挥、战术变化少等现象。
失误是避免不了的，由于羽毛球体积小，重量轻的特点，容易受风向、气流的影响。因此，给羽毛球运动员的发球和接发球都带来了麻烦。随着新赛制的改革，比赛的进攻性加强、节奏明显加快、偶然性增大。这就要求运动员不能有过多的失误，有时候一个小小的失误可能扭转比赛的局势。羽毛球运动员所关心的问题，是把这种最低级的失误减小为零。
三、结论与建议
（一）结论
1．网前扑杀球、勾对角、搓球、中场平高球，直接得分方面都略低于对手，主动失误过多。
2．吊球技术上发挥良好成功率高于对手，比赛中被对手拉吊的场面比较多，直接得分高于对手。
3．李宗伟在扣杀球总数上明显少于对手，被对手压制的比较厉害，没有太多的主动进攻的机会，不但没有限制住对手技术特点的发挥，而且一度陷入到对方的战术中，跟着对手的节奏打球。
4．在对方失误率方面，李宗伟在失误率方面要大于林丹的失误率，连续得分能力弱，主动进攻意识不够。
（二）建议
1．主动进攻训练
新赛制的改革，比赛时间和节奏的加快，比较有利于进攻型打法。因此，平时训练就要养成“以攻为主”的战略思想。在“积极进攻”的同时还必须重视进攻的有效性和稳定性的有机结合，减少失误。
2．专项素质训练
在羽毛球比赛中21分每球得分制尤其对单打羽毛球运动员的爆发力、专项跑动能力、无氧代谢能力等体能提出了更高的要求。因此，平时要加强这些专项能力的训练。
3．提倡“以我为主，以快为主，攻守结合”的战术思想
羽毛球比赛本身就是一个控制与反控制的过程，在比赛中应该用自己的特长去攻击对方的薄弱之处，以我为主，以快为主，并做到攻守兼备，从而牢牢控制住比赛的节奏和主动权。
参考文献：
[1] 肖杰.羽毛球运动理论与实践[M].北京:人民教育出版社.2005.
[2] 程勇民.“快、狠、准、活”技术风格对中国羽毛球运动的促进与制约[J].体育学刊.2005(2):99-101.
肌球蛋白范文5
【关键词】 手足口病；患儿；检测；血清免疫球蛋白；C反应蛋白
手足口病（HFMD）易发病于夏秋季节， 多见于学龄前儿童， 3岁以下发病率高， 其主要原因可能是该年龄段小儿细胞免疫及体液免疫均不成熟， 免疫功能低下， 机体缺乏保护性抗体[1]。手足口病是由肠道病毒（ 以柯萨奇A组16型、Ev71多见） 引起的急性传染病， 少数病例多因Ev71感染引发脑脊髓、脑膜炎、脑炎、肺水肿、循环障碍等。手足口病的临床表现为发热， 在口腔、手心、足底臀部位散在红色的疱疹， 可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。手足口病可引起患儿多项检验指标异常[2]， 为了解手足口病患儿血清免疫球蛋白与C反应蛋白的浓度变化情况并同时为临床提供一种检测方法， 本研究通过对在本院住院治疗的110例手足口病患儿的血清联合检测其免疫球蛋白与C反应蛋白水平， 分析其变化情况， 进而判断患儿免疫状况， 并为临床采取相应的治疗措施提供科学依据。现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取自2012年4月～2014年1月来本院就诊并确诊的小儿手足口病患儿110例， 将其作为研究组。其中男64例， 女46例， 年龄9个月～5岁， 所有患儿均有发热、手足口处均有疱疹等症状， 并符合卫生部制定《手足口病诊疗指南2010年版》的诊断标准。患儿病程在7 d以内， 平均病程3.7 d。随机选取90例（男58例， 女32例）同期住院的非手足口病患儿作为对照组。
1. 2 方法 在研究组以及对照组患儿入院当日或者第2天， 分别抽取两组静脉血3 ml后， 分离血清备用， 采用免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白与C反应蛋白浓度。
1. 3 临床检测 主要测量研究组及对照组的IgA、IgG、IgM及超敏C反应蛋白水平， 比较研究组以及对照组各个指标的大小。
1. 4 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差（ x-±s）形式表示， 实施t检验。P
2 结果
研究组IgA、IgG平均水平低于对照组， 两组比较差异具有统计学意义（P
3 讨论
手足口病已成为全球性传染病之一， 春夏季易于流行， 发病人群多集中于1～3岁的儿童。该病目前尚无疫苗和针对性的药物防治。手足口病传染性强且传播途径复杂， 流行速度快， 严重危及儿童身体健康。该病的潜伏期一般2～6 d， 易从最常见的无症状或仅有轻度不适， 至严重并发症甚至引发死亡。据相关研究表明， 因该年龄阶段的儿童机体内缺乏保护性抗体， 所以发病率和病死率较高。目前多数患儿感染后经治疗后愈后良好， 少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等较严重病变， 有的患儿甚至会死亡。因此， 如何防治HFMD感染已成为国内研究热点之一。
目前， 临床上用免疫球蛋白和超敏C反应蛋白来检测手足口病病情进展状况， 其主要原因是免疫球蛋白IgM、IgG、IgA水平可以一定程度反映机体体液免疫状态。其中IgM 是体液免疫最早出现的抗体， 有中和游离的外毒素， 增强吞噬细胞的吞噬作用。IgA 的水平下降常伴随分泌型 IgA 下降， 而分泌型 IgA 是防止呼吸道感染的主要免疫球蛋白。因此， IgA 水平下降导致患儿口腔出现疱疹[3]。CRP 是一种由肝脏合成的急性相蛋白， 可结合多种真菌、细菌及原虫等体内的多糖物质。也可Ca2+存在下， 结合卵磷酸和核酸形成聚合物， 激活补体系统， 引发对侵入细胞的免疫调节作用和吞噬作用而表现出炎症反应[4]。超敏C反应蛋白的微小变化可反映出心血管及部分其他疾病密切相关[5]。
本研究数据表明手足口患儿血清免疫球蛋白水平与正常值比较， 差异具有统计学意义（P
综上所述， 临床防治方面应关注手足口病患儿免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、超敏C反应蛋白水平变化， 并针对存在的问题及时采取适当的措施， 以防止严重并发症的发生。另外还应继续加强对手足口病的深入研究， 制定更好更有针对性的治疗措施， 以促进患儿早日康复。
参考文献
[1] 路黎娟， 李廷俊， 董焱， 等.脾氨肽口服冻干粉预防小儿手足口病疗效观察.儿科药学杂志， 2014， 20（1）：29-32.
[2] 李兰娟， 手足口病.杭州：浙江科学技术出版社， 2008：61.
[3] 陈慰锋.医学免疫学.第3版.北京：人民出版社， 2001： 32-33.
[4] 刘小英.超敏 C-反应蛋白和心肌酶联合检测对手足口病患儿早期诊治的意义. 中国医药导报， 2011， 8（14） ：20-22.
肌球蛋白范文6
者4例。发病后2个月心脏彩超复查，2例冠状动脉扩张者均恢复正常。静注丙种球蛋白期间发生心衰3例，心率增快、烦躁2例，出现高热、寒战1例。结论：丙种球蛋白属于血液制品，在发挥治疗作用的同时，有时可以产生不同程度的不良反应。护理人员一定要熟悉所用药物的作用及不良反应，严密观察患儿病情，及时与医生联系，以便病人得到及时治疗。
[关键词] 川崎病；丙种球蛋白
[中图分类号]R472[文献标识码]C [文章编号]1673-7210（2007）03（c）-069-02
川崎病（kavasaki disease，KD）又称皮肤黏膜淋巴结综合征，是一种病因未明的幼儿高发的血管炎综合征，以冠状动脉病变最为严重[1]，因冠状动脉常常受损，给患儿造成严重危害。近年来由于大剂量丙种球蛋白的应用，使该病的预后有所改观。我院自2003年1月～2006年2月共应用大剂量丙种球蛋白治疗川崎病21例，现将护理体会报道如下：
1 对象与方法
1.1 一般资料
川崎病患儿21例，均符合实用儿科学诊断标准[2]，其中男15例，女6例，男∶女比例约为2.4∶1。发病年龄8个月～9岁3个月，中位年龄为3岁7个月。临床表现：发热21例。其中～38.5℃ 5例，～39℃ 7例，＞39℃ 9例。皮疹17例，多数为多形性红斑性皮疹，斑丘疹2例，猩红热样皮疹及麻疹样皮疹各1例。双眼球结膜充血19例，口唇潮红皲裂、口腔黏膜充血19例。杨梅舌16例。手足硬性水肿15例。趾端及肛周脱屑15例。淋巴结肿大12例。伴随症状：咳嗽、流涕8例。表现为腹痛、腹泻、呕吐6例。头痛2例。21例患儿均作血常规检查，其中WBC＜10×109/L 2例，～15×109/L 7例，～20×109/L 6例，＞20×109/L 6例。血小板计数＞300×109/L 14例，血沉增快7例。CRP增高13例。抗“O”检查均正常。心肌酶谱检查18例，异常10例，主要表现为GOT、LDH升高。血培养检查6例，均阴性。尿常规检查21例，有5例为镜下白细胞+～++，余正常。心脏彩超检查19例，异常3例：冠状动脉扩张2例，三尖瓣反流1例。
1.2方法
21例患儿均给予大剂量丙种球蛋白（1.0 g/kg）治疗，症状控制不理想时次日同样剂量再用1剂。同时应用阿司匹林治疗，阿司匹林用量为30～50 mg/（kg・d），口服，分3次给予，热退后减量为5 mg/（kg・d）。本组患儿应用1次丙种球蛋白者16例，应用2次丙种球蛋白者5例。
2 结果
体温1 d内控制者10例，2 d内控制者7例，＞2 d者4例。发病后2个月复查心脏彩超，2例冠状动脉扩张者均恢复正常。静注丙种球蛋白期间发生心衰3例，心率增快、烦躁2例，出现高热、寒战1例。
3 讨论
川崎病对冠状动脉的损害已引起人们高度关注，大剂量丙种球蛋白治疗具有缩短病程、缓解症状、减轻冠状动脉损害、促进已受损冠状动脉恢复的作用，临床应用日益广泛。由于丙种球蛋白属血液制品，在发挥治疗作用的同时，有时可以产生不同程度的不良反应，如作者观察的21例患儿中，心衰3例，血清学反应1例，所以作为护理人员一定要熟悉所应用药物的作用及不良反应，做到以下几点，尽量减少药物不良反应，避免医疗差错及医疗事故。① 丙种球蛋白为血液制品，在使用过程中应注意有无血清学反应发生。血清学反应常发生在静脉输注开始后1 h，主要表现为寒战、发热、头痛、胸闷、胸痛、肌痛、不适、恶心、瘙痒、皮疹等，一旦发现此类症状，应及时报告医生，给予相应处理。本组2例出现血清学反应，患儿经应用地塞米松、异丙嗪治疗后症状得到控制。②大剂量的丙种球蛋白在短时间内输入可致心功能不全，可能与增加血容量及部分患儿原有心脏疾患有关，因此，在输注丙种球蛋白时，全过程定期观察患儿的一般情况和呼吸、心率、肝脏的动态变化十分重要，应注意输注速度，丙种球蛋白应在12～24 h内均匀滴入[2]。如果出现心衰症状，应减慢或暂停输注，必要时静脉应用毛花甙丙。③大剂量丙种球蛋白治疗用药量大，价格比较昂贵，且该药物需要低温保存，所以一定要有专人管理，避免造成不必要的差错和损失。④口服阿司匹林具有抗凝、抗血小板聚集作用，但长期服用对胃肠道有刺激作用，可以引起胃酸增多、反酸、嗳气、腹痛，严重者导致胃肠道出血。所以，做好临床指导十分重要，应嘱咐患儿饭后服药，必要时加用胃肠黏膜保护剂，以尽量减少胃肠道反应。⑤ 严密观察患儿病情，及时与医生联系，以便病人得到及时的治疗、护理。此外，应把好药源关，无正规批号的药物不用，批号不清楚的药物不用，院外购置的药物不用。
[参考文献]
[1]黄平，胡大一，金小燕，等.川畸病冠状动脉病变介入疗法的研究现状[J].中华儿科杂志，2002，40（11）:675-677.