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保健室的秘密范文1
一、保密措施是判断商业秘密存在的外在标志
在商业秘密案件中，现行法律、法规及相关规章均规定，权利人或经权利人授权的使用人是否采取保密措施，是其商业秘密能否成立的判断标准。如《中华人民共和国反不正当竞争法》第十条第五款规定，本条所称的商业秘密，是指不为公众所知悉、能为权利人带来经济利益、具有实用性并经权利人采取保密措施的技术信息和经营信息。《中华人民共和国刑法》第二百一十九条第五款规定，本条所称商业秘密，是指不为公众所知悉，能为权利人带来经济利益，具有实用性并经权利人采取保密措施的技术信息和经营信息。国家工商行政管理局《关于禁止侵犯商业秘密行为的若干规定》第二条规定，本规定所称商业秘密，是指不为公众所知悉、能为权利人带来经济利益、具有实用性并经权利人采取保密措施的技术信息和经营信息。本规定所称权利人采取保密措施，包括订立保密协议，建立保密制度及采取其他合理的保密措施。国家工商行政管理局工商公字（1998）第109号《关于商业秘密构成要件问题的答复》中规定，权利人采取保密措施，包括口头或书面的保密协议、对商业秘密权利人的职工或与商业秘密权利人有业务关系的他人提出保密要求等合理措施。只要权利人提出了保密要求，商业秘密权利人的职工或与商业秘密权利人有业务关系的他人知道或应该知道存在商业秘密，即为权利人采取了合理的保密措施，职工就对权利人承担保密义务。
如果说商业秘密的其他构成要件诸如新颖性、实用性等更多地属于内在技术特质的话，那保密措施则构成商业秘密存在的外在标志，它如同一个容器，为商业秘密提供了存放的空间。其他构成要件诸如新颖性、实用性等内在技术特质再强，如果没有保密措施所体现出来的管理性，所谓商业秘密依然不能得到确认和保护。在司法实践中，商业秘密的内在技术特质往往非依法律所能直接认定，也非审判人员专业知识所能直接把握，其认定更多也更主要地依赖专门机构，但是作为商业秘密外在标志的保密措施，则可以据法律规定予以直接审查其是否成立，在这方面审判人员可以充分发挥所长。如果商业秘密的外在标志经审查后不能在法律上得到认定，即便具备其他构成要件，所谓商业秘密也是皮之不存，毛将焉附。商业秘密的这一特殊的外在标志决定了司法审查的工作前提和重点。
二、保密措施的合理性应以最低限度的法律性为边界
司法实践中，在适用前述法律及相关规定以判明是否采取保密措施时，由于前述规定的笼统与含糊，缺乏可操作性，给商业秘密外在标志的认定带来较大的困难。比如，权利人向义务人提出保密要求能不能构成保密措施？是不是还要具备其他的相应条件？如果还需其他条件，那各条件间是并列关系还是递进关系？即是具备其一即可还是需同时具备其他或全部条件？这些问题恰恰是司法实践中最常遇见又最亟需解决的，却很难简单地适用前述规定作出判断。归结为一点就是，保密措施的制定要不要达到合理程度以及怎样才算是合理程度？目前的问题是，现有法律、法规及相关规定中，关于商业秘密中的保密措施的规定，或是不详，或是要求过低，或没有厘清保密措施间的关系，由于没有涉及到合理性的问题及其判断标准，审判实践中出现不少认定上的困难。如《中华人民共和国反不正当竞争法》和《中华人民共和国刑法》中，对商业秘密的认定仅规定经权利人采取保密措施，却没有规定其具体内容。国家工商行政管理局工商公字（1998）第109号《关于商业秘密构成要件问题的答复》中，关于保密措施的规定仅仅是权利人提出保密要求，标准显然过低。《国家工商行政管理局关于禁止侵犯商业秘密行为的若干规定》虽然提出了保密措施的具体内容，却没有进一步说明其间的关系，是适用其一即可认定还是适用全部方可认定，均无下文。由于上述规定中存在的种种操作上的缺陷，司法实践中对是否采取保密措施的认定往往不一，直接影响了案件的审理质量。
笔者认为，保密措施体现了权利人为有效保护商业秘密免受侵犯所付出的努力，理所当然地构成商业秘密的要件之一。对权利人制定的保密措施，当然不能要求做到万无一失，但起码也不应是空纸一张，只是摆个样子，而缺少实际的落实。权利人所采取的保密措施，应当具有一定的合理性。关于保密措施应具有合理性，最高人民法院以前曾在有关司法解释中曾作过相应的规定，如《审理科技纠纷案件的若干问题的规定》第51条规定，非专利技术成果应该具备的管理性条件为，拥有者采取了适当保密措施。这一解释反映出司法机关对保密措施程度已经有所认识，只不过这种认识仍需进一步深化。
当然，保密措施合理性的程度差异往往因人而异，因角度不同而异，因利益冲突而异，在权利人与义务人之间并没有一个统一的价值评判标准，也不可能形成这样一个统一的价值评判标准。对于权利人来说，保密措施合理性的门槛自然是越低越好，门槛越低，付出的成本就越小，行为就越经济。但是，低到什么程度才是最经济的合理行为呢？笔者认为，要使对这个问题的度量具有可操作性，必须将其纳入到法律的轨道上来。权利人所采取保密措施，仅是一种客观事实，客观事实与法律事实还不是一回事。当事人感觉到的客观事实之所以与法律事实尚有一段距离，就是因为只有通过一定的方式，客观事实才能转变成法律事实。保密措施这个客观事实要想转变成法律事实，就必须符合法律的基本要件，在法律上获得最低限度的确认。也就是说，评判保密措施是否具有合理性，只有将其上升至最低限度的法律性，获得起码的法律支撑，保密措施才谈得上具有合理性。因此，权利人所采取的保密措施，其合理性的门槛再低，也不能低于法律能够给予确认的最低标准，低于这个标准，保密措施的合理性就很可能因为难以在法律上得到确认而无法成立，此时保密措施的所谓合理性不过是权利人单方意愿的表示罢了。只有达到了法律性的最边界处，所采取的保密措施才能既体现出权利人保护商业秘密的主观努力，同时又由于在法律上获得最低程度的确定而具有合理性。因此，任何合理性说到底都是最低限度的法律性，不将合理性奠基在最低限度的法律性之上，所谓的合理性就会因为无法得到确认而没有实际意义。
三、保密协议作为保密措施合理性判断标准的可行性
保密措施有多种表现形式，如保密制度、划定密级、知悉范围、保密设施、保密协议等等。根据保密措施合理性应具有最低限度的法律性的观点，笔者认为，在诸多的保密措施中，保密协议最符合关于保密措施合理性这一标准，其他保密措施如保密制度、保密设施等均难以单独或共同构成保密措施合理性的法律标准，或者在依法评判时要冒相当大的不确定的风险。
首先，任何保密措施都是针对人的，只有将保密措施落实在人身上，才能有效防止泄密。与其他的保密措施相比，保密协议针对的是特定的具体的人，不仅最大程度地体现了保密过程中人的因素，而且将权利人与义务人有机地结合在一起，强烈反映出权利人的保密意愿和具体落实，鲜明体现出双方的意志，这些特点都是其他的保密措施所不能及的，在保密意愿、保密力度及约束力方面显然不及保密协议。
其次，保密协议处在法律性的最边界，因此最易获得法律的确认。将保密义务以书面形式予以界定，不仅明确划分出其间的权利义务范围，更重要的是，这种划分也获得了法律上的最低同时也是最基本的承认，随时可以行使的举证权保证了权利人采取的保密措施获得了法律上的合理性。而其他的保密措施，由于更多地反映的是权利人的单方意志，在法律上的可操作性差，获得合理性确认的风险很大。因为任何保密措施的合理性的主张，一旦纳入到法律范围，一定程度上就脱离了其原来的客观属性，只能依照法律的规定予以确认。在这个确认过程中，有一些不符合法律要求的方面不可避免地要被剥离，从而大大削弱了其合理性的法律证明力。其他保密措施在法律上的最大难题是，往往都是单方举证，如果对方予以否认，很难证明该措施是在商业秘密出现之初即已制定，即不能排除后来弥补的可能性，这在刑事案件中表现得尤其突出，因为在刑事案件中对证据的审查更严格。如笔者办理的安徽首例侵犯商业秘密罪案，由于权利人未与义务人签订过保密协议，结果只举出保密制度、保密要求等证据，证明其已采取过一定的保密措施，由于被告人对此予以否认，认为系事后所补，且证人证言与权利存在利害关系，由于权利人无法举出排他性证据，其提出的已采取了合理保密措施的证明显然就很勉强。
保健室的秘密范文2
能够拍成电影、搬上荧幕的，都是詹姆斯・邦德最风光的功劳，其实007一年到头来并不总是如此风光，比如这个最新接到的任务。根据中情局的最新情报，来自欧洲某大国R国的间谍已经瞄准了代号为“XPS”的高度机密资料。而邦德接到的任务是保护此机密文件。
硬盘中总有一些需要被保护的文件，本文就是使用跟007相同的方法将这些文件进行严密保护，以防被破坏。被保护文件及代号：
1.个人及工作的重要资料(My documents)
2.系统分区重要文件(参见2008年22期83页《C盘根目录文件解析》)
3.Ghost备份文件(GHO文件)
4.邮件数据文件(客户端存放)等。
一重保护：
改头换面――扩展名修改
首先007将机密文件进行了包装，让间谍无法识别出。
使用矮人DOS工具箱之类的工具，进入DOS命令，输入GHO文件所在盘符，比如e：然后回车。输入“cd ghost”回车，再输入“ren system.gho system.xxx”回车，ren命令的作用是重命名文件。
二重保护：
建立基地――专用分区存放
007在一个人烟稀少的地区建立专用基地，用来保护XPS。
使用一个专门分区存放备份，进行磁盘整理时只要忽略这个分区即可。分区的划分使用磁盘管理组件。
右击桌面“我的电脑”选择“管理”，打开计算机管理窗口依次展开“存储磁盘管理”。右击右侧窗格的D:选择“删除逻辑驱动器”，分区删除后再次重建分区，按提示创建一个大小为3GB（一般XP备份这个容量即可）FAT32分区，盘符为D:。剩余空间创建另一个分区，把前面转移文件拷回该分区即可。
三重保护：
隐形仓库――建立隐藏目录
这样即使R国间谍闯入基地，也找不到XPS的藏身之处。
建立一个完全隐藏的目录用于存放文件，这个目录病毒无法访问也无法删除。启动命令提示符，输入“md d:\...\”，在D:创建隐藏目录“…\”。现在打开D:，并不能看到上述创建目录，但是这个目录确实存在。目录查看可以在命令提示符输入“dir /x d:”，此时可以看到一个名为“e2e2~1”的目录，这就是隐藏目录（见图1）。
四重保护：
最新验证――设置访问权限
007给仓库用上了最新的验证技术。
为了更好保护备份，成功备份后用“convert d: /fs:ntfs”将分区无损转化为NTFS分区。这样可以使用权限更好保护备份文件的安全。比如，可以启动命令提示符输入“cacls d: /d:cfan”，设置当前用户CFAN无法访问D:。即使有人知道进入该目录的方法，也由于权限不足无法打开。
终极保护：
反探测装备――删除分区盘符
最终，007将整个基地都装上了反探测装备，再也不用担心暴露了。
保健室的秘密范文3
关键词：MOOC；保密史及保密制度；课程设计
基金项目：哈尔滨工程大学2013年度教育教学改革研究项目（JG2013YB24），“基于现代教育技术的教学模式的改革与实践”
中国分类号：G423
一、背景
随着高校生师比的不断增高，计算机网络的不断发展，慕课在2008年在美国诞生并席卷全球。其中的教育平台先驱网站Coursera推出仅前4个月注册学生人数就超过100万人。据统计，近年来在Coursera登记参加一门以上的网络课程学生人数不断增长，变化曲线如图1[1]所示。
图1参加至少一门网络课堂学生人数
在这一趋势下，我国各高校结合自有优势开展了慕课课堂的相关实践和研究工作。本文将MOOC与保密史及保密制度专业选修课程相结合[1]。近年来，保密的重要性已经不容忽视，自“棱镜门”事件后，保密工作也成为各项工作的前提。学好保密史及保密制度对每个国家保密学院学生尤其重要。作为一个新兴课程，该课程的课程设计、教学模式等方面并不是十分完善。一个是新课程模式，一个是新的课程，因此，笔者希望将这两个“新”有效结合，以进一步提高课程效果。虽然国内外的研究学者已经做过将MOOC应用于大学教学中的研究，但是，针对于保密史及保密制度这一特定学科的研究还从未出现。因此，笔者将针对MOOC的特点，结合传统大学教学模式，阐述MOOC的优势和劣势，以及如何结合两者优点，形成新的保密史及保密制度教学模式。
二.什么是MOOC
1 MOOC的定义：MOOC，是“massive open online courses”的缩写，即大规模开放式在线网络课程。从它的名字来看，我们很容易得到MOOC的特点：1广泛的开放性。它欢迎每个对相关课程感兴趣的同学，学习没有国籍、语言、年龄等任何方面的要求，只要你能上网，你就可以加入MOOC学院，免费学习。在线实时性。在MOOC学院学习不会受到时间与地域的限制，你可以在合适的时间，坐在家里，欣赏名师课堂，因为MOOC学院的学习是在网上完成的。当然，这只是MOOC的基本特征，是构成MOOC的前提。除了这些，MOOC还具有：易于使用；费用低廉；覆盖的人群广；自主学习；学习资源丰富[2]的优点。
2.MOOC中学生类型：结合已有研究，基于作者多年的MOOC教学实践的基础上，提出了5种学生类型[3]。1僵尸用户：此处借用微博中名词，即目前困扰大多数MOOC网站的现象，注册的人数很多、但是坚持学习并坚持到最后的10%都不到。2浏览用户：该类学生不能深入地学习相关课程，而是迅速浏览和了解课程信息或者偶尔完成MOOC中的测验题甚至考试。无法达到教学目的。3浅学用户：这部分用户学习课程没有明确目标和进度设计，而是根据自身爱好挑选不同的课程进行学习和尝试。虽然比浏览用户留在网上时间要长，并且可能会完成整个课程，但不会深入讨论和学习。4被动用户：该类用户一般是在校学生或者已工作职工，为了获得培训证书。因此学习时完全按部就班地参与学习、讨论，完成作业，既不能为课程做出贡献，也不能产生额外的教学效果。5主动学习用户：该类用户有明确的学习目的、学习东西，能够积极地参与到MOOC教学中，发起讨论给出解决办法，是课堂教学的有力补充和教学主体。同时能自掘地完成课堂任务。
3. MOOC的缺点：1分布广泛，监管困难：大规模虽然是MOOC的一个优点，僵尸用户没有通过MOOC获取任何知识，空占其位，浪费了学习资源。而且，由于规模较大，我们难以掌握每个人的学习情况。2无法提供“校园文化”。在校园中，学生需要处理人际关系，进行社会实践，这在MOOC上都是无法获得的。3互动距离远，导致互动影响小。这是MOOC最显著的问题。Pennsylvania大学教授迈克尔・慕而曾经在1983年论述过该问题，称之为交互影响理论，也叫Moore理论。该理论是说在课堂教学过程中，教师和学生之间存在了物理距离影响着心里距离的情况[4]，即由于物理距离不可达可能导致心里距离的遥远，从而影响了沟通和学习的效果。因此通过MOOC的学习，实际上是一种通过计算机技术将教师和学生之间的距离拉近，并降低了交互距离的现代化举措[5]。
所以，正是基于上面的讨论，MOOC只能作为传统教学的补充，而不能也不影响传统教学模式的地位。
三、课程特点
保密史及保密制度是哈尔滨工程大学针对信息安全（保密管理）专业设立的专业选修课。该课程于开始于2013年，作为一个新开设的课程，保密史及保密制度的课堂具有以下几个特点：1在内容上偏属文科。历史是一种过去的事实，保密史也如此。而选修此课程的学生则都是理科生，这是一个矛盾。作为一个新兴的学科，保密史与传统的历史学科相比材料较少，内容丰富度不足。2学科交叉联系相关。保密史是一种综合性强的学科。它保函古今中外，跟保密相关的各种史实和知识。所以，在课堂教学中要抓住这一特点。3师生间的影响距离大。本课程是小班课程，教学人数在20到30人之间，学生人数少，师生之间能够获得更多的交流、互动，这也是该课程于MOOC课程最大的差别，可以利用这个特点，形成互补。
四、MOOC与保密史及保密制度课程的结合方法
1. MOOC的教学模式：MOOC的授课主要是以视频教学录像与教师的讲解相结合的方式进行在线教学，其中模块化的短视频方式方便学习者按主题学习，学生可以利用零碎时间拆分观看学习。另外，在教学资源中一般会嵌入超链接与相关背景资料，方便学生对知识的延伸[6]。
MOOC的教学模式如图2所示：
图2 MOOC的教学模式
2. 结合MOOC教学模式的教学设计：结合MOOC的授课方式和教学模式，笔者得到以下方面的保密史及保密制度教学方法。1制作开发MOOC视频，保证教学质量。视频课程可以广泛使用，每年只针对新的教学内容进行修改，是一种可持续的教学方式。学生们完全可以在课下进行自主的学习，将课堂的宝贵时间用来发散思维。2丰富教学内容，以知识块为单位建设课程资。MOOC课程的视频资源大多数是以知识模块划分单位，在不同的知识模块之间，可以加入一些考核的内容以强化讲过的知识点，这样同事也可以给学生留出独立思考的时间，并能强化教学效果[7]。3课堂将“以教师为中心”转为“以学生为中心”因为知识的传授可以在课下完成，在课堂上，教师的角色反而减弱。真实的课堂可以转换为MOOC教学模式中的“在线讨论组”“线下见面会”。老师可以及时解决学生的问题，师生之间也可以进行积极的讨论。4发挥大学校园文化的独特魅力[8]。大学作为一种特殊的组织机构，除了具有一般组织机构的特征外，它又有自己独特的文化特性，并以物质的、制度的、精神的形态表现出来。面对MOOC浪潮的冲击与社会的质疑，大学就应该发挥其独特的文化魅力。
五、结语
由于MOOC的兴起，传统大学的教学观念和教学方法都会随之改变。虽然，受到MOOC的冲击，传统的教学还是有其不可替代的地位和作用。如何将MOOC思想应用在保密史及保密制度课程，使教学效果更好是本文关注的方面。
首先，从MOOC的教学模式入手，进行视频开发，并以知识块为单位对课程进行分割；其次，把课堂的“以教师为中心”转为“以学生为中心”，并根据学生的学习情况进行课程调整；只有老师与学生也要共同努力，将方法落实，课程设计还需要在长时间的实践中不断完善。
参考文献：
[]郎大鹏，董宇馨，吕天阳，黄少滨，《基础课教学中结构化综合评价模型的构建与研究》，《计算机教育》，2013（11），第22期
[2]王文礼.MOOC的发展及其对高等教育的影响 2013
[3]中国教育网络.MOOC的五种学生类型[EB/OL]. http：///li_lun_yj_1652/20130507/t20130507939524.shtml
[4]Lang Dapeng， Lv Tianyang， Research on the Method of Computer Practical Class Teaching Based on Cloud Computing，2012，2nd Teaching Seminars on Higher Education Science and Engineering Courses。2012：561-564；
[5]杨杉，夏志鹏.MOOC中的交互影响距离研究.2014
[6]谢莹，解继丽.MOOC革命：在线教育的发展对传统大学的冲击与影响 2014
保健室的秘密范文4
一、关于技术秘密信息许可费价值评估可能涉及的相关资料及其关联性分析
从笔者目前所能够掌握的资料来看，进行技术秘密信息许可费评估具体需要哪些资料，并没有统一的要求，一般都需要根据案件的情况确定，在多数的情况下还要委托单位（公安机关）、受害单位（权利人）与评估机构进行多次沟通。什么时间开始沟通，什么时间沟通什么问题还有可能成为被关注或者被质疑的对象。侦查机关在正式委托评估机构之前，需要确认该评估机构是否可以承担该工作并愿意接受委托。而评估机构在确认能够完成该项委托评估事宜之前，需要了解案件所涉及的具体问题，包括可以提供哪些资料与数据信息等。简单地讲，评估机构在没有回复确认可以完成该项委托前，侦查机关不会出具正式的委托书。如果出具了正式的委托评估函件而评估机构因客观原因无法完成所托事宜的，就必须更换评估机构再次出具委托函件；按现行的流程，这会给公安机关带来很多的问题。所以，在司法实践中就常常会出现委托书出具的时间在评估机构接触案件材料与受害单位之后，这也是辩护人在开庭质证时对此提出质疑的原因。评估机构在正式接受委托手续之前，与侦查机关、受害单位接触的目的虽然是为了确认是否可以完成受托事项所做的必要工作，但程序依然有规范的必要，比如建议公安机关在正式出具委托函件前，将这一阶段的工作纳入办案程序中，并把接触的时间、事实、目的以及所提供的材料信息等予以明确。
基于上述分析，提高效率为顺利进行评估工作做好充分准备显得非常必要，笔者从实务的角度提出点滴建议供参考。下文以化工行业技术秘密信息许可费价值评估可能涉及的相关资料信息为例作简要的说明。
一般而言，为《评估鉴定报告》准备的参考资料主要有：（1）关于经营资质和商业秘密成立的资料，主要是营业证照、公司章程，以及司法鉴定意见书、保密措施等。这类资料多是程序性材料，与评估结果没有直接关系，可以提前做好准备；（2）关于案情的相关资料信息，主要是基本情况介绍、使用涉案技术秘密侵权的相关证据、侵权人项目的规模信息、与技术秘密有关的鉴定报告等；（3）受害单位的财务资料，主要是经过审计的财务报告、设备表、设备订购合同等。这类资料与评估结果关系最密切。评估人员需要根据财务制度到受害单位核实与评估有关的原始单据、合同，并从经审计的财务报告中提取相关财务数据，作为评估的重要参考。这部分财务数据与材料，法律专家需要与受害单位的财务专家做充分深入的沟通；（4）第四类是评估人员根据专业经验进行调研而获得的有关涉案产品市场前景和产业政策等方面的资料。这些资料需要提前为评估机构做好前期的准备工作，包括可以获得这些资料信息的渠道、途径、方法等。
很显然，从实务操作的角度看，上述介绍能够贡献的地方是极其有限的，对该部分业务有所了解的读者不难发现，这是基于“收益法”评估方法而做的举例说明。所谓的“收益法”，即依一定的产品销售规模产生的收益入手，计算未来可能取得的收益，再通过一定的分成率，得出该评估对象在一定的经营规模下于评估基准日的公允价值。针对商业秘密市场价值的评估，除收益法外，还包括市场法和成本法。由于商业秘密形成的直接成本往往与其价值没有直接的对应关系，即投入产出的弱对应性，因此一般不采用成本法，或者在采用时会非常慎重。如果国内有类似商业秘密充分交易的案例时可以考虑采用市场法评估，如果没有充分的案例可以参考的，则放弃市场法。这里需要特别强调的是，不采用成本法的原因是投入产出的弱对应性，而不是对涉案技术秘密投入成本在案件中贡献的漠视，更不是根本的否定。在本专栏的其他文章将会阐述这一问题。
二、技术秘密信息许可价值评估意见结论成立的条件、有效期及其效力
价值评估结论受机构评估人员的职业水平和能力的影响，并且仅为委托方进行以本次评估目的所发生的经济行为提供服务，对于将其运用到其他经济行为时，评估结论一般会失效，不具同等效果。一般来讲，评估工作不考虑国家宏观经济政策发生变化以及遇到自然力和其它不可抗力对资产价值的影响，也不考虑资产将来可能承担的抵押、担保事宜，以及特殊的交易方可能追加付出的价格等对其评估值的影响。当评估条件以及评估中遵循的持续经营原则等其他情况发生变化时，评估结果一般会失效。所以，我们无论是在技术秘密的刑事案件中还是在民事案件中，都要结合案件的具体情况看待所评估的价值，而不能脱离案件以及所涉及技术的具体情况，特别不应当通过运用经济行为来模拟其准确性，从而泛泛地评论价值是过高还是过低，并进而质疑，甚至得出完全否定价值评估意见的结论。
技术秘密信息许可价值评估报告中，一般都会对有效使用期限做出表述，即：从XX年X月X日到XX年X月X日止，评估目的在本评估报告的有效使用期限内实现时，评估结果可以作为参照依据。超过该有效使用期限，需重新进行资产评估。可是，案件还没有审理完毕，评估报告的1年有效期已经届满，怎么办？技术秘密刑事保护司法实践中辩护人曾提出过有效期届满不应采用的辩护观点。笔者认为这个问题要结合案件的具体情况而定。《资产评估准则DD评估报告》（中评协[2007]第189号）第11条规定，“评估报告应当明确评估报告的使用有效期。通常，只有当评估基准日与经济行为实现日相距不超过一年时，才可以使用评估报告。”可见，评估准则规定评估报告的有效期，是为了避免评估基准日确定的评估价值和经济行为实现日的实际价值差异过大而无法使用评估报告。通常，评估报告的有效期是针对评估后一段时间才使用评估资产的情况，此时会产生“评估基准日”和“经济行为实现日”两个时间点，如果经济行为实现日在评估基准日之后并超过1年，则评估基准日的评估价值可能发生重大变化，而不宜再使用评估报告。所以评估报告所确定评估基准日与评估目的很关键。比如，嫌疑人窃取了受害单位全套技术，所要评估的是在窃取完成日假定为受害单位将全套技术许可给使用方的许可价值，以确定受害单位因丧失该次许可机会而导致的损失。可见，窃取完成日，既是评估基准日，也是假定进行技术许可的经济行为实现日，两个时间点是重合的，因此，评估基准日的评估价值，就是许可这一经济行为实现时的许可价值。当评估是对历史时点的价值评估时，就不存在经济行为实现日超过评估基准日后1年而评估报告不能使用的说法了。
三、价值评估报告复核人的法律地位以及《评估说明》的保密问题
《司法鉴定程序通则》（2016年5月1日起施行）第4条明确规定，司法鉴定实行鉴定人负责制度。要求司法鉴定人应当依法独立、客观、公正地进行鉴定，并对自己作出的鉴定意见负责。可是，第32条又规定了一个复核人，即委托的鉴定事项完成后，司法鉴定机构可以指定专人对该项鉴定的实施是否符合规定的程序、是否采用符合规定的技术标准和技术规范等情况进行复核，发现有违反通则规定情形的，司法鉴定机构应当予以纠正。复核人的法律地位是不清楚的。司法实践中，曾发生过辩护人提出复核人是否应当回避的问题。《司法鉴定程序通则》第20条规定：司法鉴定人本人或者其近亲属与委托人、委托的鉴定事项或者鉴定事项涉及的案件有利害关系，可能影响其独立、客观、公正进行鉴定的，应当回避。司法鉴定人自行提出回避的，由其所属的司法鉴定机构决定；委托人要求司法鉴定人回避的，应当向该鉴定人所属的司法鉴定机构提出，由司法鉴定机构决定。委托人对司法鉴定机构是否实行回避的决定有异议的，可以撤销鉴定委托。可是没规定复核人是否要适用回避的条款。《刑事诉讼法》第145条规定，“鉴定人进行鉴定后，应当写出鉴定意见，并且签名。鉴定人故意作虚假鉴定的，应当承担法律责任。”中国资产评估协会《资产评估准则――评估报告》第9条规定，“评估报告应当由两名以上（含两名）注册资产评估师签字盖章。”法律和相关评估准则中没有“复核人”的概念，更未将其规定为“鉴定人”，也未规定其适用回避的相关规定。但是司法实践中复核人的角色又很重要。为了有效地避免争议，笔者建议，评估机构在确定评估师时将复核人也一并告知并要求委托人或者当事人回复是否提出回避申请。
在技术秘密刑事保护的司法实践中，还有一个很敏感的问题，即价值评估过程中评估机构内部保存一份叫做《评估说明》的文件，当辩护人提出要求评估机构提供时，是否应当被支持。这个问题之所以敏感是因为会涉及到受害单位的定价指数与定价原则，非常珍贵并且极易容易泄密，所以受害单位极力反对，评估机构也非常重视。笔者倾向于评估机构有权拒绝提供《评估说明》。
基本理由如下：（1）评估说明是财产评估主管机关、企业主管部门审查资产评估报告书和检查评估机构工作之用，不是法律法规规定的评估报告的组成部分，也非附件；（2）评估说明属于评估专家的专业和经验范畴，评估专家已经当庭详细解释了其中涉及的重要问题；根据评估专家的当庭解释，评估说明主要是如何确定评估中重要参数和方法的技术性说明，属于专家专业和经验范畴，比如技术分成率、评估方法、许可方式等。评估专家可以在当庭详细解释了为什么采用这些参数和方法，而且在评估报告中明确列出了选择确定的最终结果。（3）评估材料中，对评估价值有实质影响的是受害单位的财务资料是保密的，且经过审计机构审计，质疑其真实性理由不充分。
注：本文节选自LexisNexis律商网【桃李知教】专栏，其专注观察和解析知识产权领域最前沿、最新型的法律问题，旨在识微见远，或指点迷津。
保健室的秘密范文5
关键字：降雪，观测，.NET
中图分类号： S161.6 文献标识码：A
1引言
根据中国气象局关于开展降雪加密观测的紧急通知中，为满足预报服务对降雪观测的需求，决定开展降雪加密观测。为了减轻了观测员的工作强度，降低手工编报出错的机率在市局业务科的大力支持下开发编写了降雪加密观测编发报软件。
2 Visual Studio .NET集成开发环境概述
Visual Studio 是微软公司推出的开发环境。是目前最流行的 Windows 平台应用程序开发环境。Visual Studio .NET继承了Visual Basic 6.0的快速开发的优点，另外，与.NET框架下面的其他语言如C#和Visual C++ 一样，Visual Studio .NET是完全面向对象的。Visual Studio 可以用来创建 Windows 平台下的 Windows 应用程序和网络应用程序，也可以用来创建网络服务、智能设备应用程序和 Office 插件。
3 设计思路
此系统的流程如图1所示，其功能包括：参数设置；报文编辑；报文发送；系统主界面如图2所示：
图1 系统运行流程图
图2降雪加密观测编发报软件主界面图
3.1参数设置：右击桌面右下角状态栏的最小化图标，选择“参数”或者系统界面上的红色参数设置连接按钮可以打开参数设置窗体，如图3所示。此模块可以设置台站的区站号、经纬度，方便灵活，可移植性强。报文的发送是通过FTP方式上传到远程服务器上指定的远端路径，所以首先设置连接远程服务器的参数，可以通过此模块设置服务器IP地址、端口、用户名、密码、远端路径，设置完毕重启软件设置生效。如果访问的远程服务器相应参数有变动可以通过此模块重新设置。
图3参数设置
3.2报文编辑：输入观测数据后单击“计算编报”，系统在后台根据降雪加密观测的相关文件按照编报文件名的格式和编报文件内容的格式自动编译并在本地文件夹中生成报文。报文的文件名、文件内容然后在界面上显示出来，形象直观，可读性强。在输入观测数据的时候如果误输入其它的非法数值(如字符，汉字等)或超出观测范围的数值(如累积降雪深度为9999CM等)系统会出现错误提示对话框，来提醒观测员。这在一定程度上减轻了观测员的工作强度，也避免了在手工编报过程中因认为因素造成观测数据的真实性。
3.3报文发送：观测员在认真校对报文的文件名和报文内容准确无误后，单击“报文发送”，系统会自动连接到远程服务器，并把生成的报文上传到指定的远端目录文件夹下。报文发送到远端目录下后，系统把上传到服务器的报文再下载到本地指定的目录文件夹下，然后比较两者报文的内容是否相同，如果相同说明文件发送成功，否则说明文件没有成功发送。在报文发送的过程中从远程数据库的连接到报文内容的比较，发送是否成功，系统界面的报文回执栏都会显示每一步报文的发送过程，一目了然的查看了报文的发送状态。如图2所示。
4 降雪加密观测编发报软件实现的核心代码
4.1在Visual 平台下实现报文编辑的主要代码为：
……
FileName=CreateFileName();//文件名组合函数
if (File.Exists(FileName));//如果文件存在
File.Delete(FileName); //直接删除已经存在的文件
sw=File.CreateText(FileName);//创建新文件
sw.WriteLine(ReportText);//写入文本内容，ReportText表示编辑好的文本内容
……
StreamReader sr=File.OpenText(path);//打开文件
txtReportText=sr.ReadToEnd();//报文内容显示在界面上
……
4.2报文发送是通过FTP方式发送到远程服务器上，主要代码为：
……
//连接FTP
FTP myftp=new FTP(IP,ServerPath,UserName,UserPwd,Port);
//其中IP表示服务器地址，ServerPath表示远端路径，UserName表示用户名，UserPwd表示用户密码，Port表示服务器端口
//上传文件
myftp.Put(UpFilePath, UpFileName);
//其中UpFilePath表示要上传文件的本地路径，fileName表示要上传的文件名
//文件下载
myftp.Get(DownFileName,LocalFilePath); //下载到本地
//其中fileName表示从远端服务器下载文件的文件名，LocalFilePath表示要下载文件到本地的路径。
//关闭连接
myftp.DisConnect();
……
UpFileText=File.OpenText(UpFileName);//打开本地报文
FileText1=UpFileText.ReadToEnd();//读取报文内容
DownFileText=File.OpenText(DownFileName);//打开从远端服务器下载的报文
FileText2=DownFileText.ReadToEnd();DownFileName//读取报文内容
if (string.Equals(FileText1, FileText2)==true)//如果文件内容相同
{
……//报文发送成功。
}
else
{
……//报文发送失败。
}
……
5 结语
本系统在Visual 平台下实现了降雪加密观测自动编报、发报的功能,在张家口全市14个台站2009年11月9日至今加密观测编发报的运行下，没有出现任何错误，可以帮助观测人员减轻工作强度，降低手工编报出错的机率，提高工作效率。
参考文献：
保健室的秘密范文6
作者：李树钧，戚好文，叶江枫，帝新宇，季少平，何鹏，张英起，药立波
【关键词】 嗜酸粒细胞
【Abstract】AIM: To investigate the activity of MIP4 mutant (MetMIP4) in blocking eosinophils chemotaxis in vitro by expressing MetMIP4 in E. coli and purifying it. METHODS: The gene of MetMIP4 was inserted into the expression vector pRSETA and pRSETMetMIP4 fusion protein was expressed by IPTG induction. After E. coli. was lysed by ultrasonic wave， the solubility of the fusion protein was determined by SDSPAGE gel electrophoresis. Protein in supernatant was purified by Ni2+NTA agarose beads. The activity of pRSETMetMIP4 protein in inhibiting eosinophils chemotaxis was determined with 24well chemotaxis plate filter. RESULTS: The pRSETMetMIP4 fusion protein was expressed in E. coli. The solubility of the fusion protein reached 80% and the purity of the fusion protein was 87% by Ni2+NTA agarose beads. Eosinophil was purified from asthmatic blood and Eosinophil purity was 90%. Investigation of biological function of the fusion protein showed that the fusion protein inhibited the eosinophils chemotaxis. CONCLUSION: The pRSETMetMIP4 protein has been correctly expressed in E. coli and the fusion protein is soluble. Study of the biological function of the fusion protein indicates that the fusion protein can inhibit eosinophils chemotaxis in vitro.
【Keywords】 chemotactic factors; eosinophils; gene expression; genetic vectors
【摘要】 目的： 为研究MIP4（巨噬细胞炎性蛋白4）的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性，构建MIP4突变体（MetMIP4）并进行原核表达和纯化，体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用. 方法： 将MetMIP4基因片段插入到pRSETA融合表达载体中.诱导表达后，表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性，细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化.采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞，利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性.结果： 构建入融合表达载体pRSET A的基因在大肠杆菌中得到表达.裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占80%，经镍螯合亲和层析纯化后纯度达87%.分离的嗜酸粒细胞纯度达到90%.拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明，纯化的MetMIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用.结论： MetMIP4突变体基因在pRSET A融合表达载体中获得可溶性表达和纯化，生物学活性实验表明融合的pRSETMetMIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性， 为进一步开发其临床应用奠定了基础.
【关键词】 趋化因子；嗜酸粒细胞；基因表达；遗传载体
0引言
嗜酸粒细胞在外周血和周围组织中的聚集是过敏性疾病、寄生虫感染和许多系统性疾病的标志性特征.正常情况下，嗜酸粒细胞中只有一小部分存在于血液循环或组织中，在疾病状态下可发生特征性的升高，这表明人体存在选择性调节嗜酸粒细胞生成和聚集的分子机制.过敏反应时被激活的嗜酸粒细胞、Th2细胞滤过到组织，β趋化因子受体(CC chemokine receptor 3， CCR3)在这个过程中起到主要作用.CCR3特异地表达于嗜酸粒细胞、Th2细胞表面［1，2］，已经在几种动物模型中证明可以通过同源重组减少Eotaxin.用这种配体的抗体或注射受体拮抗剂MetRANTES减少过敏性炎症［3，4］.文献［5］证实MetMIP4是一种强力和特异的CCR3拮抗剂，在1 nmol・L-1浓度时就能完全阻滞最强力的CCR3激动剂Eotaxin和MCP4引起的嗜酸粒细胞趋化.我们通过合成经过改造的CCR3拮抗剂pRSETMetMIP4，进行表达和纯化，并观察对嗜酸粒细胞趋化功能的影响.
1材料和方法
1．1材料克隆载体pUC19、表达载体pRSET A和E coli JM109(DE3)由本校生物化学与分子生物学教研室提供；DNA重组所用各种限制性内切酶、T4 DNA 连接酶 、反转录酶、PCR反应系统（Taq DNA聚合酶、dNTP，10×PCR缓冲液及MgCl2）购自华美生物工程公司；葡聚糖购自Sigma公司；Transwell 趋化板购自Costar公司.
1．2方法
1．2．1原核表达载体pRSET MetMIP4的构建pRSET A空载体以及测序证实连有MetMIP4的重组pUC19质粒经EcoRI和 BamHI双酶切，回收切下的目的片段与切开的pRSET A载体，用T4 DNA 连接酶连接后，转化入大肠杆菌JM109(DE3)中，挑取克隆，用上海华舜试剂盒提取质粒，经EcoRI 和BamIH 双酶切鉴定获得阳性克隆.
1．2．2pRSET MetMIP4融合蛋白的表达 重组的pRSET MetMIP4阳性克隆重新转化大肠杆菌JM109(DE3)中，于含氨苄青霉素（100 mg・L-1）的培养基中，37℃培养过夜，转接后培养至A600 nm=0.5左右，加入IPTG（异丙基D硫代半乳糖苷）至终浓度为0.2 mmol・L-1， 24 ℃诱导（为增加可溶性）培养2 h.常规方法收菌，进行SDSPAGE凝胶电泳观察融合蛋白的表达［6］.
1．2．3pRSET MetMIP4融合表达蛋白的可溶性分析获得融合蛋白表达的菌株经大量诱导后收菌，加入细菌裂解液（50 mmol・L－1NaH2PO4， pH 8.0， 300 mmol・L-1 NaCl，1 mmol PMSF），超声裂菌（输出功率为40 Hz， 4℃ ， 2×1 min）. 12 000 g，4 ℃离心30 min ，收集上清和沉淀，分别加入2×上样缓冲液（100 mmol・L-1 TrisCl， 200 mmol・L-1 DTT， 40 g・L-1 SDS， 2 g・L-1溴酚蓝， 200 mL・L-1甘油）， 煮沸5 min，离心5 min，进行SDSPAGE凝胶电泳，观察融合蛋白的可溶性.
12. 4融合表达蛋白pRSET MetMIP4的纯化 获得表达的融合蛋白的菌株经大量诱导后收菌， PBS洗2遍，加入MCAC0（20 mmol・L-1 TrisCl，05 mol・L-1 NaCl， 100 mL・L-1甘油，1 mmol PMSF， pH 7.9），超声裂菌（输出功率为40 Hz， 4 ℃， 2×1 min）.12 000 g，4 ℃离心30 min，收集上清，加入TritonX100至终浓度为1 mL・L-1， 经0.45 μm滤膜过滤.滤过后的上清以10~15 mL・h-1的流速过Ni2+-NTA柱.随后分别以MCAC0，MCAC30（MCAC0中加入咪唑至30 mmol・L-1），MCAC100（MCAC0中加入咪唑至100 mmol・L-1，余类推），MCAC200，MCAC300和MCAC500洗柱，收集洗脱液，SDSPAGE分析后，合并含有目的蛋白的组分.以分子截流量为10 000的透析膜于透析缓冲液（20 mmol・L-1 TrisCl，0.5 mol・L-1 NaCl， pH 7.4）中透析24 h后，冻干浓缩.采用Bradford法蛋白定量.
1.2.5血嗜酸粒细胞的分离和纯化取哮喘自愿者静脉血20 mL，用27 g・L-1 EDTA抗凝，加入50 g・L-1葡聚糖TBS缓冲液，静置45 min，吸取富含白细胞的上层液，加在淋巴细胞分离液，1000 g离心20 min， 弃取单个核细胞，管底颗粒细胞用比重为1.070 kg・L-1的percoll液(含100 mL・L-1FCS)调细胞数为1.5×109・L-1， 将percoll原液用10×PBS溶解，用1×PBS调成所需浓度，在10 mL离心管中，依次加入比重为1.070，1.080，1.090 ，1.100 kg・L-1 的percoll液1，1，2，1 mL，最后加入1 mL颗粒细胞悬液.1000 g离心15 min， 回收比重为1.100和1.090 percoll液交界面的细胞层，重悬于Hank’s液中，取少许涂片，Wright染色，测定嗜酸粒细胞纯度［7］.
1．2．6嗜酸粒细胞的趋化活性测定纯化的嗜酸粒细胞用Hank’s液重悬，调细胞数为1×1012・L-1， 加入40 μL的分离纯化的嗜酸粒细胞悬液到24孔Transwell细胞趋化板的上层孔中.实验分为2组1组下层孔加趋化剂Eotaxin至终浓度为50 nmol・L-1， 2组下层孔中加入终浓度为50 nmol・L-1的趋化剂Eotaxin和50 nmol・L-1的MetMIP4蛋白，每组6孔，37 ℃培养5 h，通过上、下层的细胞数，计算嗜酸粒细胞的趋化百分比， 确定pRSET MetMIP4蛋白拮抗嗜酸粒细胞的趋化活性.通过细胞分类计数，分离的嗜酸粒细胞纯度约90%.苔盼蓝染色检查活力，嗜酸粒细胞活力大于90%.
2结果
2．1MIP4突变体的克隆 PCR扩增的MIP4突变体，连入克隆载体pUC19中，经测序证实，与所要克隆的序列一致.
2．2pRSET MetMIP4融合蛋白的表达用EcoRI和 BamHI双酶切连有插段的克隆载体pUC19，琼脂糖凝胶电泳分离，回收目的片段，与相同酶切表达载体pRSETA连接，转化入大肠杆菌JM109（DE3）中.经相同酶切鉴定，获得正确的重组pRSETMetMIP4表达载体.转化入大肠杆菌JM109(DE3)中，经IPTG于24 ℃条件下诱导2 h.常规方法收菌行SDSPAGE，电泳结果显示诱导后Mr 约为12×103的新生蛋白条带出现（Fig 1），与预期的蛋白分子质量相近.
1，2：Expression of fusion protein MetMIP4 induced by IPTG； 3：Expression of fusion protein MetMIP4 without IPTG induction； 4：pRSETA vector in E.coli induced by IPTG； 5：Protein marker.
图1MIP4突变体原核表达载体pRSET A的融合表达，大小约12 Ku（略）
Fig 1Expression of fusion protein MetMIP4 in SDSPAGE（略）
2. 3融合蛋白pRSETMetMIP4的可溶性分析转入大肠杆菌JM109(DE3)中的pRSET MetMIP4融合表达载体经IPTG，24℃ 诱导表达，获得表达的菌体经超声裂菌，分别取上清和沉淀作SDSPAGE（聚丙烯酰胺凝胶），结果显示融合蛋白存在与上清和沉淀中，由于上清体积大于沉淀，经计算可溶性约占80% (Fig 2).
1：Protein marker； 2：Supernatant of E.coli lysate expressing fusion protein MetMIP4； 3：Precipitation of E.coli lysate expressing fusion protein MetMIP4； 4：Full E.coli expressing fusion protein MetMIP4.
图2MIP4突变体原核表达载体pRSET A的融合表达的可溶性 （略）
转贴于
Fig 2Soluble identification of fusion protein MetMIP4 in SDSPAGE（略）
2. 4MIP4突变体原核表达融合蛋白的纯化 转入大肠杆菌JM109(DE3)中的pRSET MetMIP4融合表达载体经IPTG，24 ℃诱导表达和裂菌后，上清经镍螯合亲和层析柱纯化，收集洗脱液，经SDSPAGE蛋白电泳，得到了纯化的融合表达蛋白，纯度达87%（Fig 3）.
1：Protein marker， 97， 66， 43， 30， 21 and 14 Ku，respectively， from top to bottom； 2：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC100； 3：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC200； 4：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC300；5：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC500； 6：Fraction flowed through Ni2+NTA agarose.
图3MIP4突变体原核表达融合蛋白的纯化（略）
Fig 3Purification of fusion protein MetMIP4 with MCAC in SDSPAGE（略）
2. 5MIP4突变体融合表达产物拮抗嗜酸细胞的趋化第1组和第2组嗜酸性粒细胞的趋化百分比分别为70%，29%.结果表明融合蛋白MetMIP4可明显抑制趋化剂Eotaxin诱导的嗜酸粒细胞的趋化作用， 两组相比差异显著（P
3讨论
趋化性细胞因子是一族对各种白细胞亚类如中性粒细胞、淋巴细胞具有显著趋化作用的细胞因子，可分为CXC和CC两个主要亚家族， CXC趋化性细胞因子主要趋化中性粒细胞和T细胞.CC 趋化性细胞因子趋化除中性粒细胞外的其他白细胞，又称β趋化因子，其配体为Eotaxin， MCP3， MCP4和RANTES，主要趋化嗜酸粒细胞、单核细胞.趋化性细胞因子受体有7个跨膜片段，受体的胞内侧是与G蛋白偶联的，G蛋白与多种信号有着广泛的联系，G蛋白的α和β亚单位作为信号效应器而激活细胞内的生物学效应.根据配体亚家族，其受体被分为CCR， CXCR， CX3CR和XCR［8］.
目前认为哮喘主要是以嗜酸粒细胞浸润为主的气道慢性炎症［9］.在哮喘气道炎症调控机制中，不同的趋化因子激活不同的细胞与分子途径，以协调方式构成复杂的细胞因子网络.嗜酸粒细胞可以释放血小板激活因子、白三烯、白细胞介素、嗜酸性阳离子蛋白和趋化因子等，直接参与哮喘的发病.在众多的趋化因子中，迄今只有Eotaxin被证明具有特异性激活嗜酸粒细胞作用，对中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等均无活性.因此对Eotaxin 的研究，不仅有助于从嗜酸粒细胞趋化的角度探讨哮喘特异性气道炎症的本质，亦可能在特异地阻断嗜酸粒细胞募集的环节上，探讨新的不干预正常的细胞/因子活性的平喘药物［10］.在IL2和IL4存在的情况下，Eotaxin 通过T 细胞的CCR3激活T 细胞趋化和粘附活性［11］.Eotaxin 还可以通过ERK2和p38导致嗜酸粒细胞趋化和脱颗粒［12］，说明Eotaxin能够明显地影响嗜酸粒细胞的功能.而突变的MetMIP4能拮抗CCR3受体的活性，阻断其介导的信号途径［13］，抑制过敏性炎性反应.我们通过MIP4氨基末端的丙氨酸改造为蛋氨酸，成功地突变了MetMIP4，通过序列测定，完全符合序列设计，并且成功地进行了融合表达和纯化.MIP4也是PARC，DCCK1，AMAC1［14］.实验显示融合6个组氨酸残基对MetMIP4活性无明显影响，能够通过CCR3阻滞嗜酸粒细胞的趋化.由于pRSETMetMIP4能特异地作用于嗜酸粒细胞、Th2细胞，而且不干扰中性粒细胞功能，因而有望成为抗哮喘和其他过敏性疾病的药物.
【参考文献】
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