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增资报告范文1
（一）节能减排政策落实情况
1、节能工作开展情况：
（一）是加大执法和监督力度，对重点用能单位进行检查和用能审计工作。（二）是与统计部门联合开展用能单位网上填报工作，从源头上确保数字真实具体。（三）是与霍邱县姚李镇、曹庙镇、洪集镇、乌龙镇签订秸杆收购协议，有效禁止焚烧，提高凯迪电厂的秸杆使用率。（四）是加大公共机构的节能工作开展，对空调、走廊灯、纸张等进行重点检查。（五）是加大宣传力度，提高全民节能意识，营造节能氛围，多种形式、方法开展节能宣传周工作。（六）是认真开展节能示范单位申报工作。县中医院、县大别山职业学校获省级节能示范单位称号，积极向省市申报节能项目。目前我县全面完成了市政府下达县政府的节能目标任务。
2、减排工作开展情况：2015年1月23日县政府下发了污染减排计划《县人民政府关于下达2015年主要污染物总量减排计划的通知》（金政秘[2015]19号文），对减排计划进行了分解，并在全县环保大会上与各单位和有关乡镇签订了责任状。环保局要求减排单位倒排工期，按序时进度建设施工。县老城区污水处理厂在2014年11月30日已完成项目主体工程的建设，目前正在运行，同步进行竣工验收监测工作、场地的平整和场区内部的绿化工作。县斑竹园污水处理站已完成竣工验收工作，现已稳定发挥减排效益。县团结养殖合作社的污水处理项目实施方案已通过专家评审，现在正在组织施工。县船冲养殖合作社、金鑫牧业都已完成竣工验收，现已正常发挥减排效益。县污水处理厂今年的管网建设任务已经完成，水量进一步提高，进水量平均达1.4万吨/日，COD≥189毫克/升，出水浓度≤20毫克/升；氨氮进水浓度≥18毫克/升，出水浓度≤3毫克/升。
（二）秸秆禁烧和综合利用政策落实情况
4月7日，全县环保大会，明确严格落实秸秆禁烧三级网络责任制，明晰网格化管理职责，将秸秆禁烧工作列入各乡镇、各单位年终目标考核内容，实行“一票否决”。县政府还与县凯迪生物电厂签订秸秆收购协议，加强秸秆还田等综合利用。
2015年，我县午季农作物种植面积10.8万亩，秸秆产生量3.8万吨，可收集秸秆量2.88万吨，秸秆机械化全量还田8.6万亩，其他途径消化秸秆0.95万吨，动用80马力以上拖拉机112台，联合收割机88台参加午季秸秆还田工作，午季禁烧投入人力200人次、财力105万元。目前正在开展秋季秸秆禁烧工作。
（三）环境执法政策落实情况
按照省、市大检查的要求，县出台了《关于印发县环境保护大检查的通知》。成立了以分管县长为组长，县相关部门负责同志为成员的县环境保护大检查领导小组，组织开展全县环境保护大检查工作。
按照大检查要求，我县排查各类工业园区和重点排污单位的污染防治设施运行是否正常、污染物是否达标排放、固体废物和危险废物处置是否符合规范要求以及是否存在环境风险隐患等情况；重点检查生物质发电、化工、钢铁、制药、电镀、水泥等重点排污企业以及县污水处理厂、生活垃圾处理场、矿山采选企业、危险废物产生单位环境守法情况；排查建设项目环境影响评价制度和“三同时”制度执行情况；检信重访、群众反映强烈、影响恶劣的环境案件，以及长期未得到彻底解决的突出环境问题等进行了大检查，期间共检查企业90多家，下发各类监察意见30余份。处罚3家，责令停产1家，限期整改11家。
各乡镇也成立了环境执法检查领导组，制定方案，详细排查。
（四）大气、水、土壤污染治理政策落实情况
1、大气污染防治工作。2015年，我县大气污染防治工作继续有序深入推进，实行“条块结合、以块为主”网格化管理模式，环境空气质量控制目标实行乡镇（园区）负责制，每一项重点治理任务在属地管理，乡镇政府、园区管委负责的基础上，确定一个县直相关部门牵头负责，完成情况纳入县政府年度目标考核。（一）是强化扬尘治理。强力推进建筑建造方式转变，开展建筑工地、道路、物料堆场扬尘综合整治。加强对县城建成区内现有的6家建设工程工地的管理，通过落实施工现场封闭围挡、道路硬化、材料堆放遮盖、进出车辆冲洗、外挂密目网、建筑垃圾清运、车辆进出口视频监控以及渣土运输车辆密闭等措施，减少建筑施工扬尘污染。建立长效机制，及时跟进新开工项目，定期和突击检查扬尘防治措施落实情况。5个物料堆场落实了防风抑尘控尘措施。渣土运输车辆严格实行密闭运输，落实了冲洗保洁措施。县城城区增加了道路洒水频次，推行城区道路机械化清扫等低尘作业方式。（二）是整治餐饮油烟污染。2015年5月，县十六届人民政府第18次县长办公会议通过了县市场监督管理局提出的城镇餐饮油烟污染专项整治方案。下一步按照县城先行、实事求是的原则，整治餐饮油烟污染，同时大排档的抽油烟机也要考虑进去；对改造费用，财政实行以奖代补，逐一验收，差额补贴；加强抽查核实，防止套取。在此基础上，我县拟于2015年进行餐饮业油烟污染专项整治的8家餐饮企业，已完成餐饮油烟净化设施安装和油烟废气达标排放工作。（三）是强力推进县城生活燃煤锅炉整治。城区8家生活燃煤小锅炉已有1家拆除，7家改用多功能生物质燃料等清洁能源锅炉。（四）是加强城镇生态建设。县编制了县城总体规划，强化了城市生态、绿地空间管控。持续推进了道路绿化、居住区绿化、立体空间绿化和城市周边绿化。（五）是加强工业废气治理。金安不锈钢铸造有限公司对煤气发生炉进行脱硫改造，使综合脱硫效率达到90%，二氧化硫排放减少了23.1吨。（六）是加强矿山整治。县陆续关闭了22家石料厂，对12家石料、石材企业开展扬尘整治，采取建设收尘设施、硬化厂区道路、料仓进行封闭、堆场进行覆盖，厂区进行洒水抑尘等措施，有效控制了扬尘污染。
2、水污染防治工作。（1）加快《重点流域水污染防治规划》项目实施，完成“十二五”规划项目建设任务。加强项目环境监管，加大环境执法力度，确保已完工项目发挥环境效益。目前，我县“十二五”期间规划的11个项目已完成9个，在建的2个(祥堡生态农业科技开发有限公司养殖废弃物综合利用项目和县麻埠镇鲜花岭街道饮用水源保护工程)。（2）加强梅山、响洪甸水库库区污染排查整治，严把建设项目环境准入关，全面开展库区周边工业污染企业排查和整治，严厉打击饮用水水源保护区环境违法行为，坚决取缔保护区的排污口，对于排放污染物的建设项目及保护区内违法建筑一律责令拆除或者关闭；杜绝水源保护区内违法网箱养殖、渔业养殖、农家乐等活动。目前，全县集中式饮用水水源地水质全部达到了国家标准。(3）以保障群众饮用水安全为首要任务，切实加强饮用水水源地保护。积极开展县城区饮用水源地环境管理状况评估和乡镇集中式饮用水源保护区的划分（调整）工作，保护饮用水源水质，制定饮用水源安全保障措施。
3、土壤污染防治工作。我县对土壤环境情况进行了调查摸底，为《省土壤环境保护与综合治理方案》提供了基础资料。下一步将结合相关土壤污染防治方案计划以及“十三五”环境保护规划编制工作，规划编制土壤修复工程项目。
（五）存在的主要问题和工作打算
通过各部门的共同努力，我县综合污染防治工作取得了一定的成效，但仍然存在不同程度的问题：
1、环境保护宣传需要进一步加强。宣传重点是农村和乡镇领导干部，以及学校的宣传教育，要经常开展宣传进旅游区、进林区与进工业区等多种形式，进行针对性宣传。
2、生态建设与环境保护需要进一步投入。生态建设与环境保护经费严重不足，特别是农村的生态环境保护历史欠账太多。我们应该抓住国家加大对大别山区加大投入的机遇，大力争取资金和政策，同时整合农业、林业、水利、城建、环保等各方面的资金，优先解决突出的环境问题，并且建成一批适合我县有山区特色的具有不同生态模式的村镇。
3、环境监管监测设施需要进一步完善。县环境监测能力亟待加强，重点是解决监测人员问题，完善我县大气和水环境质量监测网络。
增资报告范文2
一、成立自查小组，传达检查方案
我社及时成立了由社主任刘x为组长、副主任刘x及各分社负责人为成员的新增贷款自查领导小组。认真学习新增贷款检查方案，组织专人负责。
二、认真自查，真实反映
1、截止2011年8月28日，全社新增贷款xx万元，其中农户小额贷款新增xx万元，中小企业贷款新增xx万元，汽车按揭贷款新增xx万元，其它个人生产消费贷款新增xx万元。
2、1-8月新增贷款单笔超过500万元的贷款仅一笔，为xxx有限公司于2011年x月xx日发放的800万元，期限一年，借款方式为抵押，借款用途为购钢材，符合其生产经营的范围。
3、我社的所有新增贷款除农户小额贷款以外，均按照“三个办法一个指引”的要求进行操作，按借款人提供的资金用途要求等相关资料进行自主或受托支付，借款人的借款用途均符合其生产经营或消费的范围。
4、我社年初进行企业评级授信时，就严格控制“两高一剩”和落后产能企业的评级授信，截止目前，我社无“两高一剩”和落后产能行业项目授信企业。
增资报告范文3
__乡2015年促进农民增收工作在乡党委、政府的安排部署及县级相关部门的支持下，精心组织，广泛宣传，认真落实，在今年上半年取得了明显成效。按县委、县府办公室《关于分解落实2015年促进农民增收工作目标任务的通知》（青委办〔2015〕27号）精神，我乡认真落实，开展了自我检查，现将情况汇报如下：
截止2015年6月30日__乡农民生产经营所得总额为1175.8万元，农民人均纯收入为3694元。按生产行业划分，全乡农村经济总收入为1813.1万元，其中：农业收入为901.2万元（种植业收入832.6万元、其他农业收入68.6万元），林业收入87.4万元，牧业收入482.6万元，工业收入110.7万元，建筑业收入58万元，商饮业收入96.2万元，服务业收入11.6万元，其他收入65.4万元，农业生产总费用为842.7万元。到2015年上半年我乡农民农村经济净收入为970.4万元，农村外出务工劳务收入为205.4万元。
今年上半年我乡农民人均纯收入完成2015年度目标任务的47.3﹪，到2015年底预计我乡农民人均纯收入将达到7860元，在__年的基础上增长17.2﹪。
(一)高度重视，健全机构
为扎实推进我乡促进农民增收工作，乡党委、政府把该项工作列入重要议事日程，多次召开会议研究此项工作。乡上成立了以乡长王萍为组长，驻村领导为副组长，乡农业服务中心、财政所、村两委为成员的__乡促进农民增收工作领导小组。各村分别成立了以村党支部书记为组长，相关村社干部为成员工作小组，具体各村促农增收工作的落实。明确分工，强化责任，确保2015年工作目标的完成。
（二）大力宣传、积极发动
通过召开村民代表会议，党员大会，开辟宣专栏，制作固定标语等形式，全力营造促农增收工作的氛围。通过有效的宣传，把党的政策化作农民群众的实际行动，增强了他们的积极性、创造性和主动性，有力地推动了促农增收工作的顺利开展，营造了群众积极参与的良好氛围。
（三）科学规划、强力推进
为了切实做好全乡促进农民增收工作，根据各村实际发展情况制定了__乡2015年促进农民增收工作实施方案。一是在种养业方面以保证我乡原有的种养业优势，大力发展以绿色山珍、有机茶叶、中药材、林下魔芋为基础的特色产业，在南溪村、五星村规划建设有本地特色的农业科技示范片1500亩。二是在林业方面以加强核桃标准化管护为主，加快银杏风景林建设，计划实施第二轮退耕还林项目。三是加强农村基础设施建设改善群众生产生活条件，扩大政策性农业保险化解群众生产风险，保障发展农业生产、增收致富。四是加强农村劳动力技能培训，增加劳务输出工资性收入。五是严格落实各项补贴政策，增加农民的财产性收入，加强精准扶贫力度，以贫困户基础建设、产业发展为中心，做到“村村有产业基地、户户有增收项目”。
（一）我乡农业生产发展以传统方式的种养业为主，结构单一，缺乏发展新动力。下一步将加快产业结构调整，大力加强林业中的银杏、核桃等产业发展，加快茶叶管护与茶叶加
增资报告范文4
首先是资源浪费，高校固定资产和企业的固定资产有明显的区别，高校固定资产一般来源于国家财政拨款，所以不直接产生经济效益，使用过程中也不需要进行成本核算。现阶段，因为很多高校都进行二级财务核算，这就造成了高校内部各个院系盲目的购置固定资产，不结合自己的实际需求，购置一些使用价值不高但非常昂贵的固定资产，造成资源的浪费；其次是账实不符的问题，固定资产的数据处于不断变化之中，其存放地点、使用人等项目随时都可能变化，因此必须及时更新。但因为大多数高校不重视固定资产的盘存清查，资产数据无法第一时间更新，同时固定资产管理部门和高校财务部门之间沟通存在障碍，并未定期核对账务，从而产生了很多“糊涂账”；最后是管理问题，大多数高校依旧使用的单机管理软件，这些管理软件在多级分散管理模式下已经明显的暴露出自身的局限性，固定资产管理方式的落后，管理软件的不稳定等因素都导致了高校固定资产无法很好的保值增值。
二、新时期高校固定资产的管理途径
1.做好采购验收
高校固定资产的管理部门应该深入开展可行性研究与调查分析，避免出现重复购置盲目购置的问题，避免购置一些价值不高、无法保值的固定资产。高校方面应该建立固定资产集中采购与招标管理领导小组，对固定资产招标、采购的整个流程实施全方位的监管，确保采购资产的质量，避免资金的浪费，保证固定资产质量与采购资金之间的平衡。另外还应做好验收管理，确保采购回的固定资产符合质量标准，坚决防止暗箱操作或腐败问题的发生。
2.完善核算方法
其一应该引入权责发生制，固定资产一直以来都是高校重要的资源，因此我们必须对固定资产从采购、使用、报废整个流程进行科学的确认、计量，因此我们在对固定资产的核算过程中应引入权责发生制；其二是高校固定资产计提折旧，我们知道固定资产无论使用与否，其都会随着时间的推移而发生损耗，自身价值也会逐渐降低，为了客观的反映这种情况我们必须对固定资产计提折旧。这样一来不但能够建立与高校资金循环相符合的补偿机制，同时还可以实现高校固定资产的价值管理与形态管理相统一。随着社会主义市场经济的发展和我国高等教育事业的发展，作为市场经济中的重要组成部分，高校也应该进行投入与产出的计算，计提固定资产折旧能够按照固定资产的不同种类来考虑有形损耗与无形损耗，从而帮助我们选择正确的核算方法。
3.加强计划管理
一方面是实施经费预算指标控制，高校固定资产的预算编制工作必须要站在全局的高度，结合高校自身发展目标以及固定资产的存量情况，科学的制定购置预算，做好固定资产使用效益的可行性分析，确保实现统一管理，避免固定资产闲置而导致资源的浪费；另一方面是要做好固定资产统筹管理调度，合理使用目前已有的固定资产资源，不断提升固定资产的综合利用率。要努力打破高校内各院系、各部门、各专业的限制，结合不同学科专业的具体教学教研任务，将相近的实验室做好分类、重组，建成跨专业、跨学科的综合实验室，最终实现资源贡献，也别是对于一些比较贵重的实验教学设备以及实验室，应该尽可能减少其空闲时间，让其使用价值充分发挥出来。
4.盘活存量资产
要切实转变现阶段高校固定资产由各个部门所分散占用的局面，集中统一进行安排，避免固定资产的空置率，充分发挥出高校固定资产的价值，不断优化各院系各部门的资源配置，从而实现全校固定资产的共享，确保固定资产的保值增值。
另一方面要坚持做好日常清查。为了确保高校固定资产的真实性，应该定期对所有的固定资产展开清查工作，每一年要至少进行一次全面的盘点，重点清查固定资产帐表、账物是否相符，账目是否规范。同时还要做好固定资产审计监督工作，高校固定资产属于国有资产的一部分，固定资产的安全和完整直接影响着其自身价值的发挥，关系到高校的发展。所以只有同时做好固定资产的审计工作才能保证其保值增值。
增资报告范文5
新浪财经讯，北京时间10月9日下午消息瑞信今日《全球财富报告2013》。报告预测，亚太区在未来5年将实现8.4%的财富增速，并从2017年起取代北美洲成为全球最富裕的地区。届时，全球财富将增长93万亿美元，中国将贡献近50%。
《全球财富报告2013》指出，全球家庭财富总值由2012年年中上升4.9%（按当期币值计算）至2013年年中的241万亿美元。受美国楼价回升和股市兴旺带动，北美洲的家庭财富上涨11.9%至78.9万亿美元，取代亚太区和欧洲成为全球最富裕的地区。由于期内日圆兑美元贬值22%，日本的家庭财富以美元计算下跌20.5%，至22.6万亿美元，拖累亚太区财富总值减少3.7%，至73.9万亿美元。然而，亚太区（除日本以外）在2013年年中继续录得6.2%的稳定财富增长，至51.3万亿美元。
瑞信私人银行及财富管理部亚太区首席投资总监范卓云女士说：“亚太区仍然是全球经济增长和创富动力的主要来源，占全球家庭财富31%，并涵盖全球新兴中产消费阶级人口的61%，增长潜力巨大。”
亚太区：中国财富增幅最高，日本财富因日圆贬值而录得最大跌幅
《全球财富报告2013》发现，由2012年年中至2013年年中，全球家庭财富总值增长4.9%，即11.3万亿美元（按当期币值计算），至241万亿美元，而成人平均资产净值则由去年的49，990美元增至51，600美元的纪录高位。北美洲自2005年以来首次成为全球最富裕的地区，家庭财富增长11.9%（即8.4万亿美元）至78.9万亿美元（见表1）。虽然今年的经济环境持续带来挑战，但欧洲的家庭财富增长5.5万亿美元，增幅为7.7%。由于股市不断上升，到2013年年中，欧元区的成人平均财富已收复之前12个月的巨大跌幅超过一半。
由于期内日圆兑美元贬值22%，日本成为亚太区内唯一家庭财富下跌（按当期美元币值计算）的国家。日本家庭财富下跌20.5%，即5.8万亿美元，导致亚太区财富总值下跌3.7%，至73.9万亿美元。然而，亚太区（不包括日本）的财富继续录得6.2%的稳定增长，于2013年年中达51.3万亿美元。在过去一年，美国、中国和德国是全球财富的三大增长来源。中国的家庭财富增长6.7%至22.2万亿美元，成人平均财富为22，230美元，为全球第三高，仅次于美国和日本。
在中国，由于储蓄率偏高和金融机构的发展相对完善，中国家庭资产中的金融资产比重（46%）高于其他主要的新兴市场国家。虽然中国家庭债务水准相对偏低，成人平均债务为1，400美元，相当于总资产的6%，但个人负债近年来一直迅速增长，于2012-13年度升幅达20%。相对于世界和其它新兴市场，中国的整体财富不均情况仍属温和，中国42%的成年人口拥有10，000美元以上的财富，高于全球平均水平为31%。然而，随着企业家、专业人士及投资者的财富不断增加，财富不均情况在近年一直扩大。
未来财富大势：亚太区财富将按年增长8.4%，到2018年达110万亿美元
报告预测，全球财富在未来五年将上升39%，到2018年达334万亿美元，年增长率为6.7%。预测期内全球财富将增长93万亿美元，其中新兴市场占29%，而中国占近50%。在强劲的经济增长支持下，预期亚太区在未来五年将继续是全球最大的新增财富来源地，家庭财富由现时的74万亿美元，按年增长8.4%至2018年的110万亿美元，增幅达49%，即36万亿美元（见图1）。亚太区占全球财富的百分比估计将由2013年的31%增至2018年的33%。预期亚太区将由2017年起取代北美洲成为全球最富裕的地区。
在国家层面，预期美国将继续录得最高的财富总值，到2018年将迫近100万亿美元。日本有望继续成为全球排行第二的富有国家，直至大概于2016年被中国取而代之。预测中国的家庭财富将增长62%，至2018年的35.9万亿美元，即按年增长10.1%，而在全球财富的占比将由2013年的9.2%上升至10.8%。
预测亚太区百万富翁在未来五年将增长75%
报告估计，全球的百万富翁数目到2018年可能超过4，700万，较2013年增长50%，即按近1，600万。预期美国新增的百万富翁最多，为数达540万名。新兴经济体的百万富翁数目到2018年将仍然远低于美国（1，860万）或欧洲（1，500万），但预期增幅将超越先进国家。于未来五年，百万富翁数目增幅最高的国家预计是中国、南韩、马来西亚、印度和香港，分别为+88%、+79%、+76%、+66%及+63%（见表3）。根据预测，日本在未来五年的百万富翁将增加85%，原因是日本政府推行刺激景气政策，而预期结构性改革将改善日本的中期财富增长前景。
报告预测，亚太区的百万富翁总数将增加75%至2018年的1，150万，而北美洲和欧洲的增幅分别为41%和47%。到2018年，亚太区将占全球百万富翁总数的24%，由目前的21%上升。在亚太区，中国将是新增百万富翁的主要来源，到2018年的百万富翁数目预计达210万。
财富金字塔上层
报告估计，全球有98，700名个人资产净值超过5，000万美元的超高净值人士，当中33，900人的个人资产值最少达1亿美元，而3，100人的资产值超过5亿美元。北美洲在地区排行榜占前列位置，共有48，000名超高净值人士（49%），美国则以45，650名超高净值人士，大幅抛离其他国家（见表4）。欧洲有24，800名超高净值人士（25%），而亚太区则有21，790名超高净值人士（22%）。中国以5，830名超高净值人士（占全球总数5.9%）排名第二，仅次于美国。
按成人平均财富计算，澳大利亚和新加坡是亚太区内最富裕的国家
按成人平均财富计算，瑞士仍然是全球最富裕的国家，其于2013年的成人平均财富为513，000美元，其次为澳大利亚（403，000美元）及挪威（380，000美元）（见表5）。在亚太区，按成人平均财富计算，澳大利亚和新加坡（282，000美元）是最富裕的国家，而日本则因日圆大幅贬值而跌出十大。值得注意的是，澳大利亚的成人平均财富中位数219，500美元为全球最高，抛离瑞士（95，916美元）和挪威（92，859美元）。
财富流动性
增资报告范文6
【关键词】 nf-κb；核糖核酸类，反义；肌细胞，平滑肌
effect of antisense rna of nf-κb on proliferation of vascular smooth muscle cells in spontaneously hypertensive rats/hu rong，hong huashan，xu changsheng，wu kegui//chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(2):116
abstract：objective:to investigate the effect of antisense rna of nf-κb on proliferation of vascular smooth muscle cells（vsmcs） in spontaneously hypertensive rats（shr） promoted by thrombin.methods:after pretreated with the 50moi recombinant adenovirus expressing antisense rna of nf-κb for 48h and 100μmol/l pdtc （nf-κb special inhibitor）for 1h， vsmcs proliferation induced by 0.5u/ml thrombin was investigated.the proliferation rate of vsmcs was determined with both wst-1 metabolic activity and 3h-tdr incorporation efficiency.results:the pretreatment of recombinant adenovirus expressing nf-κ b antisense rna obviously inhibit vsmcs proliferation induced by thrombin (p<0.01) at the rate of >30%, which was similar to the inhibition of vsmcs proliferation by nf- κ b special inhibitor pdtc with no statistical difference between two group(p>0.05).conclusion:the recombinant adenovirus expressing nf-κ b antisense rna may effectively inhibit vsmcs proliferation induced by thrombin,is similar to the nf- κb special inhibitor,may be applied to successive basic research and clinical interference treatment.
author′s address：department of cardiology，union hospital，fujian medical university，fuzhou，fujian，350001,china
key words：nf-kappa b;ribonueleases,antisense; myocytes,smooth muscle
血管平滑肌细胞（vsmcs）的增殖、向内膜下迁移、分泌细胞外基质等在血管增殖性疾病的发病中起重要作用。体内可以引起细胞增殖的因素很多，各种有丝分裂原可通过不同的信号传导系统产生细胞增殖反应，单纯抑制某种特定的因子并不能完全抑制病灶形成。因此，阻断调节细胞增殖、分化、迁移等最终共同通路的关键基因成为有效防止血管增殖性疾病的研究方向。核因子-κb（nf-κb）是调节细胞基因转录的关键因子之一，调控几十种生长因子、细胞因子、粘附因子、趋化因子等靶基因的表达[1]。因此，许多学者认为调控nf-κb的活性是一个理想的治疗靶点。基因治疗是从基因水平改变细胞的病理状态而达到治愈疾病的目的，具有一次治疗长期有效的优点，克服现有药物疗法的缺点，实现“生理性治疗”[2]。反义rna是一类能与特异性mrna互补的小分子质量的、可扩散的dna转录物，它能够从翻译水平、转录水平和核酸复制水平上高度特异性地抑制靶基因表达。反义核酸技术的意义在于仅干扰靶基因功能，对基因组其它基因的结构无影响，而且方法简便。本研究试图在细胞水平探讨以腺病毒为载体，nf-κb反义核酸治疗对vsmc增殖的影响，为其在整体动物的水平治疗经皮冠状动脉介入治疗（pci）术后再狭窄和动脉粥样硬化（as）奠定基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料
实验所用的自发性高血压大鼠（shr）购自北京维通利华有限公司［二级动物合格证号：scxk(京)2003-0003］。表达nf-κb反义rna重组腺病毒载体－pad/cmv/269和空载体pad/cmv系本实验室构建保存[3]；凝血酶、吡咯烷二硫氨基甲酸盐（pdtc）（sigma公司）1；氚-胸腺嘧啶核苷（3h-tdr，中国原子能科学研究院）；测定细胞活性的wst-1试剂盒（德国boehringer mannheim公司）；阳离子脂质体（lipofectamine）tm 2000转染试剂（invitrogen公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 vsmcs的培养与鉴定[4]:以组织贴块法培养vsmcs。取清洁级三月龄雄性shr大鼠，无菌操作分离其胸主动脉，剪碎后加入含15%胎牛血清（fbs）的dmem培养液（含100 ku/l青霉素，100mg/l链霉素），5%co2、37℃二氧化碳培养箱静置培养。实验选用3～5代细胞。用光镜和免疫细胞化学法鉴定。
1.2.2 重组腺病毒的制备、滴度测定及鉴定[3]:paci酶切使重组腺病毒质粒pad/cmv/269线性化，紫外分光光度计测定质粒的纯度及浓度。按lipofectaminetm 2000转染试剂盒操作说明，用脂质法转染培养好的293单层细胞，进行细胞内包装，形成并释放完整的腺病毒颗粒。包装后的腺病毒用空斑法测定滴度，操作按virapowertm adenoviral expression system 试剂盒说明书。重组腺病毒用聚合酶链式反应（pcr）方法进行验证，按dna提取试剂盒操作说明。
1.2.3 实验分组:实验选用3-5代的培养vsmcs，用0.125％胰酶消化后，以2×104个/孔或5×103个/孔，均匀接种于24孔或96孔培养板上，待细胞贴壁生长至70%～80％汇合时，吸弃原培养液，换用无血清或0.2％血清的dmem培养液，继续培养24h，使vsmcs处于g0/g1期，再进行后续干预实验。将培养细胞分为5组：①空白对照组：加入无血清dmem液；②空载体组：加入50多重感染（moi） ad/cmv感染vsmcs；③凝血酶组：加入终浓度为0.5u/ml凝血酶；④pdtc组：先加入终浓度为100μmol/l的pdtc预处理1h，再加入终浓度为0.5u/ml凝血酶；⑤反义rna预处理组：先加入50moi 重组ad/cmv/269感染vsmcs后48h，再加入终浓度为0.5u/ml凝血酶。按实验要求细胞继续培养至加刺激因素凝血酶后24h，测定细胞增殖率。每组复3孔取均值。重复4次。
1.2.4 vsmcs增殖的测定方法:wst-1代谢活性测定[4]：取3～5代vsmcs以5×103个/孔均匀接种于96孔培养板上，培养至70%～80％汇合时，换用0.2％血清的dmem培养液，继续培养24h，使vsmcs处于g0/g1期。在上述各干预因素刺激至规定时间后加入即用型wst-1溶液，10μl/孔，继续置37℃ 5％co2培养箱孵育90 min。取出培养板，置振荡器上充分振荡（300 r/min）1min，在酶标仪450/630nm双波长处检测光密度（od）值，即wst-1检测值。每次实验均设一个（复3孔）空白对照孔（以dmem培养液代替细胞），对照孔吸光值应<0.01。dna合成率测定：3～5代vsmcs以2×104个/孔，均匀接种于24孔培养板上，在上述干预因素加入时，同时加入1微居里/ml的3h-tdr，共育至相应时间后，吸弃培养液，0.125％胰酶消化细胞，收集细胞于0.45μm的微孔滤膜（预先用10％三氯醋酸湿润）上，负压抽滤，用生理盐水和10％三氯醋酸冲洗滤膜，室温凉干后置入液体闪烁杯中，加入3ml闪烁液［二甲苯+0.5%二苯基噁唑（ppo）+0.04%对苯撑苯唑基（popop）］，静置过夜后，在液体闪烁计数器上进行放射性强度的测定。
1.3 统计学处理
实验结果用数据和图表表示，测定值以均数±标准差(±s)。采用spss 10.0统计软件包分析。组间比较采用多样本均数的单因素方差分析检验。p<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 nf-κb反义rna重组腺病毒感染vsmcs对vsmc wst-1代谢活性的影响
凝血酶＋反义rna组和凝血酶＋pdtc组的wst-1的od值均比凝血酶组明显减少（p<0.01），反义rna组与pdtc组之间不存在显著差异（p>0.05）。50moi nf-κb反义rna和100μmol/l pdtc对0.5u/ml凝血酶诱导的vsmc wst-1代谢活性增加的抑制率分别为35.64％和36.32％，较之凝血酶组显著减少（p<0.01），见表1，图1。
2.2 nf-κb反义rna重组腺病毒感染vsmcs对vsmc 3h-tdr掺入率的影响
凝血酶＋反义rna组和凝血酶＋pdtc组的3h-tdr掺入率均比凝血酶组明显减少（p<0.01），反义rna组与dptc组之间不存在显著差异（p>0.05）。50moi nf-κb反义rna和100μmol/l pdtc对0.5u/ml凝血酶诱导vsmc 3h-tdr掺入率增加的抑制率分别为45.22％和49.62％，较之凝血酶组显著减少（p<0.01），见表1，图2。表1 不同组wst-1测定的代谢活性和氚胸腺嘧啶核苷（3h-tdr）掺入率(n=4)
3 讨 论
许多能够抑制vsmc增殖的药物，无论是在基础研究还是临床实验中，均已被证明具有防治动脉硬化及pci术后再狭窄的作用。但由于药物治疗的效果尚不十分理想，以及必须坚持长期用药给病人心理上造成了巨大的困扰，寻找更加有效和方便可靠的治疗方法便成为心血管病研究的热点。尽管基因治疗目前尚不十分成熟，但在这一领域中所取得的成就已引起众多学者的关注。
凝血酶是一种重要的血管活性物质，除凝血作用外，晚近也证明它还能促进vsmc的增殖和迁移；促进血管壁非细胞成分的累积和新生内膜形成和释放炎症反应因子等作用，其功能多由细胞表面的凝血酶受体基因介导[5]。nf-κb是调节细胞基因转录的关键因子之一，新近研究发现vsmc中存在着nf-κb通路，且是vsmc增殖必经的激活通路。本系列实验的先前研究结果显示凝血酶能够激活vsmc的nf-κb，使其从细胞浆转位至细胞核，而且凝血酶引起的vsmc增殖与nf-κb途径相关联[6]。nf-κb可能是vsmc增殖的细胞内信号转导的共同通路。国内、外已有利用反义核酸技术抑制凝血酶受体表达来阻断凝血酶作用，从而抑制vsmc增殖的报道[7～9]，但利用反义表达载体、反义核酸技术抑制nf-κb的生成，从而达到抑制凝血酶诱导vsmc增殖的目的至今尚未见相关报道。
本研究利用前文[3]构建的nf-κb反义rna腺病毒表达载体，转染293细胞，获得高滴度腺病毒上清，再感染vsmc，观察nf-κb反义rna对凝血酶引起的细胞增殖的作用。结果显示，该载体能在vsmc内表达出nf-κb反义rna，显著抑制了凝血酶诱导的vsmc增殖，显示出该反义表达载体在心血管细胞增殖性疾病的基因治疗的研究中具有良好的适用性。
基因治疗是从根本上针对发病环节的一种治疗手段，靶向性更明显，具有一次治疗长期有效的优点。本实验结果证实，在同等条件下，nf-κb反义rna对vsmc增殖的抑制率＞30％，即具有生物学效应，且与nf-κb特异性阻断剂pdtc的抑制作用相仿，为今后进一步的基础研究和临床干预治疗奠定了基础。值得注意的是，nf-κb在维持机体的防御功能和细胞生死平衡方面，起着极其重要的作用，完全地、持续地阻断nf-κb激活有可能导致免疫缺陷和正常细胞的凋亡[10,11]。因此，如何进一步提高反义核酸技术的稳定性、有效性、安全性，尚待进一步的研究。
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