前言：中文期刊网精心挑选了孙维的爷爷范文供你参考和学习，希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感，欢迎阅读。
孙维的爷爷范文1
关键词：供电企业；线损分析；管理对策
供电企业在对人们日常生活和生产供应电能的时候，会出现一定线损问题，研究和分析供电企业的线损分析及管理对策就显得尤为重要。
一、线损的含义及分类
线损就是电力企业在分配、运输、管理等过程中形成的损失。总电量中线损电量占据的百分比就是线路损失率，也就说线损率。依据种类来说线损可以分为以下几种，管理线损、理论线损、定额线损、统计线损等。管理线损是电力企业在供电的过程中，因为人为因素，计量设备误差等因素导致出现线损，属于可控线损。理论线损主要就是电力企业在分配、输送电能的时候，通过电网供电设备参数、电网负荷情况决定的正常的、不可避免的理论计算电能消耗，又叫做技术线损。
二、供电企业出现线损的原因
（一）分布负荷不合理
（二）线路维护不到位
（三）配电变压器容量不匹配
（四）无功补偿缺乏
（五）用户窃电问题
三、供电企业的线损管理对策
（一）降低线损的技术措施
1.优化电网结构
合理改造电网，完善电网配电布局，改造或及时更换半径过大供电线路、卡脖子线路、线径比较细线路、迂回线路、淘汰型电能表等，不断优化网络结构，可以在一定程度上降低线路的损耗，为进一步发展提供依据。
2.选择合理的变压器
电网配电变压器的容量以及型号会极大程度上影响电能损耗，应大量应用S9变压器，并其在一些经济比较发达区域合理应用非晶合金节能型配电变压器。选择变压器容量的时候，需要合理匹配负荷和容量，防止形成大马拉小车的问题，促使仅具备60～70的变压器负荷率。
3.完善无功补偿
无功设备有机结合动力用户低压侧补偿以及10kV变电站高压侧补偿，依据结合分散补偿和集中补偿的形式来有效增加功率因数，达到降低损耗的目的，在调整20KW及以上用户电力功率因数的时候，应该不断完善和建设无功补偿设备。
4.检查是否存在失流、失压的系统内关口表
及时上报到相关部门现场互感器倍率小、接线错误等情况，以便于及时作出调整和停电计划，改进相关部门实施的跟踪进度，协调有关部门实施停电整顿工作。
5.大力推进新技术应用
（1）安装配变监测设备，及时监控配变负荷、功率因数、三相负荷平衡度，实现远程读取考核总表；（2）对于不能实现远程读取表止度的计量点安装 GPRS 装置； （3）电缆线路或老城区隐蔽线路，采用户变核对装置进行核对；（4）实现营销信息系统和配网 GIS 系统的连接，实现所有异动从配网 GIS 发起并形成流程传到营销系统来修改；（5）加强倒电器窃电，破坏多功能电子表计数器等高科技窃电技术应对措施的研究。
（二）降低线损的管理措施
1.加大线路维护力度
每年有计划安排进行维修，不能预留维修死角，需要严格依据检查制度定期巡查线路，每月检查一次10kV及以下电网线路；确保具备清洁的线路瓷瓶，及时清理干净线路周围高杆植物，尽可能降低漏电电压，以便能够有效降低线损。
2.优化调度管理
在管理电网线路损耗的时候，不断优化运行调度形式，保证可以合理分布电源和负荷，确保能够在最优情况下运行个功率因数、各电压等级电网，从而达到降低损耗目的。
3.完善抄、核、收工作
在管理中，不断提高抄表人员整体素质和责任心，达到能够同步变电站电网关口抄表、大用户总表的目的，避免出现错抄、漏抄等问题，避免因为人为原因导致出现线路损耗。
4.加强用电检查力度，避免偷窃电行为
在管理电网中，经常开展用电检查工作，及时检查互感器变比、卡账等是否正确，是否出现私自提高临时用电量、户外用电等，对于管理不合格的位置及时采取有效措施，尽可能降低线路损耗[5]。有效结合社会舆论和法律方式，对反窃电工作给予一定重视，严厉打击窃电行为。
5.夯实计量管理工作
不断健全电力计量管理制度，提高管理表计封钳的力度。经常检查计量设备，查看是否能够正常运行计量表，是否能够良好接触电流互感器，避免错误连接互感器和表计，有效提高表计和互感器测量准确性[4]。
四、降低台区线损实例：
目前，供电企业营销部负责的线损指标主要有线损率计划偏差值、线损率环比变化值、中低压（10千伏及以下）有损线损率同比下降率、分台区线损管理比例、台区日线损合格率等。
以某供电企业为例，降低台区线损的主要方法是在台区计量终端安装集中器，完成数据采集以后，通过用电信息采集系统后台软件对终端数据进行计算，统计并且发现存在异常的台区区域，经由供电所排查，每月编制分线分台区线损分析月报，对线损超标或异常的台区应进行排查分析，并提出相应的整改措施，从而达到台区降损的目的。
排查分析要点是：1.查看系统内台区关口表是否存在失压、失流等情况，倍率是否正确。2.确认线路、大用户计量装置是否有异常；3.确认新增用户是否采集正常；4.确认所辖配网及低压网络是否有变动，如有变动，GPMS、营销186系统、用电信息采集系统与现场是否相符合，隶属关系是否正确；5.确认该台区本月是否有临时搭接电源，用户电量未计入； 6.确认该台区本月是否有计量异常或窃电需追补电量；7.对所辖线路、台区电量突减等用电异常的用户进行现场检查，确认是否有计量问题或用户窃电；8.检查是否有线路、设备维护不当引起的漏电现象； 9.确认线路、 台区是否供电半径大，电源点未设置在负荷中心； 10.查营销系统计量表计档案信息是否与现场不符。
五、结束语
总之，本文分析了线路的含义和分类，研究了线路损耗的原因，针对上述原因从管理损耗和技术损耗两方面提出解决措施，有机结合实际案例具体分析线损的实际情况以及管理对策。
参考文献：
[1]廖伟玲.县级供电企业线损管理现状及改进措施[J].技术与市场，2013，20（11）：172-173.
[2] 罗文辉.浅析供电企业的线损管理工作及降损措施[J].河南科技，2014（16）：252-253.
[3] 时晓辉，李霞芳.浅谈如何有效提高供电企业的线损管理[J].科技与生活，2010（22）：176，24.
[4] 王庆彬.加强供电企业的线损管理措施[J].科技创新与应用，2012（5）：91-91.
孙维的爷爷范文2
【摘要】目的：探讨外科护理人员职业危害根源与防护 方法：通过临床观察和分析：外科护理人员由于其工作的特殊性，经常接触病人开放性伤口、血液、体液、分泌物等，存在着被感染的高度危险；各种理化因素也对外科护士的健康造成潜在的影响。结论：注重从预防入手，上级领导要重视，个人增强防护意识，提高自我防护能力，加强高危人群的防护，减少或消除造成职业危害的各种因素是防范措施的关键。
【关键词】外科职业危害防护
随着医学技术的不断发展，医院里存在着许多威胁医护人员身体健康的危险因素。外科护理人员因工作性质、工作环境的特殊性，常常暴露于各种现存的或潜在的危险因素中，容易造成突发性的或慢性的职业危害。如何做好自我防护已成为医院以及护理工作者密切关注的问题。现就外科护士常见的职业危害与防护进行论述，报告如下1 常见的危害因素
1.1 接触与污染:外科护士由于其专业特点，直接接触病人开放性伤口、血液、分泌物等各种体液，这些体液带有多种致病微生物、病毒。可直接污染护士的皮肤及黏膜，造成感染。 1.2 化学污染:首先是化学消毒剂污染：外科病房的氧气湿化瓶、无菌剪刀、持针器、地面、空气及病床的终末消毒等都大量的应用消毒剂，如戊二醛、甲醛、含氯消毒剂、过氧乙酸等。长期吸入混有较高浓度的戊二醛的空气或直接接触戊二醛、过氧乙酸容易引起眼灼伤、头痛、皮肤过敏、咽喉炎及肺炎。1.3 器械损伤:护理人员要完成繁重的注射任务，而忽视了对自身的保护。护士是执行注射的主要群体，增加了护士的职业感染危险性。据调查报告，每年针刺伤发生率为80%。传播常见的疾病为乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病，它们通过血液传播的几率是最高的。
1.4? 药物因素:肿瘤术后病人使用的抗肿瘤药物，对肿瘤组织和正常组织都具有杀伤作用。护士在这类药物的配制过程中，难免会使药物产生的含有毒性微粒的气雾通过皮肤或呼吸道进入体内，反复接触可导致白细胞下降、月经失调、脱发、流产率增高或致癌等。1.5 心理因素:外科护理人员常处于一种精神高度紧张状态，工作的繁重、琐碎及来源于护患关系带来的压力对护士的身心造成的影响，极易导致身心疲劳，不但损害护士的身心健康，而且会逐步降低护士的工作热情以及工作效率。
2 防护措施分析
2.1 建立安全的护理观和职业安全管理体系:外科护理管理者应制定确实可行的措施，减轻护士的职业危害，加大培训和宣传力度，定期组织讲座学习，使护士充分认识到职业损伤的危害，增强健康防护意识，普及预防措施，建立职工档案，定期体检，预防接种。 2.2 培养自我防护意识:医院要加强自我防护教育，严格操作管理，提高业务素质。平时对各专科护士要不定期组织相关的职业防护理论学习和实践操作演练，让大家充分认识到职业暴露的危害，学会在工作中更好地保护自己。 2.3 改善医疗操作环境:安全的操作环境能有效减少医护人员锐器刺伤的次数，如采用安全针头注射器、负压标本试管采血等。医院应在现有的条件下，考虑医护人员本身的安全性，提供便于丢弃污染针头等锐利废物的容器等设施，杜绝医疗锐器刺伤的发生。 2.4 重视洗手与戴手套 :医院感染病原体传播最主要媒介是污染的手，因此要强调洗手的重要性,同时要随时戴手套。当预料到手要接触血液、体液或污染物时，要戴手套进行操作，减少皮肤接触血液。特别是护理人员手上有伤口时应戴手套操作，加强防护。 2.5 防护化学及药物污染:首先护理人员在科室配制特殊药物时，操作者应穿隔离衣，戴圆帽、口罩、手套，穿鞋套，戴防护镜、防护面罩；如果药液洒到地上，应用肥皂水和大量清水彻底擦净。在配制酸性消毒剂时要戴防护眼镜，如不慎污染皮肤或者眼睛，应用流动水反复冲洗以降低损害程度。 2.6 防止器械损伤:工作中应加强工作人员职业安全教育，增强防护意识，规范操作程序，熟练操作技术，禁止直接传递锐器、针头、刀片，不要用手直接取下，用持针器取下放在锐器收集容器中，集中管理.同时我们要积极改良医疗器具，使用先进的预防针刺伤、切割伤护理用具，以避免机械性损伤。 2.7 提高认识，减少精神及心理压力 :护理管理者要关心体贴护士，培养健康的人格。减少或降低因社会心理因素及工作压力对护士健康造成的不利影响。指导护士正确对待社会偏见及各种心理困扰，采取回避、疏泄、转移、放松、自我暗示等方法进行自我心理调适。
总之，医院及外科科室管理者应该对外科护理工作有充分的了解和重视，建立健全防护制度，完善与改进防护措施，努力创造健康安全的工作环境。对外科护士定期体检，统计分析，总结经验，规范操作规程，既保证工作质量，又保证外科护理人员的健康安全。
参考文献
［1］ 应菊素，徐国英，王晶．急诊护士对针刺伤认识及针刺伤的心理状态的调查分析．中华护理杂志，2004;39(3)：204~205
［2］ 尹爱华．护士职业性损伤的危险因素及预防对策．当代护士，2005;2：29~30
［3］ 哈智华．护理职业防护进展［J］．护理研究，2004;18(6)：956~957
［4］ 童朝阳，林福生，赵德禄．对重症急性呼吸综合征病毒消毒剂的使用及其不良反应［J］．中华内科杂志，2003;42(9)：668
孙维的爷爷范文3
【论文摘要】关注血液透析室护士可能存在的职业损伤危险因素和面临的安全健康风险，积极采取相关防护措施，减低血液透析室护士职业损伤发生率，减少工作中的不安全因素，维护健康，更好的服务病人。
随着血液净化技术的日益蓬勃发展，血液净化技术越来越广泛应用于临床，作为特殊岗位的护士，其独特的工作环境和服务对象，决定了血液透析护士经常暴露在各种各样的危险之中，职业安全已成为广大血液净化工作者日益关注的重要问题，针对血液透析过程中，可能会发生的主要危险因素和如何作好防护对策介绍如下：
1 职业性损伤的主要危险因素
1.1 机械性损伤因素 血透室护士主要的机械性损伤因素是锐利器械损伤和不良的工作环境。锐利器械损伤是血透室护士最常见的职业事故，主要指针刺伤，其危害不仅限于针刺损伤的本身，还可以传播疾病发生感染如乙肝、丙感等，在血液透析过程中，护士每天要给患者进行动静脉内瘘的穿刺和注射药物，留取标本、利器回收等操作，发生针刺伤的几率很高。玻璃扎伤常常因为玻璃接头或掰安瓿时遇到质量问题而被扎伤。钝器伤则发生在固定滤器时和复用滤器时疏忽而误伤到手[1]。手在刺破的情况下，接触被污染的物品和设备而被传播疾病，最常见最可怕的是乙肝、丙肝和爱滋病，它们通过血液传播的效率很高，一次即可感染[2]。
1.2 物理性损伤因素 大量的搬运透析粉和透析液使护士发生腰肌劳损和脊背损伤的几率很大，我院透析室10名工作人员中有5名人员有不同程度的腰肌劳损，占总工作人员的50%，不对称的工作姿势也会造成骨骼的损伤，在给患者穿刺过程中需要弯腰，遇到穿刺不顺利的情况，往往一个姿势保持较长时间；透析结束拔除动静脉内瘘针穿刺点局部压迫止血也需弯腰操作。水处理及透析设备和抢救设备的频繁使用，使透析室护士在透析过程中受到噪音的危害和触电危险的可能。在整个患者透析过程中，护士需要随时观察机器运转情况，患者的透析反应，应对机器的报警，处理发生的各种各样问题，长时间站立使下肢静脉回流不畅造成下肢静脉曲张。
1.3 化学性损伤因素 透析室护士每天都要接触大量的化学消毒剂，如过氧乙酸，甲醛，伦那灵和各种透析机清洗液，消毒液，椐报道甲醛浓度过高接触者可有食欲不振、头疼、心悸等不适[3]，并可刺激呼吸道黏膜、眼结膜，出现流泪，眼睛干燥，流鼻涕，打喷嚏等症状。过氧乙酸也可以通过呼吸道黏膜的接触对人体造成直接伤害。
1.4 生物性损伤因素 我国是肝炎大国，乙型肝炎的感染率很高，而乙型肝炎的传播途径是血液传播，报道丙型肝炎的传播途径也是血液传播。血液透析室工作人员一旦被患有乙肝或丙肝的病人使用过的穿刺针将手刺破，则感染乙肝丙肝的几率很高。在日常生活中也难免使皮肤受损，大多透析室工作人员少，工作量大，即使皮肤完整性受损仍要坚持工作，这样也大大增加了经皮肤感染病毒的几率。不停的接触来自各种原因被血液污染的物品和物品表面，很容易通过血液交叉感染，使血液透析室工作人员成为易受病毒感染的高危人群。
1.5 心理性损伤因素 血液透析是一个特殊的工作岗位，患者每次治疗在4.5~5小时之间，血液体外循环随时有可能出现问题，随时要分析判断机器报警及各种检测系统是否正常，患者不适的原因及故障排除，思想必须高度集中，这样思想长期处在紧张之中，使人体的生物钟受到干扰，发生职业应激。这些职业应激的影响不低于物理化学因素，可导致消化道溃疡等疾病的发生
2 防护对策
2.1 血液净化室的护士要严格执行无菌技术操作，明确只有有效的保护自己才能更有效的保护病人。首先要有较强的防护意识，加强职业教育，减少职业暴露，要转变观念，不怕脏不怕累的观念已经不能适应现代护理的要求，血液净化室要制定完整规范的控制感染防护制度，在做好工作的同时，做好个人防护。
2 加强管理降低损伤几率，新护士进入透析室工作要进行健康检查，乙型肝炎表面抗原阴性要注射疫苗并建立健康档案，在工作中不慎被利器刺伤应严格按照医院感染职业暴露的防范要求去做，并作好检查跟踪工作。要严格控制感染区、非感染区物品的流动。透析结束后拔除的动静脉穿刺针要按标准手法操作，避免被针刺伤。透析液和透析粉的搬运尽量使用低平车，减少工作人员的搬运，从而减少肌肉和脊柱的损伤几率。上下机后要用含氯制剂清洗透析机表面，被血液污染的表面要进行特殊处理。戴手套操作后不能触摸办公室物品及电话桌椅等。透析病历夹要定期消毒，避免污染。设立工作人员与患者入室的双通道等。
2.3 提高专业技能，减轻心理压力。提高专业技能在一定程度上能减轻工作压力，如较好的穿刺水平，缩短穿刺弯腰时间；良好的分析、解决问题的能力，能从容面对机器发生的各种故障、报警及透析过程中发生的各种各样问题。
2.4 端正心态增强体质，加强文化修养，保持乐观向上的良好心态，心胸开阔，提高心理素质，加强心理承受压力的能力，树立正确的人生观、价值观和服务观。坚持户外锻炼，多做有氧运动，提高身体素质，增强抵制各种损伤的能力。
参考文献
[1] 郝晶.血液透析护士的职业损伤因素【J】，护理管理，2006，20(7)
[2] 倪传英，袁晓华，张敏，手术室护士职业性损伤的原因及防护措施【J】，现代医药卫生，2004，20(18)：1911
孙维的爷爷范文4
了解临床护士职业性损伤以及对此的预防情况。临床护士的防护意识较淡薄，职业性损伤发生率高，应规范护理操作，加强职业防护知识教育，建立健全各类职业性损伤的报告制度。
【关键词】护士；职业损伤；针刺伤
【中图分类号】R192.6 【文献标识码】A 【文章编号】1004-4949（2013）10-252-02
职业性损伤又称工作伤害，简称工伤。主要包括职工在劳动过程中，由于外部因素直接作用而引起机体组织的突发性意外损伤。随着医学科学和诊疗技术的发展，尤其是近几年来新的化学药物和新技术的临床应用，我们医疗工作者，特别是护士常暴露于多种职业性损伤的危害因素之中。于是，在诊疗、护理、操作过程中若不注意个人的防护容易造成职业性损伤，因而严重威胁着护士的身心健康。
1 职业性损伤的危险因素
1.1医疗工作环境对护理人员的侵害是随处可见的，不过是程度的轻重之分和防护措施是否得当而已。护理人员经常性地与各种各样的患者接触，有些传染性疾病可以通过空气传染，如果不注意防止交叉传染，就很可能染上疾病。再加上护理人员长期生活在各种消毒剂的环境中，包括麻醉气体和有害气体，因此都会在不同程度上对护理人员的身体造成伤害。
1.2工作性质对护理人员健康的影响。护理人员的服务对象是各种各样的患者，有些患者本身就是病毒携带者，经常与这些患者接触，增加了被感染的机率。锐器伤是医院内常见的一种职业伤害，污染的锐器伤是导致医务人员发生血源性传播疾病的最主要职业因素。护理人员长时间站立工作，身体前倾，腰部长期受力，还有的经常处理重物，疾步行走，紧张地传递器械，易造成劳损和静脉曲张等。护理人员也常忙于手术或抢救，饮食或作息没有规律等，都能造成护理人员不同程度的隐性伤害或职业后遗症。
1.3护理人员由于自身防护意识的淡薄和医疗护理技术操作的不规范，从而使职业伤害出现的机会加大了。工作1年或不到1年的发生锐器伤的数量占了总数的21.9%～35.0%。而在处理针头相关的行为中，针头使用后重新套上针帽是导致锐器伤的最常见的原因。
1.4职业压力对护理人员身心健康的伤害。紧张的工作特点给护理人员造成很大的心理压力，如果长期处于压力之下，会对她们的身心造成极大的伤害。医护人员每天面对患者，这种环境使她们不知不觉会产生人性的冷漠，容易感到麻木或厌倦，缺少同情心和责任感，或觉得人生不过如此，产生厌世一类消极心理。
2护理人员职业性损伤的防范对策
2.1加强护理人员职业安全教育及整体素质教育。医院应制定合理的职业伤害防护措施，定期组织人员培训与学习。特别是新进人员，将职业伤害防护措施的培训考核作为必需条件。老员工也要定期进行培训，学习新的防护措施。逐渐在整个医院增强防护意识，规范操作程序，减少和防止意外发生。
2.2健全职业伤害预防与处理体系。建立护理人员健康档案，定期体检，对发生职业损伤者及时报告主管部门，按要求治疗处理；定期分析总结经验，并作为质量管理的依据。加强高危科室的管理和高危人群的预防接种，提高机体免疫力。
2.3防止和减少意外针刺伤的发生，可建议所有医疗机构采用安全型采血器和锐器盒，严格遵守临床废弃垃圾管理规定。用过的一次性注射器、输液器、针头必须集中处理；建议推广使用无针产品、安全注射器。而皮肤粘膜一旦受伤，应立即挤出少量血液，用流动自来水冲洗，然后用碘酒、酒精消毒后包扎伤口。针刺伤者，建议及时采用相关病毒血清检查，确定是否存在隐性感染，若确定被感染病人血清污染的针头刺伤，应立即采取相关治疗措施，并随访观察；对于高危护理工作者，应注射相应疫苗，做到早期预防。
2.4加强化学性危害因素的防护。在接触抗肿瘤药物时应穿隔离衣、戴口罩、帽子、乳胶手套，必要时戴防护眼罩，熟练操作规程，防止药液逸出；安装空气净化装置，注意通风，定期监测空气中浓度，以减少呼吸道和皮肤吸收；对于刺激性强、易挥发的消毒剂应密闭存储，防止外溢。
2.5加强生物性危害因素的防护。在接触具有传染性分泌物、血液、体液的病人时，应遵守消毒隔离制度，认真实现六部洗手法进行手的消毒是控制交叉感染的重要措施。加强高危人群保护，接种疫苗是防止生物性疾病传播最有效的预防办法。
2.6注重心理性危害因素的防护。医院管理者在工作设计和安排上要符合卫生学要求，对工作量大、危重病人多的科室加强人员配备，适当调整工作强度，以减轻护理人员职业紧张和心理压力。
3讨论
3.1护理人员面临着严峻的职业暴露危险。针刺伤传播血源性传播疾病的危险性远远大于其他途径（皮肤、黏膜）。在临床工作中，护士每天要完成大量的注射、抽血、输液等治疗工作，由于接触医疗锐器物的机会多，由此发生针刺伤的几率也明显高于其他医务人员。
3.2规范操作行为、改善医疗操作环境、加强锐器物的管理是降低针刺伤的重要环节。护理工作中存在诸多针刺伤的高危环节，为避免针刺伤的发生，要加强护士关于预防针刺伤的教育，包括禁止将使用后的针头重新套上针帽，禁止徒手分离针头针栓，禁止用手去弄弯针头，为不合作的病人做治疗时要有他人协作等，同时加强硬件的建设，安全的操作环境能有效减少医护人员锐器伤次数。同时医院应创造良好的工作环境，保持光线充足，空间宽敞，操作区域整洁，还应提供便于丢弃污染针头等锐器废物的容器等设施。
3.3加强职业安全教育，树立全面防护的管理理念是预防针刺伤的关键。在个人防护中值得一提的是手套的应用，医院管理层要加强护理人员的职业安全教育，树立标准防护的理念，确保职业安全。
3.4建立健全针刺伤的报告制度，加强针刺伤后的支持系统建设。建立完善严格的针刺伤后上报制度，可使受伤者判断污染针头是否来源于高危人群，并接受治疗和检测，达到职业安全的控制和管理。
参考文献
[1] 王方.手术室护士的职业危险因素及防护对策[J].中华护理杂志，2000，35（5）：290292.
[2] 周文娟，孙晓红，高波，等.X射线对手术室女护士敏感器官的影响[J].中华护理杂志，2004，39（12）：900.
[3] 陈琼芳，王惠珍，廖玉联.护理人员的职业健康问题与职业健康促进研究进展[J].国外医学护理学分册，2005，24（4）：351.
孙维的爷爷范文5
[关键词] 骨髓间充质干细胞 视网膜细胞 大鼠
成体干细胞中的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）具有多向分化的潜能，虽然其来源于中胚层，却可以跨胚层分化为外胚层来源的组织细胞，而视网膜则来源于胚胎期神经外胚层。MSC表达许多生长因子和细胞因子受体以及细胞与细胞黏附作用的受体，提示MSC的功能受自分泌和旁分泌循环的调控。这成为不同方法诱导MSCs定向分化的理论基础。组织或细胞在受到损伤后会进行自身修复，视网膜是接受光能，形成视觉的重要组织结构，如果光照强度或光照时间超过了视网膜的承受力，将会造成视网膜光损伤。本研究旨在用光损伤视网膜片的培养上清液体外诱导MSCs，看其损伤时分泌的细胞因子和分化所需蛋白是否能诱导MSCs分化为视网膜光感受器样细胞和视网膜神经细胞。探索体外构建MSCs分化成视网膜细胞所需微环境的理论可能性。
1材料与方法
1.1 实验动物
健康无眼病成年Sprague-Dawley(SD)大鼠，雌雄不限，体重120~150g（吴氏实验动物中心）。
1.2 大鼠视网膜片的取材
10%水合氯醛按0.3mL/100g腹腔注射麻醉，无菌状态下取出眼球。把眼球用10%FBS的LG-DMEM洗涤3次，去除球周筋膜组织，清洗干净后移入另一盛有10% FBS的LG-DMEM培养皿中，在解剖显微镜下，在角巩膜缘后1mm处剪开，用显微剪取出角膜、晶状体、玻璃体，留有外层覆盖巩膜的视网膜杯。把视网膜杯浸入培养皿中的培养液里，由杯缘向杯底，用显微镊钝性分离视网膜和巩膜，在视神经处剪断，彻底分离视网膜色素上皮层与视网膜神经上皮层。
1.3 大鼠视网膜神经上皮层常规石蜡切片HE染色
将大鼠视网膜片（只包含神经上皮层）常温浸泡甲醛24h以固定，常规脱水、透明、包埋、切片，常规脱蜡，行苏木素-伊红(HE)染色，封片。用数字摄像系统观察并采集照片。
1.4 视网膜片光损伤和条件培养液的制备
把分离好的4只眼球的视网膜神经上皮层移入另一盛有8mlNeurobasal+B27的小培养皿中（直径60mm）。用眼科显微剪把视网膜神经上皮层剪成1mm×1mm×1mm大小。在超净台内，50W,12V的卤素灯作为光源，采取直落式照射上述的小培养皿，用TES-1330A照度计测定光照强度，调整光源与培养皿之间的距离（3.5cm），使被照细胞同一水平的光照强度为(1950 ±200) Lux ,光照时该水平温度变化在0.5℃之内，持续光照45min，光照后将培养皿放入37℃、5%CO2饱和湿度培养箱继续培养1小时15min。用去针头的针筒吸出小培养皿中的液体，离心后上清液用0.22um滤器过滤，以2:3的比例与10%FBS-LGDMEM混合，并吹打均匀，制成条件培养液Ⅰ。条件培养液Ⅱ制备方法同条件培养液Ⅰ，只是视网膜片未经过光损伤处理，盛有Neurobasal+B27和视网膜神经上皮层的小培养皿直接放入37℃、5%CO2饱和湿度培养箱培养2小时。条件培养液Ⅲ为Neurobasal+B27和10%FBS-LGDMEM以2：3的比例混合，无视网膜片以及光损伤处理。三种条件培养液均放于-20℃保存。
1.5 视网膜神经上皮层光损伤后电镜观察
取材，3%戊二醛―1.5%多聚甲醛前固定，1%锇酸―1.5%亚铁氰化钾后固定，酒精―丙酮脱水，环氧树脂618包埋剂包埋；超薄切片，醋酸铀、柠檬酸铅染色，日立Hu-12A型（飞利浦208型）透射电镜观察、摄影。
1.6 大鼠MSC的分离和培养
取SD大鼠，麻醉后，无菌条件下取出双侧股骨和胫骨，剔除周围肌肉组织。在超净台内，用PBS冲干净，转移到盛有20%FBS-LGDMEM的培养皿中，去除长骨2端骨骺，暴露骨髓腔。用培养液冲出骨髓腔内的骨髓液，吹打。用200目筛网过滤后置于离心管中，1000rpm,10min，弃上清，用10%FBS-LGDMEM培养液重悬后以10×108/mL接种于塑料培养瓶中。37℃、5%二氧化碳培养，24h换液，以后每3d换液一次，除去非贴壁细胞，12~15d后MSC达90%瓶底面积时传代，P1后细胞融合至80%进行1：2传代。
1.7 MSC的鉴定
当第3代的BMSCs融合达90%,经0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化、离心后用PBS制成2×106/mL的细胞悬液，将细胞悬液分装至4只样品管中，分别加入荧光标记的小鼠抗大鼠单抗CD34-FITC+小鼠抗大鼠单抗CD90-PE，小鼠抗大鼠单抗CD34-FITC+小鼠抗大鼠单抗CD44-PE及其对应的同型对照各10μL，混匀，37℃下避光反应20min。每管加入1mLPBS混匀，离心2000rpm，10min以洗去未标记上的抗体。弃上清液，每管再加入1mLPBS重新混悬细胞,用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD44和CD90的表达。对细胞纯度进行鉴定。
1.8 MSC体外诱导成视网膜细胞
取第3代BMSCs细胞消化、离心后用10%FBS-LGDMEM重悬后以200ul/孔接种于6孔板，24h待BMSC贴壁后，弃培养液，将细胞分为3组：第1组换用条件培养液Ⅰ，第2组换用条件培养液Ⅱ，第三组换用条件培养液Ⅲ，3个组均在在37℃、5%CO2培养箱孵育。每天观察记录细胞生长分化情况，每2天换一次条件培养液，培养至第7~8天时停止。
1.9 诱导的BMSCs细胞免疫化学染色
采用Envision二步法，分别将3组诱导的MSC玻片取出，均与神经元特异性标志小鼠抗大鼠醇化酶(NSE) （稀释度1：50）（美国Fisher Scientific公司）、星形胶质细胞特异性标志小鼠抗大鼠单克隆抗体神经胶质酸性蛋白(GFAP) （稀释度1：50）（美国Fisher Scientific公司）、光感受器特异性标志小鼠抗大鼠单克隆抗体视紫质(Rhodopsin) （稀释度1：50）（美国Fisher Scientific公司）和二抗（生物素标记的羊抗鼠IgG抗体）作用，二氨基联苯胺（diaminobenzidin,DAB）显色后，苏木素复染，室温干燥后封片，光镜下观察是否表达视紫红质、NSE、GFAP。选取至少10个随机视野，每个视野在200倍物镜下统计阳性细胞数和整个视野细胞总数，计算阳性细胞率，测量值均以x±s表示，来对三种诱导条件下所表达的阳性细胞进行分析。
1.10 数据分析方法
所有数据用均数±标准差表示，并进行双因素方差分析。
2 结果
2.1 大鼠视网膜片光损伤电镜观察所见:光损伤后视网膜神经上皮层，可见光感受器外段肿胀成圆形，盘膜结构紊乱，叠状结构解离，膜间隙增大。内节线粒体固缩和肿胀，空泡变性。染色质浓染，核膜皱缩内陷。
2.2 大鼠MSC细胞的鉴定(如图1)
图1 大鼠MSC细胞的鉴定
BMSCs流式细胞术鉴定结果，培养的第三代BMSCs干细胞表面标志CD90阳性（CD90+/CD34-：92%），基质细胞表面标志CD44阳性（CD44+/CD34-：93%）
2.3 诱导分化的细胞形态学观察（如图2）
A：3天后原来梭形的BMSCs胞体发生收缩，呈圆形或椭圆形，细胞边缘变得不规整，有零星的细胞突起×300；B：4天后BMSCs有较多突起×300；
C、D：7天后，细胞发生迁移并相互之间建立突触联系×200；E：对照组BMSs分化细胞明显减少，也少有建立突触联系的细胞×300。
图2 诱导分化的BMSCs形态学观察
2.4 诱导分化的视网膜样细胞不同诱导条件下免疫细胞化
学染色表达指标阳性率
表1 不同诱导条件下免疫细胞化学染色表达指标阳性率
注：均方比F值为7.6054，F0.05=6.944，可见视网膜片三组间两两比较差异有显著性（P ＜0.05）。
3 讨论
3.1视网膜光损伤
视网膜是接受光能，形成视觉的重要组织结构，但也是眼组织中最易受到光损伤的部位。如果光照强度或光照时间超过了视网膜的承受能力，将会造成视网膜光损伤。
本实验采用（50W,12V的卤素灯作为光源，采取直落式照射上述的小培养皿，1950 ±200Lux）主要是考虑到以下几点：①视网膜光损伤受诸多因素影响，内在因素包括视网膜部位、体温、肤色、年龄、种属、营养状态及晶体状况，外在因素包括视网膜暗适应状态、光照射方式、光强度、波长和光照时间。因此本实验选择单纯照射细胞而不是照射活体动物来尽量排除内在因素的干扰，选择成年SD白鼠是考虑到有研究表明白种人较黑种人容易损伤，大白鼠视网膜对光的敏感性随着年龄的增加而增高。②视网膜光化学损伤的敏感性随着光波长的缩短而呈对数上升，因此短波长更易引起视网膜光损伤，角膜可吸收
3.2 MSC细胞分离、培养、鉴定
用组织工程技术体外分离和培养所需靶细胞，用于体内相关疾病的细胞替代治疗为多种疾病带来了新的治疗思路。因此有关此类的研究受到广泛关注。胚胎干细胞具有发育全能性，但涉及伦理学问题，以往受到很大限制，发展缓慢。应用眼色素上皮缘的视网膜干细胞[3]及鼠脑神经先祖细胞移植[4]也由于供体组织有限性及安全性问题，不利于治疗视网膜疾病的开展。于是有人把目光投向成体干细胞中的MSCs，因其来源于中胚层，可以跨系统甚至跨胚层分化为3个胚层来源的细胞，特别是中胚层和神经外胚层来源组织的细胞（视网膜来源于胚胎期神经外胚层），并且经过20~30次细胞分裂后，这种分化特性也不会消失[5]。且分离培养方便。MSC存在于体内多处如胎血、胎肝、胎脾、胎儿的骨髓以及成人骨髓[6], 脐血、脂肪组织和成人的外周血中亦含有数量极少的间质干细胞[7]，现多从骨髓中分离获得。MSC的纯化方法有贴壁筛选法，流式细胞仪分选法，密度梯度离心法，免疫磁珠法。较常采用的方法为贴壁筛选法和密度梯度离心法，或两者联合。MSCs的表面标志具有非单一性，表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，一般认为CD29、CD44、CD71、CD90、CD105、CD120a、CD124、CD166以及STRO-1、SH2、SH3是其重要的标志物，流式细胞术发现不表达造血细胞表面抗原如CD34、CD45、CD11a、CD14。如果能找到更特异性标记物，就可以获得更纯的MSCs，这对后续的实验步骤所得的实验数据有重要影响。前2种方法分离所获得的细胞纯度较低,但具有良好的细胞分化能力。应用流式细胞仪技术和磁性分选技术针对细胞表面标志进行富集和分离,分选效率和纯度均较高[8-9]。
3.3 MSC体外诱导成视网膜细胞
目前国内外主要用生长因子诱导MSCs分化为视网膜细胞。Anthony K等[8]发现EGF、taurine或activinA体外诱导大鼠MSCs，有20%~32%表达视网膜光感受器细胞的表面抗原视紫红质。Anthony K等[8]应用activinA（活化蛋白A），牛磺酸和EGF对成人CD90+MSCs体外诱导分化后，20%-32%的细胞表达感光细胞特异标志―视紫红质，视蛋白，recoverin。非视网膜来源的，可替代视网膜细胞功能的自体细胞是细胞移植治疗视网膜变性疾病和视神经损伤的理想种子细胞，目前国外有少量研究发现MSCs视网膜下移植可诱导分化为视网膜细胞，但由于体内局部微环境复杂，影响因素繁多，移植细胞的分化方向不确定，往往无法定向分化成所需细胞，存在表达增殖性玻璃体视网膜病变的潜在危险。而体外诱导MSCs定向分化为视网膜细胞仍是当前研究的难点。国内外仅数篇文献报道用视网膜片培养上清液体外诱导MSCs分化为视网膜样细胞，但均未对培养上清液成分进行具体分析检测，分析其有效成分。本实验探索体外诱导MSCs定向分化的新途径，可进一步进行蛋白质组学技术检测不同诱导微环境的蛋白差异，为构建MSC体外诱导分化为视网膜细胞的微环境提供理论支持。这不仅解决了直接将MSCs体内移植分化方向不确定的问题，以及应用异体的人视网膜片诱导时可能引发排斥反应等问题。
参考文献：
[1]Noell WK.Possible mechanisms of photo receptor damage by light in mammalian eyes[J]. Vision Res,1989,20(12):1163-1171.
[2] 宋忆淑，贺 冰，费向东，等. 可见光照射致培养的视网膜色素上皮细胞凋亡的超微结构观察[J].中国老年学杂志,2001,25(1):69-70.
[3] Tropepe K, Brenda LK,Bernard JC, et al. Retinal stem cells in themammalian eye[J].Science, 2000,287:2032-2036.
[4] Van Hoffelen, Samantha J. Young, Michael J.Shatos, et al. Incorporation of murine brain progenitor cells into the developing mammalian retina[J].Invest.Ophthalmol.Vis.sci,2003,44:426.
[5] Friedenstein AJ,ChailakhyanRK,GerasimonUV.Bone marrow osteogenic stem cells:in vitro cultivation and transplantation in diffu-sion chamber[J].Cell Tissue Kinet,1987,20(3):263-272.
[6] Campagnoli C,Roboerts AG,Kumar S,et al.Identification of mesenchymal stem progenitor cells in human first-trimester fetal blood,liver,and bone marrow[J].Blood,2001,98(8):1396-1402.
[7] EricesA,Conget P,Minguell JJ.Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood[J].Br J Haematol,2000,109(1):235-242.
孙维的爷爷范文6
在单位里。孙公安可是一个什么事也难不倒的硬汉子。他在公安系统走了不少的工作单位了，在哪一个单位都干得好着呢，破案呀，逮小偷呀，教育劣迹青少年呀，领导交办的工作，孙公安保证都能出色地完成。可是儿子孙林要出去画老虎，这事得怎么弄呢?
那天，孙公安在自己的片警工作办公室里，瞅着房檐也想辙呢。不一会儿，就未了一帮人，这些人里有老头老太大，也有年轻人。这些人是来孙公安的办公室里开会的，是关于社区内的治安联防内容的。好几天前就通知下去了。
正事没说呢，先说到孩子了。孙公安说，各位社区的邻居，你们帮我拿个主意，我儿子想去虎园画老虎。你们说怎么办?
社区的马大嫂嘴最快，让他去画呗，孩子画画多好的事呀，舍不得给孩子买笔买墨，还是舍不得车票钱，大嫂我给你掏钱，、
孙公安赶紧摆手说，不差钱，不差钱上、
走哪儿都带着自己的宠物狗的老康爷爷说，不差在钱上，那就让孩子去玩玩吧，
孙公安解释着，那得分孩子，我家的那个孙林，你就是拿个绳子也捆不住他，他太淘气了，好不容易我才给他关在家里，这还不到一个星期，他非要出去画老虎
马大嫂说，孩子都听老师的。你让他们老师管他。
孙公安说，就他们那个徐老师，我也是一点儿招也没有。徐老师太惯着孩子了，她在后面支持着呢，我有什么办法。我原来想把这个新毕业的大学生给弄走了，换一个老教师，可是他们班的孩子都跟她粘上了，比502胶粘得还紧呢。
说到这时，屋里的这帮家长大人们就开始七嘴八舌地议论起现在的孩子了。
这个说，今天的小孩子呀，也是，你看不住他们，他们本事没学多少，可都会撒谎撩屁的了。我家的那个小子，总回家说，老师让收这个费了，又让收那个费了，咱都寻思这是学校乱收费呢，后来，我一打听，你猜怎么着?他是打着学校乱收费的幌子，把钱都捐献给游戏厅了。
又一个中年男人也插言，是的，现在的孩子，既不能不听他们的，又不能全听他们的，孩子的事最好的管理办法，就是不管。一管就头疼。
孙公安见大家讨论得这么热烈，就顺着大家的话题接着说，今天也算一个诸葛亮会吧，大家都帮我出出主意，想一个好办法呀。
马大嫂说，画老虎，他真敢想，那就找一个老虎的照片让他画呗。
不行呀。人家画画这行里讲究写生，就是照着一个真的老虎才能画。
另一个长着一脸大胡子的老头出主意，能不能让他待在家里，还能画着老虎。
老康爷爷立刻提了反对票，除非你把老虎借到家里来，让孩子画、那你得弄多少个保安看着呀，你们家孩子不怕老虎吃。街坊邻居们还得活命呢：再说，现在的老虎那可都是国家重点的保护动物，老虎吃你行，你吃老虎那犯看法呢
老康爷爷够幽默的了
又有个出主意的人说，你就给弄个带老虎的光盘或者电视片让孩子画，不就结了吗?就买那个《动物世界》里的片子，有专门拍老虎的镜头，可清楚了。
孙公安又叹了一口气，这个主意早想过？人家说要画的是实物，不是图片，也不是电视片：图片电视片都是，是什么平面的，人家要的是那个专业术语叫“三维”的，或者是“四维”的。
老康爷爷说，八维的好，上哪儿去弄呀
正在这时，一个栽着眼镜的干部说，我有一个好主意，肯定行
大家都不吱声了，赶紧问，什么好主意?
干部说，你们呀，能不能换一个思路宋想主意，比女，给他弄个猫，让他在家里画呗可劲地画，猫还不吃人，还不是国家重点保护动物。
人家要画老虎，你给弄个猫。照猫画虎?
马大嫂一听这个主意，眼睛一亮，声音立刻高了八度她说，这个主意真是太有创意了，好主意!好主意呀!
老康爷爷也投了赞成票，说这个土意就是高见呀
过去有一个成语，就是“照猫画虎”，这个典故你们查查出处吧，没准，就是咱们的古人被孩子们逼出来的。
干部的话得到了大家的赞许，脸上洋溢着很有成就感的笑容
他继续说，谁都知道。猫就是虎的师傅，师徒俩长得就是像呀
小学生能把猫画好了，就是能把虎画好了呀、孙公安呀。你就快给孩子弄个猫吧，现在养描的人不是有的是吗?
马大嫂还给孙公安提建议，对，找猫容易
不过，你别找那个什么波斯猫，你得找那个长得像老虎的猫。
孙公安这时站起未。和屋子里的人——握手，嘴里连忙说着感谢的话，今天的诸葛亮会开得真是大成功了，众人出韩信，集体的力量就是大呀。看来，这个困扰我一天两宿零三个小时的大难题终于解决了、
说到这时，孙公安才想起来，该开社区治安联防的会议了、可是一看表，已经快到吃饭的时间了，不能再往下开了，社区的大妈大娘们还得回家做饭去呢，孙公安就觉得有些不好意思了，忙说，真是对不起大家，这么长时间没说上正经事。
采的众人听孙公安这样说，都用一种满不在乎的口气说，什么是正经事?刚才咱们的那个照猫画虎的事，就是正经事。现在只要是孩子们的事，就是压倒一切的正经事呀：
对呀，对呀，哪家现在不是这样呀，孩子就是天，就是上帝；
你听听，你听听，可怜天下父母心呀，如果让孩子们参加一下孙公安召开的诸葛亮会，还不得感动得眼泪哗哗流呀!
那个老康爷爷最后还对孙公安说，片警呀，你赶紧借猫去吧，这画老虎的事，我看孩子是一点也没有难为你。赶明个，你们家的小祖宗非要去画大象、恐龙了，我看你上哪儿掏弄去呀?
现在孙公安的一个最重要的任务，就是给孙林借猫，
说是现在养猫的人家很多，可是要想借一个长得像老虎的猫，也并不是一件容易的事
下面的故事，就是我在后来的一段时间里，听孙叔叔说的，家长对孩子的一片苦心呀，你听了还不得眼泪哗哗地流?
孙公安在他分管的这个小社区里开始挨家地敲门。
孙公安敲门的时候，也特有礼貌。他轻轻地敲，或者轻轻地按人家的门铃，然后报上自己的姓名，说，请开一下门，我是孙建国。孙公安的名字叫建国。
现在城里的住户听到敲门声，都没有一下子就把门打开的，别说是坏人了，就是分发小广告的，推销化妆品的小贩，都是很讨厌的。于是人们都是先从门镜里往外看，要是不认识的人，你就是把门敲碎了，他们一般也不会给你开的。
孙公安就敲开了一家。“请问您家有猫吗?”