前言：中文期刊网精心挑选了立春的古诗范文供你参考和学习，希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感，欢迎阅读。
立春的古诗范文1
2、应为熏风拂，能令芳树春。——赵彦昭《奉和圣制立春日侍宴内殿出剪彩花应制》
3、梅花将柳色，偏思越乡人。——曹松《客中立春》
4、举杯相劝醉归去，明日立春还尔期。——成鹫《打春牛歌三阕·其一》
5、隔岁立春先十日，东风已觉到天涯。——金幼孜《立春日朝罢偶赋·其三》
6、立春后五日，春态纷婀娜。白日斜渐长，碧云低欲堕。 ——白居易《立春后五日》
7、谷雨久过三月节。 春田龟坼苗不滋，犹赖立春三日雪。——王士祯《春不雨》
8、饤果待斟分岁酒，剪蔬先赋立春诗。——方回《春前一日还家》
9、远天归雁拂云飞，近水游鱼迸冰出。——罗隐《京中正月七日立春》
10、林中觅草才生蕙，殿里争花并是梅。——沈佺期《奉和立春游苑迎春》
11、笑语东风解冻迟，立春翻在试镫时。——慧霖《庚申正月十三夜立春·其一》
12、绿外浓黄白外红，一屏香锦立春风。——姚勉《花障》
13、嫩色惊衔燕，轻香误采人。——赵彦昭《奉和圣制立春日侍宴内殿出剪彩花应制》
14、春饮一杯酒，便吟春日诗。——曹松《立春日》
立春的古诗范文2
妹妹引导下的演艺路
李冰冰出生在东北五常的一个普通的工人家庭，因为学习成绩不好，就非常羡慕从小一直是全年级第一名的妹妹。李雪比李冰冰小两岁，在两个女孩之中，李雪被认为更有可能考上大学，姐姐则承担了大部分家务，比如每个周六周日，她都需要把家里的所有衣服洗好。这些经历赐予了李冰冰丰富的生活技能，若干年后，她在电视剧《野丫头》中演的农村女孩需要表演一场搓苞米的戏，她表现得非常熟练，这让导演十分意外。
从鸡西师范学校毕业后，李冰冰成为一名小学音乐老师。不久，20岁的她收到了上海戏剧学院的录取通知书。她享受了家人的震惊目光，也将这个家庭推到了艰难的选择之中。
当时母亲的疾病已经让这个家庭陷入极大困境。她病了六七年，前一年下决心手术，花了将近3万块钱。这是一种由于瓣膜问题导致的心脏病，医生需要在手术中为她更换两个已经坏掉的瓣膜。因为贫穷，家里只能支付起一个瓣膜的费用，这导致手术并不够彻底，为了确保血液能顺利流过仍有一个瓣膜损坏的心脏，李冰冰的母亲从此每天需要服用一种可以稀释血液浓度的药物。过于稀释的血液又使她的凝血功能发生问题，这也使李冰冰母亲一旦遭遇任何撞击，身体便会立刻出现一大块淤青。
面对家里的困境，李冰冰决定放弃上大学。闻听此事，正在上高中的李雪说就算自己退学，也一定要让姐姐去上大学。父母被说动了。李冰冰临行前，李雪递给她一张纸条，上面写着：姐，放心去吧，家里有我呢……
李冰冰带了7600元到上海，这钱本来是家里备着给她妹妹李雪上大学的。她经常给妹妹写信，告诉李雪外面的世界如何精彩。在上戏读书的4年里，忙碌的李冰冰只回过一次家。在她看来，戏剧学院比起学校更像一个超市，总会有上海电影厂、电视台、各大广告公司来表演系找人。李冰冰从一开始就去接拍各种各样的广告，因为赚钱更快。
入学第二个月，李冰冰便赚到了第一笔钱，是刚刚开通的徐家汇地铁电视广告，“这个广告价格太低请不到高年级的同学，所以就找到了刚刚入学的我身上”，她那一次赚了800元钱，立刻全部寄给了家里。
到了大二，李冰冰已经成了全班赚钱最多的同学。当时，李冰冰和关系非常好的任泉拍了玉兰油一支26万元的广告，这让所有的同学都觉得非常不可思议。任泉那时曾经告诉李冰冰，你知道你为什么有那么多广告机会吗？因为你给人的感觉很质朴，现在质朴的女孩太少了。
李冰冰出去拍广告时，别人都会送她很多东西，李冰冰一直攒着这些零食给李雪，从没有注意到保质期是多久，她没有保质期这个概念。李雪回忆起来“真的觉得心里特难受”，“她不断托老乡给我往回运当时北方小镇上根本买不到的康元饼干和费列罗巧克力，那段时间我真的把巧克力吃够了，从此我再也不想吃任何巧克力了。”
一年后，李雪参加高考，父亲希望她能考到一个离姐姐很近的城市，因此，李雪的高考志愿报了浙江广播传媒学院的新闻专业。
由于李冰冰拍戏非常忙碌，当妹妹在上海下火车准备倒车去杭州时，她并没有时间去车站接送。一直到十一剧组放假时，才有时间到杭州看望妹妹。放假前，剧组为每一个演员发了一箱梨，很多演员嫌麻烦把梨都留给了李冰冰，她便把这些梨塞进一个大包里，“双肩背塞得都要爆炸了”，然后把它们背到杭州带给李雪。那次相聚让妹妹非常开心，她至今记得在大学的宿舍里，李冰冰如何像自己的母亲一样帮她在床头围起了一圈铁丝，再把帘子挂在铁丝上，在简陋的女生宿舍里，为她搭起一个私密的个人空间。她还记得李冰冰坐上三轮车离开时，两人依依不舍，就像“十八相送”。
姐妹两人都在1997年毕业，当时，李冰冰想留在熟悉的上海，然后找份工作安心地生活。当她把想法告诉妹妹后，遭到了妹妹的否定。李雪颇有建设性地指出，作为一名艺人，北京的文化氛围要比其他任何地方都强，那里才有更广阔的空间。李雪的话再次给李冰冰鼓足了劲，同年，李冰冰被分配到了北京实验话剧团。
就这样，李冰冰去了北京，妹妹留在了杭州。李雪在浙江省交通厅下面的《浙江交通报》工作，把父母的户籍也从东北迁到了杭州。李冰冰觉得她来养家，妹妹安逸照顾父母，这样安排很合适。
最苛刻的经纪人
起初，因为低调，不善于为自己争取机会，李冰冰发展初期不太受人关注。但李雪并不着急，她认为观众更多的是带着猎奇心去寻求刺激，如果一味迎合这种心理，时间长了，性格与之相悖的艺人必然陷入平庸和肤浅。她坚持让李冰冰用作品说话，回避任何有可能引起争议的话题，用细水长流、以柔克刚的耐力，赢得长久的关注和尊重。就这样，在妹妹的鼓励和引导下，李冰冰的戏渐渐多了起来。
虽然如此，但李冰冰因自己演出经验少，一直不敢承认自己是专业演员。李雪得知后，鼓励姐姐干一行就要爱一行、精通一行，即使目前演的多是小角色，但自信心绝对不可少。在妹妹一次次的鼓励下，李冰冰自信心渐渐增强了。她先后接拍了电视剧《战国传奇》《商鞅传奇》《风生水起》等，而且都有着不轻的戏份。
在做了3年记者后，2001年，李雪来到北京。这个小学当大队长、中学当团支书、大学当文艺部长的女子，很快把一种天生的自信与骄傲转移到了她的事业，也就是自己的姐姐李冰冰身上。那时李冰冰刚刚在电视剧《少年包青天》之后开始有了名利心，“拍完那个戏，突然一下子走在街上，好多人都认识你，叫你的名字，你才发现这才是演员，以前不是演员，这让你对演员这两个字发生了改观，觉得有名才是演员。”
李雪对“有名”的理解比李冰冰更有野心，当时中国有了“四小花旦”的说法：赵薇、章子怡、周迅、徐静蕾。李雪说，“我觉得我姐姐应该跟她们站在一起，我要跟她一起努力。”
李雪觉得当时中国最火的女演员是赵薇，便买来了报刊亭上所有印着赵薇封面的杂志，按照上面印着的编辑部电话，一个一个打过去，希望编辑也能够让李冰冰登上封面。当然，她收到的大部分都是傲慢的拒绝。
在《少年张三丰》之后，李雪向广告客户推荐李冰冰时，他们都觉得李冰冰太冷了，“然后我就特意拿出一张她笑的照片，我说怎么会呢？你看她笑得多灿烂，客户却说，她连笑起来都是冷的。”
2002年年底，贺岁片《老鼠爱上猫》来沪宣传，主演刘德华和张柏芝以及女二号李冰冰同时出席。在首映式上，工作人员拿出手印模板请明星按手印。李冰冰兴致勃勃举起双手刚想按下去，对方却忽然抽回模板，嘴里说了一句“不是你”，转身笑着把模板递向刘天王。
冯小刚曾经有一段讲述：“忘了是哪一届的金鸡奖，李冰冰是最佳女配角提名，领奖前很多相关人士透露消息给她，能得奖，这傻丫头就信以为真了。待宣布时，不是她，但她差点以获奖姿态站起来，当场就哭了，毫不掩饰委屈和对奖的在乎。有人说她太幼稚，没有城府，可我却通过这件事觉得她挺可爱。”
后来，李雪结识了“华谊兄弟”的高层，成为华谊的经纪人。就这样，姐姐做艺人、妹妹做经纪人，她们结成了黄金搭档。
《云水谣》是李雪帮姐姐争取来的。刚开始李冰冰不肯接这部戏，她当时身体不好，也知道拍尹力导演的戏很苦。但李雪在看完剧本，了解到整个创作班底、制作的情况后，觉得这是一部非常好的作品。她对姐姐说：“你想不想上我都给你接了，咬咬牙，什么苦都能扛过来。”2007年，李冰冰凭借《云水谣》获得华表奖影后。上台领奖时，她流着泪说：“从台下到台上，只要1分钟。但为了这1分钟，我努力了10年。”这一刻，坐在台下的李雪也热泪盈眶……
长期劳累让李冰冰不堪重负，因此，李雪更尽心地照顾姐姐。因为太忙，李冰冰的公寓里常常乱七八糟，李雪一有空就帮姐姐收拾房间，把脏衣服洗过了叠整齐再放到衣柜里。一次，李冰冰胃疼，李雪深夜跑去药店买药。姐姐吃完药，她又到厨房煮了一碗面条，让姐姐吃了再睡：“胃里没东西，会更疼。”
花开两朵各自灿烂
《雪花秘扇》为李冰冰带来了好运，随后，她又接下了《生化危机5》与GUCCI的代言，从而被世界瞩目，成为表现最抢眼的亚洲女演员之一。接着片约不断，李冰冰越飞越高，越来越忙。
2011年，李雪与一位商人结婚。当时，由李冰冰担纲主演的《雪花秘扇》在美国上映，她应邀录制了4档脱口秀节目。李雪为了帮姐姐安排好所有行程，忙得没有休过一天婚假。而这一切，李冰冰都看在眼里。
这年7月，即便在进产房的前一天，李雪仍在工作，在那一天，李雪敲定了电影《我愿意》的全部合同细节，与剧组签约之后才收拾东西去医院。
孩子的诞生改变了李雪，“之前我并不认为没有孩子人生是有缺陷的，但现在一有机会我就劝朋友们要早点结婚。”李雪笑着说。李冰冰的生活也随之发生了改变，“当我看到她的孩子，我没觉得那是她的，就觉得那是我的。我可以用生命来疼他，我的一切都是他的。”李冰冰认真地说，“今天我可以为他去死都没有问题。”
2012年7月23日，在李冰冰的张罗下，李雪为一周岁的儿子摆宴庆生和补办婚礼，当天的宴会星光璀璨、大腕云集。那天，看着一脸幸福的李雪，这些年姐妹俩在北京的挣扎与辛苦、争吵与情深、泪水与微笑，放电影一般在李冰冰脑海中闪过，让她不禁红了眼圈……
李雪和李冰冰非常谨慎地不对同行做任何评价，她们只乐意谈自己。二人都用“性格决定命运”来解释李冰冰的道路。李冰冰说：“我只能面对这样的人生。”在李雪看来，她们没有特别的背景和天赋，不能冒险、犯错，只能一步步积累。“一直做一个好人、一个没有缺点的人是很累的。现在大家都是感兴趣一些新奇的东西，反而不太关注三好学生与好人好事。”
2014年，凭电影《变形金刚4》成为全球瞩目明星的李冰冰，不单是近年在好莱坞巨制中内地女星戏份最多的一个，同时还因此成为国际“品牌新宠”，众多欧美商家纷纷请其代言。
2015年2月19日，李冰冰主演的《钟馗伏魔：雪妖魔灵》上映。同时她还担任浙江卫视大型电视综艺真人秀《我看你有戏》的导师，事业可谓蒸蒸日上。
李冰冰成功背后都离不开妹妹的付出，而在帮助姐姐成为一代影后的同时，李雪也从单纯的李冰冰经纪人成长为华谊联席总经理，步步为营，稳扎稳打。真是花开两朵，各自灿烂！
立春的古诗范文3
星期天到了，我在家里看书。看着看着我忽然猛地抬起了头，睁大了眼睛，喊道：“爸妈，今天我们要去公园野餐。难道你们忘记了吗？”爸爸和妈妈一听到喊声便急急忙忙地开始换衣服。但是不管他们怎么急，都没有我快。因为我已经在楼下朝他们挥手呢。过了好久，才看见爸爸妈妈各提着个大篮子朝我跑来。急得我可心急了。我们全家立马上了车，便朝公园驶去。
到了公园里，我蹦蹦跳跳地走着。突然，我的余光看到了一个极好的用餐处——大树的树荫底下。于是我们便把野餐垫铺在了树荫底下。在一个和煦的春天里能够在树荫下野餐，那是多么的舒服啊！趁爸爸妈妈在布置野餐的时候，我开始在整个公园里闲逛。我闭上眼睛呼吸着新鲜的空气，那空气清凉而轻。吹在脸上凉丝丝的，轻轻的。桃花害羞了，脸上慢慢地浮现出了桃红色。看！柳树爷爷正在做早操呢。小溪哥哥真厉害。一觉睡醒后，精神饱满。一直顺着溪流奔波，怎么也不知道疲倦。再抬头望望太阳，太阳正在朝我微笑呢。他的笑是多么地灿烂，多么地耀眼。云朵们也不示弱，他们用他们那洁白无瑕的身体摆出各种各样的形状去逗孩子们，使他们笑不拢嘴。
啊！我爱春天。因为它是如此地美丽，如此地奇妙。
立春的古诗范文4
晋商故里，因《乔家大院》《白银谷》等影视剧而走红，明清时代曾叱咤华夏。晋中太原地区，历史上以物阜天成、人杰地灵而著称，以平遥、太谷、祁县以及太原为代表的商贸金融前驱，举商贸大业，夺金融之声，票号汇天下，称雄数百年，创造了亘古未有的世纪繁荣。晋商的兴盛带来了当地的繁荣，也使人们对节日的庆祝更加隆重。包饺子、剪窗花、贴春联、放鞭炮、看大戏、观社火，让我们走进山西，亲身体验十足年味儿晋商民俗年。
平遥
雪花飘、灯笼红、古城春早
锣鼓贺平遥、灯火靓平遥、年味浓平遥、欢乐聚平遥。一年一度的“平遥中国年”又向我们走来了，在这座有着2700多年文化积淀的古城，你能发现春节比想象中的要丰富许多。清晨，阵阵清脆的鞭炮声，令古城从梦中醒来。踏着薄雪，沐着朝阳，循着平整的青石板路，我倘徉在平遥古城的街巷中。街道上，一派红火喜庆的景象，大红灯笼高高挂着。最热闹的明清商业街，店铺林立，商品琳琅满目。幽长的古巷，向远处纵伸，仿佛是时间的空洞，延伸至那古老悠远的岁月，等着人们去读懂它曾经的落寞与辉煌。
入夜，城内的古巷两侧挂满了大红灯笼，城墙外的平地上满是造型栩栩如生的花灯。在这片张艺谋曾经拍摄过《大红灯笼高高挂》的晋中大地，灯，是最具代表性的民俗注脚。在迎薰门人工湖畔，民俗灯会现场人潮如云。色彩喜庆、争奇斗艳的200多种宫灯、红灯笼、彩灯带将人工湖装扮得喜气洋洋，在清冷黑暗的夜色中，花灯流光溢彩，非常漂亮，把晚上逛灯的人们带进了一个五彩缤纷、璀璨美丽的灯的海洋。
太谷
过大年、娶媳妇、双喜临门
黄土地、土窑洞、坐花轿、骑毛驴，一场原汁原味的农村婚礼，仿佛是几百年前的情景。太谷县地处山西晋中盆地，在明清时期，太谷商人遍及大江南北，固有“旱码头”“小北京”之称。那时商人们常年经商在外，每年春节前后才会归乡探亲，恰逢农闲收获之时，娶亲嫁女的好日子多定在这个时节，有一种说法就是“赶乱岁”。特殊的历史渊源，孕育了独具特色的婚俗文化，不妨参与其中，来体验一把晋商人家的过年娶媳妇，双喜临门的感觉。
阳光明媚，黄土高坡上花团锦簇、鸾凤和鸣，临近太谷县城的青基沟一场婚礼正在举行。待嫁的新娘含娇带羞地坐在炕上，穿着大红的棉衣棉裤，这叫“穿厚成”，喻意日子越过越“厚”。新娘子的化妆方式也很特别，首先要请福寿双全的妇人“上头”和“开脸”，新娘像是换了一个人一样，褪去了少女的装扮，以此表示少女时代的结束。
穿戴梳洗完毕，新娘上轿了，鞭炮连天，迎娶队伍起程，前面是大红灯笼开道，后面是摇摇摆摆的花轿。一路吹吹打打迎到男方家，下轿时，由新郎牵引，由伴娘搀扶，缓缓步入夫家大门。大门中间，一个用红布包裹的马鞍上放着苹果，寓意平平安安，新娘要轻轻地迈过去。进门之后，举行拜天地仪式。新郎新娘手牵“同心结”入洞房，以示一对新人已经结为一体，同心协力，白头偕老。
太原
逛庙会、闹红火、喜庆热闹
电影《让子弹飞》中冯小刚饰演的师爷一角“也好听，也好吃”的台词，给很多人留下了深刻印象。春节期间太原的传统庙会，同样会让人感受到听觉和味蕾的快意，更有视觉、触觉等全方位的冲击等着你。一句话，来太原庙会，能看演出，闹红火，品美味，买年货，绝对能享受到浓浓的年滋味。
太原“红火”，也就是春节元宵节的文娱活动。“红火”顾名思义，红红火火，既表现春节的红火热闹，也寓意人们的生活丰富多彩、红火繁荣。广场上燃起熊熊烈火，空地上跑起欢乐的旱船……带有山西地方特色的民俗表演无疑是庙会的一个重头戏。逛庙会当然少不了品尝美食，还没有走进太原动物园亲水广场，风味小吃摊的香味已经扑鼻而来，蒙古烤肉串、湖南臭豆腐、韩式棉花糖……琳琅满目的各色美食汇聚一堂，吊足了人们的胃口。本地特色名吃清徐的蘸（沾）片子、徐沟豆腐干、徐沟罐渣、孟封饼；古交的“糊擦擦”；阳曲县的“五香山药粥”、麻油饼、红面饺；老太原的面食、煮疙瘩、捞饭一应俱全，再看那些食客，一个个陶醉于美味之中，心满意足。
扩展阅读
平遥将于2013年农历腊月二十三至正月十六在平遥古城举办“我们的节日·春节——平遥”活动。届时有丰富多彩的文化活动。
立春的古诗范文5
县令自幼家贫，但却天资聪颖，善养鱼虫，其中尤以养蟋蟀为最，他也好斗蟋蟀，从小就被人成为“蟋蟀王”。
自从当上县令以后，他勤于政事，忙于公务，难得再斗上一场。
一日邻县一同样好斗蟋蟀的县令前来拜访，两人谈到蟋蟀甚是兴奋，县令便拿出他那战无不胜的叫“青子”的蟋蟀与对方的蟋蟀斗了一场，并叫县衙众人前来观战。没想到半个回合，青子便将对方打败。此时那些阿谀奉承的捕快、杂役们便大呼“老爷神勇，青子无敌”，县令日日公务缠身，好久没有这般开心，便赏了小的们一些银子让他们散去了。县尉看在眼里记在心里，四处寻找斗蟋蟀的高手前来与县令比赛。县令起初总以有要事在身为由拒绝，但县尉三番五次找人来，也不好总拒绝。县尉找来的这些人的蟋蟀自然不是“青子”的对手，每次比赛县令不光可赢得比赛，更能得到众人一番赞赏。日子久了，县令几日不斗一场便觉得有些不自在，审案办公也觉得很难熬。好在他有一位能干的县丞，县丞除了处理文书、仓库等事物外，还帮助县令处理其他一些公务。
县尉自从开始为县令找斗蟋蟀之人，自然也得到县令的不少恩惠，为此他精心的定期为县令安排比赛。终于在被赞誉的虚荣与天生爱好的驱使下，县令渐渐荒诞政务，并在县衙设立了个“聚闲堂”专门用来斗蟋蟀。日常政务都交与县丞来处理，县丞看在眼里，急在心里，几次劝说都无功而返，反而遭受阿谀奉承者们的打击和嘲讽。但为了挽救县令他想尽了各种办法阻止县令斗蟋蟀，对县令说劝谏阻，对与县令比赛者围追堵截，甚至有几次与县令挣得面红耳赤，大呼自己赤胆却被冷落委屈，咒骂这些奸佞小人，却被人围攻陷害。
最终县丞心灰意冷，告病还乡，临行前，他与新到任的县丞语重心长的长谈一夜。但新县丞让他尽可放心，并保证必能将县令从斗场拉回来。
上任头一天，新县丞特意托人从外地买来一只好斗、能斗的蟋蟀，个大，触粗，腰细，腿长。但他并不是要把这只蟋蟀送给县令作为见面礼，而是要让其与县令的“青子”进行比赛。
这只蟋蟀与“青子”的实力也确实不相上下，县丞隔三岔五的与县令斗上一场，但每次斗至焦灼之时，县丞总是以处理公务为由离开，弄得县令心里直痒痒，虽然很想分出胜负，但面对上级新派来的助手也不好强求。
一日两只蟋蟀激斗正酣，衙役跑来报告，说有二人因一头牛的事情闹上堂来，请县令前去断案，衙役话音未落，县丞便说：“今天这两只蟋蟀一定要争出个胜负”。见县令面露难色，衙役又说：“那小的下去叫二人候着”。未等县令开口，县丞又说：“拉下去各打三十大板问题自然解决”。此话一出来让县令与衙役四目相对，县令欲言又止，县丞却指手画脚的大呼：“打他，打他”，县令低头，只见“青子”被县丞的蟋蟀打的节节败退，衙役见县令未作指令，便领了县丞“打他”的命下去了。
一场恶战，两个蟋蟀两败俱伤，却仍未决出胜负，两个评理之人也在三十大板的“伺候”下各自回去了。
第二日，一大早县丞带着自己的蟋蟀请县令大人也带着他的“青子”到街上找个人多的地方再战一场，以决胜负。县令见跟随自己多年的“青子”被打的遍体鳞伤，再看看县丞那蟋蟀也臂折触伤，话也没多讲便一同前往。
二人在街上找着人多的地方，行至街角，见众人围着门对门的两户人家，吵吵嚷嚷，他们走上前，看见北边一家被烧的断壁残垣，南边一家门口有一大滩血，县令便打探出了何事。
原来，这两家的男人都是好赌之徒，前日住在南边的张三在赌场上输给了住在北边的李四，张三没钱便用自家的牛来顶赌帐。李四去牵牛的时候，张三的老婆死活不给，李四便找人打了张三，为此二人前去县衙评理，没想到二人在县衙被各打三十大板，事后没出了气的李四的弟弟到张三家大闹，拿起刀子杀死了张三家的牛，在门前留下一大滩血迹，张三老婆见自家仅有的一头牛被杀，气急败坏冲到李四家放火烧了李四的房。而此时被打的不能动弹的张三和李四都躺在郎中的家里。
县令听罢正欲上前，县丞问道：“大人，依您看这二人的这场赌博谁才是赢家？”正在这时一个小孩子从二人身边挤过，撞掉了县丞手上装蟋蟀的小笼子，小笼子的小门被撞开，蟋蟀托着断臂跑了出来，刚出笼子便被拥挤的人群踩死。
小孩感觉撞到了东西便回头看，看到是县令，在拥挤的人群中唱起了童谣：“草鞋包公是草包，不办案来不上朝，蟋蟀青子赛牛刀，聚贤堂里烧民膏”
县令看着手中的小笼子，低头不语，弯下腰打开了小门，“青子”蹦向一堆青草。
县令突然想到县衙堂上的那块“青天明镜”的漆木牌子也该重漆了……
冯光春论道： 在企业的经营管理过程中，中高层管理干部面对一个存在明显缺点的老板应该怎么办呢？有的人会选择随波逐流，投其所好，阿谀奉承；有的人会刚直不阿，敢言直谏，宁碎不折，此处不留爷自有留爷处；有的人会循循善诱，去引导，去启发。
立春的古诗范文6
（福建师范大学 生命科学学院，福建 福州 350108）
摘 要：本研究从红色诺卡氏菌细胞壁骨架中分离出具有免疫活性的多糖成分.用盐酸断裂多糖和粘肽之间的化学键后用乙醇从细胞壁骨架中将多糖沉淀出来，利用苯酚-硫酸法测定酸解后的多糖含量，结果表明提取率为5.12 %.通过Sephadex G-100（1.7cm×20.5cm）凝胶柱层析用pH=7.0，Tris-HCl,洗脱速度为1.0mL/min进行分离纯化，出现8个洗脱峰.洗脱峰的具体成分，有待于进一步测定.
关键词 ：红色诺卡氏菌；细胞壁骨架；多糖；分离纯化
中图分类号：Q539文献标识码：A文章编号：1673-260X（2015）08-0017-03
基金项目：福建省教育厅项目(JB12029)
红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)是一种放线菌，是目前所发现具有最强细胞毒活性和免疫促进作用的一种微生物.因为一方面红色诺卡氏菌具有最强细胞毒活性，说明这种微生物对肿瘤细胞有最强的毒性，可以直接杀灭肿瘤细胞；另一方面具有免疫促进作用，说明这种微生物可以调节并增强机体的免疫力.研究表明[1]:红色诺卡氏菌细胞壁骨架（以下简称N—CWS）,在增强体内巨噬细胞、T细胞和自然杀伤细胞的活性的同时，还能诱导机体产生LAK细胞等,产生抗癌作用,有效地抑制肿瘤生长.所以N-CWS已经成为治疗肿瘤的有效制剂.它具有提高机体内T辅细胞和杀伤细胞的功能,增强巨噬细胞和自然杀伤细胞的免疫活性，抑制肿瘤和增强免疫能力的功效.其主要有效成分为[2]霉菌酸，阿拉伯半乳糖，粘肽.由于N-CWS的组成复杂，使用过程仍然存在一定的副作用,其起主要作用的物质不明确，影响了后续对其作用机制和药用开发.而有关N-CWS的多糖成分分离纯化的报道较少，本文研究了N-CWS的多糖成分的提取及分离纯化，为进一步分析该产品中多糖的成分和结构提供参考,为新药的开发与制备提供基础数据.
1 材料与方法
1.1 实验材料及仪器
1.1.1 主要材料和试剂:
红色诺卡氏菌(由本实验自行培养传代提供)；Sephadex G-100（为Pharmacia公司产品）；葡萄糖(广东汕头西陇化工厂产品，AR);苯酚(广东汕头西陇化工厂产品，AR);硫酸(广东汕头西陇化工厂产品，AR);阿拉伯糖(广东汕头西陇化工厂产品，AR);其他生化试剂均为分析纯.
1.1.2 主要仪器
可见分光光度计（V-1100型，上海美谱达仪器有限公司）；电子天平（AL104，梅特勒-托利多仪器有限公司）；电热恒温振荡水槽；微量离心机（TG16-W型）；电热鼓风干燥箱（101-2型，上海阳光实验仪器有限公司）；BT1-100恒流泵（上海琪特分析器有限公司）；BSZ-100A自动部分收集器（上海琪特分析器有限公司）；凝胶层析柱（1.7㎝×20.5㎝为Pharmacia公司产品）；TGL-16M高速台式冷冻离心机.
1.2 实验方法
1.2.1 红色诺卡氏菌细胞壁骨架的制备
红色诺卡氏菌经菌体培养,菌体破碎，蛋白酶处理，脱色及有机溶媒处理后即可获得白色的红色诺卡氏菌细胞壁骨架制剂[3].
1.2.2 多糖PS的提取
800ugN-CWS样品加入0.1mol/L HCl溶液酸解[4]，放于60℃的电热箱内孵育12h.16000r/min离心15min 后收集上清液并浓缩，加3倍体积的无水乙醇，混匀后静置过夜使多糖充分沉淀，离心收集PS沉淀.
1.2.3 标准曲线的制备[5]
准确称取标准阿拉伯糖50mg于500mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度.分别吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mL阿拉伯糖溶液，各以水补至2.0mL，然后加入6%的苯酚溶液1.0mL，再加入浓硫酸5.0mL，迅速震荡摇匀，置于25℃水浴30min，取出于490nm测光密度值，以2.0mL蒸馏水为空白对照，以阿拉伯糖微克数为横座标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线.
1.2.4 样品溶液的制备和含糖量的测定
将样品加水至1.0mL,用移液器吸取样品液100μL并补水至2.0mL，然后加入6%的苯酚溶液1.0mL，再加入浓硫酸5.0mL，迅速震荡摇匀，置于25℃水浴30min，取出用V-1100型分光光度计于490nm测光密度值，以标准曲线计算其多糖含量.多糖得率计算：多糖得率=(多糖质量／样品质量)X100％.
1.2.5 Sephadex G-100凝胶柱层析
装柱:称取5克Sephadex G-100,加入50ml去离子水，浸泡溶胀过夜.[6]将悬浮细颗粒,随上层液体倾去之后,加入等体积的1.0mol/LNaOH浸泡并间歇搅拌2h倾去,用蒸馏水洗涤至中性,用1.0mol／L HCl溶液浸泡1h，用蒸馏水洗至中性，再用1.0mol／L NaOH溶液浸泡2h.最后用蒸馏水洗至pH中性，备用.采用上述处理过的Sephadex G-100凝胶装柱.装柱过程需将凝胶缓慢加入,不能出现断层,纹路和气泡,必须均匀,否则要重新装柱.柱装好后用3-5倍体积的缓冲液平衡层析柱,保持流速1.0ml/ min,直至流出液与上柱缓冲液完全相同.
上样:用移液器取样品280μL,用玻棒引流沿管壁缓缓加入到凝胶床面上.样品全部加入后，加入0.05mol/L pH=7.0 Tris-HCl洗脱液,小心清洗凝胶床界面表面，使黏附着的样品全部洗入凝胶床,直到液面高出凝胶床面2-3cm.
洗脱:用0.05 mol/L pH=7.0 Tris-HCl缓冲液洗脱，调节好恒流泵的流速1.0ml/min，开始收集.每1min管收集1管，收集120管.用苯酚-硫酸法进行跟踪测定多糖,以洗脱管数为横坐标，吸光值为纵坐标绘制洗脱曲线作图.
2 结果与分析
2.1 样品PS含量测定
2.1.1 标准曲线的制备
以苯酚-硫酸[7]为显色剂，用比色法测定多糖含量.多糖类成分在浓硫酸作用下，先水解成单糖，单糖迅速脱水生成糠醛衍生物，糠醛与苯酚直接结合生成橙红色衍生物，该衍生物在490nm处出现最大吸收值，记录数据如表1，其吸收值与糖质量浓度呈线性关系.绘制标准曲线如图1，样品测定以标准曲线，计算多糖含量.
2.1.2 样品的测定
取多糖样品800ug，精密称定，置1mL离心管中，加水稀释至刻度，摇匀.提取前和提取后各精密量取样品溶液100μL，照标准曲线制备项下的方法，制备样品供试液.以阿拉伯糖为标准,用苯酚-硫酸法,在490nm波长处测定OD值,以标准曲线计算其多糖总含量.结果见表2,结果样品中多糖得率以阿拉伯糖含量计算.根据标准曲线如图1，计算样品多糖含量.为了消除单糖对测定的影响，本法在测定之前先用无水乙醇进行沉淀处理，实验表明，根据标准曲线,求出总糖量为16.15%.用盐酸解离后经沉淀处理后，提取的多糖含量5.12%.结果如表2,表明还有大部分多糖还未被盐酸解离，提取出来的多糖占总糖的31.7%.
2.2 Sephadex G-100凝胶柱层析分离
将提取的粗多糖溶液Sephadex G-100凝胶柱层析，上样体积为280μL，洗脱曲线如图2所示.从图2可以看出.粗多糖经凝胶柱层析洗脱可以得到8个峰.结果发现经Sephadex G一100的洗脱曲线峰太多，而且峰较密集，说明样品中粗多糖成分复杂.因此洗脱柱填充材料和洗脱条件有待进一步研究.
从洗脱曲线上看，从10管到18管中出现的三个洗脱峰都比较密集说明有可能是分子量相近的多糖,35到38管出现两个相连的洗脱峰分离效果较差表明这也是相似的多糖成分.从图2来看，提取出来多糖的成分较为复杂，除了主要的阿拉伯糖和半乳糖之外还有其他的多糖.影响洗脱效果的因素主要有：凝胶孔径，洗脱速度，洗脱浓度，柱长等.由于乙醇沉淀下来的多糖样品一般含有少量的肽聚糖，类脂，蛋白质等杂质.总之用Sephdex G-100纯化的效果不是十分明显，为了能够对其生物学活性和作用机制进行后续研究,对该样品进行纯度鉴定，分子量测定和组分分析等实验.
3 讨论
3.1 苯酚硫酸法测定
关于苯酚-硫酸法测定多糖含量原理是多糖在浓硫酸的作用下，先水解为单糖，迅速脱水形成糠醛衍生物，然后与苯酚缩合为有色化合物，在490nm处有特征吸收值.
根据已有文献的报道[8-10],该实验方法有所差异，主要区别在于是否加热，关键操作为硫酸的添加方式，应将浓硫酸垂直加入试管中，而不应沿管壁加入，否则将会造成一定的误差.因为反应所需的温度可以通过快速加入浓硫酸产生热量达到,从而使多糖显色充分.采用苯酚-硫酸法测定多糖含量时，不同单糖显色产物之间的最大吸收波长与吸收值有所不同.因此，选择合适物质配制标准曲线也是实验的关键.在现有的文献报道中，该多糖的测定均以葡萄糖为标准.而结构分析表明N-CWS多糖的主要组成单糖是阿拉伯糖和半乳糖[5].阿拉伯糖和葡萄糖与N-CWS多糖的苯酚-硫酸法显色产物的吸收光谱特征相比较，表明N－CWS多糖的吸收光谱与阿拉伯糖基本一致，而与葡萄糖有所差异.因此，实验采用阿拉伯糖配制标准溶液测定N-CWS多糖，测定结果能比葡萄糖更准确地反映其含量.
3.2 N-CWS中PS的提取方法
根据已有的文献关于N-CWS中PS提取的报道较少,除了用盐酸浸提多糖，酸解样品使多糖和类脂，肽聚糖，脂肪酸，蛋白质等物质的化学键断裂，还可以使用甲酰胺和容菌酶将细胞壁中的多糖解离出来，但是后两者反应激烈会将多糖水解成单糖，影响多糖生物学活性的后续研究.经过本实验，表明用盐酸浸提的方法简单方便，对多糖的化学键没有造成断裂，保持其生物学性质以便进一步研究分析作用机制.
参考文献：
〔1〕王燕.诺卡菌细胞壁骨架N—CWS在治疗癌性胸水中的应用[J].中国医学理论与实践,2003（6）:749-751.
〔2〕阮继生,刘志恒,梁丽糯,等.放线菌研究及应用[M].北京:科学出版社,1990．19—20．
〔3〕张祝兰，林善，唐文力，等.胞必佳制造工艺的改进[J].海峡药学，2001，13（2）：90-92.
〔4〕蔡晶晶，张少华，吴梧桐，等.N-CWS多糖的促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用[J].中国天然药物，2007，5（6）：435-437.
〔5〕宁惠青.苯酚硫酸法测定灵芝多糖的研究[J].太原师范学院学报,2006,5（1）：105-107.
〔6〕罗显仲,陶美华,廖毅俊，等.仙人掌茎多糖的分离纯化[J].湛江师范学院学报,2004,25(6):32-36.
〔7〕刘莹，戴玉杰，张黎明,等.穿山龙多糖分离纯化工艺的研究[J].天津科技大学学报,2007,22(4):27-30.
〔8〕王宝珍,张天斌,马冰如.黑蔓粗多糖的总糖含量测定研究[J].白求恩医科大学学报,1995,21(3):275-276.
〔9〕刘友平,李祖伦,陈红,等.分光光度法测定川牛膝中多糖含量[J]成都中医药大学学报，1997，20(4)：49-50.
〔10〕邓俊林，许平,王志勇.茶叶多糖的分离纯化及分析[J].重庆师范学院学报,1998,15(2):35．