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关键词 藕莲；特征特性；品质
中图分类号 S645.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）17-0115-02
莲藕（Nelumbo nucifera）是睡莲科莲属多年生大型水生草本植物，按照栽培类型可分为藕莲、子莲和花莲三大类。藕莲是以采食肥大地下茎为目的的品种资源的总称，在食用、药用和加工方面都有较高的应用价值[1-3]。现以18份来自不同地区的藕莲品种资源为研究对象，初步分析藕莲的变化规律，为今后的育种和推广提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
18份材料来自浙江省水生蔬菜种质资源圃，分别为东河早藕（单株系选）、金华红花藕（野生）、金华无籽藕（野生）、金华白莲、尖头白荷（浙江）、杭州藕、湖州早白荷、武义藕、绍兴红花藕、鄂莲6号（杂交选育）、鄂莲7号（杂交选育）、鄂莲5号（杂交选育）、马口白莲（湖北）、应城白莲（湖北）、无花藕（江苏）、苏州藕、红芽藕（野生）、飘花藕（安徽），分别用1～18标号。
1.2 试验方法
将18份藕莲品种资源种植于44 m2的池内，3次重复，每池种8支，随机区组排列。考查27个性状，其中质量性状8个[4-6]：顶芽颜色、藕头形状、藕节形状、藕节切面形状、藕肩形状、表皮颜色、藕肉颜色、熟性；数量性状12个：株高、叶柄粗、叶长、叶宽、整藕重、主藕重、主藕长、主藕节数、最大藕节长、最大藕节粗、最大藕节、产量；品质性状7 个：干物质（烘干法）、可溶性总糖（酸水解法）、淀粉（蒽酮比色法）、粗蛋白（自动凯氏定氮仪检测）、维生素C（2，6 -二氯靛酚滴定法）、粗纤维（纤维素测定仪检测）、粗脂肪（脂肪测定仪检测）。
2 结果与分析
2.1 不同藕莲品种资源产品外观对比
顶芽的颜色除了金华红花藕和红芽藕2个野生资源为红色，其他均为黄色；来自湖北的品种资源藕头形状较圆润，其他均为锐尖；藕节形状多数为长筒形，来自湖北省的品种资源为短筒形，而金华红花藕和红芽藕为较细长的长条形。所有品质资源中只有杭州藕、武义藕和鄂莲5号的切面近方形，其他均为近圆形。皮色以黄白为主，肉色以白色为主，3个野生种和鄂莲5、鄂莲6号肉色为黄色。除了3个野生资源和绍兴红花藕为晚熟，其他地方品种和选育品种都是早、中熟（表1）。
2.2 不同藕莲主要农艺性状对比
通过农艺性状考察对比发现（表2），浙江、江苏和安徽的藕莲品种资源株高在123.9～169.3 cm，表现为早熟的品种株型较小，节数3～5节，多数品种资源最大节长和最大节粗比例接近2∶3，其中金华红花藕和绍兴红花藕节长超过20 cm。单株重量在0.62～2.18 kg之间，主藕重占整藕重的64.0%～93.1%，侧枝少且质量轻。而5个湖北的藕莲品种资源植株高大，叶梗粗和叶长、叶宽都较其他品种资源大，并且节数多，均在6节以上。节短而粗，最大节长和最大节粗比例接近1/2；单株重量大，总体产量高，但主藕重只占整藕重的49.7%～53.4%，侧枝较多且重量大。相比较而言，湖北的品种资源易于与其他地区区分，野生资源和部分地方品种产品器官较细长，外观品质差且产量低。改良品种外观品质好、产量高或早熟。而还有部分地方品种仍在大面积栽培，例如飘花藕、湖州早白荷、无花藕等，其外观品质、产量等方面都与改良品种相当或某一方面突出，依然受到市场青睐。
2.3 不同藕莲主要品质性状对比
通过品质性状检测对比发现（表3），野生资源金华红花藕和地方品种绍兴红花藕除了可溶性总糖含量较低外，其他品质指标含量较高，金华红花藕干物质达到30.2%，绍兴红花藕粗蛋白含量3.16%、淀粉含量15.30%，在被检对象中最高。地方品种武义藕可溶性总糖含量4.16%、马口白莲维生素C含量37.8 mg/100 g，都是被检对象中最高值。脂肪和粗纤维含量在18份品种资源中表现差异不显著。改良品种各项品质指标较为均衡，但在直接影响到食用口感的品质指标上都有较高的含量，例如东河早藕、湖州早白荷和鄂莲7号等适宜生食、炒食的早熟品种，可溶性总糖含量较高，分别达到3.65%、2.91%和3.88%，而鄂莲5号、鄂莲6号、尖头白荷、苏州藕等适宜煨汤的中晚熟品种，淀粉含量较高。
3 结论与讨论
参试的18个材料在农艺性状上有明显的地域划分，江、浙2个省的藕莲资源节长而少、侧枝少，湖北的藕莲资源节短而多、侧枝多，产量后者更有优势。不同地区的改良品种在商品性、产量等方面明显优于地方品种和野生资源，说明了藕莲在长期生产过程中经过人为的选择，向着更粗大、更高产的目标演化。而野生资源和部分地方资源在多个品质性状或单个品质性状表现远远优于改良品种，应该加强对这些资源的保护和利用。本试验虽然选择了不同地区的品种资源作为试验对象，但由于样本数量少，结果存在局限性，目的在于反思如何制定正确的育种目标，为藕莲资源保护、种质创新工作的深入提供参考。
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重莲范文3
[关键词] 穿心莲内酯；不良反应；中药注射剂；安全性研究
Analysis and exploration on adverse reactions of
four kinds of andrographolide injections
XIANG Dong， WANG Mengdie， WANG Wenqing， SHI Chunyang， XIE Xuejia， FANG Jianguo*
（Department of Pharmacy， Tongji Hospital， Tongji Medical College， Huazhong University of
Science and Technology， Wuhan 430030， China）
[Abstract] Concerned literature on four kinds of andrographolide injections in recent 15 years were searched in CNKI， Wanfang and VIP databases The adverse drug reaction（ADR） cases of Chuanhuning， Yanhuning， Xiyanping and Lianbizhi injections were classified and analyzed statistically， including a total of 194 articles and 3 479 cases The ADR clinical characteristics and occurrence regularity of these four andrographolide injections were analyzed and compared from the gender， age， primary disease， emergence time of ADR， clinical manifestation， allergy history， dosage， prognosis and combined medication of the patients It is useful to provide valuable references for rational use of these andrographolide injections in clinical practice
[Key words] andrographolide； adverse reactions； traditional Chinese medicine injections； safety study
doi：10.4268/cjcmm20161229
穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治注射液是由中药穿心莲提取的穿心莲总内酯中成分经过衍生化制成的中药注射液，具有清热解毒、抗菌消炎的功效[1]，临床上对上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、痢疾等具有良好的疗效[2]。随着4种穿心莲内酯注射液在临床应用越来越广泛，人们对中药注射剂不良反应的关注度也在逐渐提高，不良反应（adverse drug reaction， ADR）报道也随之增多[3]。国家药品不良反应监测中心的《药品不良反应信息通报》分别在第8，23，48期警示了莲必治、炎琥宁、穿琥宁、喜炎平注射液的不良反应情况。4种穿心莲内酯注射液药品使用说明书中适应症基本一致，但不良反应、儿童给药剂量、药物相互作用等内容存在不足。为总结4种穿心莲内酯注射剂ADR发生的特点和规律，本文收集了三大数据库近15年国内应用4种穿心莲内酯注射液出现的不良反应病例报告进行综合分析，以期指导临床安全合理用药。
穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及新穿心内酯是穿心莲总内酯的主要成分，为二萜内酯类化合物。穿琥宁是穿心莲内酯经酯化、脱水、成盐而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐；炎琥宁是穿琥宁与氢氧化钠反应而得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钠钾盐；喜炎平是穿心莲总内酯通过磺化制得的磺酸盐；莲必治是穿心莲内酯和亚硫酸氢钠发生加成反应制得的水溶性磺酸盐。
1 材料
通过检索中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库及维普中文科技期刊数据库（检索词为“穿琥宁”、“炎琥宁”、“喜炎平”、“莲必治”、“穿心莲内酯”及“不良反应”、“安全性”、“过敏反应”等），收集2000―2015年国内公开发表的医药学期刊中有关4种穿心莲内酯注射液的不良反应病例报告，检索结果共2 943篇，其中穿琥宁158篇，炎琥宁1 024篇，喜炎平1 036篇，莲必治213篇。摒除实验研究、不良反应系统数据库分析、综述摘要类文献，合并同单位作者在不同数据库中相同杂志的重复报道，剔除无明确不良反应发生，不良反应病例内容描述不清或陈述不全的报道。最终纳入分析的文献穿琥宁82篇，炎琥宁57篇，喜炎平33篇，莲必治22篇，共计194篇，病例3 479例。
2 方法
将所查阅到的4种注射剂ADR相关文献资料进行整理，采集相关信息，以Excel录入资料，采用手工筛选的方法，列表分析。对患者的性别、年龄、原发疾病情况、出现 ADR 的时间、过敏史、临床表现、给药剂量、愈后及合并用药情况等进行统计并整理、汇总。
3 结果
31 一般情况 4种注射剂共统计ADR发生人数3 479例，其中穿琥宁605例，炎琥宁1 959例，喜炎平726例，莲必治189例。穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治注射剂发生ADR的男女例数见表1，男女比例分别为120∶1，115∶1，135∶1，154∶1。
32 各年龄段病例数与构成比 4种注射剂ADR共有854例年龄不详患者，年龄已知患者中使用穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治发生ADR的最小年龄分别为3个月，8个月，9 d，2岁，最大年龄分别为
33 原患疾病 4种穿心莲内酯注射剂的治疗适应症基本一致，临床上主要用于治疗感染性疾病和炎症。ADR原患疾病主要为上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、胃肠炎等。另外，还有穿琥宁注射液用于胆囊炎、心肌炎、盆腔炎，炎琥宁注射液用于泌尿系统感染，喜炎平注射液用于中耳炎、鼻窦炎、急性腮腺炎，莲必治注射液用于胆囊炎治疗的报道。
34 过敏史 统计显示，有过敏史记载的ADR患者179例，其中穿琥宁19例、炎琥宁63例、喜炎平96例、莲必治1例。此外，324例记载无家族或个人过敏史者，其余2 976例不详。
35 发生ADR的时间 ADR发生时间有确切记录的共1 697例，穿琥宁373例，炎琥宁701例，喜炎平487例，莲必治136例。其中30 min内发生ADR的人数分别为穿琥宁219例（3620%），炎琥宁490例（2459%），喜炎平274例（3774%），莲必治32例（1693%）。莲必治1 h后发生ADR的人数占5132%，见表3。4种注射液ADR发生的最短时间仅为数秒，最长可延迟到14 d。
36 ADR累及系统器官及临床症状 参照《WHO药品不良反应术语集》[4]的分类标准，将4种注射剂的ADR按照累及器官系统分类统计，详细情况见表4。
37 用药及合并用药情况 文献报道的3 479例ADR患者均具有适应症。穿琥宁605例中281例给药剂量符合规定，4例超剂量使用，320例给药剂量不详；炎琥宁1 959例中502给药剂量符合规定，9例超剂量使用，1 448例给药剂量不详；喜炎平726例中548给药剂量符合规定，7例超剂量使用，171例给药剂量不详；莲必治189例中112例给药剂量
符合规定，7例超剂量使用，70例给药剂量不详。
发生ADR时有单用某种注射剂，也有联合用药，存在两联、三联和多联用药，联合用药情况见表5。4种注射液联合用药药品种类基本一致，主要为抗生素类（青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类）、糖皮质激素和抗菌消炎中药注射剂等。
38 ADR的治疗情况 穿琥宁注射液发生ADR的605例患者中痊愈或好转293例（4843%），死亡4例（066%），不详308例（5091%）；炎琥宁注射液发生ADR的1 959例患者中痊愈或好转554例（2828%），死亡2例（010%），不详1 403例（7162%）；喜炎平注射液发生ADR的726例患者中痊愈或好转509例（7011%），死亡4例（055%），不详213例（2934%）；莲必治注射液发生ADR的189例患者中痊愈或好转111例（5873%），不详78例（4127%）。总计，3 479例发生ADR患者中，1 467例（4217%）患者痊愈或好转，2 002例（5754%）患者情况不详，10例（029%）发生重大不良反应事件，导致患者死亡。
4 讨论
41 ADR与性别、年龄的关系 由表1可见，从明确男女性别的3 144例患者中，穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治注射液的男女比例分别为120∶1，115∶1，135∶1，154∶1，提示男性比女性更易发生ADR，与相关报告吻合[56]，这可能与生理结构特异性相关，男性的耐受性稍差[5]。另外，4种穿心莲内酯类注射液ADR可发生在各个年龄段。由表2可见，穿琥宁、炎琥宁、喜炎平注射液ADR患者以0～10岁的儿童居多，分别占2810%，4303%，6432%。一方面由于儿童器官发育尚不成熟，药物在体内代谢较慢，容易造成药物的蓄积；另一方面，儿童表达能力欠缺，在给药初期遇到不适也不能及时提出，会增加儿童不良反应发生的风险[7]，另外，穿琥宁和炎琥宁注射液说明书中没有明确规定儿童用药剂量，不少病例中儿童使用剂量接近于成人用量，这与说明书中没有说明儿童用药剂量或只说明“小儿酌减，或遵医嘱”有关[8]。而其他各年龄段ADR患者构成比差异不大。
本研究为回顾性分析研究，并没有穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治注射液使用人群的使用量，因此难以推断4种穿心莲内酯注射液ADR的发生率。刘佐仁等[9]采用回顾性研究住院病历分析得出穿琥宁ADR的发生率为260%，ADR患者中18岁以下未成年构成比为4286%；朱永坤等[10]同样研究得出炎琥宁ADR的发生率为150%，ADR患者中儿童构成比为4595%；王连心等[11]研究得出喜炎平ADR发生率为017%，7例ADR患者中6例为儿童；莲必治未见回顾性住院病历研究报道。结果可见均以儿童居多。
莲必治的不良反应主要发生在21～60岁的中青年，可能与该年龄段使用莲必治较多有关，因莲必治易导致急性肾功能损害，国家食品药品监督管理局2006年11月12日了关于修订莲必治注射液说明书的通知，明确要求生产厂家在其说明书中注明：可致“急性肾功能损伤”，所以临床上使用时应尽量避免用于儿童及老年人。
42 发生ADR的时间 由表3可见，4种注射液ADR可发生在用药后的各个时间段，但发生频率存在明显的差异。其中穿琥宁（3620%）、炎琥宁（2459%）、喜炎平（3774%）的ADR集中发生在用药30 min以内，说明这3种注射剂发生ADR的类型主要为速发型变态反应[12]。莲必治的ADR主要发生在用药1 h之后，发生频率为5132%，而用药30 min内发生频率也占1693%，因此ADR的发生类型主要为迟发型变态反应兼具速发型变态反应[13]。因此，医务人员在临床使用时，应仔细询问患者过敏史，用药1 h内应留院密切观察，发现异常情况应立即停药，并及时对症处理。莲必治注射液严重不良反应多为急性肾功能衰竭，ADR的发生时间稍长，王勇等[14]在观察3例使用莲必治注射液出现ADR的患者过程中发现，均为用药后2～3 d出现腰痛、少尿等症状。因此在使用莲必治注射液时，应及时监测患者的肾功能状况，观察患者的泌尿系统情况，发现腰痛、少尿、无尿等症状，立即停药并进行相应处理。
43 ADR累及器官和临床表现 4种穿心莲内酯注射剂的ADR涉及人体多个组织器官，临床表现呈多样性，主要为皮肤及其附件损害、全身性损害、消化系统损害、呼吸系统损害等，且发生频率具有明显差异。穿琥宁、炎琥宁、喜炎平注射液易发生皮肤及其附件的损害，构成比分别为3118%，5165%，5275%，临床表现为皮疹、瘙痒、水肿、面部潮红、肢体硬结、多汗等，为速发型变态反应。其次为全身性损害，临床表现高热、寒战、过敏性休克、无力等，其中过敏性休克危害最大，抢救不及时易导致生命危险，已报道的10例死亡患者均为严重的过敏性休克所致。此外，消化系统、呼吸系统和神经系统损害也较为突出，主要表现为腹泻、恶心、呕吐、呼吸困难、气促、头晕、头痛等。对人体泌尿系统、血液系统、听觉及前庭、用药部位的损害也见部分病例报道。
莲必治注射液易发生泌尿系统损害（4338%），可能因为莲必治在肾脏的分布浓度较高，容易蓄积对肾脏造成损害[15]，临床表现为肾功能衰竭、少尿或无尿等，尤其是急性肾功能衰竭，会对患者的肾脏造成可逆性或不可逆性的伤害，因此使用时应格外注意。其次，皮肤及其附件损害和消化系统损害也较为常见。
44 联合用药情况 4种穿心莲内酯类注射液的适应症主要为上呼吸道感染、支气管炎、肺炎、胃肠炎等，其与青霉素类、头孢类等抗菌药联合应用在一定程度上能取得较好的治疗效果，临床上常见以两联、三联用药，也有四联和多联用药，使出现ADR的风险增加，主要联合用药药品种类为抗生素类（青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类），糖皮质激素和抗菌消炎中药注射剂等。
中西药及多种药物联合使用时，会因药物间的相互作用而使不良反应的发生率增加。一方面，4种穿心莲内酯中药注射液成分复杂，联合用药可能会因药物性状，pH改变等导致药物稳定性降低而引起不良反应，如穿琥宁注射液与庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、氧氟沙星等联合配伍时会产生沉淀[16]。纪敏芳等[17]也发现炎琥宁与大环内酯类或氨基糖苷类合用会出现乳白色浑浊，甚至堵塞针头。这些沉淀如果没及时发现，而进入人体，可能会造成血管堵塞、发炎、过敏等更加严重的不良反应[18]。另一方面，青霉素、氨基糖苷类、大环内酯类等抗生素本身也易引起轻微或严重的不良反应，联合使用时也会增加不良反应的发生率。此外，莲必治有导致急性肾功能损害的风险，在联合用药时应避免与其他具有肾毒性的药物联合使用。金小福等[19]发现莲必治与氨基糖苷类抗生素联用时更易导致急性肾衰竭，与其他抗菌药物如克林霉素、阿奇霉素、庆大霉素等合用也会增加肾功能损害的发生率。
因此，4种穿心莲内酯注射液与其他药物联合使用时应密切关注，在临床使用经验、药品使用说明书和文献安全性依据的指导下用药。联合用药时应尽量避免2种或多种药物同时使用，最好有一定的时间间隔，以降低ADR的发生率。
45 ADR发生的可能机制 首先，导致ADR发生的因素可能为药物本身。穿心莲内酯注射液是由中药穿心莲提取的穿心莲总内酯中成分经过衍生化制成的中药注射液，因其成分复杂和生产工艺繁琐，能引发不良反应的物质较多，除药物本身具有致敏原作用外[2021]，提纯、生产运输及储存过程不可避免的引入一些生物大分子如蛋白质、多肽等[22]，制剂中的各种辅料以及药物本身性质不稳定发生变化而形成的杂质均有可能引发不良反应[23]。注射液含有多种蛋白成分是产生变态反应的基础，未除尽的半抗原与血浆蛋白结合形成抗原抗体复合物可激活过敏反应进程，释放炎症介质，引起血管和周围组织的损伤，导致严重过敏反应，甚至死亡[24]。
其次，用药过程中各种不合理操作也可能导致ADR的发生。超剂量使用，未按适应症给药，溶媒选用不当，药物配伍不当，滴注速度过快等均可导致不良反应的发生。例如与其他药品配伍或溶媒选用不当，会使不溶性微粒显著增加，增加患ADR的风险[25]。
另外，个体的特异质与ADR的发生也密切相关。不同年龄、性别、生理和健康状况的个体对药物的吸收、分布、代谢、排泄不同，尤其是特殊人群（新生儿、婴幼儿、孕妇、老年人等）及有过敏史、肝肾疾病的患者在适应症和正常剂量范围内尚可发生不良反应[26]，故对4种注射液有不良反应史的患者应谨慎使用。
46 本研究的局限性 本研究从三大期刊数据库中检索已发表的个案报道、病例观察报告、回顾性住院病例研究等，虽然经过认真的排查、定义和审定，但相当一部分的ADR报道的准确性无法判断。报道中很多重要的信息缺失，如药物的使用量、滴速、患者的个人与家族过敏史等，不利于分析ADR的原因。本研究虽然是对既往ADR发生特点和规律的总结，但仅基于已发表的文献报道，不能代表4种穿心莲内酯注射液ADR发生的全貌。
5 建议
51 说明书与药品生产的建议 建议药品生产企业进一步完善注射剂使用说明书。穿琥宁、炎琥宁、喜炎平、莲必治注射液使用说明书很多信息不详，特别是儿童用药剂量，在目前儿童患不良反应发生几率逐渐增加的情况下，确定合适的儿童给药剂量尤为重要。此外，在过敏反应、配伍禁忌等方面也应增加相应提示，控制药品风险。同时，开展风险评估研究，改进制备工艺，提高制剂纯度，减少或避免ADR发生的潜在因素[20]。
52 临床用药的建议 通过对3 479例4种穿心莲内酯注射液不良反应统计分析发现，穿琥宁、炎琥宁、喜炎平及莲必治在临床上的使用规范性有待加强。对于长期用药患者，应定期进行血象及肝、肾功能的检查，以便及时发现ADR的发生。儿童用药应注意用量，严格按照年龄、体表面积或体重等折算以确定用量，切不可盲目按成人用法用量来用药。详细了解患者的基本情况，对儿童、高龄患者及有药物过敏史的患者，做好预防变态反应的工作，建议过敏体质或有药物过敏史的患者慎用此类注射剂。
用药时应认真阅读药品使用说明书，按照说明书的用法用量给药，并注意有无超适应症使用情况，合理选择溶媒及滴注速度，一般滴注速度控制在40～60滴/min为宜[21]。避免与其他药物配伍，如必须配伍使用应谨慎选择与其配伍的药物，一般采用“序贯联合用药”的方式[8]，以减小发生配伍禁忌的可能[27]，保证用药安全。对某些不稳定的药物如炎琥宁最好做到现配现用[28]。用药过程及用药后一段时间密切观察患者的反应，特别是用药1 h以内，但也要注意迟发型过敏反应的发生。对ADR做到及时发现、及时停药、及时治疗。
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重莲范文4
【关键词】 反相高效液相色谱法；穿心莲提取物；穿心莲内酯
穿心莲内酯（andrographolide）又名穿心莲乙素，是爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata（Burm.f.）Nees的有效成分之一，具有抗菌、消炎、止咳平喘、清热解毒、凉血消肿等作用，广泛用于上呼吸道、消化道的细菌感染所引起的各种疾病［1］。关于穿心莲药材及其制剂中穿心莲内酯的含量分析测定方法已有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法等报道［2-5］。本文采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定了穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量，方法简便、快速、准确，可作为穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量测定方法。
1 仪器与试剂
美国安捷伦科技有限公司生产HP1100高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1314A紫外检测器，HP1100/Agilent化学工作站，Lambda25型紫外分光光度计（带扫描功能），德国赛多利斯BP211D型电子天平（感量0.01 mg），SB2200超声波清洗器，针筒式样品过滤器，溶剂过滤器。
甲醇（分析纯，0.45 μm滤膜滤过）;乙腈（色谱纯）;水（重蒸水）;穿心莲提取物：桂林莱茵生物制品有限公司提供;穿心莲内酯对照品：中国药品生物制品检定所提供，批号：0797—200106。
2 方法与结果
2.1 检测波长的选择
对穿心莲对照品溶液进行最大吸收的波长扫描，记录色谱图（图1），穿心莲内酯的最大吸收波长在226 nm处，故选择此波长为穿心莲内酯的检测波长。
图1 穿心莲内酯吸收光谱图（略）
Fig.1 UV spectrogram of andrographolide
2.2 色谱条件
色谱柱为Hypersil ODS C18(4.0 mm×250 mm，5 μm)，柱温为室温，流动相为乙腈体积分数0.1%磷酸水溶液（体积比25∶75），流速1.0 mL/min，进样量5 μL，检测波长226 nm。
2.3 标准曲线的制定
精密称取穿心莲内酯对照品10 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解后定容至刻度，得质量浓度为1.0 mg/mL的对照品溶液，过0.45 μm滤膜。精密吸取穿心莲对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0 mL分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。按上述色谱条件进行分析，每次进样5 μL，以对照品穿心莲内酯进样量为横坐标（m），以与其相应的峰面积为纵坐标（A），绘制标准曲线，得线性回归方程：A=3 932.294 44m-55.700 008， r=0.999 5。穿心莲内酯在0.5～5.0 μg范围内线性关系良好。对照品HPLC图谱见图2。
2.4 供试品溶液的制备
精密称取穿心莲提取物(批号:2002006)粉末10 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解15 min，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，过0.45 μm滤膜，即为供试品溶液。取5 μL注入高效液相色谱仪。供试品HPLC图谱见图3。
图2 穿心莲内酯对照品HPLC图谱（略）
Fig.2 HPLC chromatogram of standard reference material of andrographolide
图3 穿心莲提取物样品HPLC图谱（略）
Fig.3 HPLC chromatogram of sample of extractive of Andrographis paniculata（Burm.f.）Nees
2.5 精密度试验
按上述色谱条件，取同一批号供试品溶液连续进样5次，每次5 μL，分别测定峰面积，计算得峰面积RSD值为1.05％。
2.6 重现性试验
取同一批穿心莲提取物样品分别称取5份，依法测定穿心莲内酯的含量，计算得其RSD值为1.16％，表明方法具有良好的重复性。
2.7 稳定性试验
取同一批号样品溶液分别在室温下放置2、4、6、8、10 h后测定，以峰面积计算穿心莲内酯的RSD为1.15％(n=5)，试验表明样品溶液在10 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知穿心莲内酯含量的穿心莲提取物(批号:2002006)粉末5份，分别准确加入穿心莲内酯0.10 mg，按上述色谱条件测定，计算得平均回收率为98.73％，RSD为1.32％(n=5)。
2.9 样品测定
取不同批号的穿心莲提取物粉末，按“2.4”项下方法进行含量测定，结果见表1。
表1 样品含量测定结果（n＝5）（略）
Tab.1 Determination results of 4 samples
3 讨论
反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定穿心莲提取物中穿心莲内酯含量少见报道，采用乙腈体积分数0.1％磷酸水溶液（体积比25∶75）为流动相，穿心莲内酯与其他组分达到基线分离。
在提取穿心莲内酯时，我们对比了0.1 mol/L磷酸水、甲醇、乙醇等溶剂，结果采用甲醇为提取溶媒，其他色谱条件同前，测得穿心莲内酯含量最高，杂峰较少。
考察超声提取时间为15、30、45 min时穿心莲内酯的含量，结果基本一致，故选用超声提取15 min的方法。
本方法准确、可靠，可以用作穿心莲提取物中穿心莲内酯的定量分析方法。
参考文献
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重莲范文5
【摘要】 目的：建立人血浆中的穿心莲内酯的HPLCMS测定法，研究两种穿心莲内酯分散片的相对生物利用度。方法：血浆样品液液萃取后，进行LCMS分析，色谱柱为汉邦C18柱（4.6 mm× 150 mm，5 μm），流动相为甲醇水（72∶28，v/v），检测离子为m/z 373. 6（穿心莲内酯）、m/z 267.7（奈韦拉平，内标）。20名健康志愿者采用随机交叉方式分别单次口服穿心莲内酯分散片T或R各0.15 g，在不同时间点取血，样品以新建立的HPLCMS法测定，研究比较两制剂的药动学参数及相对生物利用度。结果：穿心莲内酯在1.343～268.6 μg/L浓度范围内与峰面积比线性良好，最低定量浓度为1.343 μg/L。方法回收率为95.7%～104.7%，日内RSD小于6.4%，日间RSD小于12.4%。单剂量口服穿心莲内酯分散片T和R 0.15 g后两种制剂的Cmax 为（114.26±37.20）μg/L、（107.95±32.44）μg/L、；Tmax为（1.0±0.3）h、（1.1±0.3）h；AUC036 为（375.96±89.86）μg·h/L、（368.84±89.14）μg·h/L；AUC0∞为（388.39±91.14）μg·h/L、（382.81±97.14）μg·h/L；T1/2为（7.65±2.24）h、（7.90±2.16）h。结论：该方法选择性好，灵敏度高，可用于穿心莲内酯的体内过程研究。药动学参数经方差分析表明，穿心莲内酯分散片T和R中穿心莲内酯的主要药动学参数之间差异均无统计学意义，双单侧t检验结果表明两制剂为生物等效制剂。
【关键词】 穿心莲内酯；HPLCMS法；生物利用度；生物等效性
［Abstract］Objective: To develop an HPLCMS method to determine andrographolide in plasma and evaluate the bioavailability of andrographolide dispersible tablets. Methods: Sample preparation was based on liquidliquid extraction. The compounds were separated on a Hanbon C18 column (4.6 mm×150 mm， 5 μm) with mobile phase of methanolwater (72∶28， v/v) and analyzed by MS detector. Nevirapine was the internal standard and the target ions were m/z 373.6 for andrographolide and m/z 267.7 for the internal standard. In a randomized crossover design， 20 healthy male volunteers were given 0.15 g andrographolide dispersible tablets T (test drug) or R (reference drug). The plasma samples were obtained and determined by the newlydeveloped HPLCMS method and the pharmacokinetics and bioavailability were studied. Results: The calibration curve of andrographolide were liner within the range of 1.343～268.6 μg· L-1 with the limit of quantity 1.343 μg·L-1， the methodology recoveries were in the range of 95.7%～104.7%. Interday and intraday RSDs were less than 6.4% and 12.4%， respectively. Pharmacokinetic parameters of andrographolide after a single dose of T and R were as following: Cmax were (114.26±37.20) μg·L-1 and (107.95±32.44) μg·L-1; Tmax were (1.0±0.3) h and (1.1±0.3) h; AUC0 36 were (375.96±89.86) μg·h·L-1 and (368.84±89.14) μg·h·L-1; AUC0∞ were (388.39±91.14) μg·h·L-1 and (382.81±97.14) μg ·h· L-1; t1/2 were (7.65±2.24) h and (7.90±2.16) h. Conclusions: The method is selective， sensitive and rapid for andrographolide determination. The results of ANOVA analysis and two oneside t tests show that there is no significant difference between the pharmacokinetic parameters of the two formulations and bioequivalence is observed.
［Key words］Andrographolide; HPLCMS; Bioavailability; Bioequivalence
穿心莲内酯（Andrographolide）是从中草药穿心莲中提取的纯中药的有效单体，为穿心莲的主要活性成分之一，在穿心莲中含量较高，且毒性最低［1］，是临床上应用有效的清热解毒、抗菌消炎药。但由于穿心莲内酯的水不溶性，单体穿心莲内酯较提取物在体内吸收差，血药浓度达不到治疗浓度而导致临床疗效不稳定，故将其加工为分散片以加大溶解度和溶出速率［2］。国内多采用HPLC法测定动物体内的穿心莲内酯的血药浓度［36］。由于仪器灵敏度的限制，难以满足该制剂在人体内的完整药时曲线的测定与药物动力学研究。本文采用HPLCMS联用技术，建立了简便、灵敏的体内分析方法，为穿心莲内酯的人体药代动力学研究提供可靠的检测手段，并以此法研究了两种穿心莲内酯分散片的相对生物利用度。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
Waters ZQ2000液相色谱质谱联用仪（含二元高压泵、自动进样器、柱温箱、电喷雾离子化接口、2695液相色谱仪）；Masslynx 4.0高级色谱工作站；美国Millipore超纯水仪；METTLER电子天平；AllegraTM 64R Centrifuge台式高速冷冻离心机（BECKMAN COULTERTM）；旋涡混合器（上海分析仪器厂）。
穿心莲内酯对照品（天津市汉康医药生物技术有限公司提供，含量99.6%）；奈韦拉平（内标，南京第一医院提供）；穿心莲内酯分散片R（50 mg/片，江西青峰药业有限公司，批号20050711）。穿心莲内酯分散片T（50 mg/片，天津市汉康医药生物技术有限公司试制，批号050324）。甲醇（色谱纯，TEDIA Company）；水为纯化水；其它试剂均为国产分析纯（AR级）。
1.2 色谱条件及血样处理
1.2.1 色谱条件
汉邦C18柱（4.6 mm×150 mm， 5 μm）；柱温：25 ℃；流动相： 甲醇水（72∶28，v/v）；流速：1.0 mL/min分流进样。
1.2.2 质谱条件
毛细管电压：3.50 KV；锥孔电压：35 V；干燥气流速：500 L/h；离子源温度：120 ℃；辅助气温度：380 ℃；离子检测方式：选择性离子检测（SIM）；离子极性：正离子（positive）；离子化方式：气动辅助电喷雾离子化（ESI）；检测对象：穿心莲内酯，［M+Na］+，m/z 373.6；内标：奈韦拉平，［M+H］+，m/z 267.7。
1.2.3 血样处理
准确吸取血浆0.5 mL，置10 mL具塞尖底离心管中，加入内标（1.068 μg/mL）100 μL，漩涡振荡1 min，加入乙酸乙酯2.5 mL，漩涡振荡3 min，4 000 r/min离心10 min，吸取有机相于另一离心管中，50 ℃水浴氮气吹干。残渣用150 μL流动相溶解，进样20 μL。
1.3 试验方案
试验经中南大学伦理委员会批准，20名健康男性志愿者，年龄（22.2±1.4）岁，体重（58.5±5.7）kg，经签署知情同意书和体检合格后纳入试验。志愿者随机等分为两组，禁食12 h后，于清晨分别单次口服穿心莲内酯片T或R 0.15 g，于服药前及服药后0.25 h、0.5 h、0.75 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h，8.0 h、12.0 h、24.0 h、36.0 h各抽取肘静脉血4 mL。一周后交叉服药，取血方法和时间相同。采集的血样标本置于肝素化试管中，在-20 ℃保存待测。
1.4 数据处理
药代动力学参数Cmax、tmax由血药数据直接读取。AUC0t以梯形面积法计算，消除速率常数K以血药浓度时间曲线尾部数据回归计算。AUC0t和Cmax经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析，再以双单侧t检验进行生物等效性判定。
2 结果
2.1 色谱行为
在选定的条件下，穿心莲内酯和内标峰形良好，穿心莲内酯和内标的保留时间均为2.1 min左右，内源性杂质不干扰测定。空白血样、穿心莲内酯对照品及内标、空白血样中加入对照品和受试者服药后血样色谱图见图1。
2.2 线性范围
取空白血浆分别配制成含穿心莲内酯分别为1.343 μg/L、4.029 μg/L、13.43 μg/L、26.86 μg/L、67.15 μg/L、134.3 μg/L、268.6 μg/L的系列标准血浆样品，余照“血样处理”项下方法操作并测定。记录色谱图，以穿心莲内酯面积与内标峰面积比值（Y）与血药浓度（X）进行线性回归，得回归方程：Y=0.022253X+0.017778， r=0.9992。穿心莲内酯浓度在1.343～268.6 μg/L范围内与峰面积比线性良好，最低定量浓度为1.343 μg/L。
2.3 回收率与精密度试验
2.3.1 绝对回收率
用空白血浆配制穿心莲内酯浓度为4.029 μg/L、26.86 μg/L、134.3 μg/L的血样各5份，按“血样处理”项下平行操作，进样20 μL，记录穿心莲内酯和内标峰面积；另配制穿心莲内酯浓度为4.029 μg/L、26.86 μg/L、134.3 μg/L的甲醇溶液，每份0.5 mL，加入内标溶液（1.068 μg/mL）100 μL，40 ℃水浴氮气吹干，残渣用150 μL流动相溶解，进样20 μL，记录穿心莲内酯和内标色谱峰面积。以血浆样品测定的峰面积除以同浓度的甲醇溶液峰面积所得百分率计算绝对回收率，结果穿心莲内酯低、中、高浓度绝对回收率分别为78.0%±4.0%、78.0%±3.0%、88.1%±4.2%（n=5）。
2.3.2 相对回收率及精密度
用空白血浆配制穿心莲内酯浓度为4.029 μg/L、26.86 μg/L、134.3 μg/L的血样各5份，按“血样处理”项下平行处理后进样，在一天内测定5次，由标准曲线计算各样品的浓度，以测得值与加入值之比计算回收率，并计算日内精密度，结果各浓度的回收率为95.7%～104.7%（n=15），日内RSD为2.4%～6.4%。上述样品连续测定3天，计算日间精密度，结果日间RSD为6.3%～12.4%。
2.4 稳定性试验
用空白血浆配制穿心莲内酯浓度为4.029 μg/L、26.86 μg/L、134.3 μg/L的血样，在室温条件下放置4 h；在-20 ℃冰箱中冷冻后取出，室温融化，重复操作3次；-20 ℃冰箱中放置30 d，血样提取后于4 ℃自动进样器中放置12 h，分别在不同时间点取样测定，结果样品在室温4 h内，在3次冻融过程中，在冷冻条件下放置30 d以及血样提取后于4 ℃自动进样器中放置12 h稳定（RSD≤7.2%）。
2.5 两种穿心莲内酯片的相对生物利用度
2.5.1 血药浓度
时间曲线 20名受试者单剂量给予穿心莲内酯分散片T和R各0.15 g后全血中穿心莲内酯的平均药时曲线见图2。
2.5.2 药物动力学参数
20名健康志愿受试者单剂量口服穿心莲内酯分散片T和R各0.15 g后的平均药动学参数见表1。表1 单剂量口服穿心莲内酯分散片T和R后平均药物动力学参数（略）
穿心莲内酯分散片T和R的AUC036、Cmax经对数转换后，进行方差分析，结果表明：两种制剂中穿心莲内酯的主要药动学参数之间差异均无统计学意义（P>0.05），非参数检验未发现两种制剂Tmax之间差异有统计学意义，两制剂为生物等效制剂（t1、t2均>t0.05）。与R相比，T的相对生物利用度为101.1%±7.9%。试验制剂的Cmax的均值落在参比制剂Cmax均值的93.32%～119.40%之间，AUC036的均值落在参比制剂AUC036均值的97.72%～104.69%之间。
3 讨论
本研究采用HPLCMS法测定人血浆中的穿心莲内酯，药物和内标的保留时间均为2.1 min左右，操作简单快速，定量限为1.3 μg/L，灵敏度高，适合穿心莲内酯体内过程研究。
20名健康受试者单次口服穿心莲内酯分散片T和R 0.15 g后，吸收较快，约1.0 h血药浓度达到峰值。药物峰浓度、吸收总量与同剂量（以穿心莲内酯计）的穿心莲提取物给药相比明显降低，显示中药提取物较优的促吸收作用［7］，但与同制剂的药动学参数相近［8］。两制剂在人体内吸收过程相当，生物利用度无明显差异，两种穿心莲内酯分散片为生物等效制剂。
但本试验发现计算的半衰期较文献［8］为短，主要是因为在生物等效试验中，主要考察药物在吸收过程中的差异，实验设计取样点主要考虑吸收相，对消除相的时间点安排不同，因此，出现药物半衰期计算结果的差异。
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重莲范文6
关键词：国企，党风廉政建设，改革，发展
一、国企党风廉政建设存在的问题
（一）思想认识问题
部分国企领导和工作人员缺乏政治意识、责任意识与大局意识，对于党风廉政建设存在认识偏差，单纯的追求企业效益，认为党风廉政建设与国企改革发展无太大关系，使得党风廉政建设工作浮于表面、流于形式，无法真正落到实处。
（二）实施方法问题
在进行党风廉政建设时，实施方法存在问题。一是组织教育缺乏针对性，比较笼统；二是实施方法落后，没有与现代管理手段相结合，降低了党风廉政建设效率；三是党风廉政建设实施不够持续，缺乏阶段性成果验收。
（三）监督机制问题
监督机制问题主要表现在三个方面：一是监督力量不足，上级的监管难以渗透到企业各个层面；二是纪检监察部门专业人才缺乏，无法满足国企涉及领域及专业越来越广的现况，出现外行监督内行的问题；三是监督的规章制度不健全，监督的标准不明确。
（四）责任追究问题
在进行党风廉政建设时，对于违规乃至违法行为的责任追究往往不够严明，多是从宽处理，导致责任主体存在侥幸心理，而且对其他人形成了不良示范，让其产生不惧犯错的心态，不利于党风廉政建设。
二、党风廉政建设在国企改革发展中的作用
（一）实现国企决策的民主
目前，部分国企存在领导一个人说了算以及滥用权力的问题，影响了决策的合法性与正确性，给国企的发展带来了不确定。而党风廉政建设在内容上落实了“三大一重”决策制度，构建了监管机制与风险防控机制，制约了领导的决策权力，落实了民主决策，保证了国企重大决策的科学，使得国企朝着正确的道路与方向发展。
（二）提高国企的廉洁程度
反腐是国企党风廉政建设的重要内容，而保证国企的廉洁与透明是党风廉政建设的目的之一。党风廉政建设在思想上让领导和员工深刻认识到自己的权利与义务，做到廉洁从业；在方法上落实教育、制度、监督、惩处、改革“五位一体”，确保企业领导和员工的行为始终在规范之下。而提高国企廉洁程度是实现其可持续发展的基础条件。
（三）增强国企市场竞争力
党风廉政建设在一定程度上能够提高国企领导和员工的廉洁程度与工作效率，为他们创造一个和谐的企业环境与氛围，使其能够全身心投入到工作中，进而增强国企在市场中的竞争力，提高国企的经济效益。这也是国企进行党风廉政建设的主要目的之一。
（四）树立国企良好的形象
与私营企业相比，国企承担了更重大的社会影响与作用。良好的国企形象是促进社会稳定发展的重要力量。而党风廉政建设能够改善国企以往存在的不良风气，给社会大众留下良好的印象。反过来，百姓也会更加信任和支持国企，进而推动国企的发展与进步。
（五）推动国企的改革发展
随着我国市场经济改革的深化，国企面临着越来越激烈的竞争环境，改革也更加迫切。而党风廉政建设能够提高国企领导与员工的思想觉悟，规范其工作行为，构建完善的监管体制，保证国企始终坚持在党的领导与指导方向之下，进而提高企业经营管理的质量与效益，实现企业的改革与可持续发展。
三、国企党风廉政建设的对策建议
（一）强化责任意识
通过宣传、教育加强国企领导和工作人T缺乏政治意识、责任意识与大局意识，让其充分认识到党风廉政建设在国企改革与发展中的作用，认真贯彻党风廉政建设工作，使其能够真正落实下去。
（二）改善实施方法
利用互联网与多媒体，采用最新的管理方法来推动党风廉政建设工作，以提高实施效率。针对性的进行教育工作，根据各人员的性格特点加以引导。持续的推动党风廉政建设，并进行阶段性的成果验收。
（三）健全监督机制
拓宽监督渠道，坚持“三大一重”事项决策过程的公开与透明，避免暗箱操作，滋生腐败。加强监督合力，建立以纪检监督为主导，各部门监督机构为辅的监督体系。完善监督机制及各项规章制度，并认真遵守、执行，解决违章不纠问题。
（四）严格责任追究
对于企业内违反法律法规、纪律、规章制度的人员，必须严格追究责任并加以惩处，以起到督促的作用。同时要准确区分个人责任与集体责任、直接责任与领导责任。
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