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刺猬的拥抱范文1
【摘要】 目的 观察CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞的杀伤作用，对G0期CD34+白血病细胞的细胞毒作用，及对正常骨髓造血干细胞的影响。方法 取急性白血病(AL)化疗后、慢性粒细胞白血病(CML)慢性期及正常人外周血单个核细胞加入一系列细胞因子诱导培养CIK细胞，流式细胞仪检测CIK表型，G带法分析CIK细胞核型。冻存、复苏后作为靶细胞，MTT法测定CIK细胞对自体、异体原代白血病细胞杀伤作用。AO染色法测定复苏后G0期急性粒细胞白血病(AML) CD34+细胞比例及培养后CML CD34+细胞中G0期细胞比例。流式细胞仪检测CIK细胞杀伤前后G0期CD34+细胞比例变化。半固体培养法检测CIK细胞对正常骨髓CFUGM、BFUE集落形成的影响。结果 CIK细胞可从白血病患者外周血中获得，来源于正常淋巴细胞，对自体原代白血病细胞有明显杀伤作用，对G0期白血病细胞有明显抑制作用，对正常造血干细胞无杀伤作用。结论 CIK细胞可作为清除残留白血病细胞的有效工具。
【关键词】 白血病；微小残留病；CIK细胞
完全缓解的白血病患者体内，常残存耐药的、处于静止期的微小残留白血病细胞，是复发的根源。本研究从白血病患者外周血中培养出的CIK细胞，不含有白血病干细胞，能有效杀伤G0期CD34+白血病干细胞，而且这种杀伤作用具有选择性，不损伤正常造血干细胞，可以作为有效的免疫细胞来清除白血病患者体内的为微小残留病（MRD），值得临床使用。
1 材料和方法
1.1 对象
本院血液科2005年1月至2008年10月15例急性白血病（AL）治疗后完全缓解（CR）患者，5例慢性粒细胞白血病（CML）慢性期患者，5例正常人。诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》〔1〕。
1.2 试剂和仪器
白介素(IL)1，英国Pepro Tech INC公司；IL2，沈阳三生公司；CD3抗体，美国PharMingen公司；干扰素(IFN)γ，英国Pepro Tech INC公司；CD3FITC单抗、CD56PE单抗、CD34APC单抗、IgGFITC单抗、IgGPE单抗，美国PharMingen公司；EPICS XL流式细胞仪，美国贝克曼库尔特公司。
1.3 方法
1.3.1 CIK细胞的培养与测定
（1）CIK细胞的诱导与培养：取15例AL化疗后CR患者、5例CML患者、5例正常人外周血分离单个核细胞，第1天加入IFNγ 1 000 μl/ml，第2天加入CD3单抗50 ng/ml、IL2 1 000 μl/ml、IL1 100 μl/ml，诱导培养CIK细胞。（2）流式细胞仪(FCM)检测CIK细胞表型：在培养至第1、2、3周时，分别取105 CIK细胞，标记CD3FITC单抗、CD56PE单抗20 μl，对照管加入IgGPE、IgGFITC 20 μl，避光孵育20 min，用PBS洗涤后，再加1 g/L多聚甲醛固定，4℃避光保存，1 w内上机检测。（3）染色体G带法分析CIK细胞核型：取4例CML 患者、1例APL患者外周血单个核细胞培养至第3～4周CIK细胞5 ml(1×106/ml)，加秋水仙胺至终浓度0.03 ng/ml，置于37℃、5％ CO2孵箱中培育3 h后离心、低渗处理、预固定、离心、固定、离心、再次固定、离心、再固定，制备中期染色体标本，Gimsa 染色后镜检及摄影。
1.3.2 CIK细胞对急、慢性白血病细胞的杀伤作用
（1）靶细胞（白血病细胞）制备：取上述患者初诊时骨髓5 ml，肝素抗凝，以RPMI 1640按2∶1体积混合稀释，将此稀释液缓慢加入含有5 ml Ficoll的离心管中，2 000 r/min离心20 min后吸取单个核细胞层，以RPMI 1640清洗2次后，用含20%胎牛血清和10%DMSO的1640作为冻存保护液，程序降温至-196℃液氮中保存。（2）靶细胞（白血病细胞）复苏：从液氮中取出上述白血病细胞冻存管，迅速放入37℃水中，摇动使其尽快融化，吸出细胞悬液，注入离心管中，加入10 ml培养液混匀，1 000 r/min离心10 min，吸弃上清液，再重复用培养液洗1次；培养液稀释细胞至1×106/ml，接种于培养瓶中，培养1～2 d，培养后台盼蓝拒染法计数活细胞＞95%后备用。（3）MTT法测定CIK细胞对原代急慢性白血病细胞杀伤作用：将白血病细胞浓度调至1×105/ml，效应细胞即CIK细胞浓度分别调至2×106/ml，5×105/ml，1×105/ml，即效靶比分别为20∶1、5∶1、1∶1。取96孔无菌培养板，实验组加效、靶细胞各100 μl，靶细胞对照组（白血病细胞）加靶细胞、培养液各100 μl，效应细胞对照组（CIK细胞）加效应细胞、培养液各100 μl（每组设3个平行孔），置于37℃、5% CO2孵箱中培养4 h。孵育后，各孔加入MTT比色液20 μl，再置于37℃、5% CO2孵箱中培养4 h。孵育后，1 500 r/min离心10 min，弃上清，各孔加入DMSO有机溶剂150 μl，微量振荡器轻微振荡，待沉淀物充分溶解后，在酶联免疫监测仪上检测，按以下公式计算CIK细胞杀伤活性：
杀伤活性（%）=1-(实验组OD值-效应细胞对照孔OD值)/靶细胞对照孔OD值×100%。
1.3.3 CIK细胞对G0期CD34+急慢性白血病细胞的杀伤作用
（1）CIK细胞对G0期CD34+急性粒细胞白血病细胞(AML)的杀伤作用检测：取上述5例AML患者复苏后白血病细胞1×105/ml，按效靶比10∶1加入自体CIK细胞，在37℃、饱和湿度条件下作用4 h，同时设置阴性对照组。将上述2组细胞标记CD34APC单抗后，甲醛固定2 h后，加入AO染色液2 ml在冰浴条件下染色10 min后上机分析。（2）CIK细胞对G0期CD34+慢性白血病细胞的细胞毒作用 ①直接免疫磁珠法富集CML患者的CD34+细胞 取上述5例CML患者肝素抗凝骨髓5 ml，经淋巴细胞分层密度梯度离心分离，将BMMNC悬浮于含5 mmol/L的EDTA 500 μl PBS中，先加入非特异性结合阻断剂100 μl，6℃孵育20 min，缓冲液洗涤后悬浮于500 ml PBS中备用。将MiniMACS分离柱置于永久磁场的分离器上，以500 μl缓冲液洗柱后，将细胞悬液加于柱顶，然后以500 μl缓冲液洗柱4次；将分离柱移出磁场，加1 ml缓冲液于柱顶，加压使CD34+细胞洗脱下来，离心，重悬于100 μl。取样计数细胞，取富集后CD34+细胞1×105/ml，加入10 μl CD34单抗，避光孵育20 min，洗涤后通过FCM检测。②体外培养法选择CML白血病细胞：将富集的CD34+细胞以H5100调至1×106/ml，在37℃、保和湿度、CO2条件下培养3 d。③CIK细胞对CML CD34+干细胞中G0期细胞杀伤作用的测定 取培养后的CML CD34+细胞1×105/ml，按效靶比10∶1加入CIK细胞，在37℃、饱和湿度、5%CO2条件下作用下4 h，同时设置阴性对照组。将上述2组细胞标记CD34APC单抗后，甲醛固定2 h后，加入AO染色液2 ml，在冰浴条件下染色10 min后上机分析。
1.3.4 正常骨髓CFUGM、BFUE集落培养
一组取本院骨髓无转移的实体瘤患者（3例）BMMNC 5×104/ml种入含有GMCSF、GCSF、SCF、EPO因子甲基纤维素半固体培养基，放置于37℃、5%CO2孵箱中培养，第14天计数CFUGM、BFUE集落数量。另一组按效靶比20∶1加入培养的自体CIK细胞，第14天计数CFUGM、BFUE集落数量。
1.4 统计学处理
采用样本均数的t检验、方差分析。
2 结 果
2.1 CIK细胞的增殖
2.1.1 CIK细胞的增殖
随着培养时间增加，CIK细胞数量明显增多，见图1。
2.1.2 CIK细胞表型分析
来源于AL缓解患者、CML患者的CIK细胞，随着培养时间延长，CD3+细胞数量明显增加，第3周分别达到(98.09±4.12)%、(97.29±3.55)%，CD3+CD56+细胞数量分别达到(30.28±11.74)%、(31.64±8.52)%，与来源于正常人CIK细胞(35±5)%无明显差异（P＞0.05），图2。
2.1.3 染色体分析
G带法检测来源于有染色体异常患者（5例）的CIK细胞均为正常核型（图3），表明CIK细胞为非白血病源性。
2.2 CIK细胞对原代急慢性白血病细胞的杀伤作用 见图4。
2.3 CIK细胞对G0期CD34+原始白血病细胞的细胞毒作用
CIK细胞对G0期CD34+急性白血病细胞有明显细胞毒作用，平均杀伤率47%。CIK细胞对CD34+慢性白血病细胞有杀伤作用（图5、图6），平均杀伤率66.73%。
2.4 CIK细胞对正常骨髓BFUE、CFUE集落形成影响
对照组与加入CIK细胞组的CFUGM集落数分别为150±16、145±20(P＞0.05)，BFUE集落数分别为68±5、68±8(P＞0.05)，表明CIK细胞对正常骨髓干细胞生长无明显抑制作用。
3 讨 论
近20年来，由于化疗、造血干细胞移植及靶向治疗的发展，急、慢性白血病的治疗取得巨大进展，白血病的CR率已有明显提高，急性白血病CR率可达60%～80%，大部分慢性期CML患者可获得细胞遗传学及分子生物学缓解，生存时间也明显延长，但白血病5年长期生存率仍只有20%～30%，大部分患者因复发而死亡。目前许多研究者认为CR期间体内MRD是复发的主要根源。MRD是指临床上达到CR，但体内仍有微量的、凭形态学方法无法检测到的白血病细胞残留。利用现代检测技术RTPCR、FISH、FCM证实了在完全缓解的急、慢性白血病患者体内存在MRD。如何去除MDR，提高白血病患者长期生存率成为人们研究的热点。化疗无法清除MRD，一方面由于残留的白血病细胞高表达gp170蛋白，多为多药耐药，对化疗药物不敏感〔2〕；另一方面有研究者通过分析增殖相关标记物Ki67及P120，发现只有16%的残留肿瘤细胞处于细胞周期中，大部分细胞静止于G0期，抵制化疗药物的杀伤，这些细胞一旦能够从G0期进入细胞周期，则持续增殖，导致白血病复发。目前治疗MRD尚无理想方法。
近年来人们逐渐认识到MRD的根除在很大程度上依赖免疫系统。异基因造血干细胞移植后移植物抗白血病（GVL）作用以及异基因造血干细胞移植后复发的患者，给予供者淋巴细胞输注（DLI）能达到再次缓解也证实免疫细胞对杀灭白血病细胞起着很重要的作用〔3〕。本实验探讨应用过继细胞免疫疗法杀灭残留白血病细胞的可行性。结果表明：①CIK细胞可从白血病患者外周血中获得，来源于正常淋巴细胞，能够在体外大量扩增，与来源于正常人的CIK细胞表型无明显区别。②CIK细胞对自体AL白血病细胞及CML白血病细胞均有明显杀伤作用。另外，CIK细胞能够杀伤异体白血病细胞，与对自体白血病细胞的杀伤率相比无显著性差异，提示CIK细胞以非MHC限制形式杀伤白血病细胞。③CIK细胞对G0期CD34+急慢性白血病细胞有明显细胞毒作用。④CIK细胞对正常骨髓造血干细胞无明显抑制作用。
参考文献
1 张之南. 血液病诊断与疗效标准〔M〕. 第2版. 北京：北京科学出版社，1998：336.
刺猬的拥抱范文2
关键词：针刺；骨骼肌细胞；膜电位；细胞内记录
中图分类号：G804.2
文献标识码：A
文章编号：1007—3612（2012）07—0045-04
针灸治疗骨骼肌损伤具有疗效明显、疗程短、安全、经济等特点，近年来也得到了广泛应用。针刺对骨骼肌的治疗作用机制研究也取得了一定的进展。关于针刺作用机制的研究主要有两种观点：其一是神经一体液论，认为针刺的作用是通过激发某些神经递质的释放，使舒血管神经的活动增强，或者是通过降低运动神经元的活动，从而解除肌肉痉挛，缓解肌肉疼痛。其二是外周机制论，认为针刺可以通过某些不依赖于神经体液的途径而直接影响损伤肌肉结构与功能的作用机制。研究证明，针刺促进延迟性肌肉结构变化的恢复作用与针刺后骨骼肌细胞膜内钙离子，钾离子浓度改变有关。
目前，用针刺治疗骨骼肌损伤均采用金属针，那么非金属针是否也能取得与金属针一样的治疗作用？
用金属针治疗是否存在着电场或磁场的作用？本研究采用微电极技术，首先对单个骨骼肌细胞进行细胞内记录，观察其膜电位在长时间电刺激后的变化；并选用不锈钢针和竹针分别对骨骼肌细胞进行针刺处理，观察金属针刺与非金属针刺对骨骼肌细胞膜电位变化的作用是否存在差异，从而探讨针刺治疗骨骼肌损伤是否与针的材质有关。
1 材料和方法
1.1 实验动物 蟾蜍，体重40～50g，雄性，取其半腱肌分离出两束肌细胞作为实验标本。
1.2 标本制备 按常规方法破坏蟾蜍的脑和脊髓，剪除躯干上部及内脏，剥去下肢皮肤，置于任氏液内；用钢针固定下肢，除去下肢大腿的缝匠肌，大收肌、大内直肌和小内直肌后，找到长腱肌肉一半腱肌。在尽量保持长腱情况下将半腱肌摘出，用针固定远心端的胫骨基端侧肌腱和近心端的坐骨侧肌腱于硅胶垫上。于解剖显微镜下，用钟表镊子剥去结缔组织及肌外衣，再剥掉表面几层肌细胞，直至剩下左右两束，每束约20个左右的肌细胞为止。将剩下的两束完整的、两边均附着在肌腱上的肌细胞束用针在肌腱处重新固定好，放置半小时后进行实验。
1.3 细胞内记录 实验随机选取其中一束肌细胞为对照肌，另一束为实验肌。采用细胞内微电极技术，记录骨骼肌细胞膜电位。微电极的尖端直径小于0.5μm，充灌3mmol/L氯化钾溶液，电极电阻10～15MΩ。主要仪器：MEZ-8201直流放大器；VC-10记忆示波器；SEN-7301电子刺激器（以上均为日本光电公司产品）；XC-603型微电极推进器、垂直式微电极拉制器和二道生理记录仪（国产）。电刺激参数：刺激强度2～4V，波宽50ms，时间45min，频率2Hz。实验组在刺激停止后即刻，采用微电极推进器将不锈钢针或竹针沿肌束方向斜推进入骨骼肌细胞束内进行针刺。两种针的直径相近，约为0.5mm。实验在室温（24℃）条件下进行。需要明确的是斜刺并非将针刺人肌纤维单个细胞内，因为两种针的直径远大于肌细胞。实验观察的是（有或无）斜刺的同一条肌束中，肌纤维的静息电位的变化；针刺前后记录的肌纤维也并非相同的纤维。但是由于实验中的其他条件（同一块肌肉、浴液温度、酸碱及离子环境等）控制都一样，各组静息电位的变化是源于处理方式（有无针刺及使用的是竹针还是不锈钢针）的不同。
1.4 统计学分析 采用SPSS11.0统计软件进行数据统计分析。为了统计方便，去掉膜电位的负号，以绝对值表示，单位：mV（毫伏）。其绝对值变小即表示细胞的膜电位降低，向去极化方向发展。其绝对值变大即表示细胞的膜电位增高，向复极化方向发展。各组数据均以Mean±SD表示。
2 结果
2.1 骨骼肌细胞膜电位随时间的变化 实验开始后，随机选取两肌束中肌细胞进行静息膜电位记录，观察记录开始、静置任氏液内1h和2h后膜电位的变化。可见，在2h之内，膜电位没有显著变化（图1）。
2.2 金属针和非金属针针刺对骨骼肌细胞膜电位的影响
2.2.1 长时间电刺激对骨骼肌细胞膜电位的影响实验肌和对照肌在电刺激45min后，于无针刺处理、单纯休息10min的情况下，对比两束肌细胞实验前后膜电位的变化及幅值，见表1和图2。
2.2.2 不锈钢针和竹针针刺对长时间电刺激诱发的骨骼肌细胞膜电位变化的影响 在电刺激45min后，对实验肌即刻进行不锈钢针或竹针刺处理，对照肌无针刺处理，单纯休息10min的情况下，对比肌细胞膜电位的变化及幅值，见表1和图2。
3 分析与讨论
针刺疗法是我国传统医学临床治病的主要手段之一。在治疗肌肉疾患和促进肌肉功能恢复方面，针刺疗法占有重要的地位。从进针的角度看，目前在治疗肌肉疾患时所使用的针刺方法主要有直刺和斜刺两类（直刺时针与皮肤约呈直角，斜刺时针与皮肤间有一定的倾斜角）。现有资料表明，两种针刺方法均有较好的临床疗效，也有人已注意到在治疗某些肌肉疾患时，斜刺比直刺效果更为显著。斜刺阿是穴对肌肉损伤治疗作用的临床和实验研究发现，往往在针刺后数秒到几分钟内就会出现条索软化、疼痛消失、功能恢复的明显疗效。电镜下观察，针刺可使损伤肌肉超微结构的紊乱恢复正常，同时使肌肉收缩蛋白的免疫标记密度和相应的收缩结构改变得到改善。有文献报道，大负荷斜蹲后骨骼肌细胞出现z线扭曲、肌原纤维等改变；而直刺和斜刺均可减少这些变化，在对Z线扭曲的作用上斜刺优于直刺。本实验根据临床及实验研究，选用斜刺方式。
有关针刺对运动性损伤肌的促恢复作用在人体及动物实验中均得到证实。除电镜对骨骼肌超微结构的观察外，屈竹青等对针刺前后细胞内钙、镁、钠、钾等离子的分析及细胞膜、肌浆网膜ATP酶活性的测定也发现，针刺的作用是通过细胞膜Na-Ca交换，促使细胞内增多的Ca2+外排而完成的。针刺的作用机制目前认为可能是通过加强收缩蛋白的组装、合成，使损伤肌肉的结构与机能恢复正常，同时使疼痛缓解。尽管对于针刺作用机理的研究很多，但是关于针刺对细胞电学特性方面影响的研究十分匮乏。本研究即采用电生理学的微电极技术，于蟾蜍骨骼肌细胞上证实了长时间电刺激可以诱发其细胞膜电位向去极化方向发展，斜刺具有促进长时间电刺激后骨骼肌细胞膜电位恢复的效应。而且不论是金属针（不锈钢针）还是非金属针（竹针）均有此效应，二者的作用元显著性差异，提示针刺治疗骨骼肌损伤的作用效果并非源于金属针的电场或磁场作用。
本研究所采用的实验标本是从一块骨骼肌上分离出的两束肌细胞。首先我们观察了在无电刺激、无针刺的条件下，于任氏液内单纯放置1～2h，骨骼肌细胞膜电位的变化。如图1所示，肌细胞膜电位并无明显变化。说明我们后续实验中将整个时程控制在两小时内，来观察长时间电刺激引起的骨骼肌细胞膜电位的变化，以及针刺对长时间电刺激后骨骼肌细胞膜电位变化的影响作用是可行的。
我们的实验发现，长时间电刺激后，骨骼肌细胞膜电位降低，向去极化方向发展，如表2所示。这一研究结果与国外一些学者的研究结果是一致的。例如，Sigward使用大白鼠的比目鱼肌和趾伸肌，利用电刺激的方式诱发肌肉标本运动至疲劳，并采用微电极技术直接观察了对照组和电刺激组的膜电位变化，发现电刺激肌肉收缩至疲劳可使肌细胞膜电位降低，即使膜电位向去极化的方向发展。关于长时间电刺激后，引起的骨骼肌细胞膜电位降低，向去极化方向发展的机制仍在探索中。Sigaard的研究发现，长时间电刺激后引起的骨骼肌细胞膜电位降低的同时，肌细胞内钾离子浓度也降低，因此他认为二者之间存在联系。我国学者也发现长时间电刺激后骨骼肌细胞膜内离子浓度及酶活性均发生变化。因此，我们实验中所发现的长时间电刺激后骨骼肌细胞膜电位向去极化方向发展，很可能也与肌细胞内离子浓度的变化有关，但仍需进一步探讨。
本研究发现，经过45min电刺激后，给予其中一束肌细胞针刺处理，另一束肌细胞元针刺处理的实验条件下，两束肌细胞的膜电位变化幅度之间出现显著性差异。进行不锈钢针针刺处理的肌细胞膜电位变化幅度是（12.83±2.74）mV，而无针刺处理的肌细胞膜电位变化幅度却是（28.05±2.88）mV。经检验，两者之间存在显著性差异。竹针针刺组的研究结果也发现，进行竹针针刺处理的肌细胞膜电位变化幅度是（14.14±4.04）mV，也与无针刺处理的肌细胞膜电位变化幅度之间存在显著性差异。但是，不锈钢针和竹针两个处理组之间不存在显著性差异。针刺后膜电位出现恢复，恢复程度在不锈钢针针刺组和竹针针刺组分别达到85.18%和84.32%。这说明长时间电刺激后对骨骼肌细胞进行金属针刺或进行非金属针刺的处理，均有促进肌细胞膜电位恢复的作用，使骨骼肌细胞膜电位向复极化方向发展，但是效果无明显差异。因此，我们可以推断目前常用的金属针刺对骨骼肌损伤的治疗作用并非由于金属针的电场或磁场作用引起。
刺猬的拥抱范文3
关键词：单独收费 卫生材料 申报 管理
一、实行医院单独收费的医用特殊一次性卫生材料价格申报制度的背景
2004年10月11日，甘肃省物价局、卫生厅下发了《甘肃省医疗服务价格改革方案》（甘价费[2004]231号）。该方案以引入市场竞争机制为切入点，建立和完善适应社会主义市场经济发展要求的医疗服务价格管理体制和价格形成机制。其目标是整顿医疗服务价格秩序，理顺医疗服务价格关系，规范医疗服务价格行为，推动医疗卫生体制改革，建立合理的医疗机构补偿机制，减轻群众不合理的医疗费用负担，促进医疗机构健康发展。基于这一目标，省物价局、卫生厅在确定了医疗服务项目名称、项目内涵、计价单位、说明、基准价的同时，确定了单独收费的医用特殊一次性卫生材料目录。
二、单独收费的医用特殊一次性卫生材料价格申报范围
根据《甘肃省医疗服务价格改革方案》（甘价费[2004]231号）文件规定，“单独收费的医用特殊一次性卫生材料是指用于对患者诊疗过程中必须使用而又事先无法确定其数量、规格、型号且价值较高的一次性卫生材料。其具体范围是《甘肃省医疗服务价格改革方案》附件三《甘肃省省级医疗机构医疗服务价格》中“除外内容”所限定的范围。”在临床实践中，单独收费的医用特殊一次性卫生材料可能达成百上千种之多，例编码为3315的肌肉骨骼系统手术，其除外内容为内、外固定材料。一所三级医院所经常使用的内、外固定材料的品种一般有几十种，加上规格、型号和生产厂家的不同，其价格就有可能达到上千种。所以在申报时必须认真细致，物价管理人员还要和药械科保持密切的联系，在源头上控制住单独收费的医用特殊一次性卫生材料价格申报工作。并严格区分单独收费的医用特殊一次性卫生材料和非单独收费的医用特殊一次性卫生材料，尽可能使申报工作做到不重不漏。
三、单独收费的医用特殊一次性卫生材料价格申报程序
（一）确定范围
范围的正确是做好申报工作的前提。申报内容要严格控制在《甘肃省医疗服务价格改革方案》附件三《甘肃省省级医疗机构医疗服务价格》中“除外内容”所限定的范围之内。
（二）严格执行医疗用品招标制度
为确保卫生材料的质量、价格符合规定，必须严格执行医疗用品招标制度，杜绝伪劣产品进入医院，保证医疗安全；增强价格透明，把解决群众“看病难、看病贵”落到实处。
（三）整理、归集齐全，按程序申报
先由物价管理员会同药械部门相关人员整理、归集需申报的单独收费的医用特殊一次性卫生材料的名称、规格、型号、计价单位、单价、生产厂家等基本内容后，由物价管理员拟文造表，经主管院长签发，报物价局、卫生局申请备案。物价局、卫生局批复同意备案后方可作为单独收费的医用特殊一次性卫生材料。
四、单独收费的医用特殊一次性卫生材料日常管理的难点和解决办法
（一）随着市场经济环境和供求关系的变化导致的价格变化
根据甘价费[2004]299号文件精神，“以后当其价格变动时，医疗机构或商家（商）必须事先到同级价格、卫生行政主管部门进行申报登记。”但因其品种、规格型号繁多，价格波动较大，给申报工作带来一定难度。这就要求对申报工作建立长效机制，物价管理人员在日常工作中要做到眼勤手勤，随时掌握其价格变化，尽可能使申报工作做到不重不漏。
（二）随着临床诊疗水平发展和科技进步导致的品种变化
随着临床诊疗水平发展和科技的进步，越来越多的新技术、新产品将应用于临床诊疗活动中，同时，必然会淘汰一些卫生材料，这就要求物价管理人员随时掌握医疗市场行情和信息，科学评估医院临床诊疗水平和新技术、新业务的开拓能力，给药械部门采购人员提供科学的预测数据，使医院的经济免遭损失。
（三）日常收费管理
医疗体制改革的指导思想是“用比较低廉的费用提供比较优质的服务”，切实解决群众“看病难、看病贵”的问题，然而，当前的医疗补偿机制不竟合理，政府投入又严重不足，医疗市场竞争日趋激烈，致使许多医院自定标准、自立项目、重复收费现象屡禁不止，医疗体制改革成困扰国家的一大难题。本次医疗服务价格改革是医疗体制改革的一部分，其目的是根本解决这一难题。为保证医疗服务价格改革的顺利进行，必须随时检查医院的收费行为，尤其是临床科室给患者记账时，对单独收费的一次性材料是否进行了单独收费，或者对包含在项目内涵内的卫生材料是否又进行了单独收费。
总之，单独收费的医用特殊一次性卫生材料价格申报是一个新的课题，是医疗服务价格改革的重要组成部分，是切实解决群众“看病难、看病贵”的关键因素，只有认识深刻，操作规范，执行严格，才能保证医疗体制改革的顺利进行，才能把解决群众“看病难、看病贵”的目标落到实处。
参考文献：
刺猬的拥抱范文4
他们有自己的秩序，有自己的文明。在他们的社会里，有一个传统——每一只刺猬都必须经过“成熟的考验”，是否合格，是由星球上年纪最大的一只老刺猬来认可的。
没有通过考验的刺猬，会被放逐到星球另一端的沙漠中去生活。
背背一出生，妈妈就告诉了他这个传统，“通不过成熟的考验，是不会有出息的。”妈妈这么说。
背背很好奇，它去问那只老刺猬，“老爷爷，什么叫成熟呀？”
老刺猬很老了，整个星球上，背背只看见老刺猬的刺是白色的，其他刺猬的刺都是黑色的。
除了背背，背背的刺是蓝色的。
老刺猬眯着眼睛，看着背背漂亮的蓝色的刺说：“孩子，成熟这个东西是说不清楚的，只有自己成熟的那天，你才会懂。”
“那我什么时候才能通过成熟的考验呢？”背背一知半解地问。
“嗯……孩子，当你的刺变成黑色的时候，再来找我，我会告诉你的。”
老刺猬似乎很疲倦，说完就闭上眼睛睡了。
背背不是很懂，但他很快就忘了这件事，开心地在树林里玩起来。
二
背背长得很快，他的刺仍然是蓝色的。
他偶尔也会看到别的小刺猬的刺不是黑色，但他们总是很快就变成了黑漆漆的。
背背有时候挺担心的，但他只要一看到晴的天、白的云、绿色的树林、跳跃的小鸟就会把一切烦恼忘个一干二净，他喜欢自由，热爱生命。
背背觉得每一天都是充满希望的，什么事也不用担心。
背背总是一个人跑到树林里晒着阳光，一边唱着好听的歌，一边在草地上打滚。
好快乐地过一整天。虽然每次他这样开心地回家总会被妈妈骂，但背背还是偷偷地乐着，他不明白为什么妈妈总是不喜欢他做这些快乐的事，也不明白为什么每次妈合肥论坛我的最爱眼里都会有那么担忧的眼神。
背背不管，背背觉得生命那么美好，怎么可以不快乐的过呢？
一天又一天，背背仍然是一只漂亮的蓝色的刺猬。快乐的小刺猬。
三
背背恋爱了。背背爱上了一只叫晶晶的小刺猬，晶晶很爱听背背唱歌，每次背背坐在晶晶身边唱起为她写的歌，晶晶就会微笑着梳自己乌黑乌黑的刺，陪背背一起享受自由的空气。
晶晶第一次对背背说我爱你的那一个晚上，背背兴奋得一夜没睡。
可是晶晶有时候很烦恼，因为她和背背都没有通过成熟的考验，她可不想到星球另一头的沙漠里去生活，她很担心。
可背背不，背背觉得只要能和晶晶在一起，无论在哪里都是幸福的。
晶晶为此会跟背背吵架，背背每次都很难过，因为他爱晶晶，他不想晶晶烦恼，可是他认为晶晶不该把成熟看得比他们的爱情还重要。
背背相信晶晶是真的爱他，所以他把一生一世都放到了这场爱情里。
四
背背和晶晶都是刺猬。他们的身上都长满了会伤人的刺。
每一次他们紧紧拥抱的时候，都会刺伤对方。
可是背背和晶晶不怕，他们年轻，他们不怕痛，只怕失去爱情。
于是他们一次又一次紧紧拥抱，一次又一次给彼此留下伤口。
背背很心疼，背背不愿伤害晶晶。而且晶晶因为成熟的考验，最近一直不开心。
背背决定为晶晶做一件事。因为背背愿意为晶晶做任何事。
在一个浓浓大雾的深夜，背背咬着牙，一根一根，把自己身上漂亮的蓝刺，全都拔了下来。
好痛啊。但背背不哭。背背是一只勇敢的小刺猬。
第二天，背背就这样裸露着身体光溜溜地去找晶晶。
晶晶看见背背在风里瑟缩的样子，心疼地哭了好久。
背背却笑着，因为他再也不会刺伤晶晶了。
他们又一次紧紧拥抱。
五
背背被刺伤了，伤得很重。因为他太用力地抱紧晶晶，可是他忘了晶晶身上浓密的刺。
背背被幸福之后跟随而来的巨大痛苦惊呆了，但背背仍然紧紧拥着晶晶，因为晶晶还在流泪，因为背背宁愿被刺伤，也不愿看晶晶流泪，他不愿意放开晶晶，背背等这一天等了好久，只为等这一次不会伤到晶晶的拥抱。
背背只要晶晶幸福，背背心甘情愿地承受这痛楚。
可是晶晶流着泪，用力地，放开了手。
晶晶其实也很爱背背，但她再不愿意彼此伤害。
背背为了她去掉了所有会伤害到她的刺，背背对爱情的执着真的让她好感动，但晶晶无法做到，晶晶从来也不曾想过要拔掉身上的刺，那该有多疼啊！
晶晶觉得这段爱情太痛苦，晶晶流着泪，用力地，放开了手。
背背失去了他一生中最深爱的女孩。
六
在那一天夜里，背背默默地，找出他所有蓝色的刺。
背背用黑色的漆，把刺全都涂成黑色，重新按到自己身上，黑色的刺刺破伤口，比拔下来的时候更痛。
背背按回一根刺，就回忆起一天和晶晶共同度过的日子，每回忆到一次快乐的往事，就流一滴泪，无声地哭泣。
背背照着镜子，已经认不出自己。他只觉得全身无力，他睡下、梦醒、哭泣，再睡、再梦、再醒、再哭泣…………
背背的泪，流了一整夜。全身都湿了，心也湿了。
终于，背背变成了一只黑色的刺猬。一只伤心的黑色刺猬。
七
背背又去找那只老刺猬。
路上，他听说，晶晶已经通过了成熟的考验。
背背见到了老刺猬，老刺猬看着背背乌黑的刺，对背背说：“你已经成熟了，孩子。你通过了成熟的考验。”
每一只刺猬都来祝贺背背，背背知道晶晶不会来，可是背背仍然等了很久。
然后背背忍着心底的痛，向大家微笑，大家都很高兴地看着背背伪装的快乐。
“这孩子将来一定会有出息的。”每一只成熟的刺猬都这么说。
刺猬的拥抱范文5
一条鱼静静地游过来，游到了刺猬的心中，揉碎了水草里的梦。
“为什么你总是那么忧郁呢？”鱼默默地问刺猬。
“我忧郁吗？”刺猬轻轻地笑了。
鱼温柔地注视着刺猬，默默地抚摸着鱼的忧伤，轻轻地说：“让我来温暖你的心。” 上帝啊，鱼和刺猬相爱了！
上帝说，你见过鱼和刺猬的爱情吗？
刺猬说：“我要把身上的刺一根根拔掉，我不想在我们拥抱的时候刺痛你。”鱼说：“不要啊，我怎么忍心看你那一滴滴流淌下来的鲜血？那血是从我心上淌出来的。”刺猬说：“因为我爱你！爱是不需要理由的。” 鱼说：“可是，你拔掉了刺就不是你了。我只想要给你以快乐……” 刺猬说：“我宁愿为你一点点撕碎自己……” 刺猬在一点点拔自己身上的刺，每拔一下都是一阵揪心的疼，每一次的疼都在鱼的心上。鱼渴望和刺猬作一次深情的相拥，它一次次地腾越而起，每一次的纵身是为了每一次的梦想，每一次的梦想是每一次跌碎的痛苦。
鱼对上帝说：“如何能让我有一双脚，我要走到爱人的身旁？” 上帝说：“孩子，请原谅我的无能为力，因为你本来就是没有脚的。”
鱼说：“难道我的爱错了？” 上帝说：“爱永远没有错。” 鱼说：“要如何做才能给我的爱人以幸福？”
上帝说：“请转身！” 鱼毅然游走了，在辽阔的水域下，鱼闪闪的鳞片渐渐消失在刺猬的眼睛里。
刺猬说：“上帝啊，鱼有眼泪吗？”上帝说：“鱼的眼泪流在水里。”
刺猬的拥抱范文6
第一次在《仙剑奇侠传3》中看到她，她饰演的角色是堂堂唐家大小姐唐雪见。在剧中，她刁蛮任性，我对她没有太大的印象。后来，我又在《宫》中见到了她，我才知道她原来叫—杨幂。
杨幂在《宫》中演的角色叫晴川，她聪明机智活泼开朗，与八阿哥冯绍峰上演着穿越时空的恋情，让我记忆犹新。后来，我慢慢的了解了她：她出生在北京，小时后十分顽皮父母便让她参加了“小明星培训班”。4岁时，她幸运的参加了《唐明皇》，在剧中她饰演咸宜公主。5岁的杨幂又在《武状元苏乞儿》中饰演苏灿（周星驰饰演）的女儿。1992年，她与六小龄童合作主演的《猴娃》曾获得第十四届“飞天奖”少儿电视连续剧二等奖。15岁时，杨幂在同学的建议下把自己的照片寄给了《瑞丽》时尚杂志社，被编辑选中后做起了杂志模特。16岁，杨幂被李小婉签入旗下的荣信达公司。2004年，18岁的杨幂接演《神雕侠侣》里的郭襄一角2005年，杨幂在央视大戏《王昭君》的选角中，击败范冰冰、李冰冰、高圆圆等国内一线演员，出演女主角王昭君。2008年7月7日，杨幂加盟新版《红楼梦》剧组，饰演“晴雯”一角。仙剑奇侠传三》剧组与新《红楼梦》剧组再三商议后，最终成功“借”到了杨幂。在拍摄这两部电视剧的同时杨幂还跨拍电视剧《暗香》。杨幂自己表示：《仙剑奇侠传三》成为了她演艺心态上的一个转折点。随着《仙剑奇侠传三》的热播，杨幂的人气再次高涨，博客点击量以每分钟两百多次的速度激增，“蜜蜂”更是以每日上百的数量在不断壮大。[43]2009年，杨幂又在《美人心计》中饰演了绝色杀手莫雪鸢，网友赞她为“最感人丫鬟”。2010年，杨幂又接拍了多部电视剧：《十二生肖传奇》、《洪武大案》、《京城四少》、《我们同是一家人》以及《宫》；同时还在电影《孤岛惊魂》和《人鱼帝国》中出演角色。2011年，穿越剧《宫》开播后一直稳居中国同时段收视率第一。杨幂还凭借《宫》入围第17届上海电视节“白玉兰奖”最佳女演员；以及2011年被正式纳入白玉兰”颁奖环节的“最具人气女演员”奖，并最终成为此奖项登台领奖的第一人。
光辉的背后是无限努力。2011年是幂姐最忙的一年，这一年幂姐接拍了11部电视。被称为新生代劳模，每天的档期也排得满满的。每天的睡眠不足三个小时。记得在拍《北爱》的戏时，杨幂冒着寒风在零下十几度的水里拍戏，第二天，在化妆室里化妆时，杨幂当场昏倒，被送往医院，据说发烧到了41度。但她还坚持拍戏。
2012年，幂幂的首张专辑《亲幂关系》终于出版了！！“蜂蜜”们都爱不释手……