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父爱短诗范文1
《神偷4》这款游戏对于显卡的要求并不高，哪怕是酷睿i3-4130处理器的核芯显卡，也可满足30帧以上的流畅运行速度。预算不多的话也可以购买奔腾G3220这样的低端双核处理器，再用余下的400多元去购买一块低端独立显卡，游戏性能反倒更好。
显卡选购：A卡主推R7 240
考虑到只有400多元的显卡预算，因此A卡阵营当中的R7 240才是最佳的选择。不到450元，便可买到铭瑄、昂达、盈通、迪兰恒进等多个品牌的R7 240显卡，而且还都配备了GDDR5这样的高速显卡。而如果喜欢N卡，则可以考虑GDDR5显存版本的GT640显卡，售价同样可以低至450元以内。
GTX650Ti显卡已经全面退市，不如考虑GTX750显卡，性能更好。推土机FX4300主频高达3.6GHz，8MB三级缓存，是500元以内很好的游戏处理器。机箱电源航嘉品牌的即可，350W的额定功率绝对够用。键鼠不妨考虑宜博EKM059BKC-E眼镜蛇有线套装，不仅物美价廉而且性能出色。显示器推荐购买MVA面板的产品，在以黑暗场景为主的游戏下可以提供更纯净的黑色，非常适合于主流的大型3D游戏。优派VA2214s售价不到700元，非常值得购买。
其他配件：中规中距即可
内存最好是4GB DDR 1600的，毕竟它是市面上最具性价比的选择。硬盘则是1TB最好，并且最好是单碟1TB的新硬盘。希捷新酷鱼和西数蓝盘的售价为370元和360元，盘体编号则为ST1000DM003和DT01ACA100，选购时认准编号即可买到单碟1TB新硬盘。电源方面，考虑到游戏电脑需要日后升级显卡，所以最好是额定功率为300W的产品。
笔记本选购：GT740M独显本
GT740M独显在笔记本市场已经成为了绝对主流，最低售价甚至还不到3000元。游戏玩家在选购时，就不要再考虑GT710M和GT720M这样的独显本了，游戏性能实在不怎么样，售价也便宜不了多少。除此之外，选购时最好考虑已经预留SSD固态硬盘升级接口的机型，这样便可为日后升级带来更大的便利。
Q：天气越来越热了，想买一个笔记本散热底座，不知对笔记本散热有多大提升。另外需要询问的是，有的笔记本散热底座具备支架功能，请问是否值得购买？
A：对笔记本用户来说，用配备风扇的底座来辅助笔记本散热是很有必要的。即便不开风扇，也能将笔记本抬高架空，有效加快机身底部的空气流通，提高散热性能。至于具备支架功能的散热底座，则必须符合人体工学设计才行，这样便可带来更舒适的操控体验。至于价格，具备支架功能的散热底座，最好不要超过100元，否则性价比就显得太低了。
Q：家里没有路由器，所以想用笔记本搭配随身Wi-Fi，好让智能手机无线上网。看了360品牌的随身Wi-Fi，只卖19.9元，不知怎样？
A：随身Wi-Fi必须依赖笔记本开机才能发射无线信号。笔记本不用时也得开机，不仅费电而且还麻烦。实际上无线路由器已经很便宜了，比如说斐讯FIR150M和磊科NW604这样的无线路由器京东售价仅为34元和39元。如果仅仅在家上网，直接购买无线路由器即可。
父爱短诗范文2
被爸爸宠出来的坏脾气
小时候的袁咏仪，漂亮极了。一头浓密的黑色卷发，大大的眼睛，圆圆的小脸，整个一洋娃娃。但她并不是个安静的娃娃，自出娘胎，袁咏仪就爱大哭大闹，人称“喊包”。
记者：我看过你小时候的照片，好漂亮。能够拥有你这么漂亮的“洋娃娃”，父母一定很骄傲了?
袁是啊。我爸宠我到“不可理喻”的地步。他下班回家第一件事就是抱女儿，而且远离人群，不让任何人碰一下，别人即使只是看看，也得站远些才可以。以至于邻居们后来跟我“控诉”说：“你很小的时候，人家都以为你爸是个疯子，怀里抱个假洋娃娃自我陶醉。”
记者：你是独女吗?
袁不是啊。我在家排行老二，上有哥，下有妹，但爸爸独宠我一个。我跟妹妹吵架，不管谁对谁错，爸爸铁定帮我：三个孩子分到一样的糖果，我打开自己那包吃一半，见哥哥的那包还没打开，就要跟哥哥换，居然也能得到允许。
记者：爸爸是个和蔼的、没什么脾气的人吗?
袁不是的。我爸爸是做警察的，很威武，在外面天不怕地不怕，唯独在我面前脾气全无，任我对他大喊大闹，他只会满心欢喜地嘿嘿笑。直到现在，我跟爸爸聊天时仍可以大喊大叫，好像是在吵架。但如果是另外一个人用这种语气跟他讲话，他是绝不会轻饶的。
记者：爸爸这样宠爱你，对你的性格有没有什么影响?
袁：有啊。爸爸这样宠爱我，一手培养了我的霸气，以致后来有媒体形容我说：“袁咏仪除了演技精湛、外形出色外，她最大的特色是人人敬而远之的坏脾气。”其实，我的脾气都是自小被爸爸宠坏的。
记者：那妈妈对你怎样?
袁妈妈对我太严厉了，所以我常常怀疑她是不是我亲妈。
记者：严厉到什么程度?居然让你产生这种想法。
袁：从小妈妈就把我送入女校，杜绝我同男生接触的一切机会。有一次，我哥哥到学校找我，他那时已经当警察了，校长看见后紧张地打电话到我家告状：“有男生来接袁咏仪。”回家后，妈妈就试探着问谁接我。我很气恼，大声反问：“你儿子来接我，不可以吗?”还有，我想跟同学外出旅游，在野外露营住几天，本来很平常的事情，哥哥和妹妹都去过好几次，可妈妈从不准我去。
记者：后来有没有问过妈妈，为什么不让你去露营?
袁有问过。记得15岁那年，我问过妈妈为什么独独不让我去，妈妈说
“因为我是你妈妈，我太了解你的性格，你是那种一玩起来，就连自己姓什么都会忘记的人。”
记者：当时理解妈妈的回答吗?
袁我小时候太调皮、太贪玩，而且胆大得出奇，什么都不怕。现在明白了，妈妈那是为我好，只是方法同其他小朋友的妈妈不一样。
贪玩的香港小姐
记者：你上学的时候成绩好吗?
袁：不算好。因为有妈妈管我，分数还可以，属于中等水平，但我不是爱读书的人。上学的时候，常常盯着书本看半天，也不知道书上写了些什么。但我记广告词很厉害，电视上播任何个广告，所有的广告词，我都知道。
记者：不爱读书的孩子，都有一些别人不太理解的兴趣爱好，你那时候的兴趣是什幺?
袁不知道什么原因，初中的时候，我居然狂爱跑步。每天放学后，就跟同学一起坐公车去运动场跑步，上课也心不在焉地惦记着跑步，常常不耐烦地看表。老师发现后到妈妈那儿告状：“袁咏仪读书呢，还可以，但是她每天想着去跑步，这样会影响学习。”后来，妈妈就跟我达成协议要想跑步，就要好好学习，如果下次考不好，就不许再去跑步。
记者：后来怎样?谁胜利了?
袁我啊。为了这个协定，我努力读书，后来考得很好，得以继续跑步。但妈妈开始并不知道我不喜欢读书，志向也不在读书，我是为了跑步才好好读书。所以，妈妈明白后，常常宽慰我：“没关系，最重要是你尽力了。”
记者：在竞选港姐前，你做什么工作?
袁做文书。但我的性格实在不适合做文书，3个月下来，自己差点被“闷”死不说，老板快被我折磨疯了。老板看我在办公室乱窜，到处找人聊天，头疼得大叫：“你相不相信，你再乱窜，我去买条绳子来把你绑起来!”
记者：哈哈!看来你确实不适宜干这份工，没见过你这么不安分的文书，那不做文书，做什么呢?
袁后来我又做起了老本行――拍广告。你知道，我从侣岁就开始拍广告了，拍广告还蛮适合我的性格，跑来跑去，永不安静。
记者：那怎么想到去竞选港姐?
袁，有天，给我拍广告的人拿着张香港小姐报名表来找我，可我要不要去选香港小姐。当时我想都没想，就把表格扔进垃圾桶。然后有天，我在电视上看到香港小姐的宣传片，灵机动：“试一下又何妨?”就跑进厨房告诉妈妈这个想法。妈妈正在做饭，瞪大眼睛问我为什么。我回答：“第一，我要不尝试，过几年会后悔，第二，我觉得我是个漂亮的女孩。”
记者：这么理直气壮，看来妈妈没理由不支持了。
袁对啊。妈妈说：“好，你去吧。我虽然觉得不好，但如果你决定了，就去试试吧。以后有什么不开心的，你要记住，这是你自己的选择。”
记者：那时候竞选港姐，你有没有压力?
袁：完全没有思想负担。那时候，现场评判觉得我的眼睛很漂亮，怀疑我整过容，就问我：“袁咏仪，你的眼睛是真的还是假的?”我说：“是真的。我跟我妈妈很像。我那个整容手术，已经在出生前，在我妈妈肚子里就做好了。”评判都被我逗乐了。
记者：现在想起当年竞选港姐的事情，印象最深的是什么?
袁：再热闹的花团锦簇，也已经过去，剩下的是同几个女孩的友谊。那时候，入选的18个小女生每天在一起吃饭、训练、玩耍、旅行，要多开心有多开心。我跟几个国外回来的女生最要好，常常不顾规定，在各屋乱窜，化好了妆还要出去玩，哪怕回来再要补妆。人家在彩排得奖后如何走台，我却和小姐妹们在后台玩牌，等听到宣布我是冠军的时候，只好匆忙上台，将台步快快走完。
口无遮拦导致“冷藏”
袁咏仪的性格直来直去，反应又快，来不及顾及别人的感受，已经将自己要说的话竹筒倒豆子――一倾而尽了。过后，又会后悔，觉得自己不应该那么倔，态度亦不该那么强烈。但为时已晚，人已经被她得罪了。这令她在入行之初，有些举步维艰。
记者：成为港姐后，我知道你签约了TVB，成为它旗下的艺员。但奇怪的是，善于制造明星的TVB为什么
独独没能让你红起来?我发现你出名，是在离开TVB之后。这到底是为什么?
袁：我得罪人呀!刚选上港姐时，第二、三名小姐都有工作，只有我要义务为香港做一年形象宣传。后来又要我主持一档音乐节目。我本来不喜欢当主持，又不太会讲话，要我去做什么主持，简直要命耶。每次到现场，我表情都木木的，轮到我说话了，要人家捅捅我，说：“袁咏仪，到你了。”我才回过神来：“是吗?好好，下一个有请刘德华。”
记者：除了当主持人，那时候就没有别的选择吗?
袁：做了三个月，跟我一起主持的人走了，当然我也想走，就跟老板说我也不做了，因为一直都是搭档提醒我，我才说话的，他们不做，我也不做了。可是老板说：“不行耶，观众太喜欢看你常常忘记的样子了，你走了，人家看什么?”我说我才不要香港小姐看起来那么笨，总之我是不做了。
记者：所以后来就去拍戏了?
袁：是啊。终于安排我去拍戏，演一个女强人，管理很多人，跟公司里一个男人明争暗斗。但有一天，我接到剧本，两个人之间的关系发生了180度大转弯，女强人变温顺了，我很吃惊，就去问编剧，为什么女强人会变成这样。你知道那个编剧怎么说吗?“去拍吧，观众忘记了。”我很生气，觉得你把观众当，但不要把我也当。之后正好有记者采访我，我就把自己的气愤发泄出来。第二天报纸登出来了：袁咏仪不满编剧把观众当。
记者：当时有没有意识到问题的严重性?
袁没有啊。新闻出来后，公司一个高层负责人看了报道很生气，跟别人咆哮：“袁咏仪什么态度呀?有什么问题来找我，在外面乱说什么?”可她没有把这话直接跟我说，而是叫另一个人传话给我。我告诉传话的人：“她有什么问题来跟我说，不要再跟你说。”当然我的下场就是不可以用!所以在TVB两年，我只拍了三个电视剧。
记者：后来有没有反省，改变这口无遮拦的情况?
袁：人一定要经历了，才能明白。很多年过去了，我才知道，原来是自己的不对。现在我学乖了，虽然有时控制不住坏脾气，但骂完了，赶紧去道歉。我妈常说的“一口屎，一口糖”，很形象，我就是那种人。
经历三段情才懂什么是爱
记者：你那么贪玩，应该会早恋吧?你的初恋是在什么时候?
袁：很小的时候有过一次早恋吧，寿命极短，只维持了一个礼拜。有一天妈妈问我：“你是不是跟人拍拖了?”我说：“对呀。”妈妈很和气地问：“你要不要把人带回来，让人家到咱家来玩?”我也不知是妈妈在用计，隔了几天，就把人带回家了。吃过晚饭，把人送出门去，回转身妈妈就说：“你现在才16岁，你跟他拍拖，这样会把你的交际圈子缩小，许多人就不方便再跟你做朋友了。
记者：哇，好厉害的妈妈!她知道16岁的孩子最叛逆，所以用这么巧妙的理由建议你。
袁：是啊，当时我听了妈妈的话，觉得有道理，自己是个那么爱自由的人，怎么可能给人家关住呢，第二天就对那个男生说：“对不起，我们分手吧!”
记者：第二次恋爱，时间是不是长了些?
袁：跟第二个男朋友交往的时间比较长一点。我们分手，是在我选香港小姐期间。我参加初赛时，他也鼓励我去，可等到我快要选上了，他突然跟我说“希望你不要再选”。我回家想一下，倒也是。他如果早跟我说，我可能会考虑，但那时已经迟了。所以，第二个男朋友就没了。
记者：第三个男朋友怎样呢?
袁：第三个男朋友是有妇之夫，年纪比我大很多，很沉默，但对我特别好。我今天想去美国，明天就可以走了，一下飞机，直接去饭店，吃住他都帮我安排好了，什么都不用我想，我每天只是想去哪儿玩。
记者：那为什么分手呢?
袁：这样被宠爱着，初时还觉得幸福快乐，但突然有一天，我发现自己真正需要的是一份可以见光的真感情，一个能够在圣诞节等重要日子陪伴自己的男朋友。可这个男人做不到。于是两个人分开，成了一辈子的好朋友。
记者：怎么评价你的这三段感情?
袁：每一次分手，我都不伤心，因为我明白那些都不是自己的最爱。直到遇到张智霖，我才知道，爱一个人，不光是开心，还伴随着痛苦和焦心。
记者：你和张智霖两个人，性格是互补还是相同的呢?
袁：我们性格很相似，爱玩爱闹，从开始拍拖到现在，感觉越来越近，很舒服。除了家人，我最爱的人就是他了。虽然在一起快10年了，但我现在看到他还是很新鲜，有着头一次见面的开心刺激。可能是因为不怎么在起，经常两地分离，互相思念吧，每一次见面，我们都有说不完的话。
记者：“相爱容易相处难”，相处实在是一门艺术。在这方面，你有什么心得吗?
袁：聪明的女人，要懂得什么时候关灯，什么时候开灯。我以前不懂，乱发脾气，常让张智霖丢面子。现在学聪明了。比方他在朋友面前开玩笑，说我身材不好，我当时不把愤怒表现出来，等他进了我的屋，一关门我再变脸：“刚才说什么呢?”这时我的火气已经下来了，而且也不会伤他的面子。
记者：关于理财，在钱这个问题上，你和张智霖怎么协调?
袁我曾经开玩笑说：“你的钱，就是我的钱；我的钱，还是我的钱。”两个相爱的人，女人可以这样霸道地对男人说，但万万不可强求。要对方心甘情愿地把钱送到你手里才行。
父爱短诗范文3
effect of sirnamediated inhibition of nfκb combination with 5fu on cell cycle of escc cell lines
tian fang1，2，chai yurong3，xu peirong2，liu hongtao2，xue lexun2
1. department of pathophysiology, basic medical college of zhengzhou university, zhengzhou 450052, china，2. laboratory for cell biology，3. department of histology and embryology
corresponding author：xue lexun，email：xuelx@371.netabstract：objective rna interference (rnai) was employed to inhibit the expression of p65 and to evaluate the effects of nfκb signaling pathway as a target for gene therapy in escc cell lines. methods a fluoresceinlabeled nonspecial sirna was used to monitor efficiency in ec9706. ec9706 and eca109 were transfected with 50 nm p65sirna, p65 and cyclind1 protein levels were determined using western blotting. after transfected with or without p65sirna at 72h, cells were tested for nuclear activity of nfκb using nuclear extracts by emsa. escc cells were treated with or without p65sirna, 5fu or combinations thereof for 48h. the cells were stained with pi and analyzed cell cycle by flow cytometry. results a fluoresceinlabeled nonspecial sirna was used to monitor efficiency in ec9706, demonstrating nearly 90% transfection efficiency. the protein level of p65 and cyclind1 decreased after transfected with p65sirna at 72h. and p65sirna also suppressed the nfκbdnabinding. p65sirnatransfected cells showed an increase in the percentage of cells in the g0/g1 phase and a decrease in the percentage of cells in the s phase. while combination with 5fu, the results were more prominence. conclusion p65sirna inhibits the constitutively active nfκb signaling pathway, and downregulats the expression of cyclind1. the strong constitutive nfκb signaling pathway in escc makes nfκb a target for the development of novel therapeutic strategies.
key words：esophageal squamous cell carcinoma;nfkappab;rna interference;cyclin d1
食管鳞癌是一种侵袭性很强的肿瘤，它的预后差，临床进展迅速，多伴有淋巴结转移，且易复发。核因子nfκb (nuclear factorkappa b) 是近年来发现的转录调控因子，最常见的形式是由 p50 和p65组成的异源二聚体，在绝大多数静止期的细胞中，nfκb 与其阻抑物iκbα蛋白相结合，以非活性形式存在于细胞质中。许多刺激物可以通过对iκbα的磷酸化而使其降解，使解离的nfκb进入到核内并暴露它的核识别位点，从而促进靶基因的转录。活化的nfκb信号通路可增强肿瘤细胞对放化疗药物的抵抗力，从而产生耐药性。有研究表明，在许多人类肿瘤中nfκb信号通路的激活在肿瘤的发生发展中起着重要的作用[13]。
rna干扰(rna interference，rnai)是由双链rna(doublestranded rna，dsrna)引发的转录后基因静默机制，是目前研究基因功能强有力的工具之一[4]。rnai 的功能是由21～23 个碱基长的短双链rna完成的 ,即sirna(small interference rna ,sirna)，它具有与目的基因互补的序列。目前这一方法被用于体外细胞水平的基因敲除或基因表达抑制,为其成为基因治疗的手段开辟了广阔的前景。本研究拟应用rna干扰技术，使用针对nfκb信号通路中p65的特异性sirna,观察其对p65表达的抑制作用及联合化疗药5fu对食管鳞癌ec9706和eca109细胞周期的影响，探讨将nfκb作为基因治疗靶点的价值。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞系及细胞培养 食管癌细胞系eca109由本室保存，食管癌细胞系 ec9706由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室惠赠。两株细胞在含有10%的胎牛血清，100u/ml青霉素，100μg/ml链霉素的1640培养液(gibco公司)中于37 ℃、5% co2 的条件下培养，实验细胞均处于对数生长期。
1.1.2 抗体和试剂 鼠抗人p65(sc8008)单克隆抗体和兔抗人cyclin d1(sc753)购自santa cruz biotechnology 公司;细胞核和细胞质蛋白提取试剂盒、生物素3′末端标记试剂盒(89818)、化学发光emsa 试剂盒(78833)均购自 pierce 公司。nfκb p65 sirna干扰试剂盒购自cell signaling technology公司，碘化吡啶pi购自美国sigma公司。
1.2 方法
1.2.1 sirna的转染及效率检测 按照cell signaling technology公司sirna干扰试剂盒说明书的要求，进行转染。在转染前，ec9706(5×104) 和eca109(6×104)按一定细胞数铺于6孔板中，使用无抗生素的培养基培养24h。将含有sirna的转染试剂或荧光素标记的对照sirna与细胞共孵育5h后，加入新鲜培养基孵育24h。用日本nikon公司显微荧光摄像/照相系统检测荧光素标记的对照sirna在ec9706细胞中的转染效率并照相。
1.2.2 胞浆、胞核蛋白的制备 按照细胞核和细胞质蛋白提取试剂盒说明书，分别提取细胞质、细胞核蛋白，bradford 法检测蛋白质的含量，-70℃保存。
1.2.3 western blot测定蛋白的表达 转染p65sirna72h后，从ec9706和eca109细胞中取细胞质蛋白，与预染的蛋白质分子量标准一起上样。检测p65和非靶向mapk蛋白表达，及细胞周期蛋白cyclin d1的表达，经12%sdspage分离，电转到硝酸纤维膜上。5%的脱脂奶粉tbst溶液封闭2h，抗体按1∶100 孵育4℃过夜，tbst溶液洗涤10min×3次，硝酸纤维膜分别与辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶50 000)室温孵育1h后，tbst溶液洗涤10min×3次，dab显色。实验重复三次。
1.2.4 凝胶电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay，emsa)检测nfκb与 dna的结合活性 ec9706和eca109细胞转染p65sirna 72h后，收集转染细胞和未转染细胞提取细胞核蛋白，检测转染前后p65与dna结合活性的变化，方法如下：采用生物素3′末端标记法将nfκb探针5′agt tga ggg gac ttt ccc agg c3′，3′tca act ccc ctg aaa ggg tcc g5′进行标记。将细胞核提取物(10μg)与生物素标记的探针在20μl的缓冲液(10m trishcl，ph 8.5，0.5 mm edta，5mm mgcl2，1m kcl，0.05% np40，2.5% glycerol，1μg/μl poly (di·dc) and 0.2μg/μl bsa)中充分结合，行6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，采用毛吸转移法转移至带正电荷的尼龙膜上，120mj紫外交联5min。生物素标记的dna探针与hrp标记的亲和素之间相结合，通过化学发光，显影，定影。
1.2.5 流式细胞仪检测细胞周期 转染和未转染p65 sirna的食管鳞癌细胞，在50ml培养瓶中培养，5fu单独或联合应用，进行试验分组和处理，作用48h后，收集细胞;1 000 r/min离心5min，弃去上清;用pbs洗两遍，离心后弃去，加入70%冰乙醇固定，4℃过夜;上机前，1 000 r/min离心5min，弃去乙醇，pbs洗三遍;加入1ml pbs制成细胞悬液，加rnasea(终浓度50μg/ml)，室温放置1h;调整细胞浓度为1×106，加1ml pi(100μg/ml)，避光30min，上机检测细胞周期，每个样本检测10 000个细胞。
2 结果
2.1 sirna转染食管鳞癌细胞ec9706的效率
将荧光素标记的对照sirna，在同样条件下转染到ec9706细胞中，置37℃、5%co2孵育箱内培养48h，通过荧光显微镜观察转染效率，见图1。sirna转染食管鳞癌细胞的效率可达90%以上。
2.2 食管鳞癌细胞转染p65sirna后p65蛋白的表达水平
western blot检测细胞中p65的蛋白表达水平，见图2。结果表明，与未转染p65 sirna的ec9706和eca109细胞相比，转染后的ec9706和eca109细胞，p65蛋白的表达水平下调，而非靶向蛋白mapk的表达无影响。
2.3 食管鳞癌细胞转染p65sirna后，nfκb与κb位点结合活性的改变
ec9706和eca109细胞转染p65sirna72h后，收集各组细胞提取细胞核蛋白，emsa检测nfκb与dna结合活性的变化。结果发现，与未转染p65 sirna的ec9706和eca109细胞相比，转染p65 sirna的ec9706和eca109细胞中，nfκb与dna的结合活性明显下降，见图3。提示：p65 sirna可以抑制p65的表达，下调nfκb与靶基因的结合活性。
2.4 p65sirna阻断nfκb信号通路下调cyclind1的表达
食管鳞癌细胞ec9706和eca109在转染p65 sirna72h后，分别提取细胞总蛋白检测细胞周期cyclin d1蛋白的表达情况。结果表明，与未转染的细胞相比，cyclin d1的表达在转染72h后开始下降，见图4。
2.5 p65sirna单独或联合5fu对食管鳞癌ec9706和eca109细胞周期的影响
食管鳞癌细胞ec9706和eca109按以下方法分组：未转染组;转染p65 sirna72h组;单独使用5fu组;转染p65 sirna48h后，使用5fu治疗24h组。各组细胞使用pi染色，以未转染组为对照，检测细胞周期变化情况。结果显示，ec9706和eca109在转染p65 sirna后，g0/g1期的细胞开始增加，同时s期的细胞逐渐减少;当转染细胞联合使用5fu时，g0/g1期的细胞明显增加，同时s期的细胞明显减少，见表1、2。
3 讨论
研究表明，活化的nfκb信号通路存在于多种人类肿瘤中，作者以往的研究已证实在两种食管鳞癌细胞中存在有激活的nfκb信号通路[5]。但是，激活的nfκb信号通路在食管鳞癌细胞的增殖及对化疗药的耐受性等机制中是否起作用，尚不清楚。本研究使用rna干扰技术，特异性的阻断nfκb亚单位p65的表达，研究nfκb信号通路在食管鳞癌的发生发展中的作用。western blot实验中，将终浓度为50nm的p65 sirna分别转染ec9706和eca109细胞，持续作用72h，检测p65的蛋白表达水平，结果发现，在转染72h后，与未转染细胞相比，p65的蛋白表达水平也明显下降，而非靶向抗体mapk的表达水平未受到影响。表1 p65 sirna转染前后与5fu单独或表2 p65 sirna转染前后与5fu单独或联合
活化的nfκb可以进入到核内，与下游调控基因上共同的κb序列结合，参与细胞的增殖、转化、浸润及抗凋亡。抑制nfκb信号通路的活性，最终是抑制nfκb与κb的序列结合，阻断它促进下游基因表达的功能。本研究采用凝胶滞留实验检测nfκb与dna的结合，结果发现，在转染72h后，nfκb与dna的结合活性明显下降。以上实验结果表明，p65 sirna可以高效的转染到食管鳞癌细胞中，特异性的抑制目的基因p65在mrna和蛋白水平上的表达，导致nfκb与dna结合能力下降，从而抑制nfκb信号通路的活化。
cyclin d1的高表达存在于多种肿瘤中，如mega等[6]的研究发现，在食管鳞癌组织中，cyclin d1和e2f1的高表达会促进肿瘤的发展，导致病人的预后欠佳。在研究中国南方的食管癌组织中发现，cyclin d1的高表达存在于61%的样本中，提示cyclin d1的表达是食管癌发生的早期事件，并在肿瘤的进展中cyclin d1的表达不断积累[7]。本研究采用western blot法，检测转染p65sirna，阻断nfκb信号通路后，是否能够下调nfκb下游基因cyclin d1的表达。将终浓度为50nm的p65 sirna分别转染ec9706和eca109细胞，72h后收集细胞总蛋白，结果发现，与未转染细胞相比，转染细胞中cyclin d1的表达受到抑制。本研究还采用流式细胞仪检测食管鳞癌细胞在转染前后及单独或联合应用5fu后，对细胞周期的影响。ec9706和eca109在转染p65 sirna后，g0/g1期的细胞开始增加，s期的细胞逐渐减少;当转染细胞联合使用5fu时，g0/g1期的细胞明显增加，同时s期的细胞明显减少。以上这些结果表明，由于cyclin d1是细胞周期进行中一个重要的调节者，当使用p65 sirna阻断食管鳞癌细胞中nfκb信号通路时，cyclin d1的表达下调，肿瘤细胞被停滞在g1期，提示cyclin d1是受nfκb调节的一个重要的下游基因，nfκb可以通过对cyclin d1的调控来促进食管鳞癌细胞的增殖。p65 sirna阻断食管鳞癌细胞中nfκb信号通路并联合使用5fu，可以明显抑制食管鳞癌细胞的增殖，使更多细胞停滞在g1期，减少细胞的分裂。
因此，激活的nfκb信号通路在食管鳞癌细胞的增殖及耐药中起着重要的作用，通过转染p65 sirna可以特异性的阻断nfκb信号通路，抑制食管鳞癌细胞的增殖，增加细胞对化疗药的敏感性，提示nfκb信号通路可以成为食管癌基因治疗中一个强有力的作用靶点。
【参考文献】
[1] wang jh，huang qk，chen mx. the role of nfκb in hepatocellular carcinoma cell[j]. chin med j, 2003,116(5):747752.
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父爱短诗范文4
13岁开始写小说，14岁开始创作诗歌，作品被知名作家称为“天才的作品”，16岁已当选为浙江省作家协会会员。初中时，请假在家补习，中考竟考上温州中学。高中时，发表诗歌、童话和小说上百篇，并如愿考上中山大学博雅学院。她到底是怎样一个女子？类似于曾经的韩寒，游离在传统学校、家庭教育之外，还是在无涯学海中有自己的独到之处？本期慈琪将为我们讲述她的成功之路。
揭秘1：书海中的成长路
出生于1992年的慈琪，3岁就已在时任中学教师的母亲的教育下学会了简单的拼音规则，可以独立读故事画册；4岁就入了父亲执教的小学读书。她喜欢看书在同学里是出了名的，她随时随地都可以看书，而且一看书别人就很难跟她搭上话。她看的书，以童话、奇幻、故事类为主，安徒生、郑渊洁、周锐等人的作品，被她看了又看，《西游记》则被她翻烂。酷爱读书的慈琪从小就对书籍有着超乎常人的着迷，以至于经常把课外书带到课堂中来，偶有灵感便随意写写画画……
都说父爱深沉、母爱细腻，这话一点也不假。读书之余，慈琪开始从事写作，爸爸妈妈常常做她的第一个读者。当慈琪还是个不经世事的孩子时，在网上找杂志社邮箱、发表文章这些事一直都是妈妈在操持着。多年来，妈妈一直为慈琪收集整理着所有有关她的出版作品，而爸爸对慈琪取得的成绩似乎并没有大加赞赏，只是常常告诉慈琪要往前看。父母为慈琪提供了难能可贵的创作环境。在向来推崇传统教育的中国，慈琪的爸爸妈妈为她阻挡了世俗的叨扰，营造出了一个宽松融洽的创作氛围。父母无微不至的关怀，想必一定是她成功路上最为坚固的基石。
长期的阅读让慈琪有了比较厚实的文学积淀。慈琪得知比她小1岁的女孩赵荔出了3本书，感觉不服气，认为自己也能行，便决定在自己14周岁生日时也要完成一部长篇小说。
果不其然，在慈琪14岁生日当天，她的第一部作品《漫画世界传奇》顺利“出炉”，次年10月由中国文联出版社出版。“要是写儿童文学以外的其他作品，我可能还比不上身边的同学。”慈琪说，她目前主要是在儿童文学、儿童诗歌里尽情发挥，对于创作与成人领域相关的作品，还没有足够的阅历来支撑。
慈琪写东西一般不会提前构思，都是随着感觉走，漫步在自己想象出来的无限空间，如草原、森林等等。在这个属于她的“空间”里，她可以塑造各种动物、植物等等“意象”，并对它们“组合”，“导演”一幕幕情节。
她的代表作《梦游的孩子》，原是一首短诗，后来她忽然产生了继续探索下去的欲望，计划写成33首的组诗。在备考期末的同时，她一鼓作气地完成，有时一个晚上写四五首，“下笔如有神”，挡也挡不住。后来该组诗被《少年文艺》（江苏）精选，于2008年第10期开辟新栏目“第一推荐”头条刊发；被《中国儿童文学》开专栏部分转载，并配发主编评论。
慈琪诗选：
这样的魔法有没有
世界上有没有一个魔法
让哭泣的小孩子能够快乐起来
世界上有没有一个魔法
让冻僵的小花儿在春天柔软地绽开
世界上有没有一个魔法
可以把会喷火的魔鬼变得不那么坏
世界上有没有一个魔法
让蒲玛 让蒲玛不要再这么笨笨呆呆
第一个魔法
是好心肠的摘莓子老奶奶实现的
这个季节 她做了一大罐莓子果酱
所有的小孩子都吃得 忘了哭
第二个魔法
是山坡底下那只鼹鼠实现的
它将洞里的棉絮全都搬了出来
第二年春天 开心地欣赏
那美丽的小花儿
第三个魔法
是魔鬼的妈妈实现的
因为无数个妈妈的告状
她再也不能容忍
这个顽劣孩子的胡来
第四个魔法……
嗯，真好！
到现在还没有人实现
因此 我可以继续奔跑在世界的每个角落
和所有可爱的小东西
都打个快乐的招呼
揭秘2：在家自学迎高考
“高三的时候我很少去学校上课，一个人在家里做题，一本接一本，做完‘一课一练’再做《五年高考三年模拟》，做完了把错题答案涂掉重头再做一遍，直到不会错为止。做累了就写东西。我高三那一年生活特别简单，除了做题就是写东西，除了写东西就是看书，偶尔去学校围观一下同学们的高三生活。很惭愧地说，我当时几乎没有感觉到什么压力，高考之前我完成了三个组诗，整整一百首。”慈琪这样讲述自己的高考之路。
高考对中国的家家户户太重要了。父母会给孩子选择收费较贵的幼儿园，为的是“不输在起跑线上”，而赛道的另一端就是十几年后的高考。但是，慈琪当年的学习之路并非一帆风顺。
初二下学期结束时，老师通知家长，说慈琪的成绩连普通高中都别想考上。
“当时，慈琪的成绩考上普高的希望也很渺小”，慈琪的母亲曾说。他们并不在意孩子的学习成绩，但面对中考，不得不重视起来。