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谐音的古诗范文1
1.1农机操作人员安全意识淡薄
目前农村“一户买机，全家都用”的现象比较普遍，认为小型农机结构紧凑简单，易学易操作。缺乏安全意识，思想上麻痹大意。由于操作技术生疏，不懂操作规程，导致操作不当；部分农机操作人员认为农机在农田中作业或茶叶加工作业，发生事故的可能性小，不会出现人员伤亡，从而对安全作业不重视。农业机械年使用时间短，利用率极低，有些农机操作人员为了尽快收回购置机械的投资，在农忙季节日夜加班，长时间的疲劳作业易导致操作人员反应迟钝或判断失误，造成农机事故的发生。正是这些忽视安全的麻痹思想，形成了大量事故隐患[1-2]。
1.2农机操作人员技术水平低
近几年农村农业机械拥有量剧增，据调查，有些农民购买了农业机械后，找个“明白人”指点一下，略懂一二便开始操作机械进行作业。由于没有参加过专业的培训和指导，不了解农业机械结构和工作原理，缺乏安全作业知识，操作技能差，无法应对突况，盲目操作而引发事故。据统计，黟县农业机械操作人员中80%的人年龄在50岁以上，年龄普遍偏大，不仅技术生疏，且操作动作缓慢，遇到紧急情况，不能及时采取相应措施，使事故发生的几率增大。
1.3农机操作人员忽视维护保养
由于农机操作人员大多文化水平较低，且未参加过任何技术培训，对农业机械的保养不重视，从而不按时保养机具，还有的农机操作人员在经济利益的驱使下，无暇顾及维护保养。这样重使用、轻保养，操作带“病”的机械进行作业，从产生“小毛病”到拖成“大故障”的过程中隐藏着事故的隐患。
1.4农机作业环境较差
农田作业时，田间机耕道是机械下田作业和田间转移的道路，黟县目前田间机耕道多为20世纪70年代前后修筑，由于年久失修，部分机耕道过窄，路面坑坑洼洼。而农业机械在作业过程中，要经常转移，或走机耕道，或爬较高的田埂，或走非机耕道的小路，操作稍微不慎，便易引发事故。
1.5农机安全监管力量薄弱
黟县是个山区县，拥有各种农业机械1.6万余台（套），95%以上是非牌证管理的机械，而负责全县农机安全监管的农机安全监理站只配备3名工作人员，没有监理装备，乡（镇）农机员因管理体制所致，大部分时间从事非农机工作，对各种农业机械安全监管很难到位。
二、农业机械作业事故的预防措施
2.1强化监管，确保监管措施到位
对农业机械实行安全监管，保障群众的生命财产安全，是农机安全管理部门的职责。农机安全管理部门应认真调查研究，采取有效的监管措施。一是深入调查研究农机作业安全形势，形成报告，向同级政府作专题汇报，争取政府的重视和支持，争取相关部门的通力配合，形成上下左右齐抓共管的局面，把农机安全生产各项安全监管措施落实到位。二是建立县、乡、村三级农机安全监管网络。加强县级农机安全监管力量和手段，完善乡（镇）级农机管理机构，保障乡镇农机管理人员的专业性和稳定性，设立村级农机安全员，调动乡（镇）、村农机员的工作积极性，日常巡视摸排，掌握信息，抓好源头关，把各类隐患消除在萌芽状态。县级农机安全管理部门要转变工作作风，将非牌证管理的农机具纳入日常安全监管范围，克服量多面广畏难思想，把服务送到村、户，做好农机具安全作业监管。要根据农事规律，认真开展农机作业的安全大检查，扎实排查事故隐患，预防和减少农机作业事故的发生，推进平安农机建设。三是开展以纠正违规违章为主要内容的农机安全执法检查，把农机安全执法检查延伸到田间地头和场院，在执法过程中注意方式和方法，重纠轻治，做到以人为本、依法行政、公正执法，规范执法。坚决避免激化矛盾，杜绝暴力执法[3-4]。
2.2强化宣传，确保安全教育到位
农机安全管理部门应加强农机安全宣传教育，通过多种方式向广大农机操作人员宣传《安全生产法》《农业机械化促进法》《农业机械安全监督管理条例》等法律法规，使农机操作人员理解“安全是效益，安全是生命，安全是致富之本，事故是败家之源”的道理。一是充分利用各种媒体，广泛开展丰富多彩的安全教育宣传活动；二是将“送安全下乡”、走基层等活动常态化，避免“阵风式”活动；三是将农机安全教育融入乡村的各种活动中，扎实推进农机安全教育，提高农民群众的安全观念和意识。
2.3强化技术培训，确保操作技能到位
农机安全管理部门应加强对农机操作人员的技术培训。借“阳光工程”培训、农村实用技术培训等新型农民培训项目，组织农机操作人员学习农业机械的基本构造和工作原理、维护保养知识、操作规程、农机安全常识和实际操作技能；结合组织农机技术人员“送技术下乡”，采取实用、实效的方法，对农机操作人员进行技术辅导。通过各种方式的农机技术传授，使农机操作人员的技术水平与技能得到逐步提高。
2.4修建机耕道路，改善田间作业通行条件
建议政府从美好乡村建设、农业综合开发和购机补贴等支农资金中拨出一部分，投入乡村机耕道路建设与改造，引导村、组、农民个人筹资筹劳，引导土地流转规模经营，以改善农机田间作业通行条件。
2.5建立救济制度，提高农机户抗风险能力
为促进社会和谐安定，设立农机事故救济基金和互助组织；制订并尽快出台农机操作人员的人身保险和作业机械保险制度。提高农机户的抗风险能力，确保农机户不因农机作业事故而返贫。
三、结语
谐音的古诗范文2
一、情况经过
某月9日6时许，位于上海闹市静安寺附近的大酒家。发生由厨房煤气泄漏引发的大爆炸事故。造成7人死亡、近百人受伤。
据警方介绍，6时许，上海110报警台接到酒店业主报警说，店里煤气表爆炸了，快通知煤气公司来修。报警后仅两三分钟，酒店就发生了爆炸。玻璃粉碎。楼房坍塌，在酒店用餐的顾客和工作人员，有的被当场炸死，有的重伤。
警方接报后，迅速派出消防公安干警赶往现场进行抢救。同时把伤员送往瑞金、华山、华东等5个医院抢救。共有20余人仍在医院接受治疗。
记者在现场目击，酒店外面马路上洒满了被击碎的玻璃，受伤者中有些是过路行人。
二、造成事故的原因
大酒家煤气泄漏引发的燃气爆炸事故。可以分成二次事故，第一次事故是煤气大量泄漏，第二次事故是爆炸事故。造成的危害最大是第二次事故。
第一次事故产生的直接原因有以下几种可能：
1、煤气压力超压，造成店里煤气表爆炸。
2、对煤气设施检修或碰管使煤气表内及管道未置换干净，造成煤气表爆炸。
3、煤气表有泄漏，没引起工作人员的注意，在它周围形成爆炸浓度区域而发生煤气表爆炸。
第二次事故产生的直接原因：
1、煤气表爆炸后，煤气大量泄漏厨房内。
2、煤气泄漏报警切断装置没有启动。存在着问题；或者没有安装煤气泄漏报警切断装置。
3、酒店人员没有迅速切断气源、熄灭火源及消除可能产生的火花和尽快疏散店内就餐人员。因为当时有两、三分钟时间完成人员疏散工作。并且制止其它人员进入爆炸区或爆炸后的碎片飞溅能伤人的区域。
从以上各因素分析得出：造成7人死亡。近百人受伤事故的直接原因，首先是煤气设备设施没有按有关规定要求维修、保养、检查，其次是煤气安全设施设备投入不够；最后是酒店人员处置措施不当。间接原因。安全用气管理存在缺陷；煤气供应单位安全指导力度不够；酒店不重视各种类型的突发事件的处置演练和培训工作。
三、事故教训及防范措施
该起煤气泄漏爆炸造成7人死亡，近百人受伤的恶性事故，反映出了商业用户一旦发生煤气事故很容易造成恶性事故。商家经济利益最大化至上，忽视对燃气安全设施设备和安全教育制度培训的投入，在管理上重经营，轻安全。供气单位应加强燃气设施维护管理工作。为认真吸取事故教训，防止同类事故重复发生，应采取以下防范措施：
1、供气单位加强燃气设备设施的维护管理工作，尽可能消除因设备设施引发的第一次事故。
2、在操作中，严格执行安全规程和操作规程，保证安全供气，安全用气。
谐音的古诗范文3
一切老屋是相同的却又各具个性，相同源于其间生命的哭笑走死，个性依旧源于其间生命的哭笑走死。每个人都有自己的一间老屋，只有少数人可以听到老屋等待的呼告，从而打捞起流逝的光阴，用文字固化板结为不朽的故事，从而一如代谢的四季以叶落花放水瘦山青的重复情节暗示天道的永恒，这些故事以老屋的形象变幻一样显影了生命的奥秘。
自然，这少数人就是归有光这样的人。他们有着非凡的特质，他们以此注定被拣选，要去以自身的生命打捞并且传播老屋里深埋的生命的普遍道理。
归有光们是沉静的。他们喜爱光照与美好，他们因此敏感于破败与朽烂、裂痕与创颓。也许出于本能，也许出于久经人世后的顿悟，他们总能深知，破败与朽烂、裂痕与创颓，一如光明与鲜艳，都是天道的印记，不可扭转，但却可以促进迁化，生命的尊严与不可抹杀就在于人可以在破败与朽烂、裂痕与创颓里呼唤引发且护持那光明与美好。于是，老屋的破而得葺并非普通的人世动态，而是生命在不可逆转的命运里努力于向善逐美。因而，“借书满架，偃仰啸歌，冥然兀坐，万籁有声;而庭阶寂寂，小鸟时来啄食，人至不去。三五之夜，明月半墙，桂影斑驳，风移影动，珊珊可爱”，并非一般的文人士大夫情趣，盖因此地风月不可雅玩，只可感受，人在与世界的交融合一里得以无限扩大，沉静的生命得以雷音滚滚，细节的生命上升为普遍的生命，片刻的美好弥散为永恒，普遍的人类悲哀贯通个体的有限人生。
于是，归有光们总在极乐时兴起悲哀。谁不曾乐极生悲呢？这是人生的注定，但归有光们并非被动地承受而是主动地感受兴发。为什么？盖因他们不同于一般人，他们深知他们活在人群中活在历史里，他们是社会与历史的存在，他人的悲欢、历史的流变总与自己相关，所有人世的流变迁转兴废离合无不最终显形为小小个体生命的悲乐哀喜。因而，“先是庭中通南北为一。迨诸父异爨，内外多置小门，墙往往而是。东犬西吠，客逾庖而宴，鸡栖于厅。庭中始为篱，已为墙，凡再变矣”以及“轩凡四遭火，得不焚，殆有神护者”这样的记述，并非只是百年老屋的阵发性疼痛与创伤，也不只是百年家族的礼乐毁弃分崩离析，更是对个体生命有限性的沉痛接受。人总是无由地生，无由地死，人的一生，细数每一哀乐，检点每一细节，无不生死交缠，合离相逐，这是现象，却因其不朽的轮回、普遍的平等，成为生命不易的道理。那么，人能做的还有什么呢？是的，是主动地感受与兴发，而非懵懂无知地被动承受，个体情怀于是在主动中把握了生命的永恒脉动，那些主体介入的乐极生悲便有无量的个体尊严华光灿烂。是的，他们不能把握生，不能拒绝死，不能回避生命里的离合际遇，不能反抗家国盛极而衰的铁律，但他们却可借助生命的哀苦喜乐确证自身并非全然随波逐流，他们在匆匆如寄的生命旅程里至少可以把握他们在给定风景里的眼泪与笑容。他们感受，因而他们存在。
于是，归有光们总是深情的。因为深情，他们拒绝了时间的线性铁律，他们不以时间的流水本性计算生命，而以光阴的触动式记忆突破死亡与毁弃的封锁，在细节的累积搜索中获得无尽的片刻永恒。是以，老妪虽死，老妪的眷恋不死;母亲虽死，母亲的关爱不死;祖母虽死，祖母的期待不死;妻子虽死，妻子的影像不死……老屋如同尘封的胶卷，将所有这些生命的羁痕深埋于岁月的瓦缝风化的砖墙，而深情却如同生命的考古，以温热的情怀融化时间的封印，使他们得以在光照下显现复生。如此深情，自能生死人而肉白骨，他们在流变不息的时间里发现了凝固的光阴，他们在湮灭无着的生命里提取了无尽的细节，于是，存在得以永久性地敞开，在文字的间隙流传。
所以，“庭有枇杷树，吾妻死之年所手植也，今已亭亭如盖矣”，这不是物是人非的无奈感叹，分明是个体记忆经由万斛深情的书写突破死亡而昭示生命尊严的枝繁叶茂。
谐音的古诗范文4
【关键词】机械设备事故；原因分析；管理对策
近年来，随着建筑市场的不断升温，包括塔式起重机、施工升降机等大型施工设备使用率也呈倍数增加。但随之而来的是这些大型设备的安全事故发生率也有所上升，已引起各级政府相关部门的高度重视，并出台了一些相应的政策、规定。对此，笔者根据多年对安全管理的经验，对这些事故原因从管理上进行共性分析并浅谈管理对策，以供同行探讨。
一、大型施工机械使用规模的飞速发展
近年来，随着国家建设规模和经济发展水平的不断提高，以装备技术提高建筑施工机械化程度是当代施工经营者的必然选择。
1、是因建筑物高度、被吊体积和重量大、高空平面作业面积大及结构特殊等原因，没有大型施工设备的使用已无法进行施工；
2、是因工期紧，施工现场不投入大型施工设备已无法保证工程的施工进度要求；
3、是因建筑施工人均劳动力成本在不断增加，使用大型施工设备可以大大节省人工费用。
二、管理不适应使用规模的飞速圹展
生产安全管理的优劣应从“人、机、料、法、环”五个主要因素衡量，这五个因素与导致事故（事件）发生三个条件（人的不安全行为、物的不安全状态、处于不安全环境）紧密相关，其中的物就是“机”——设备，如我们的管理忽视了设备的管理，生产安全管理就给事故留下了空间。
近年来各地发生机械设备事故中，65%以上的设备事故是因为人为的违章指挥或违章操作所致，而35%左右的设备事故主要是因为机械维护保养原因或产品质量原因造成的。
血的事故的事实告诫我们：安全意识淡薄、重效益轻管理，抓进度松专业培训，人员素质低下，基本常识缺乏，设备管理工作不规范、不到位等是历次事故发生的根本原因。
三、规范性设备管理制度不健全
当前建筑业机械设备租赁管理没有一个行业规定（细则），租赁市场的不规范导致了企业设备和安全管理工作的不规范；安装、使用作业人员技术教育和培训机制还远没有达到适应市场化管理的要求。
对大型施工设备的技术创新没有得到足够的重视。以塔式起重机为例，多少年来，由于塔机本身的技术含量不高，除了塔机价格在逐年降低和具体的型号、规格等有所变化外，在提高安全使用可靠性、方便性等方面的研发成果，如：幅度、重量或力矩显示仪、风速仪、自动系统等有效的电子自动监控手段并未强制推广使用。
新的施工设备安装企业的市场准入门槛偏低。对于这些安装企业的专业资质考核，审查内容还主要停留在静态管理管理上，动态管理不到位。如领取“增项”起重资质证书相对单独领取要方便得多，而这些企业管理水平、技术能力究竟如何，有待于考证。
一些地区、企业对机械设备事故的处罚、处理不够重视。虽然某些设备事故未有人员伤亡，但事故性质恶劣，对事故的原因分析和事故教训不能宣传教育到每个作业人员。
一些施工企业设备管理工作松懈，无设备管理活动。这些企业的设备管理程序在基层作业班组几乎消失，加之为考虑经济效益，节约人员成本，少有甚至没有专职人员对大型施工机械实行系统管理，从而加剧了企业设备无专人管，管理无章法，管理活动无法开展，设备完好率无保证，操作人员业务水也无法提高。
一些监理单位工作侧重于进度质量和效益，对安全监理特别是设备安全监理工作不到位、不深入，对施工单位提交的大型机械安拆和使用的专项方案在审批意见上难以提出有效的修正意见和建议。
四、大型施工机械设备安全的管理对策
在当前条件下，所有参与建筑活动单位都必须以安全为主线确立设备管理工作的思想，充分发挥机械设备应有效能，杜绝大型设备的恶性事故发生，这既是行业健康发展的要求，更是构建和谐社会的要求。
1、政府主管部门要建立健全科学合理的资质审查管理机制，从企业领取专业（租赁、安装、拆除、作业）资质证书的源头抓起，严格对申领设备专业资质证书的专业公司从设备管理组织机构、设备专业管理人才配备、设备操作人员培养等方面进行考核与审查，严把企业申请准入审批关；
2、充分发挥设备安全管理行业协会指导作用。行业协会是政府与企业的桥梁和纽带，在开展安全和设备管理活动过程中，行业协会应规范企业设备管理制度，检查和指导企业设备管理行为，研讨设备维修保养经验，帮助企业实施和开展设备管理活动的规范性，这也是行业协会的重要职责。
3、要严格检测机构的监督管理，端正行业管理作风，严格执行检测标准，检测程序，定期开展检测机构市场行为和机构人员变动等管理情况的检查，定期组织检测人员进行知识更新，考核被检测设备“常态安全管理”的内在质量。
4、政府主管部门、行业协会对持施工设备专业（租赁、安装、拆除、作业）资质证书公司的管理及持证公司的自身管理。
①设备管理组织机构。施工设备专业公司必须设有设备管理部门，建立设备管理网络，管理部门及网络人员对设备管理必须有明确的分工，确保设备管理系统的有效运行。
②设备专业管理人才配备。施工设备专业公司必须设有技术、施工部门并配备具有技术知识管理人才，他们能熟练撑握设备的工作原理，设备安装、拆除技术及技术方案的编制和设备使用的指导工作。
③设备管理档案、台帐。设备管理部门必须建立设备台帐，即：各台设备履历档案、设备清单、设备运行记录（按工程项目与期间）、设备大修记录、设备检测记录、设备安全性评价记录、设备报废更新记录等
④建立培训考核基地，规范培训，严格考核，持证上岗。政府主管部门、行业协会按地区建立培训、考核基地，按规定对机操人员完成理论、实践培训、见习考试程序规定，完善起重作业发证工作。同时，兼顾对原持证人员定期开展知识更新、安全年检考核工作，对作业人员的日常制度考核，对违章作业、不持证上岗和造成事故有记载的作业人员按规定实施扣分、吊证及重新培训处理的强制有效方法。
5、事故查处，坚持原则决不手软。
①要坚持事故处理的“四不放过”原则。
②不论是否有人员伤亡，只要性质恶劣、影响严重的大型机械设备事故，必须进行通报，以避免同类事故的重复发生。
③要加大事故处罚力度，使事故发生企业、当事人始终牢记教训。
④发生事故的单位除了“扣证”、“停业整顿”、“规定时间内停止承接新任务”外，还应与年审年检挂钩，进一步明确吊销、降低资质的具体规定。
⑤完善事故统计网络，严肃事故上报统计制度，公开事故信息，奖励事故举报。对迟报、漏报、谎报和瞒报事故的现象要加倍处罚。
谐音的古诗范文5
成功做项目的感谢信成百上千来自“香椿芽”的数第一
每天上班，笔者最喜欢做的一件事就是拆开众多读者给社里寄来的良言信函，以及他们通过杂志介绍的项目获得成功而给我们的感谢信。我们为这些读者的成功感到欣慰，感到自豪，这说明我们的努力没有白费。就杂志上刊登的项目来说，我们对每个提供项目的企业的证件――审核，目的尽量降低读者的投资风险。这么多年来，因项目成功给杂志社寄来的成百上千的感谢信中，排在榜首的当然要数做香椿芽项目的。为给读者创业启迪，我们选取了其中一位成功学员，对他进行了电话采访，并将他的创业故事和经历刊出来。
误入迷途的创业者处在十字路上李老师为其选项指点迷津
陈志平是安徽某国企的下岗职工。下岗前多年的大锅饭，让他的生活无忧无虑，下岗之后他感到前所未有的压力。下岗后他做过大大小小很多项目，但都没获得成功，最后负债累累。常言说，穷是饥，饿是吵。去年6月他的结发妻子因他穷与他离了婚。
陈志平不甘心，发誓要找个赚钱的项目证明自己。
喜欢买经济类杂志和报纸看的他，从2011年8份以来就关注杂志报道无土栽培香椿芽这个项目。当他得知李老师要到山东济南参加中小型项目洽谈会并且是惟一冠名单位时，当即拔通了李老师的电话。在电话中他将自己创业失败和家庭破裂的经历从头到尾讲了一遍。李老师听后，告诉他：
“做项目必须量体裁衣，要根据自己的财力、能力来判断自己是否能做这项目；做生意要选对行业，选对市场，选对产品，选对客户，这是成功者四大要素。你现在不要走过去的老路，农民出身的你虽然在城市工作多年，但你没做过经营，对生意场上的事一概不懂，你不能像以前那样去搞不熟悉的餐饮业。当然我现在没有劝你做我的项目，但今年10月山东济南的展会你值得去一下。那里项目多，你去看看有没有更适合你的项目，如展会上没有其它适合你的项目，你再做香椿芽也不晚。”
陈志平听了李老师善意的建议后说：“李老师，不少杂志都介绍您是创业致富的带头人，我觉得你更是一位备受人们尊敬的慈善商人，不刻意诱导他人，处处为他人着想。”
2011年10月29日，陈志平来到山东济南展会。9点整一进展会，他就找到了李老师的香椿芽展位。由于刚开馆，不少展位的人还很少，可李老师的展位前却挤满了观展者。大家几乎都是慕名而来的，有的还是看到展会第一天李老师被山东电视台现场采访的节目而急急忙忙赶来的。高大魁梧的陈志平看到展位里的李老师正在微笑着为众人讲解：“一盘香椿芽成本才两元左右，成品可以卖到十六七元。十平方米的房间或阳台，一人一天工作两小时，可持续生产三四十盘香椿芽，利润均在三四百元。在常年为学员技术指导的情况下，我还能永久性提供生产用的优质良种。有的人教学是以骗他人学费为目的，炒作项目，根本就不生产种子，而我教学为的是将自己的香椿林每年生产的上百吨香椿芽种子销售给学员。香椿芽项目的运作是双向的：学员学完技术后加工香椿芽每天在赚香椿芽种子与成品香椿芽的差价钱，而我是在常年赚每位成功学员购种钱与生产种子成本的差价钱。因为我是以共赢为目的，所以我的香椿芽项目越做越红火。
众多项目只选香椿芽多年的致富梦想终实现
李老师刚刚讲完这段话，在喝了――口水之际，站在前排一位有口吃的男子的脸被憋得通红，他结结巴巴地问：“李……李……李老师，我……我想向您咨询几……几……几个问题。”口吃男子还想讲下去，站在他身边的一位中年妇女说：“李老师您好!真不好意思，他是我老公，平时讲话就结巴，遇到生人时讲话更是口吃得厉害，我代他提问好了。请问香椿芽生长周期是多少天?十五六块钱的售价酒店能接受吗?区域是怎样划分的?我们夫妻俩能做成功吗?”
李老师回答：“香椿芽生长周期为25天左右，最佳出售期为15天左右。在推销前先读懂我为学员们编写的《香椿芽营销大全》，到每家饭店推销时，把我为学员提供的高级塑封精美的彩色菜谱与香椿芽(第一次免费送一盘试用)一起送上。饭店服务员将特色菜推销给顾客，顾客见到这么好的美味佳肴，他们肯定会选择它。第一次把菜谱和香椿芽送给饭店就等于我们把香椿芽销了出去了。你们想想：饭店一年四季推出香椿芽特色菜增加了收入，老板有理由拒绝吗?
李老师又接着说：“学员生产香椿芽不要担心会打价格战，因为每个地区级的县，或是县级市我只教一名学员。我这样做对学员有利，对我也有利，因为学员长久生产香椿芽，我也就可以永远赚到种子成本与售价的差价钱了。技术是我教给你们的，种子是我卖给你们的，大家种不出香椿芽我没有什么好解释的，就等于我在骗大家。但反过来大家想一想，有哪个骗子敢连续5年共10次来山东参展!事实胜于雄辩，不再解释，大家清楚不过了。”
陈志平没想到李老师话音刚落，参观者响起一片热烈的掌声。掌声过后，一位中年妇女带头交了定金，签下了自己所在县的名额。紧接着，又有10来人定项。陈志平用心看看，周围虽然有很多展位，但他们的展位前没有几个人。心里有底，他没有再到其它展位看了，毫不犹豫地加入了交香椿芽定金的行列。
如今陈志平由起初每天三四十盘的产量，已增加到100多盘，每天净赚1000多元。陈志平终于实现他下岗后多年没有实现的创业梦想。
谐音的古诗范文6
【关键词】 脑缺血；银杏；川芎；骨髓基质细胞
以往研究证实，骨髓基质细胞(MSCs)静脉移植治疗大鼠局灶性脑缺血疗效确实，可降低脑梗死体积，促进神经功能障碍的恢复〔1〕，静脉移植MSCs最佳时间窗是在缺血发生后3～24 h，临床在最佳时间窗内应用MSCs治疗局灶性脑缺血可达到理想效果。川芎活性成分川芎嗪和阿魏酸具有扩张血管，抑制血小板活性作用〔2〕，银杏活性成分为黄酮类和萜内脂类，具有扩张血管、增加脑血流、抗氧化、抗自由基等脑保护作用〔3〕。本研究采用复方中药银杏、川芎制剂联合MSCs治疗大鼠局灶性脑缺血，探讨银杏、川芎制剂是否可以使MSCs治疗最佳时间窗延后，是否能促进MSCs在脑病灶内分布、分化。
1 材料与方法
1.1 动物 3月龄SpragueDawley(SD)雄性大鼠30只，体重230～280 g，由吉林大学新民校区实验动物中心提供。
1.2 方法
1.2.1 试剂 MSCs：Ori Cell TM间充质干细胞冻存标本(广州赛业生物科技有限公司)，复苏后调整细胞浓度3×106。复方中药制备：银杏叶提取物、川芎嗪按20∶5(5 mg/ml)制成无菌液(长春长云生物制药股份有限公司)。BrdU(5溴脱氧尿核苷5Bromo2deoxyuridine)美国Sigma公司。BrdU〔Bromodeoxyuridine 溴代脱氧尿(嘧啶核)苷〕、GFAP(胶质纤维酸性蛋白)及一抗，SABCFITC均购自武汉博士德生物工程公司(博士德公司分装)。
1.2.2 模型制备 参照Zea Longa法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。切开一侧颈部皮肤，手术显微镜下分离右颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉，接近颅底部位电灼后结扎切断颈外动脉，分离颈内动脉至鼓泡处，并暴露出翼腭动脉。在颈内动脉远端备线并放置动脉夹，在近心端距颈总动脉分叉0.5 cm处用7号注射器针穿刺颈总动脉，注入少许肝素钠盐水，插入40尼龙线23～25 mm，进入规定深度遇轻微阻力后停止，扎紧备线，栓线在皮肤外留有1 cm长线头，缝合皮肤。MCA阻断后2 h将栓线撤至颈总动脉，麻醉苏醒后大鼠左侧前肢体瘫、走路向一侧偏斜、右眼睑低垂为局灶性脑缺血再灌注制备成功模型。随机分为对照组、MSCs组、MSCs+中药组，每组10只。
1.2.3 给药方法 各组大鼠在规定时限前3 d开始腹腔内注射BrdU(50 mg/kg)，每日2次，共6次。制备局灶性脑缺血再灌注模型后2 h，对照组静脉注射PBS 2 ml，MSCs 组尾静脉注入MSCs 2 ml。MSCs +中药组于制备局灶性脑缺血再灌注模型后5 h静脉注入银杏、川芎制剂2 ml(5 mg/ml)，每日2次，48 h尾静脉注入MSCs 2 ml。
1.2.4 行为学检测 治疗后5、7、14 d用姿势反射实验和肢体不对称应用实验〔4，5〕评价大鼠神经功能障碍严重程度。肢体不对称应用实验：用于测试的器械为一直径18 cm、高30 cm透明的玻璃圆桶，正常大鼠在圆桶中会不时站立，用双侧前肢交替或同时触及桶壁，应用双侧前肢的频率应该相等。有缺血性脑损伤的大鼠偏瘫侧肢体应用较少，观察并记录双侧前肢的应用情况，对每只大鼠每次记录20次活动。以肢体应用的百分率计算最后得分，得分=(R-L)/(R+L+B)×100%，R:右侧前肢(健侧)独立应用次数;L:左侧前肢(患侧)独立应用次数;B:双前肢同时应用次数。姿势反射实验:距地面1 m提起鼠尾，观察其前肢屈曲情况，每次每只大鼠记录20次活动，评分标准：0分(正常)，双前肢完全伸展；1分(轻度异常)，左前肢贴向前胸，右前肢伸展；2分(重度异常):左前肢贴向前胸，上半身卷曲。每只大鼠每次的最后得分为20次评分的平均分。
1.2.5 免疫组织化学检测 各组大鼠开胸，行内固定，以视交叉和其后4 mm处两点行冠状切片，再次甲醛固定，经酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。使用双标免疫组化染色法确定由骨髓基质来源的细胞，按照SABCFITC检测试剂盒指导使用。切片用Zeiss LSM510激光扫描共聚焦显微镜检测切片，细胞核绿色，细胞质呈玫瑰红。
1.3 统计学分析 所有数据以x±s表示，应用SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析(ANOVA)，如有统计学意义进一步作StudentNewman Keuls检验，进行两两比较。
2 结果
2.1 神经缺损评分 MSCs组与MSCs＋中药组比较，两组大鼠神经缺损评分无明显差异。与对照组比较，第7天和第14天细胞移植组较对照组神经功能有明显改善(P＜0.05)。
2.2 组织学改变 见图1。组织病理切片中均有BDNF与GFAP表达，MSCs组和MSCs+中药组BDNF、GFAP染色阳性细胞明显增加，对照组阳性率明显下降。双标免疫组化法表明，一些BrdU阳性细胞表现神经胶质标记物GFAP阳性反应。
图1 免疫组化检测BDNF阳性细胞（略）
3 讨论
中药可诱导骨髓MSCs的定向分化，但在局灶性脑缺血性损伤时对MSCs的作用需要进一步研究。研究发现，有些中药成分通过影响MSCs分泌一些细胞因子促进造血干细胞的分化增殖，或者促进MSCs和造血干细胞的黏附而起作用，从而调节造血干细胞的增殖分化〔6〕。现代医学研究证实，中药有效治疗脑缺血性疾病很大程度上与通过对MSCs的影响，促进骨髓细胞的增殖分化，调节造血干细胞的增殖作用有关。川芎嗪是从中药川芎根茎中提取的有效成分，具有活血化瘀、扩张血管、抑制血小板聚集和改善微循环等作用〔7〕。有研究显示，川芎嗪可能通过促进成年大鼠海马SGZ增殖，显著减少大鼠脑缺血边缘区神经元的凋亡而改善局灶性脑缺血所引起的神经功能缺失〔8，9〕。川芎嗪能提高缺血侧顶叶皮质的神经元数量，增强FAK(聚焦黏附蛋白)的表达，从而促进MSCs的增殖并且增强MSCs的黏附作用〔10，11〕。银杏叶制剂对急性缺血性脑血管疾病有明显的治疗作用，研究发现，银杏叶提取物EGb761治疗脑梗死，可使脑梗死体积下降约40%〔12，13〕，治疗机制主要包括对鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，降低细胞凋亡，降低脑谷胱甘肽过氧化物酶抑制作用和三磷酸腺苷酶活性，减轻脑海马区亚细胞损伤〔14～17〕。本研究表明，联合银杏叶与川芎嗪制剂治疗脑缺血损伤，综合两种药物的作用可达到治疗目的。
MSCs在脑缺血损伤修复中起重要作用，可促进神经系统缺损修复，降低中风后的功能缺失〔18〕。有人将 MSCs通过静脉途径注射后治疗脑缺血性损伤，MSCs可选择性的进入缺血脑组织中，对缺血性脑损伤导致的神经功能障碍有明显的治疗作用〔19〕。MSCs刺激内源性星形细胞信号，或改变缺血环境，促进脑重新塑形，促进中风后神经功能改善〔20〕。Zhang〔19〕用人MSCs治疗大鼠局灶性脑缺血，发现在缺血病灶部位血管生成显著提高，并认为hMSCs是新生血管的重要活化剂，hMSCs通过损伤脑组织发挥作用，介导内源性VEGF和VEGFR2表达增加，新生血管提高缺血灶周围组织灌注。动脉内移植大鼠MSCs，在缺血早期阶段恢复脑血流和血脑屏障，治疗效果与移植的MSCs呈数目依赖关系〔21〕。本研究表明，对照组病灶内表达BDNF阳性细胞表达较少，而MSCs治疗组和中药＋MSCs治疗组病灶内BDNF阳性细胞表达明显丰富。
综上，局灶脑缺血损伤后2 h应用MSCs，其结果与缺血后用中药治疗2 d再应用MSCs无明显差别，说明复方中药对脑组织有保护作用，对MSCs治疗脑缺血性损伤有明显的促进作用，延长了MSCs的治疗应用时间，并能促进神经功能障碍恢复。
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