前言：中文期刊网精心挑选了仰望大树范文供你参考和学习，希望我们的参考范文能激发你的文章创作灵感，欢迎阅读。
仰望大树范文1
北京的秋十分短暂，从十月底开始，仅仅一个月时间，这个大都市如同走T台般刹变风格，收起夏日的雷厉风行，瞬间变得雍容华贵。让人敬畏且耐人寻味。瑟瑟秋风把人潮人海收缩在角落里静候冬天的讯息，而盛装的金黄却悄然摆阵，退去繁华，古朴的人文气息尽显无遗。一簇簇的黄与红揉碎阳光，为自己镀上绚烂的颜色。阳光、蓝天、红叶，用北京的话说，那叫“齐活”，所以秋天成了北京最美的季节。特别是那金色的银杏，秋风扫过，落叶旋转而落，景色美得可以让每位路人驻足。
北京市内赏秋的地方很多，各个公园有水有树的地方秋色都不错，但金黄的古银杏树与北京老建筑搭配在一起才算最出味道。本刊特意选择北京市内九个具有代表性的秋景地推荐给大家。
TOP1.
钓鱼台国宾大道
虽说北京最有名的是红叶，但最美的却是银杏叶。北京地区的银杏种植历史比较久远，很多地方都有银杏树，但最美最有名的银杏大道还是要数钓鱼台国宾馆门前这块儿，据说这里的银杏是北京最早种下的一批，现在钓鱼台可以说是北京观赏银杏的一个地标。
交通：此处没有停车位，最好乘坐公共交通前往，坐1号线地铁到木樨地下车，或114路、102路、103路、特6、320路等公交车在钓鱼台站下车。
温馨提示：这两年由于去钓鱼台看银杏的人太多，地面“银杏地毯”的效果已经开始大打折扣，但树上的银杏效果还是不错。著名的玉渊潭公园就在旁边，看完银杏可顺道去转转。
TOP2.
地坛公园
地坛公园的银杏大道远近闻名，从公园北门进入，两排高大的银杏树便让你一览无余。秋意未浓时，这里已有很多游客观赏银杏，摄影爱好者也拿着长枪短炮一取美景。在这里可漫步在银杏大道，也可带着孩子在游乐园玩耍，老人可听公园里的票友唱戏，或是跟着舞蹈队跳上一段。
地址：北京市东城区安定门外大街。
交通：104路、108路、124路电车地坛站，地铁安定门站下车，自驾车可停在西门旁地坛体育场内。
温馨提示：赏银杏从北门进便可直接到达银杏大道。
地坛公园简介：地坛又称方泽坛，是古都北京五坛中的第二大坛。始建于明代嘉靖九年（公元1530年）是明清两朝帝王祭祀“皇地o神”的场所，也是我国现存的最大的祭地之坛。
TOP3.
三里屯东五街
三里屯东五街是北京的使馆区，道路两旁齐刷刷地种着两排银杏树，从街西口到街东口。相比公园景点的人来人往，这里显得严肃了很多，站岗的门卫会目视着你的一举一动。银杏树的美景在这里显得更加美丽。这里真是北京一片少有的净土，除了偶有的出租车外，一个行人也没有。漫步在三里屯东五街，特别像是在某个电影中的Ending画面之中。
交通：302路、300路亮马桥站，113路、758路、416路三里屯站下车。
温馨提示：如果不想惹不必要的麻烦，最好不要拿着相机拍太多。因为不通公交，因此下车后都需要步行10分钟到达；三里屯附近坐几站车可以到朝阳公园，走几步可以到著名的三里屯酒吧街和商业区。
TOP4.
景山公园
只要来北京的都会到景山上走一遭，因为那里能俯视全城，看金碧辉煌的古老紫禁城和现代化的北京城。如果秋日走上景山顶，看的不是银杏，但那满眼的秋黄与红色的故宫墙壁交相呼应，历史的沧桑与厚重让人更加寻味。景山公园内也有银杏，也许是因为某个皇帝在这里自缢，所以人们不是很喜欢在这里欣赏景色，但这般静谧正好迎合了摄影者的口味。
交通：5路景山西街下，58、60、111、124路景山东街下车，101、103、109、124、810、685、814、846路故宫下车。
地址：北京市西城区景山西街44号。
温馨提示：秋季景山上有很多柿子挂在树上，一片片的很好看。
TOP5.
颐和园小湖边
秋天的颐和园是北京秋天美景的一处，园中山水和多层次变幻的植物，展现出了秋天北京的美丽景致。银杏树在颐和园的西南角，石舫附近。银杏树共有三颗，分布在小道的两旁。两颗大些的在靠近水边，稍小一些的靠近一个院门。扇形的树叶落在银杏树附近的绿地上，绿草地上散落着的一堆堆、一片片小金叶很是好看！
地址：北京市海淀区颐和园路。
交通：乘地铁四号线，北宫门下车即到（北宫门）。也可在西苑下车，经由同庆街西行500米到达颐和园东宫门（正门）。
门票：淡季20元（11月1日―3月31日），旺季30元（4月1日―10月31日）。
TOP6.
中山公园
在中山公园入口，便会看到好几株巨大的银杏树，好像一顶顶黄龙伞分外耀眼。清风吹拂，落叶飘洒，纷纷扬扬，绿茵如毯的草地铺满金色的叶片。中山公园还经常会有一些花展，可以顺道留意。
地址：位于北京市中心紫禁城南面，天安门西侧。
交通：地铁天安门西站下车，出B口向东步行5分钟，进中山公园南门；如果自驾车的话，晚18点之前，车辆可停放在中山公园西门公共车场（约30个车位）；晚18点之后，车辆可停放在中山公园内停车场（约30个车位），或停放在公园东门外（约20个车位）。
TOP7.
清华北大
走进清华南门，正对着是一条通畅的南北大道，沿大道直行，及至南北大道与东西大道交汇的路口，是一个宽阔的十字路口，从十字路口西行，是一条银杏成行的大路，此路有小小的弧度，到了秋天，这条路就是一条燃烧的金黄色梦幻大道。清华另一个银杏地就是清华大学宿舍五号楼了，这里是过去清华的本科女生居住楼之一，配上楼下的银杏，别有一番气质。秋天，树上的银杏叶片全部变成金黄，一阵风之后就落在地上，整个小院子都铺满了黄灿灿的银杏叶。
北大西门的两株巨大古树，已经成了北大秋景的标志。西门前共有4棵银杏树，不过后面的两棵总不被注意。前面两棵大树实在太老了，老得没人能说清到底是哪年哪月谁种的了，不过据说都有300多年历史，可从来不结果，因为是雄的。看银杏的时候顺便看看树边的华表，其实不是一对儿，当年运错了，可也就将错就错了。
交通：直接到达清华大学南门的车很少，可以先到西门，然后去南门看银杏。直达西门的公交很多，有特4、特6、运通105、运通205、310、320、331、365路等，或者地铁13号线到五道口下车，向西步行十分钟左右即可到达清华东门。去北大看银杏可乘坐718路、332路，在北京大学西门站下车。
地址：北京市海淀区学院路。
TOP8.
国家图书馆
很多人并不了解，位于海淀区的国家图书馆是历史上的元代大护国寺，因此在这里也藏身两株有700多年历史的古银杏树，矗立在旧的国图主楼西侧，它们被一片草地包围着，像一对从容的老者，春华秋实，淡定面对历史变迁。
交通：可乘坐地铁4号线或105路、106路、323路、717路等公交车国家图书馆站下车。
地址：北京市海淀区中关村南大街33号国家图书馆。
温馨提示：国图开放时间为周一至周五9：00-21：00，周六至周日 9：00-17：00，法定节假日不闭馆。
TOP9.
郭沫若故居
什刹海柳荫街的恭王府鼎鼎大名，“一座恭王府，半部清代史”，这句话更成了恭王府门口排队扎堆儿的三轮车师傅的口头禅。殊不知在它对面的郭沫若故居则是一处赏银杏最佳的幽静之地，仅一墙之隔，马路上的熙来攘往、热闹喧哗，全都听不见了。坐在院内长椅上，只有阳光和鸟声，坐在树下看书，阳光洒下来，宁静而温暖。宅院内有银杉树、松柏、海棠、银杏等等，都是郭老夫妇当年亲手种下的。
交通：乘13路、107路、111路、118路到北海后街下车，路北向西。 温馨提示：郭沫若纪念馆9：00-16：30，周一闭馆，门票20元，学生半价。另外，附近的辅仁大学也是个闹中取幽的去处
TIPS
既然是来感受地道的故都秋味儿，那肯定要住在四合院才够味儿。这些地方你可以考虑：
北京清风雅筑四合院客栈
地址：北京市西城区赵登禹路大茶叶胡同20号
价格：六人房60元/床；三人房80元/床；大坑普房160元/间
联系：010-66160200
推荐理由：坐落于北京白塔寺保护区里传统的老北京胡同之中，是一座具有北京特色的四合院客栈。房间不大，但精致，古典的家具，中国传统的窗花、剪纸、石雕，还有原创水墨画，北京的传统与古典，尽在其中。
北京易静小栈
地址：北京市东城区花梗胡同23号院
价格：多人间 70元/间；标准间 298元/间
联系：010-64004560
推荐理由：院里有一株百年海棠，还有一颗巨大的香椿树，四周绿树环绕，在这里可以感受繁华都市中那一院清幽。
北京王家四合院客栈
地址：北京东城区东四六条月牙胡同10号院
价格：大床房298元/间
联系：010-64021671
推荐理由：坐落于北京东四历史胡同保护区核心，紧邻地铁五号线路站。客栈全部按中国古典建筑风格装修，不论从择地，定位，尺度，选材及用料都极尽讲究，既体现了古老的中国建筑的传统和风俗，又严格地遵循着指导中国千百年来的风水理论。
北京合家立四合院旅馆
地址：北京东城区鼓楼东大街西公街1号。
仰望大树范文2
寻找“海洋巨无霸”
杰克和吉娜是葡萄牙著名的海洋生物学家，他们不仅是工作上的合作伙伴，还是一对相亲相爱的夫妻，他们一年中至少有一半时间都在海洋考察船上度过。
2006年初，杰克和吉娜接到葡萄牙一家海洋生物博物馆的邀请，希望他们能协助捕捉一条身长至少超过12米长的大王乌贼做成标本放在博物馆里供人参观。3月上旬，一行9人的捕捞队从里斯本的港口乘坐着一艘科学考察船出海了。
对于大王乌贼，杰克和吉娜并不陌生，迄今人类所发现的最大的大王乌贼有22米长，重达3吨，杰克和吉娜决心打破这一世界纪录，捕获到更大的大王乌贼，他们这样做的打算不仅仅是为了可观的奖金，更是希望借此来唤起人们对这种海洋奇异动物的重视和保护。
杰克和吉娜考察的这片海域位于大西洋上的公海，平均深度有2000多米，是大王乌贼理想的栖息地。
3月15日，天气晴朗，能见度高，海面上风力微弱。科考船的船长纳桑卡已经下定决心，如果今天还是一无所获的话，他将下令放弃这次捕捞大王乌贼的计划，启程返航。
这天中午，船员们刚刚用过午饭，突然船身猛地一震。难道是触礁了？大家纷纷跑到甲板上去看，但船并没有任何触礁的迹象。那么，是什么样的力量使科考船发生如此剧烈的震动呢？杰克心中又惊又喜，难道是撒下的拖网捕获到了大王乌贼？根据科考船摇晃的程度，如果确实是网住了大王乌贼的话，那么这只海洋巨兽身长至少在15米以上。
一个船员跑到船舷边去查看，当他刚把脑袋探出去，一条粗大的触手就突然从海面伸出来，把他卷进了水中，他只来得及发出一声惨叫就消失了。大王乌贼可怕的触手不断地席卷靠近船舷的一切物体，把它们带下海里，激起片片浪花。
为了保持标本的完整性，船员们不敢用刀砍，不能用枪击，只能用棍棒打击那些触手，使它负痛缩回去。有几个船员不小心被大王乌贼的触手缠绕，等其他船员好不容易把他们解救出来时，那些遭大王乌贼用吸盘袭击过的船员身上已经被吸附掉了一块块巴掌大的肉，露出血淋淋的伤口，被触手缠绕过的地方也是伤痕累累，惨不忍睹。而杰克和吉娜一边和大王乌贼搏斗，一边用摄像机拍下这一幕幕真实而珍贵的镜头，以便日后向世人展示这种凶猛无比的海洋巨兽的神奇之处。
海下生死搏斗
等攀附在船舷上的大王乌贼的触手都缩回去了后，船长纳桑卡赶紧命令船员启动机器，将拖网拉上来。当拖网被拉上水面，人们才发现里面有一只身长足有20米的大王乌贼，它依然在奋力挣扎，夹了钢丝的拖网已经被它咬出了好几个窟窿，那些触手正是从窟窿里面伸出来的。
就在这时，科考船又是猛地一震，不过这次是船真的出事了，由于慌乱中操作失误，船不慎搁浅在一片珊瑚礁上。更倒霉的是，绞动拖网的机器装置也发生了故障，而想靠人工把至少有2吨重的奋力挣扎的大王乌贼拉上船是根本不现实的，大家只好眼睁睁地看着拖网又缓缓淹没在海水中。
所有人都明白，如果不能及时把捕获到的大王乌贼拉到船上，那他们这些天来的全部努力和血汗都将白费。从科考船的颠簸程度来看，那只大王乌贼仍在拖网里挣扎，它已经咬开了几个窟窿，要是它这么持续不断地挣扎下去，它迟早会逃之夭夭。必须果断地采取补救措施，现在要想捕获活的大王乌贼已经不太现实，只能退而求其次，用麻醉枪击昏那只大王乌贼，这样等绞动拖网的机器装置修好后，他们还可以将它拖上船。可是派谁去水下制服大王乌贼呢？
杰克和吉娜自告奋勇地站了出来，他们是出色的潜水员，又熟悉大王乌贼的习性，万一出现了什么意外情况也比较好处理。船长纳桑卡紧紧地握了握这对夫妇的手，科考船上剩下的所有船员也都一一上前和他们俩握手，眼里充满了敬佩的目光，因为大家都知道，海底洋流变幻莫测，情况十分复杂，垂死挣扎的大王乌贼又随时可能给人致命一击，所以去水下制服它是件极其危险的事情，稍有不慎，就可能命丧海底。
杰克和吉娜穿上潜水服，带上潜水装置就下到了海里。在下潜前，夫妇俩紧紧地拥抱了一下，他们作了最坏的打算，因为这也许是他们最后一次亲密拥抱。其实在每次海上危险作业前，夫妇俩都要进行一次这样的拥抱和接吻，这似乎成了他们结婚近10年来表示恩爱的一种习惯。
海面上阳光灿烂，海水里的能见度却不好，10米左右就是漆黑一团了，杰克和吉娜只能借助头盔上的潜望灯辨别周边的物体，不时有各种各样美丽的鱼从光晕中游过，色彩斑斓的珊瑚像树林一样矗立在四周，如果不是因为要完成一件危险的任务，他们是很乐意欣赏这海底世界的美景的。科考船上的拖网深度大概在水下60米左右。不久，他们就循着翻腾的海水找到了那只被拖网束缚住了的大王乌贼，这时，他们才看清是一只母大王乌贼。此刻，它似乎已经精疲力竭，挣扎不那么剧烈，蜷缩成一团躺在拖网里，偶尔才舒展一下触手，惊得四周的鱼儿飞速逃窜。
一切进行得似乎比较顺利，杰克和吉娜一左一右举起麻醉射枪瞄准。就在这时，吉娜感觉身躯被什么东西重重地抽打了一下，她一下子失去重心，麻醉射枪掉到了深不可测的海底。她回头一看，顿时吓得魂飞魄散，一条比拖网网住的那只还要大得多的公大王乌贼就在她后面，正瞪着凶恶的大眼睛，向她伸出了狰狞的触手。杰克也发现了吉娜面临的危险，他赶紧游过来，迅速向那只大王乌贼开枪射击，但遗憾的是，慌乱中打歪了。杰克调整好姿势，又朝那只大王乌贼举起了枪，但一股突然涌出的海底暗流将他冲到了一边，麻醉弹再次射偏。
这时，吉娜已经被大王乌贼的一只触手缠绕住了腰部，触手的力量非常大，吉娜怎么也挣不脱。杰克看见大王乌贼和吉娜纠缠在一起，不敢随便开枪，只好游过去，拔出用来防鲨的潜水匕首向缠住吉娜的触手刺去，大王乌贼负痛松开了被刺伤的一只触手，但另一只触手又挥舞了过来，吉娜猫腰躲过，拔出自己身上携带的潜水匕首，用力反手一割，大王乌贼的这只触手也被割伤，大片蓝色的血液流了出来(注：大王乌贼的血液中没有血红素，含血蓝蛋白，所以血液呈蓝色)。但大王乌贼的头上一共有10只触手，部分触手受伤后，它还可以继续用剩下的触手攻击。
杰克的麻醉射枪在慌乱中被大王乌贼的触手打落。为了避免再被大王乌贼的触手缠绕住，杰克和吉娜不断地挥舞着潜水匕首，因为海水的压力比较大，他们又穿着笨重的潜水服，所以他们很快就筋疲力尽。这个时候，被拖网网住的那只母大王乌贼看见同伴来救它了，也兴奋起来，从拖网的窟窿里不断挣扎着伸出触手，随时准备给在它周围惊慌打转的杰克和吉娜以致命的打击。
深海情歌一曲
杰克和吉娜四处躲闪，拼命抵抗，现在他们只得放弃原定计划，寻机逃命，可是为了避免致命的减压病，他们又不能快速上浮，而大王乌贼却张牙舞爪紧紧追着他们不放，似乎不将他俩撕碎绝不罢休。慌乱中，吉娜向附近的一个珊瑚洞穴游去，这个珊瑚洞穴外面的洞口比较大，刚容一人通过，但里面就越来越窄，根本不能进去。吉娜是倒退着进洞的，刚一进去，她背负的潜水瓶就卡在了洞里狭窄的岩壁上，整个身体顿时动弹不得。
从吉娜被卡的位置到洞口只有不到五米，大王乌贼十来米长的触手完全可以伸进来把她绞死。杰克伸手去拉吉娜，但没有拉动，而且他不敢过分用力，担心把氧气筒扯脱。杰克徘徊在洞口，心急如焚。吉娜知道，她已经无法逃脱，如果杰克再不逃走，两个人很可能会同归于尽。吉娜向杰克打着手势，示意他不要管她，赶紧逃命，但杰克却好像没看见，继续小心翼翼地拉着她，守护着她，还用手势示意，宁愿一起死，也绝不独自逃命。吉娜的眼眶湿润了。
眼看着大王乌贼一步步逼近，杰克和吉娜绝望了，但就在此时，他们看见那只大王乌贼突然转身，再定睛一看，原来是一条巨大的抹香鲸游了过来。抹香鲸喜食大王乌贼，但两者遭遇，常常有一场生死之战。抹香鲸硕大的鱼头像是一颗超级导弹，它朝拖网里的那只母大王乌贼扑去，血盆大口已经张开，杰克和吉娜都知道，抹香鲸牙齿的力量大得足以将拖网连同网中的母大王乌贼一起撕成碎片。但那只公大王乌贼却奋不顾身地阻断了抹香鲸的进攻，它的触手和吸盘死死地缠住了抹香鲸的头，抹香鲸则奋力挣扎，试图咬住大王乌贼的触手。浊浪翻滚，场面壮观，大王乌贼的触手已经被咬断了好几根，而抹香鲸的身上也是遍体鳞伤，鲜血从它的伤口喷涌而出，染红了周边的海水。
20多分钟后，抹香鲸终于占了上风，它巨大的尾鳍将那只公大王乌贼打得晕头转向，然而，困在拖网里的母大王乌贼却不允许抹香鲸将自己的伴侣伤害，它挣扎着用触手去袭击敌人，抹香鲸被激怒了，又掉头扑向它，但那只公大王乌贼稍稍回过神来后，忍着伤痛，继续向抹香鲸发起了攻击。就这样，抹香鲸在两只大王乌贼的轮番抵抗中浴血奋战，一下也讨不到太多便宜。杰克一边观看着大王乌贼和抹香鲸的血战，一边尽力帮吉娜脱险。他们都知道，大王乌贼体内直肠末端长有一个贮备墨汁的墨囊，当它逃生的时候，能持续五六次喷出墨汁，把上百米范围内的海水染黑，使对手受惊迷惑。这种墨汁里含有麻醉剂，可以麻醉对手的嗅觉。如果那只公大王乌贼采用此绝招的话，它完全可以独自逃生，但为了营救自己的伴侣，它甘愿留守在这里坚持以命相搏。
仰望大树范文3
【摘要】 目的 研究bcl2、bax凋亡相关基因在低氧处理大鼠肺动脉中的表达，探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施。方法 36只Wistar大鼠随机分为3组，分别为正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度一氧化碳(CO)组，每组12只，采用原位细胞凋亡、原位杂交、免疫组化等方法检测肺动脉的凋亡状况。结果 ①原位凋亡检测示，正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组的凋亡率分别为8.1%，37.6%，76.5%，三者间差异显著；②原位杂交显示，正常对照组bax、bcl2杂交呈弱阳性表达。低氧肺动脉高压组bax杂交呈弱阳性表达，低浓度CO组呈强阳性表达，但bcl2杂交可见低氧肺动脉高压组呈强阳性表达，低浓度CO组呈弱阳性表达；③免疫组织化结果表明，低浓度CO组bcl2、bax蛋白均有升高，以bax为著。低氧肺动脉高压组虽然也有表达，但程度较弱，且bcl2表达处于优势。结论 低浓度CO可以调节bcl2、bax凋亡基因的表达，从而促进肺动脉组织的凋亡。
【关键词】 低氧；肺动脉高压；凋亡
肺动脉高压(PH)病因复杂，可由多种心、肺或肺血管疾病引起。肺血管重建被认为是低氧肺动脉高压的主要病理变化〔1〕，肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的增殖可能是导致PH形成的重要环节，增加平滑肌细胞凋亡可以逆转PH肺血管重建〔2〕。在bcl2基因家族中，bcl2是凋亡抑制基因，bax是凋亡诱导基因，二者比率是影响细胞凋亡的关键。以往体外研究〔2〕发现，低氧可以促进肺动脉平滑肌细胞的增殖，而低浓度CO可以部分抑制低氧对肺动脉平滑肌细胞的作用。为深入探讨其机制，本研究利用全自动缺氧舱复制低氧性PH大鼠模型，分别给予常氧、低氧、低氧与低浓度CO处理，观察肺动脉bcl2、bax基因的变化，探讨PH发病机制，为其防治提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 低氧PH大鼠模型制备及处理分组
选择健康成年雄性Wistar大鼠36只，体重(200±25)g (购自第三军医大学实验动物中心)，随机分为3组，每组12只。正常对照组：放在室温下依常规方法饲养；低氧PH组：依我所方法建常压低氧仓，保持O2浓度为(10±0.5)%，每天7 h，每周6 d，周日休息，持续3 w；低浓度CO组：每日低氧2 h后通入1次调制好的2 μmol/L的CO 15 min。
1.2 原位细胞凋亡检测
参照试剂盒说明书方法略加修改。先用PBS (pH 7.4) 漂洗组织切片，然后4% PFA固定组织切片30 min；室温下0.3% H2O2封闭15 min，PBS漂洗2×3 min；0.1% TritonX100 4℃通透10 min，PBS漂洗2×3 min；加入由末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)，脱氧三磷酸核苷 (dNTP) 和荧光素标记的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)组成的混合液30 μl，37℃反应1 h，荧光显微镜下观察并照相；加入过氧化物酶(POD)连接的抗荧光素抗体20 μl，37℃反应30 min，PBS漂洗3×5 min；滴加新配制的0.01%H2O2/0.05%DAB显色液，显微镜下观察，显色约10 min左右，清水冲洗终止反应；苏木素轻度复染，常规系列酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。光镜高倍镜下，观察5～8个视野，计数200个细胞以上，计算阳性细胞百分率。
1.3 原位杂交检测
参照文献〔3〕方法，所需试剂和器械均经DEPC水处理。取实验组及对照组动物肺动脉组织，基本过程如下：切片在0.1 mol/L PBS (pH 7.2，下同)中漂洗5 min×3，再2×SSC漂洗10 min；蛋白酶K (20 μg/ml，Merck产品) 消化，37℃孵育5 min；0.1 mol/L甘氨酸/0.1 mol/L PBS漂洗5 min；4%多聚甲醛漂洗5 min；0.1 mol/L PBS漂洗5 min×3，再2×SSC漂洗10 min；预杂交后置42℃水浴中2 h；在每张片子上加20 μl地高辛标记探针杂交液，用DEPC水处理的膜覆盖，于湿盒中42℃孵育20 h；取出切片，去膜，4×SSC及PBS充分漂洗；滴加AntiDigAp抗体；NBT/BCIP室温避光显色4～6 h；0.05 mol/L PBS充分漂洗，终止显色反应；中性树胶封片。原位杂交染色结果的判定，以细胞浆和胞膜内出现明确的紫蓝色细颗粒为阳性染色。无阳性信号(-)；弱阳性(+)，阳性细胞≤25%；弱阳性()，阳性细胞26%～50%；强阳性 ()，阳性细胞51%～75%；强阳性()，阳性细胞>75%。
1.4 免疫组织化学
所用的抗体bcl2为兔抗人单克隆抗体，购自加美国Santa Cruz公司，工作浓度1∶50；bax为兔抗人多克隆抗体，购自加美国Santa Cruz公司，工作浓度1∶30；生物素标记的二抗为羊抗兔多克隆抗体，购自武汉博士德公司，工作浓度1∶200。具体方法参见〔4〕。结果判定：背景无颜色，胞浆内着棕黄色颗粒为阳性细胞。无阳性信号(-)；弱阳性(+)，阳性细胞≤25%；弱阳性()，阳性细胞25%～50%；强阳性()，阳性细胞50%～75%；强阳性()，阳性细胞>75%。
1.5 统计学分析
实验结果应用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析，组间率的比较用χ2检验。
2 结果
2.1 原位凋亡结果
荧光显微镜下可见低浓度CO组肺动脉组织有明显的凋亡标记，而常氧组仅见很弱的荧光。正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组的阳性率分别为8.1%，37.6%，76.5%三者差异显著(P
2.2 原位杂交检测结果
bax、bcl2 mRNA阳性细胞细胞浆和细胞膜着紫蓝色颗粒，均匀着色，阳性细胞呈不均匀分布。正常对照组bax、bcl2杂交呈微弱的紫蓝色，为弱阳性表达(+)。低氧PH组bax杂交呈中等强度的紫蓝色，为弱阳性表达()，低浓度CO组呈极强的紫蓝色，为强阳性表达()；但bcl2杂交，可见低氧PH组细胞胞浆呈强的紫蓝色，为强阳性表达()，低浓度CO组呈微弱的紫蓝色，为弱阳性表达(+)，见图2。
2.3 免疫组织化学染色的情况
结果表明，正常对照组免疫组织化学染cl2、bax均很弱；低浓度CO组bcl2、bax均有升高，以bax为著 (78.9%)，与低氧PH组比较有显著差异(P＜0.01)；低氧PH组bax虽然也有表达，但程度较弱，且bcl2表达处于优势(80.0%)，与低浓度CO组比较有显著差异(P＜0.01)。肺动脉凋亡主要发生在内皮细胞和平滑肌细胞，见图2、表1、表2。表1 各组大鼠肺动脉bcl2凋亡的蛋白质表达情况，表2 各组大鼠肺动脉bax凋亡的蛋白质表达情况（略）。
3 讨论
近年来，随着细胞凋亡在肺动脉高压研究中的不断深入，人们已经注意到肺动脉高压时，肺组织细胞可以细胞凋亡方式出现，并在发病中起到一定作用。bcl2被认为是细胞凋亡调控的最后通路之一，其属于跨膜蛋白，主要分布于核膜、线粒体膜和内质网膜上。bcl2和bax同属于bcl2家族，但二者功能相反，bcl2抑制凋亡的促进增殖，而bax促进细胞凋亡〔5〕。一般认为bcl2通过控制细胞核内外物质的运输和抑制Ca2+的释放或阻断细胞内过氧化物的堆积而发挥抗凋亡作用。而bax作为bcl2的同源体，其作用是抑制bcl2作用，其与bcl2基因一样在组织广泛表达。bax与bcl2在细胞中的比例决定细胞是否发生凋亡，bax过量时，形成baxbax同二聚体，诱导细胞凋亡；bcl2过量时，形成bcl2异二聚体，抑制细胞凋亡〔6〕。机体在正常情况下bax与bcl2的处于平衡状态，低氧或CO诱导情况下这种平衡往往被打破，使bax或 bcl2处于优势地位，从而表现为凋亡或增殖。但是，外界因素对二者的影响非常复杂，同一因素对不同组织细胞的影向不尽相同〔7，8〕。本研究中低氧处理后肺动脉的bcl2基因表达水平显著升高，bcl2蛋白质含量增加，而bax mRNA和蛋白质表达水平稍微升高，bcl2的基因表达处于优势地位，这与以往的研究相一致〔9〕。可能的机制是形成了bax/bcl2异二聚体，从而抑制凋亡促进增殖。低浓度CO作用后，肺动脉的bcl2表达有所下降，bax显著上升，说明低浓度CO可能通过上调bax，使其处于优势地位，进而形成baxbax同二聚体，促进肺动脉组织的凋亡〔10〕。
以往研究表明增殖和凋亡现象共存在于低氧PH大鼠的肺血管细胞中〔11〕，也许bcl2和bax等基因的异常表达导致了细胞增殖和凋亡的失衡，进而调节了慢性低氧肺血管结构的改建。本实验通过bcl2家族两类功能相反基因bcl2和bax的研究，提示bcl2和bax表达可能参与了肺动脉组织的凋亡，bcl2和bax基因在低氧肺动脉表达程度对于评估PH患者的预后及指导临床治疗有一定意义。bax/bcl2对PH的调控非常复杂，许多问题有待探讨，但利用多种手段在某一环节给予干预，下调bcl2或增强bax表达，将为PH治疗开拓新思路。
参考文献
1 Mclaughlin VV，Mc Goon MD.Pulmonary arterial hypertension〔J〕. Circulation，2006；114(13)：141731.
2 Mc Murtry MS，Bonnet S，Wu X，et al.Dichloroacetate prevents and reverses pulmonary hypertension by inducing pulmonary artery smooth muscle cell apoptosis〔J〕.Circ Res，2004；95(8)：83040.
3 郑晓飞主编.RNA实验技术手册〔M〕.北京：科学出版社，2004：1517.
4 王关嵩，钱桂生，杨晓静，等.一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞低氧性增殖反应的作用〔J〕.中国病理生理杂志，2000；16(2)：1179.
5 Karbowski M，Norris KL，Cleland MM，et al.Role of Bax and Bak in mitochondrial morphogenesis〔J〕.Nature，2006；443(7112)：65862.
6 Shore GC，Nguyen M.Bcl2 proteins and apoptosis：choose your partner〔J〕.Cell，2008；135(6)：10046.
7 Nakao A，Kimizuka K，Stolz DB，et al.Carbon monoxide inhalation protects rat intestinal grafts from ischemia/reperfusion injury〔J〕.Am J Pathol，2003；163(4)：158798.
8 Wang X，Wang Y，Kim HP，et al.Carbon monoxide protects against hyperoxiainduced endothelial cell apoptosis by inhibiting reactive oxygen species formation〔J〕.J Biol Chem，2007；282(3)：171826.
9 Togane Y，Morita T，Suematsu M，et al.Protective roles of endogenous carbon monoxide in neointimal development elicited by arterial injury〔J〕. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2000；278(2)：H62332.
仰望大树范文4
【摘要】 目的：探讨低氧条件下HIF-1α及P53在大鼠视网膜的表达及相关性。方法：将大鼠56只随机分为2组，每组各28只，分别饲养于常氧和50mL/L低氧仓。于饲养后0，2，6，8，12，24， 48h 各处死4只，分别进行光镜，电镜 ，免疫组化（SABC）测定HIF-1α及P53表达，并进行相关性分析。 结果: HIF-1α在缺氧后2h开始表达，8h达到高峰，12～24h持续强表达，48h表达明显下降。P53在缺氧后2h开始表达，以后表达逐渐升高，24h后表达达到高峰，48h表达明显下降。HIF-1α及P53在大鼠视网膜表达呈明显正相关（R =0.902495）。电镜结果显示在视网膜缺氧6h视网膜超微结构开始变化，24h凋亡达到高峰。结论：低氧条件下HIF-1α及P53在大鼠视网膜均有表达，随着HIF-1α的表达达到高峰后P53的表达达到高峰，两者呈明显正相关。P53表达达到高峰时电镜结果显示凋亡达到高峰。
【关键词】 低氧诱导因子-1α P53 视网膜低氧 大鼠
0引言
低氧使细胞的生理功能发生改变，造成全身组织、器官失灌而损伤。 低氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1， HIF-1)是1992年由Semenza等发现的。HIF-1可调控促红细胞生成素(EPO)、血管内皮生长因子(VEGF)、糖酵解酶等多种基因的表达。视网膜细胞代谢的最大特点是耗氧多，对缺氧特别敏感，目前没有整体低氧情况下视网膜细胞HIF-1α表达的研究报道，也没有HIF-lα参与低氧视网膜细胞凋亡的证据。我们研究大鼠视网膜细胞缺氧后不同时间的HIF-lα，P53的表达，应用免疫组织化学技术，对低氧情况下视网膜细胞内HIF-1α及P53的蛋白表达进行了定量分析，探讨低氧环境下HIF-1α与P53的关系。并对视网膜超微结构进行电镜观察。
1材料和方法
1.1材料 常压低氧模型有机玻璃制成低氧仓，体积100cm×60cm×60cm有机玻璃厚4cm，三氯甲烷封侧面，以便开仓取换食物、水及取鼠。仓体上面开一直径1 cm的出气孔，侧面开一直径1cm的进气孔。通过三通管分别按氮气和压缩空气。用玻璃转子流量计（沈阳市北量流量仪器厂）控制流量。成年Wistar大鼠56只，雌雄不限。中国医科大学实验动物学部提供，质量170～220g随机分为2组，每组各28只，分别饲养于常氧环境，50mL/L低氧仓。于饲养后0，2，6，8，12，24，48h处死4只，分别进行光镜，电镜，免疫组化测定HIF-1α及P53表达。 兔抗鼠HIF-1α、P53抗体，免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2方法
1.2.1免疫组织化学实验 大鼠处死后立即摘除眼球投入固定液（固定液配置：无水乙醇60mL，甲醇10mL 冰醋酸10mL，氯仿20mL）固定2h。室温脱水，整个眼球投入600，700，800，900，950mL/L乙醇各10min取出眼球用锋利刀片沿角膜两侧由后向前平行视轴剖切，包括角膜，晶状体，视神经，然后投入无水乙醇10min。硬脂酸：蜡1（3:7）2h；硬脂酸：蜡2（2:8）1h；石蜡3h（熔点52℃）。石蜡包埋，切片染色浸蜡后的眼球水平面朝向包埋框底，用石蜡蜂蜡混合包埋，冷却后切片机切片厚4μm。石蜡切片烤干，常规脱蜡至水，过氧化氢封闭阻断内源性过氧化物酶，Hci进行抗原修复，羊血清封闭电荷，阻断非特异性抗原抗体结合，弃去液体不洗。分别滴加一抗（HIF-1α抗体的工作浓度1：200，P53抗体的工作浓度1：200），4℃冰箱过夜。PBS(0.01mol/L pH7.2~7.4)洗后滴加FITC标记羊抗兔IgG(工作浓度1：1 000)，PBS冲洗，孵育，染色，DAB显色，苏木素复染，晾干，脱水，透明，封片PBS代替一抗做阴性对照。
1.2.2透射电镜操作 大鼠处死后取眼球，20mL/L戊二醛浸泡至少2h，经前固定，清洗，后固定，脱水，浸透，包埋，超薄切片后柠檬酸铅和醋酸钠进行双染色。观察并摄片。细胞核或胞质中出现黄色或棕黄色颗粒为HIF-1α阳性表达细胞，细胞核或胞质中出现黄色或棕黄色颗粒为P53阳性表达细胞，无阳性反应为阴性。在40倍物镜下摄取每组随机选取的视网膜切片，每张随机选取2个视野，转入计算机用Metamorph软件设定出阳性细胞阈值，并设定阳性框区。计算框区阳性细胞平均积分吸光度IOD值判定阳性细胞的表达情况。
统计学处理：分析软件用SPSS 10.0。
2结果
2.1 HIF-1α及P53的表达 常氧条件下各时间点HIF-1α及P53的表达极为微弱，缺氧24h P53的免疫组化的照片可见节细胞层强表达，内颗粒层有表达，外颗粒层少有表达(图1A)。缺氧8h HIF-1α免疫组化的照片可见节细胞层强表达，内颗粒层有表达，外颗粒层少量表达（图1B）。 缺氧2h即出现HIF-1α表达，随着时间延长表达逐渐增加。8h基本达到高峰，12～24h持续强表达，48h表达明显下降。缺氧2h即出现P53表达，随着时间延长表达逐渐增加。8h明显表达增强，24h基本达到高峰，以后下降（表1)。缺氧条件下HIF-1α及P53表达呈曲线变化（图2）。
图1 缺氧后HIF-1α及P53的表达。A：缺氧24h P53的免疫组化的照片可见节细胞层强表达，内颗粒层有表达，外颗粒层少有表达；B：缺氧8hHIF-1α免疫组化的照片可见节细胞层强表达，内颗粒层有表达，外颗粒层少量表达
图2 HIF-1α和P53表达的相关性图示。由上图得知HIF-1α和P53表达呈正相关（r =0.902495 ）
2.2电镜结果 对照组光镜下未见明显异常，透射电镜下各层组织区分明显，细胞核仁明显，居中，核膜清晰，细胞器较多，结构清楚。神经节细胞无变性，线粒体嵴存在，粗滑面内质网无变性，粗面内质网无脱颗粒，神经纤维无水肿，而随着缺氧时间延长，6h出现超微结构变化，线粒体轻度膨胀，内质网有轻度扩张（图3A），24h出现神经节细胞变性，线粒体明显膨胀，嵴消失，滑面内质网扩张，粗面内质网脱颗粒扩张，内核层及内外丛状层中线粒体膨胀，核仁靠近核膜，细胞有损伤的变化。神经纤维层轴突水肿加重，结构疏松，但视锥，视杆细胞较完整，（图3B）。
图3电镜结果。A：缺氧6h后视网膜电镜改变:线粒体轻度膨胀，内质网有轻度扩张TEM×5 000；B：缺氧24h视网膜电镜改变:可见胞质空泡化，线粒体明显膨胀，嵴消失，滑面内质网扩张，核仁靠近核膜，细胞有损伤的变化TEM×6 000
3讨论
视网膜对缺氧极其敏感，缺氧能造成许多眼底疾病如糖尿病性视网膜病变[1]，视网膜中央静脉阻塞(缺血型) ，视网膜中央动脉阻塞等，而细胞内氧的消耗主要功能是被细胞内线粒体的氧化磷酸化的过程所利用[2]，而且约10 %～15 %的细胞内一些酶的活动也需要氧分子参加，所以缺氧不仅导致细胞内线粒体氧化磷酸化的抑制，同时也将抑制细胞内一些需要氧的正常反应代谢过程。
HIF-1是在缺氧诱导的细胞核提取物中发现的一种DNA 结合蛋白，是被公认的缺氧调节中的重要因子。HIF-1是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种异源二聚体核转录因子，由α亚基(HIF-1α)和β亚基 (HIF-1β)组成。HIF-1α是唯一的O2调节亚单位，决定HIF -1α的活性， 通过对VEGF 等下游基因的调节而产生一系列代偿反应，以适应低氧环境[3-5]。在常氧情况下HIF-1α半衰期小于1min，通过泛素、蛋白酶体途径降解，缺氧降低泛素化或通过突变阻断泛素化而增加HIF-1α的表达。HIF-1α与缺氧诱导因子抑制因子结合，而被降解；缺氧条件下，由于降解通路被阻断，HIF-1α迅速与HIF-1β聚合形成有活性的HIF-1 二聚体，从而调节下游基因的表达。我们的研究发现，缺氧可以明显增加大鼠视网膜神经细胞HIF-1蛋白的表达[6 ] 。并调控它的下游基因P53的表达，从本实验看随着HIF-1α的表达达到高峰后P53的表达达到高峰，两者呈明显正相关.
HIF-1α是机体生存必需的维持氧稳态的主要调节因子。从胚胎发育早期到成年期一直到衰老，HIF-1α精细地调节着许多生物反应。HIF-1α是机体生存必需的维持氧稳态的主要调节因子[7，8]。有研究表明氧浓度的改变，可以直接调控HIF-1α的活性，最近又发现MDM2泛素蛋白连接酶的识别靶标P53也能与HIF-1α亚基结合，从而介导HIF-1α亚基的降解。由于缺氧细胞中P53的表达升高，这样即可避免HIF-1α亚基在缺氧条件下的过量积累[9]，又可激活结构域结合蛋白1，直接与HIF-1α亚基结合，抑制P53与HIF-1α亚基的结合，从而抑制P53对HIF-1α亚基稳定性的负调节，增加HIF-1α亚基的表达[10，11]。这样P53与Jab1协同调节缺氧条件下HIF-1α亚基的表达，有效地避免了HIF-1α亚基的过量表达。从本实验看随着P53的表达达到高峰HIF-1α的表达逐渐降低，同以上观点相符。由此可见P53和HIF-1α之间有着微妙的关系。
缺氧是P53最强的生理性诱导剂，缺氧情况下，去磷酸化的HIF-1α通过与P53结合可介导缺氧情况下P53依赖的凋亡[9]。P53也参加了HIF-1α的调节。本研究结果支持这一观点。HIF-1α的表达与P53蛋白表达之间呈显著正相关(r=0.902495)。该结果提示HIF-1α和P53可能协同参与了缺氧对视网膜神经细胞的调节，缺氧一方面使HIF-1α表达增加，提高视网膜能量代谢和血管生成，另一方面可能通过对P53的选择，使视网膜神经细胞发生凋亡。通过电镜可见凋亡高峰的出现同P53表达高峰的出现相符合。
本实验只是对HIF-1α和P53的一个粗浅的研究，更深更细的研究有待于下一步进行。
参考文献
1李媛，卢燕.糖尿病视网膜病变早期发病机制研究进展.国际眼科杂志，2005;5(4):750-754
2 Luo X， Lambrou GN， Sahel JA， Hicks D. Hypoglycemia induced general neuroal death whereas hypoxia and glutamate transport blockade lead to selective retinal ganglion cell death in vitro . Invest Ophthalmol Vis Sci ，2001;42(11):2695-2705
3 Ren XQ， Meng JM， Fu KD. Study on relationship between expression of p53， H IF-1α and angiogengesis of colorectal carcinoma. Zhongguo Yixue Gongcheng ，2004;12(4):31-35
4 Semenza GL. Expression of hypoxia inducible factor-1α echanisms and consequences. Biochem Pharmacology ，2000;59:47-53
5宋虎平，惠延年，王丽丽，韩晓霞，王海燕.缺氧诱导因子-1α在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达.国际眼科杂志，2006;6(2):352-356
6张红，栾洁.眼内新生血管与细胞因子.国际眼科杂志，2006;6(1):158-163
7 Kallio PJ， WilsonWJ， O’Brien S，Makino Y， Poellinger L. Regulation of the hypoxia inducible transcription factor 1 alpha by the ubiquitin proteasome pathway. J Biol Chem ，1999;274: 6519-6525
8 Semenza GL. H IF-1α， and the 3 PHDs: how animal cells signal hypoxia to the nucleus. Cell ，2001;107:123
9 Rudzinski M， Wong TP， Saragovi HU. Changes in retinal expression of neurotrophins and neurotrophin receptors induced by ocular hypertension. J Neurobiol ，2004;58(3):341-354
10 Vannucci RC， Towfighi J， Vannucci SJ. Hypoxic preconditioning and hypoxic—ischemic brain damage in the immature rat: pathologic and metabolic correlates. J Neurochem ，1998;71:1215
仰望大树范文5
关键词：教育技术学；计算机维护；网络管理；能力培养
中图分类号：TP434文献标识码：A文章编号：1672-7800（2013）006-0194-03
作者简介：亓小涛（1978-），男，硕士，曲阜师范大学信息技术与传播学院讲师，研究方向为网络与多媒体技术、数据库技术。
1计算机维护与网络管理能力培养的必要性
（1）是当今社会对所有大学生提出的必然要求。当前，计算机和网络在社会中发挥着越来越重要的角色，已经成为人们学习、工作和生活中必不可少的重要工具。随着整个社会对计算机和网络依赖程度的不断提高，人们逐渐意识到，由于计算机和网络本身的缺点所带来了一系列问题，不同程度地影响着我们的工作和学习。这些问题主要体现在：①计算机软硬件系统以及相关其它硬件设备在使用过程中容易出现故障，如果处理不当可能会出现数据丢失等严重后果；②网络是开放的，由于人们对网络知识的缺乏，在人们使用网络的过程中经常会遇到网络不畅、病毒攻击等问题。
因此，让大学生在走上工作岗位前，进行计算机维护和网络管理能力培养，学习相关知识，进行上机实验操作，掌握计算机维护和网络管理的基本方法，对于提高大学生计算机应用实践能力，为以后的工作和学习打下良好的基础具有十分重要的意义。大学生具备了这方面的知识和技能后，在工作中就能及时解决计算机和网络带来的相关问题，从而保障工作顺利进行。
（2）是提高教育技术学毕业生就业竞争力的必然要求。近年来，教育技术学专业毕业生的流向主要包括以下几个方面：中小学信息技术教师、高校现代教育技术公共课与专业课教师、中小学/大中专院校/各级电教馆/政府的电教管理人员、影视制作及广播电视新闻专业人员、企业公司员工（主要是IT产业中教育产品的开发人员）。经过亲身的工作实践体验，绝大多数的教育技术学毕业生对自己都有了比较客观的评价：①与计算机专业的毕业生相比有优势也有劣势。优势是知识面广、掌握教育技术等基本理论、有制作多媒体课件的能力，劣势是计算机专业方面的知识（特别是硬件方面）、媒体资源开发技术掌握不够全面；②在校时动手实践太少，实际操作能力不强，知识掌握广而不专、专而不精，工作中容易眼高手低；③在工作过程中感觉到计算机软硬件维护、网络管理等方面的知识相当欠缺。同时，对高校教育技术学专业培养和在校的教育技术学专业学生提出了中肯的建议：扩大专业口径，培养全面的人才，学生所学知识要广而专、专而精，特别要加强实践应用能力和创新能力的培养。
由上可知，教育技术学专业毕业生，毕业后所从事的工作很多情况下都涉及到计算机维护和网络管理等方面的内容。因此，给在校的教育技术学专业学生开设像“计算机维护与网络管理”这样的技术技能类课程，进行计算机维护和网络管理能力培养是十分必要的。一方面，通过基础理论知识的深入学习可以改变教育技术学专业学生存在的“广而不专”的弱点；另一方面，通过上机实验操作使学生真正掌握解决问题的思路和方法，提高其以后在工作中解决实际问题的能力。这样，学生的核心能力加强了，在激烈的人才市场上具有较强的就业竞争力，在工作中具有更强的工作适应能力和解决问题的能力，就容易得到用人单位和社会的认可，从而为即将毕业的教育技术学专业学生创造一个更好的就业环境。
2计算机维护与网络管理能力培养现状及解决方案
目前，很多设有教育技术学专业的高校院系已经意识到计算机维护和网络管理能力是毕业生走上工作岗位后的薄弱环节，开始有意识地加强这方面能力的培养，开展了相应的教学工作。在具体实践中主要采用分散渗透和开设专门课程两种方式。
分散渗透是指要求相关课程的老师能在教学中渗透计算机维护和网络管理方面的理论与实践知识内容。这种方式表面看起来省时省力，然而实际的情况是：整个培养目标被分散到了不同的课程中变成了一个个次要的分目标，教师在教学中涉及到这方面的知识时，往往只是简单提及或不提，更不会设计相关实验教学环节。这样导致的结果是：一是学生可能学不到相关的知识，即使学到也没有什么系统性和针对性，二是学生的动手能力得不到锻炼，计算机维护和网络管理能力培养变成了一句空话。显然，分散渗透只能作为一种权宜之计。而开设专门的课程（制定明确教学目标、建立完善的理论教学与实验内容体系）才是计算机维护和网络管理能力培养的有效途径。然而大多数高校院系并没有为此开设专门的课程，因此，该课程能否在教育技术专业中开设、何时开设、课程的理论教学与实验内容体系应包括哪些具体内容，就成为广大教育工作者关注的首要问题。
计算机维护和网络管理是一门综合性很强的课程，它的开设要求学生有一定的基础：了解计算机基本结构和工作原理、掌握计算机网络的基础理论知识和基础应用操作（如TCP/IP设置），掌握相关软件的基本操作方法。在大多数的高校院系中，教育技术专业的学生在前3年就已经学习了《计算机文化基础》、《微机原理及应用》、《计算机网络技术》等课程内容，并开设过一些类似的实验，了解了计算机的软硬件构成和功能、网络软硬件设备的类型和功能，具有较强的理论知识水平和一定的实践操作能力，具备开展新实验的知识积累和能力，能在此基础上在教师的指导下掌握计算机维护与网络管理相关的若干实验的设计与操作方法。因此，教育技术学专业学生可以开设此课程，但不宜开设过早，建议在大四上学期开设为宜。
2007年8月，在对部分用人单位和近几年的教育技术学毕业生充分调研的基础上，我们为教育技术学专业的学生开设了《计算机维护与网络管理》这门课程。近年来笔者对课程的定位、课程的理论和实验教学内容体系进行了有益的探索和尝试。
3能力培养课程的定位及内容需求分析
为避免该课程的体系结构过于庞大，出现广而不专的老问题，在充分了解了近几年教育技术学专业毕业生流向和工作内容的基础上，将培养的对象主要定位在未来的信息技术教师、电教管理人员和在其它行业中从事计算机和网络相关工作的人员等三类，同时兼顾将来从事其它非以上三类工作的教育技术学专业学生。
中小学的信息技术教师除了专门从事信息技术课程的教学工作和负责学校课件制作任务外，通常还兼有机房的管理和维护、学校网络的管理与维护、学校网站的建设与维护等工作。有一部分在各级各类单位的电教管理人员和在其它行业中从事计算机维护和网络管理的人员通常主要负责网络的日常维护与管理、计算机的日常维护与管理以及为本单位提供技术支持等工作。由此可以看出，将来要从事以上三类工作的教育技术学专业学生必须掌握计算机软硬件技术、局域网技术、Internet接入技术、各类网站构建与开发技术等，具有不同规模的网络的设计管理与维护、计算机软硬件日常维护、计算机及网络的常见故障检测与排除、网站的日常管理与维护等能力。另外，对于从事其它非以上三类工作的教育技术学专业学生来说，尽管从事的工作与计算机和网络没有什么关系，但是由于教育技术学专业本身的专业特点，往往会被单位和同事认为是精通计算机和网络的高手，因此在工作中应具备计算机软硬件日常维护、计算机及网络的常见故障检测与排除等基本能力。
4能力培养课程的理论和实验教学内容体系构建
面对严峻的就业形势，只有以“社会需求和就业”为导向，适时地调整课程设置，不断更新课程与实验教学内容、革新教学手段和教学方法，才能培养出社会适应需求的合格大学生。基于上面的分析，同时考虑到教育技术学的专业特点、学生的认知和知识结构特点，在综合大量教材和参考书的基础上，笔者从理论和实验两方面进行了积极的探索和实践，经过几年的反复教学实践，构建了一个模块化、分层次的课程内容体系，如表1所示。
课程体系共分为5个模块，5个模块呈现的是一个培养目标和能力要求不断提高的分层式结构，各模块相对独立又相互联系，如图1所示。
每个模块既有理论讲授又有实践操作，二者紧密结合，共培养学生5个方面的能力。理论教学内容注重理论联系实际，使学生切实掌握解决实际问题的基本思路和方法，在授课中首先介绍与实验相关的基本概念、原理和方法，然后进行演示实验操作，最后结合日常应用进行分析、归纳与总结。实验教学内容注重对学生实践和创新能力的培养，许多实验为综合、设计性实验，要求学生综合应用基础性实验教学中所学的知识和所掌握的方法来完成，实验指导书上只写明实验目标、要求，提供相关设备及部分相关资料，由学生自己设计实验方案，确定实验方法、步骤，利用实验室提供的设备环境独立完成整个实验过程。
5能力培养课程体系的实践验证
上面构建的能力培养课程的理论和实验教学内容体系，通过在教育技术学专业中几年的反复教学实践证明是一套较为科学的适合教育技术专业的内容体系结构。在实践中，虽然该课程作为一门任意选修课开设的，但绝大多数学生都对该课程表现出了浓厚的兴趣，每年学生的选课率都达到了95%以上。在授课过程中，注重对理论基础知识的总结与回顾，加大了实验环节的比重，着重加强学生的应用实践能力和创新能力的培养，让学生通过实验教学亲自动手设计与实践，切实提高了学生解决实际问题的能力，达到了计算机维护与网络管理能力培养的目标要求。
参考文献：
[1]王洋，付强.教育技术学专业毕业生流向问题的研究[J].电化教育研究，2005（7）.
[2]沙景荣.教育技术学本科毕业生社会适应性调查研究[J].电化教育研究，2007（6）.
[3]郭绍青，田富鹏.局域网构建技术[M].北京：高等教育出版社，2006.
仰望大树范文6
【摘要】 目的 ：探讨慢性间歇低氧对幼鼠海马神经细胞凋亡及caspase-12表达的影响。方法：取体重为80～100 g健康雄性SPF级SD幼鼠(3～4周龄)40只，随机分为间歇低氧2周(2IH)组、4周(4IH)组，空气对照2周(2C)组、4周(4C)组，每组10只。以间歇低氧舱建立慢性间歇低氧幼鼠模型。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡，RT-PCR检测海马区caspase-12 mRNA表达，免疫组织化学染色检测海马区caspase-12蛋白的表达。结果 ：间歇低氧组凋亡指数(AI)、caspase-12 mRNA及其蛋白表达均高于对照组(均P
【关键词】 慢性间歇低氧;内质网应激;海马;凋亡;caspase-12
Abstract: Objective: To explore the effect of chronic intermittent hypoxia on apoptosis of hippocampal cells and the expression of caspase-12 in immature rat’s. Methods: Forty male Sprague- Dawley rats (3～4 week，80～100 g) were randomly pided into four groups: 2-week intermittent hypoxia group (2IH)，4-week intermittent hypoxia group (4IH)，2-week control group with room air(2C) and 4-week control group with room air (4C)， and ten rats in each group. Intermittent hypoxia model was induced by an intermittent hypoxia cabin，the in situ cell apoptosis in the hippocampus was detected with TUNEL staining. The expressions of caspase-12mRNA in the hippocampus were examined with RT-PCR. Immunohistochemical SP method was used to examine the expression of caspase-12 in the hippocampus. Results: Both the apoptosis index (AI) and the expressions of caspase-12 in hippocampus of intermittent hypoxia group were significantly higher than those in control group (P
Key words: chronic intermittent hypoxia;endoplasmic reticulum stress;hippocampus; apoptosis;caspase-12
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obst-ructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)是儿童的常见病之一，发病率为1%～10%[1]，多见于学龄前儿童。OSAHS对全身各系统均有很大的影响，儿童以神经系统损害致学习记忆障碍危害最大。然而OSAHS引起学习记忆障碍的病理生理机制尚不明确。本实验模拟OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性间歇低氧的幼鼠模型，通过不同干预时间(2周、4周)，观察幼鼠海马神经细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-12表达的变化，初步探讨慢性间歇低氧幼鼠海马神经细胞凋亡的可能机制。
1 材料和方法
1.1 主要材料 间歇低氧舱和空气模拟对照舱自制。LKB2088型超薄切片机，TUNEL试剂盒(Roche公司)，梯度PCR仪(Effendorf公司)，RT-PCR试剂盒(Fermentas公司)，免疫组化试剂盒(北京中杉生物公司)，caspase-12抗体(CST公司)。
1.2 动物分组及模型制备 取八臂迷宫训练成功的体重为80～100 g健康雄性SPF级SD幼鼠 (3～4周龄)40只，由温州医学院实验动物中心提供，合格证号为[SYXK(浙)2005-0061]。按随机数字表法分为间歇低氧2周组(2IH组)和4周组(4IH组)，空气对照2周组(2C组)和4周组(4C组)，每组10只。OSAHS动物模型建立参照McGuire[2]、Gozal等[3]方法加以改进，2IH组及4IH组幼鼠置于常压间歇低氧舱内。90 s为1次低氧-复氧循环，以0.3 kPa压力通氮气30 s，停30 s，25 L/min流量通氧气12 s，停18 s，在停止通气阶段由连接的测氧仪分别测间歇低氧舱内的氧浓度高值、低值。低氧时氧浓度控制在7.8%左右，复氧时氧浓度控制在21.0%左右，CO2浓度始终
1.3 标本制作 低氧结束次日予戊巴比妥钠(35 mg/kg体重)腹腔注射麻醉，每组随机取1只幼鼠，仰卧固定，剖开胸腔，暴露心脏。将吸有预冷至0～4 ℃生理盐水的针管刺入左心室，剖开右心耳排液，快速灌入100 mL左右的生理盐水，再用200 mL左右预冷为0～4 ℃的4%戊二醛缓慢灌注后迅速取脑，取脑置于冰盘上，快速分离出左、右海马。左侧海马置于液氮迅速冷冻，再放-70 ℃冰箱保存，用于RT-PCR检测。右侧海马放入4%多聚甲醛中固定4 h，依次进行梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋，5μm厚连续切片，用于细胞凋亡及免疫组化检测。
1.4 海马神经细胞凋亡检测 采用原位缺口末端标记(TUNEL)法，按试剂盒提供方法操作。镜检细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞。随机计算5个高倍视野(×400)下的凋亡细胞数。凋亡指数(apoptosis index，AI)以凋亡细胞/100个细胞(%)表示。
1.5 海马区神经细胞caspase-12免疫组化表达 按照试剂盒说明书进行操作。在光学显微镜(40×10倍)下每张切片随机观察6个视野，利用Image-Pro Plus 6.0生物图像处理系统处理检测累积光密度(integrated optical density，IOD)，取平均值作为caspase-12相对含量。
1.6 海马区caspase-12基因RT-PCR检测 引物根据Genebank资料，利用primer 5.0引物设计软件确定最优引物，然后经Blast匹对，由上海生工生物有限公司合成。引物：上游5’-GCCC TCATCATCTGCAACAA-3’下游5’-GACGGCCAGC AAACTTCATT-3’扩增片段172 bp，以看家基因GAPDH为内参照，进行RT-PCR反应，反应产物1%琼脂糖凝胶上电泳，EB染色，图像分析仪成像，并进行半定量分析。
1.7 统计学处理方法 组间比较采用单因素方差分析，方差齐者用LSD-t检验，方差不齐者用Tamhane’s T2检验。
2 结果
2.1 海马神经细胞凋亡指数 2C组与4C组可见少许凋亡细胞(见图1)，两组间差异无显著性，2IH与4IH组凋亡细胞较2C组和4C组明显增多(均P
2.2 海马区caspase-12 mRNA 2IH组较2C组表达上调(P
2.3 免疫组织化学检测显示 海马神经细胞caspase-12免疫反应的产物呈棕黄色，主要表达于细胞胞浆，2C组与4C组可见散在神经细胞表达caspase-12，两组间蛋白表达差异无显著性(P >0.05)，2IH组与4IH组可见较多神经细胞表达caspase-12，4IH组累计光密度(IOD)较2IH组增高(P
3 讨论
OSAHS特征性的低氧方式是慢性间歇低氧，这种低氧-复氧方式出现类似缺血/再灌注过程中的病理变化，导致脑损伤及海马等处神经细胞凋亡[4]。我们前期实验已证实慢性间歇低氧幼鼠海马神经细胞电镜下出现明显的超微结构改变，提示细胞凋亡存在[5]，细胞内有精细复杂的途径调控细胞凋亡过程，包括细胞内活性基因、酶和信号转导途径[6]。目前已知有3条主要的信号转导通路来调控细胞凋亡：线粒体通路、死亡受体通路及内质网应激通路，其中内质网应激通路是近年来发现的一条新的细胞凋亡通路[7]，称为内质网相关性死亡(ER-associated death，ERAD)途径。ERAD途径包含内质网应激诱导转录C/EBP的同源蛋白(C/EBP homologus protein，CHOP)、基因表达c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)的活化和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)蛋白水解酶的活化[8]。位于内质网侧的caspase-12这条凋亡通路是内质网特异性的。当内质网应激发生时，caspase-12酶活性升高，然后活化的caspase-12从内质网转运到胞浆，最终激活caspase-3等，最后引发细胞凋亡[9]。本实验通过TUNEL检测发现海马神经细胞凋亡的数量随着慢性间歇低氧时间的延长而增加，说明慢性间歇低氧环境下，海马神经细胞的凋亡存在时间依赖性。本实验显示，慢性间歇低氧幼鼠海马区caspase-12 mRNA及蛋白表达较对照组均明显增高，且随着间歇低氧时间的延长明显增高，说明caspase-12介导的内质网应激信号通路参与了幼鼠慢性间歇低氧海马神经细胞凋亡的调控。
参考文献
[1] Chan J，Edman JC，Koltai PJ.Obstructive sleep apnea in
children[J].Am Fam Physician，2004，69(5):1147-1154.
[2] McGuire M，MacDermott M，Bradford A.The effects of
chronic episodic hypercapnic hypoxia on rat upper airway
muscle contractile properties and fibertype distribution[J].
Chest，2002，122(4):1400-1406.
[3] Gozal D，Daniel JM，Dohanich GP.Behavioral and anatomi-
cal correlates of chronic episodic hypoxia during sleep in
the rat[J].J Neurosci，2001，21(7):2442-2450.
[4] Xu W，Chi L，Row BW，et al.Increased oxidative stress is as-
sociated with chronic intermittent hypoxia-mediated brain
cortical neuronal cell apoptosis in a mouse model of sleep
apnea[J].Neuroscience，2004，126(2):313-323.
[5] 周永海，蔡晓红，张存雪，等.慢性间歇低氧对幼鼠学习记忆的
影响[J].中国行为医学科学，2007，16(1):13-15.
[6] Wolf CM，Eastman A.The temporal relationship between
protein phosphatase， mitochondrial cytochrome c release，
and caspase activation in apoptosis[J].Exp Cell Res，1999，
247(2):503-513.
[7] Ferri KF，Kroemer G.Organelle-specific initiation of cell
death pathways[J].Nat Cell Biol，2001，3(11):E255-263.
[8] Jousse C，Bruhat A，CarraroV，et al.Inhibition of CHOP trans-
lation by a peptide encoded by an open reading frame local-
ized in the chop 5'UTR[J].Nucleic Acids Res，2001，29(21):
4341-4351.
[9] Morishima N，Nakanishi K，Takenouchi H，et al.An endoplas-
mic reticulum stress-specific caspase cascade in apoptosis.