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白细胞介素范文1
【关键词】三磷酸腺苷结合盒转运体A1 IL-18 IL-12 胆固醇流出
中图分类号：R34文献标识码：B文章编号：1005-0515（2011）10-009-03
Influence of IL-18 and IL-12 on Cholesterol efflux
JIANG Hailu1 LI Tong2
(1. Cardiovascular Institute of Nanhua UniversityHunan Hengyang 421001 ；2. Shenzhen Second People’s HospitalGuangdong Shenzhen 518036)
【Abstract】Objective IL-18 and IL-12, mainly produced by activated macrophages, are multifunctional cytokines which have been found to be excessively expressed in inflammatory atherosclerosis lesions.This study was to investigate the changes of cholesterol efflux, ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) mRNA and protein expression in THP-1 macrophage derived foam cells after treated by IL-18, IL-12, or both, and to discover the combined effects and mechanisms of IL-18 and IL-12 on the down-regulation of ABCA1 in foam cells. Conclusions These findings suggest that combined treatment with IL-18 and IL-12 can down-regulate the expression of ABCA1 mRNA and protein, promote the accumulation of lipid and decrease cellular cholesterol efflux in THP-1 macrophage derived foam cells.
【Keywords】ATP-binding cassette transporter A1 IL-18R IL-12 Nucleus factor-κB Cholesterol efflux
白细胞介素18（IL-18）和白细胞介素12（IL-12）是具有多种生物学功能的炎症因子，近来发现两者在动脉粥样硬化（As）斑块中过量表达。大量流行病学调查证实，血清IL-18水平与心血管疾病的风险呈正相关，提示IL-18介导了人体As病变的发生发展[1-3]。IL-12是一种与IL-18具有类似功能的炎性细胞因子，在As斑块中，IL- 12与IL-18共表达[4]。本研究观察IL-18及IL- 12作用下ABCA1表达及胆固醇流出的变化，为明确炎症与RCT的关系提供新的理论依据。
1 资料与方法
1.1 细胞培养
THP-1细胞生长于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中，于37℃、5% CO2培养箱中静置培养。培养液中加10 mmol/L的HEPES、1.0×105μ/L的青霉素和100 mg/L的链霉素，取对数生长期细胞进行实验。在每次实验前用160 nmol/L的佛波酯诱导THP-1细胞24 h，使其贴壁并转化为巨噬细胞。
1.2 胆固醇流出实验
胆固醇流出检测按本实验室的常规方法进行，THP-1细胞用0.2μCi/ml[3H]胆固醇在含有10%小牛血清RPMI-1640培养液共同孵育待细胞长至85%时，用PBS液洗涤细胞，置含脂蛋白的无血清RPMI-1640培养液中培养24小时。PBS液洗涤细胞，闪烁液裂解细胞后，用闪烁计数法检测培养液和细胞中的[3H]胆固醇。胆固醇流出率用培养液中CPM除以总CPM(培养液CPM+细胞CPM)，再乘以100%来表示。
1.3 高效液相色谱分析
待细胞处理结束后，弃培养基，PBS洗3遍，加入细胞裂解液200μl，反复冻融3次裂解细胞，BCA法定量蛋白后，7.2%三氯乙酸沉淀蛋白，800×g离心10min，取上清进行胆固醇检测,以豆甾醇为内标。取100μl上清液，加入8.9mol/L氢氧化钾溶液200μl，水解胆固醇酯后为细胞内总胆固醇检测样品。各样品分别与内标液混匀，用正己烷和无水乙醇抽提后，1.5mol/L的三氧化铬进行氧化衍生并真空干燥，100μl 乙晴-异丙醇（80:20）溶解样品，上样于高效液相色谱仪。采用C-18柱，柱温4℃，流速1mL/min，250nm紫外光检测，胆固醇以峰面积定量，内标校准，以mg/g细胞蛋白为单位。
1.4 细胞白的提取
弃去培养基，用冰浴PBS（含PMSF）洗涤细胞三次，用细胞刮子从培养瓶壁上刮落细胞后收集到离心管中，1000转离心5分钟，去上清液，加1ml冰浴PBS（含PMSF），洗涤沉淀，并将细胞移至Ep管，4℃ 14000转离心5min，弃上清，加入400μl冰冻的缓冲液A（10mM Hepes,1.5mM Mgcl2,10mM Kcl,1mM DTT,0.5%Np-40,100μg/ml PMSF）将细胞重悬，用移液枪将匀浆吹吸15-20次，冰上静置15min后。4℃ 14000转离心20sec，沉淀用冰浴缓冲液A洗一次，用不含Np-40的缓冲液A洗一次，同上方法离心，沉淀重新悬浮在0.5倍体积的冰浴缓冲液C（20mM Hepes,1.5mM Mgcl2,420mM Nacl,1mM DTT,0.2mM EDTA,100μg/ml PMSF）中。样品用旋涡振荡仪，振荡20分钟，14000g离心20秒，上清含细胞核提取物，放置于新的Ep管，加入等体积的冰浴缓冲液D（20mM Hepes(pH7.9), 100mM Kcl, 20%甘油, 1mM DTT, 0.2mM EDTA, 100μg/ml PMSF），立即冰冻－80℃保存。使用时，样本与SDS缓冲液一起煮沸后，-20℃ 保存备用。
1.5 统计学分析
实验所得数据采用均数±标准差（x±s）表示。用SPSS 12.0进行统计处理，组间比较采用方差分析及t检验, 以P＜0.05判定差异的显著性。
2 结果
2.1 IL-18对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响
THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度（0，2，20，200 ng/ml）IL-18处理24h后，提取细胞总RNA和蛋白，通过实时荧光定量PCR和Western blot测定细胞内ABCA1基因和蛋白质表达的变化。结果显示，用IL-18单独处理细胞，ABCA1 mRNA和蛋白表达无显著变化（图1）。
图1 不同浓度IL-18对ABCA1 mRNA表达的影响（n=3）
*P＞0.05 vs 0ng/ml组
2.2 IL-12对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响
THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度（0，0.2，2，20 ng/ml）IL-12处理24h后，提取细胞总RNA和蛋白，通过实时荧光定量PCR和Western blot测定细胞内ABCA1基因和蛋白质表达的变化。结果显示，用IL-12单独处理细胞，ABCA1 mRNA和蛋白质表达无显著变化（图2）。
图2 不同浓度IL-12对ABCA1 mRNA表达的影响（n=3）
*P＞0.05 vs 0ng/ml组
3 讨论
近年来，越来越多的研究证明动脉粥样硬化（As）具有慢性炎症疾病的病理生理过程，在As斑块中大量的炎性细胞浸润和炎性因子的表达促进斑块的发生、发展和破裂[5]。流行病学调查研究显示，高密度脂蛋白（high density lipid，HDL）水平与As相关的心血管疾病的风险呈负相关，其主要抗As的机制与HDL促进胆固醇逆向转运（RCT）有关[6]。RCT是将外周胆固醇转运到肝脏进行代谢的过程，其中HDL的主要成分载脂蛋白A-I（apolipoprotein A-I，apoA1-I）通过ABCA1促进巨噬细胞内胆固醇流出是RCT的关键环节[7]。最近的研究显示，炎症反应抑制体内RCT，可能为炎症促进As提供理论基础。然而，炎症影响RCT的具体机制还有待进一步阐明，其中炎症状态下脂质转运体ABCA1的表达变化可能是其关键机制[8-9]。ABCA1的表达受到多因素多水平的调控。在转录水平，多种促炎细胞因子，如TNF-α[10]、IL-1β[11]、C反应蛋白（CRP）[12]和IFN-γ[13]等通过LXR下调ABCA1的表达，从而抑制胆固醇的流出。在转录后水平，促炎蛋白，如LPS[14]、EPA[15]、钙蛋白酶[16]和钙调蛋白[17]等通过下调ABCA1的稳定性促进其降解，这些研究提示炎症状态下ABCA1的表达受到多种因素调节。
IL-18和IL-12是在As斑块中过量表达的炎症细胞因子，两者的水平与心血管疾病的风险呈正相关[18-20]。IL-18属于IL-1超家族成员，目前认为其是内源性和获得性免疫炎症反应的重要调节子[21]。IL-12由IL-12p40、IL-12p35两个亚基组成的，其中IL-12p35普遍表达于各类细胞，而IL-12p40主要表达于免疫细胞。在静止状态下，各种细胞中的IL-12p35是很微量的，在免疫反应时，IL-12p40可大量合成[22]。IL-12具有类似于IL-18的功能，对IL-18的生物学功能具有协同效应，两者的协同作用对于诱导IFN-γ等炎症因子的表达[23, 24] 、启动Th1反应[25, 26]和树突状细胞（DC）成熟[27, 28]等具有重要作用。虽然IL-18最初的功能被认为与诱导IFN-γ有关，然而最近的研究显示IL-18具有多种促As的功能。生理状态下，IL-18及其受体主要在血管平滑肌细胞和内皮细胞表达，炎症细胞表达IL-18R相对较少。但在As斑块中IL-18及其受体过量表达，尤其在巨噬细胞中表达明显。在血管平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞中，IL-18诱导IL-6、IL-8、ICAM-1和基质金属蛋白酶（MMPs）的表达，而且，与IL-12共同作用后，IL-18能促进平滑肌细胞IFN-γ的表达，这些作用对于As的形成具有重要意义[29]
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白细胞介素范文2
【关键词】白细胞介素12；乙型肝炎；抗病毒治疗
【中图分类号】R512.6【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2014）01-0353-01【前言】目前，全球乙型肝炎病毒慢性感染的人数超过了3.5亿，35%-40%的慢性乙型肝炎终将转化为肝硬化或肝癌。每年由乙肝病毒引起的死亡人数超过一百万人。而中国是乙型病毒性肝炎的高发区，乙肝感染人数占全国人口的10%以上。由于HBV缓慢的病毒清除动力学和自发的基因变异性，慢性乙型肝炎的抗病毒治疗在临床上仍然是种挑战。IL-l2 是由抗原提呈细胞所分泌的一种细胞因子，可促进Th1细胞发育，介导细胞毒活性和IFN-γ的产生，可抑制HBV复制，对慢性乙型肝炎患者有较明显的抗HBV-DNA活性。近年来对乙肝的治疗作用还包括做治疗性疫苗佐剂，以IL-12作为佐剂的治疗性疫苗，不仅能诱导机体产生特异性体液免疫反应，而且也诱导机体产生特异性持久的细胞免疫反应。本文拟就对IL-l2乙型肝炎的抗病毒治疗（主要包括抑制病毒复制和做治疗性疫苗佐剂两个方面）以及乙型肝炎患者中IL-l2检测的临床意义的目前国内外研究的最新进展总结如下，并对用免疫调节剂治疗慢性乙型肝炎提供新的思路。
1 IL-12的来源与本质
白细胞介素12（IL-12），最初称作自然杀伤细胞刺激因子（NKSF）或细胞毒性淋巴细胞成熟因子（cLMF），是由巨噬细胞、B淋巴细胞等抗原递呈细胞在免疫应答中产生的细胞因子。最早从EBV病毒转染的人B淋巴母细胞系RPMI-8866和佛波酯刺激的人B淋巴母细胞系NC 37的上清液中纯化和鉴定。IL-12是由分子量为35KD（P35）和40KD（P40）两条多肽链经二硫键连接组成的异源二聚体分子。IL-12的P35和P40两条多肽链分别是由两种不同的基因编码，单独的P35和P40无生物活性，只有当两个基因同时表达才产生有生物活性的IL-12[1]。IL-12 的生物学效应有促进Th1 细胞发育，抑制Th2 细胞发育，调节Th1/ Th2 细胞比例，诱导T 淋巴细胞和自然杀伤细胞分泌干扰素（ IFN-γ） ，增强细胞介导的免疫反应和自然杀伤细胞的溶解效应，促进特异性细胞毒性淋巴细胞（CTL） 增生，扩大CTL 的溶解反应。
2 IL-12对乙型肝炎的抗病毒作用
2.1 内源性IFN-γ的诱生
IFN-γ的产生细胞为CD4+CD8+T细胞，其次为NK细胞。IFN-γ不仅可增强NK细胞，CTL细胞的活性，而且可以诱导MHC-I和MHC-II分子的表达，扩大了免疫应答的识别阶段，同时刺激IL-12的产生，从而增强宿主细胞的免疫反应。IL-12可促进Th1细胞发育，诱导T细胞和NK细胞分泌IFN-γ，增加CD8 T细胞的细胞毒活性，同时增强NK细胞的功能，促进细胞免疫功能[2]。 因而内源性IFN-γ的诱生在IL-12的抗HBV作用中具有有着重要地位和作用。熊仕秋等[3]研究显示IL-12体外能增强慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞产生IFN-γ，从而上调细胞免疫应答，以利于HBV从体内排除。IL-12的抗病毒作用主要是通过IFN-γ诱生实现的。鉴于IL-12的生物学功能及抗HBV作用机制，重组IL-12有望成为新的抗HBV药物。陈瑜[4]联合拉米夫定治疗乙型肝炎，与单独使用拉米夫定治疗相比，拉米夫定与IL-12联合治疗的抗病毒活性更强。
2.2 TH1/TH2细胞平衡
TH1/TH2比例是影响机体持续感染和能否有效清除病毒的重要因素，如果Th1细胞占优势，将促进细胞免疫，增强CD8+T细胞的活性，从而清除细胞内病毒，如果Th2细胞占优势，将抑制细胞免疫，无法清除HBV病毒，而发生持续性的HBV感染。IL-12可激活NK细胞及细胞毒性T细胞，增强淋巴细胞的细胞毒作用。IL-12在T细胞中主要是作用于Th1细胞，它可增强Th1应答和抑制Th2应答，在调节Th1细胞分化上有重要作用.可诱导PBMC产生IFN-γ，促进细胞免疫反应[5]。栾厦[6]等认为，慢性HBV患者如应用IL-12治疗，可使以Th2型体液免疫反应为主转向Th1型细胞反应为主，恢复IFN-γ的产生，从而有利于HBV的清除。IL-12在 Th1细胞分化中具有决定作用，能特异性促进Th1细胞发育，诱导其产生IFN-γ、IFN-β等Th1型细胞因子，抑制Th2细胞活性[7]。这表明IL-12通过对内源性IFN-γ的诱生，促进TH1细胞亚群的发育，是IL-12抗HBV作用的重要机制之一。
3 IL-12与乙型肝炎疫苗
IL-12是诱生免疫应答的最佳细胞因子，启动细胞介导的免疫反应。以IL-12作为佐剂的治疗性疫苗，不仅能诱导机体产生特异性体液免疫反应，而且也诱导机体产生特异性持久的细胞免疫反应。王翠玲[8]等人研究显示HBsAg仅能诱导慢性乙型肝炎患这PBMC产生非常低水平的免疫应答，表现为产生低水平的IFN-γ，而IL-12和HBsAg联合刺激乙型肝炎患者PBMC，通过产生高水平IFN-γ激活乙型肝炎患者特异性细胞免疫， 若将IL-12和HBsAg联合组成特异性治疗型疫苗期待其能激活乙型肝炎患者特异性细胞免疫， 这对于与HBV感染的治疗可能是非常有效的途径。观察编码鼠IL-12的真核表达载体对HBVDNA疫苗诱导BaLb/c小鼠免疫应答的影响，IL-12的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答[9]。赵平[10]等人的研究也表明了IL-12增强HBV融合抗原DNA疫苗在小鼠诱导的细胞免疫应答，这些研究证实DNA疫苗的细胞及体液免疫原性以及细胞因子对免疫应答的促进作用，为临床预防及HBV感染提供了新思维。
4 IL-12在HBV感染者血清中检测的临床意义
研究证实，机体免疫功能紊乱，尤其是T淋巴细胞亚群与细胞因子的调节失调与慢性肝病的发生发密切相关[11]。对乙型病毒性肝炎患者血清IL-12含量进行了检测，可以探讨它们在乙型肝炎患者血清中的变化规律及其与肝功受损的关系，以便为临床诊疗和预后提供依据。李素梅[12]探讨了血清部分白介素水平与乙型肝炎病变的关系，发现血中白介素水平是判断乙肝病毒感染者免疫状态及进行治疗的重要指标。用IL-12与IL-4比值作为患者Th1/Th2应答比值，可以得知慢性肝炎患者组出现了明显的Th1/Th2失衡。Th1应答亢进而Th2应答受抑，导致机体无法有效清除HBV病毒，炎症持续反应。HBV感染类型多样，通过检测HBV感染者血清IL-12水平，了解其在不同HBV感染中的可能存在的差异，可以探讨其临床意义。血清IL-12水平可以在一定程度上反应慢性HBV感染状态下机体的细胞免疫状态，与慢性乙肝病人肝脏炎症活动有关，急性期血清IL-12低水平提示低水平IL-12可能与肝炎活动有一定的关系，将其列为HBV常规检测有一定的意义[13]。此外，HBV在体内大量复制作用于单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞在内的抗原递呈细胞（APC）产生IL-12，IL-12具有多种生物学活性，IL-12能诱导新生CD4 T细胞分化为Th1细胞，PBMC IL-12水平与慢性乙肝病人肝脏炎症活动有关[14]，血清IL- 12和IL-2水平可考虑作为无症状携带者抗病毒治疗指征，慢性乙型肝炎活动与血清IL-12水平低下有关，血清IL-2水平升高与肝炎活动有关，其升高主要参与促进HbeAg/HBeAb血清转换[15]。因此IL-12在HBV感染者血清中检测具有重要的临床意义。
5 展望
乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的公共卫生问题。目前HBV感染尚无理想的治疗措施，IL-12是抗原呈递细胞（APC）产生的一种细胞因子，在免疫应答中有重要作用，可用于乙型肝炎的治疗 ，在乙型型肝炎病毒感染的早期，IL-12通过对IFN-γ的早期诱导，抑制早期病毒复制与激活细胞毒性T淋巴细胞，阻止疾病近一步发展IL-12增强NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞应答及引起IFN-γ产生的能力表明可能具有抗病毒活性因为IL-12对HBV感染表现出治疗活性。IL-12在乙肝病毒转基因小鼠的应用，证明了它增强机体细胞免疫功能或作为佐剂能增强乙肝DNA疫苗的预防和治疗效，目前国外已将IL-12应用于慢性乙型肝炎病人I期II期临床治疗，取得了一定的疗效[16]，提示IL-12及其细胞因子家族在抵御HBV感染中起着十分重要的作用.因此IL-12对于治疗慢性乙型肝炎有潜在的应用价值。为临床预防及治疗HBV感染提供了有效手段。但是，要真正应用到临床，还需进一步深入研究。
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白细胞介素范文3
IL21在发挥生物学活性过程中与IL2、 IL4、 IL7、 IL9和IL15等细胞因子受体共用γ链[1], 均属于γc（共同γ链）依赖性细胞因子家族成员。近几年的研究, 对IL21的生物学活性有了深入的认识, 它可以广泛调节T细胞、 B细胞、 NK细胞和骨髓细胞的功能, 在自身免疫性疾病、 变态反应性疾病和抗肿瘤免疫中扮演重要角色, 因此具有潜在的临床研究价值。本文中主要综述了IL21对三大免疫细胞T、 B和NK细胞的生物学调节作用, 为理解其在疾病过程中扮演的角色以及为将来用于疾病的生物治疗提供指导意义。
关键词：白细胞介素 21 免疫调节 B细胞 NK细胞 T细胞
1 IL21及其受体
1.1 IL21 成熟人IL21的相对分子质量（Mr）是15000, 由131个氨基酸形成四螺旋束状结构域, 与IL2、 IL4和IL15结构具有同源性。IL21基因与IL2和IL15基因位于相同的染色质区域, 定位于4q26q27区, 与IL2基因只相距约180 kb[2]。IL21主要来源于活化的CD4+T细胞[2]。Wurster等[3]观察到, 起初在Th1或Th2极化条件下刺激的C57BL/6鼠T辅助细胞前体可微量表达IL21, 一旦分化为Th2细胞后可稳定表达IL21细胞因子且不受IL4和IFNγ的干扰, 但在Th1细胞中没有看到IL21mRNA的转录, 因此他们认为IL21是Th2细胞因子的一种。Coquet 等[4]最近发现用antiCD3/CD28联合CD1d限制性鞘糖脂抗原（α半乳糖苷神经酰胺）刺激的NKT细胞比通常的CD4+T细胞分泌更高的IL21, 表明NKT细胞可能是潜在分泌IL21的重要细胞, 通过分泌IL21介导对B、 T、 NK细胞和自身的免疫调节。这与IL21在免疫反应发生早期（固有免疫阶段）就能发挥相应生物学调节效应的理论推断相符合。
1.2 IL21R 早期Ozaki等[5]克隆了一种新的白细胞介素受体（NILR）, 发现它与IL2Rβ链高度相关, 与IL4Rα链基因相临, 位于16号染色体。经ParrishNovak等后来鉴定为IL21R亚单位, 是一种新的Ⅰ型细胞因子受体, 并发现它包含4个保守的半胱氨酸残基, 一段TrpSerXTrpSer基序, 一段IL2Rβ链高度保守的氨基酸序列。人IL21R是一个由独有的IL21R亚单位（IL21Rα）和γc (common γchain) 组成的复合体[1]。其中IL21R亚单位为配体识别部位, γc为信号传导单位。IL21R通常广泛表达于T细胞、 B细胞、 NK细胞和一些骨髓细胞及角化细胞表面[1, 2]。同IL2、 IL4、 IL7、 IL9和IL15相似, IL21活化JAK家族蛋白酪氨酸激酶JAK1和JAK3, 其中JAK1结合IL21R亚单位, JAK3结合于共同γ链。与其他γc家族细胞因子不同的是, 这两个激酶主要介导IL21依赖的STAT1和STAT3的活化, 而不是STAT5A和STAT5B的活化[1, 6, 7]。最近对IL21介导增殖的分子机制的研究表明, IL21R胞质区酪氨酸510（Y510）可以有效的介导STAT1和STAT3磷酸化, 从而介导完整的增殖效应, 但并不引起STAT5的磷酸化。STAT1/STAT3基因双敲除鼠的CD8+T细胞对IL21+IL15刺激的增殖反应明显减弱。研究还观察到MAPK和PI3K通路被特异抑制因子阻断后IL21介导的增殖即被阻断, 表明至少有JAKSTAT、 MAPK和PI3K传导途径参与了IL21介导的信号传导[8]。
2 IL21对B细胞的免疫调节
2.1 IL21对B细胞的增殖和凋亡的调节 B细胞的增殖和凋亡对维持体内B细胞的稳态至关重要, IL21在对B细胞的生长调节方面发挥了不可替代的作用。早期ParrishNovak 等发现IL21联合 antiCD40 mAb可诱导人外周血B细胞的增殖[2], 但对antiCD40 mAb介导的C57BL/6鼠primary B无此作用[9]; 另一方面又抑制antiIgM和IL4诱导的人外周血B细胞[2]或鼠primary B细胞的增殖[9]。Hao等观察到IL21对B淋巴细胞生物学效应存在多态性, 表现在IL21能分别诱导antiCD40活化的C57BC/6鼠B细胞凋亡和antiCD40活化的BALB/c鼠B细胞的增殖, 这因不同种系来源的B细胞而异; 其次IL21对不同活化状态的B细胞介导不同的生物学活性。如对于LPS和CpG DNA通过TLRs4和TLRs9受体途径活化的B细胞, IL21主要介导其凋亡和生长抑制作用; 经antiCD40或antiCD40+antiIgM共同刺激的B细胞, IL21可介导其增殖[10]。IL21虽然能促进antiCD40或antiIgM单独活化的B细胞增殖但作用都很弱[10, 11], 甚至介导anti
白细胞介素范文4
【关键词】 心房颤动；白细胞介素-18；炎症
作者单位：730030 甘肃省兰州大学第二医院心内科
通讯作者：白锋
心房颤动（atrial fibrillation， AF） 是临床上最常见的心律失常之一， 但目前AF的确切发病机制仍不清楚。近来有越来越多的证据表明炎症在房颤的发生和发展中起着重要的作用。白细胞介素-18（IL-18）是一种重要的促炎症因子， 主要由巨噬细胞产生， 能诱导免疫细胞产生多种细胞因子， 如干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-12、粒-巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等， 调节体内炎症及免疫反应。与冠心病、心力衰竭等心血管疾病的发生密切相关。已有研究显示超敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、TNF-α等炎性介质与AF有一定的相关性[1-3]， 但IL-18做为一种新型的炎症因子与AF的关系， 目前鲜有报道。本文旨在观察AF患者IL-18血清水平的变化， 探讨炎症与AF的关系。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 2010年10月至2012年3月兰州大学第二医院心内科入选的阵发性AF患者36例， 持续性AF患者52例。（阵发性AF是指AF发作可自行停止且持续时间不超过7天；持续时间超过7天则为持续性AF，包括永久性AF。）另纳入30例本院年龄、性别与AF组匹配的但无AF人群作为对照组（均需符合排除标准）。对所有研究象均详细采集病史， 进行体格检查、血常规、生化和12导联心电图检查。排除标准：冠心病、瓣膜性心脏病、严重心功能不全（NYHA分级IV级）、其他心律失常、电解质紊乱、肝肾功能严重受损（ALT>正常3倍， 血肌酐>265 μmol/L）、有急/慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、甲状腺功能异常、恶性肿瘤、半年内有手术史、半年内有脑卒中史、正在服用糖皮质激素或非甾体类抗炎药（阿司匹林除外）者。
1. 2 心脏彩超检测 应用多普勒心脏超声测定左房直径（LAD）和左室射血分数（LVEF）。
1. 3 血样采集与检测 空腹12小时后早上6～7时从肘前静脉抽取外周静脉血。全血以4000 r/min离心20 min后取上清等量分装后保存在-20℃冰箱， 一次性结冻测定。血清IL-18水平采用ELISA法检测（试剂盒购自日本MBL公司）。血清hs-CRP测定采用免疫比浊法（试剂盒购自芬兰Orion Diagnostica Oy公司）， 以上测定严格按说明书进行。应用JHF7-3000血常规检测仪按实验室标准检测外周血白细胞（WBC）。
1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析， 结果以x-±s 或者百分率表示。组间率的比较采用卡方检验；组间均数比较采用单因素方差分析或Welch检验；相关性采用pearson相关分析。以P
2 结果
2. 1 三组心脏超声结果比较持续性AF组LAD较对照组和阵发性AF组均增大（P
2. 2 三组血清IL-18、hs-CRP和WBC比较 持续性AF组血清IL-18、hs-CRP较对照组和阵发性AF组均升高（P
2. 3 血清IL-18水平与其他指标的相关性 AF患者血清IL-18水平与hs-CRP水平、LAD及年龄具有相关性。见表3。
表3 血清IL-18水平与其他指标的相关性
危险因素 r P
年龄 0.289
LAD 0.359
LVEF 0.101 >0.05
hs-CRP 0.638
WBC 0.098 >0.05
3 讨论
有资料表明， AF在发达国家的总发病率为1.5%-2%， 我国的患病率约为0.77%；其发生卒中与充血性心力衰竭的风险分别是正常人群的5倍与3倍， 给现代社会带来了医疗、社会、经济等一系列挑战。近年来， 炎症因素作为AF发病机制之一， 已经引起人们极大的关注。有研究发现心房细胞及间质的炎症过程可直接引起膜电位的波动， 形成触发活动， 导致心律失常。另外炎症反应可能不仅参与了AF的诱发， 还引起了心房的结构重构及电重构[4， 5]。本研究发现持续性AF和阵发性AF患者血清IL-18水平明显升高。IL-18通过JNK和p38 MAPK信号通路诱导AP-1 （activator protein 1）、NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）及其他转录基因表达， 进一步促进前炎症因子IL-6等及基质金属蛋白酶表达[6]。而这些因子又与AF存在一定的相关性[1，7]。本研究还发现血清IL-18水平与hs-CRP水平呈正相关性， 而hs-CRP可以由IL-6在炎症过程中诱导产生， 它作为探讨炎症与AF关系的观察指标， 已有大量的报道[1， 2 ，8]。这些研究说明IL-18可能是AF发生、发展过程中重要的促炎因子， AF患者血清IL-18高表达， 并可能与其他的炎性因子一起参与了AF的形成机制。
综上所述， 本研究显示持续性AF和阵发性AF患者血清IL-18水平明显升高， 提示IL-18可能与AF有关， 参与了AF发生和发展， 为AF治疗提供新的靶点。不过大多数房颤的发生、发展是一个多因素的、复杂的、长期的过程， IL-18在其中的作用有待进一步阐明。
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白细胞介素范文5
【关键词】 IL18；急性排斥反应
【中国分类号】 R74.1 【文献标识码】 A【文章编号】 1044-5511（2012）02-0159-01
人类白细胞抗原是具有高度多态性的同种异体抗原，其化学本质为一类糖蛋白，由一条α重链和一条β轻链非共价结合而成。其肽链的氨基端向外，羧基端穿入细胞质，中间疏水部分在胞膜中；随着人类白细胞抗原基因配型技术的广泛应用和新型高效低毒免疫抑制药物的不断出现，肾移植的近期成功率有了很大提高；如何早期发现或预测急性排斥反应的发生，对于提高移植物的远期存活率具有重要意义；笔者通过动态监测肾脏移植术后患者血清IL18在急性排斥反应、 感染及环孢素A(CsA)中毒中水平的改变，以探讨在肾移植急性排斥反应早期诊断和鉴别诊断的意义。
1.临床资料
选择2003年-2009年间在我院接受同种异体肾移植患者36例的病历资料，男29例，女7例， 年龄20-59岁，原发病为慢性肾小肾炎、 多囊肾等。选择健康人群中12例作为对照组，根据临床表现、 实验室检查、 肾穿活检病理检查和多普勒超声检查结果将患者分为肾功能稳定组、急性排斥反应组、感染组和CsA中毒组。
2.检测方法
患者于术前一天、术后一天、 三天、 五天、 七天、 十天、十四天、二十一天空腹抽取静脉血3 mL，对发生急性排斥反应、 感染及CsA中毒的患者于确诊时采血，2 h内3 000 r/min离心10 min, 取上清置-70℃保存至检测。血清IL18测定用BIO rad 550型酶标仪，采用ELISA法按照试剂盒说明操作；数据资料均以x±s表示，组间比较采用配对t检验，P
3.检测结果
根据临床表现、辅助检查及肾穿活检结果，在36例肾移植患者中，18例术后肾功能保持稳定，无相关并发症发生；12例在术后1月内发生了急性排斥反应；5例出现不同程度的感染；4例出现CsA中毒现象。在对所有患者术后血清IL18水平监测结果发现，在肾功能稳定组中，血清白细胞介素18水平一般于术后第1天即有升高，在术后第7天达高峰，随后逐渐下降，10 d左右即趋于稳定；而在急性排斥反应组中，其血清白细胞介素18水平术后10 d仍维持在高水平为（1086.42±264.65）ng/L，与肾功能稳定组比较（283.35±56.62）ng/L，差别有显著性意义(P
4.讨论
当移植了他人的肾脏，这种"非己"的器官存在于受者体内，于是受到体内以淋巴细胞为主的免疫活性细胞的"攻击"。这就是医学上所称的排斥反应。排斥反应大致可分为四种：超急性排斥反应、加速性排斥反应、急性排斥反应及慢性排异反应。超急性排斥确实可以称为一种"超级"排斥。它来势凶猛，大多数于吻合血同管开放后几分钟至几小时发生，也有人称之为"手术台上的排斥反应"。移植的肾脏突然变软,由红变紫，并很快停止排斥。仅少数病人可延迟发生，但也只限于移植后的24小时内。超急排斥一但发生，目前尚无治疗办法，一经确定诊断应切除移植肾。 加速性排斥反应指术后3-5天内发生的排斥反应。病员表现为体温升高、尿少、血压升高、移植肾肿胀压痛、病情进行性发展、血肌酐迅速上升，病员需透析。其余病员开始治疗时有所改善，但停药后又复发，全身反应加重，移植肾区持续胀痛，肾功能不见好转，应尽快切除移植肾。急性排斥反应是临床上最多见的一种排斥反应。发生于肾移植后第6天至术后3-6个月内，特别好发于移植后3个月内，以第5周发生率最高。据统计，肾移植后3个月内有30%的病员至少发生一次急性排斥。这段时间病员要按时随访、复查。抗排斥药，尤其是环抱素不得轻易改动，绝对听从医生指导。主要表现为：发热、尿少、血压升高、血肌酐上升。对于急性排斥反应有时与突然变换抗排斥药有关。如环抱素+强的松+硫唑嘌呤，未重叠使用，有时则是与迅速减药有关。另外,不可忽视的是感染也可诱发急性排斥。对付"急排"的方法：大剂量甲基强的松龙冲击，抗淋巴细胞球蛋白或抗胸腺细胞球蛋白及专门特异性地针对排斥有关的T细胞的单克隆抗体。慢性排斥反应是指排斥反应发生在手术6个月以后。"慢排"的发生一般与以下几个因素有关：白细胞血型配合不理想、肾移植后早期发生多次的急性排斥、环抱素剂量长期不足、高脂血症等。主要表现为：内生肌酐清除率下降，以及多尿和低比重尿，甚至无尿。对于慢性排斥反应的治疗措施有：①调整免疫制剂、短程激素冲击；②抗凝，抗血小板聚集；②扩张肾血管。其中调整抗排斥药物包括：环抱素、FK506、强的松、霉盼酸酯、硫唑嘌呤、环磷酰胺、百令胶囊、雷公藤制剂等。当然，同样的药在不同的病员身上会出现不同的效果，这就要因人而异了，最终还是要听取医生的建议。总之，病员术后出现排斥反应，要及时去医院治疗，不可耽误治疗时间。一定要尊重科学，定期复查，才能确保移植肾功能的持久、正常。
寻找一种较为特异的、无创检查方法对于诊断移植急性排斥反应尤为重要。有文献报道［1］在急性肾脏排斥反应中，存在有IL7、IL16、IL18等炎性细胞因子的高表达。因此我们选择监测肾移植患者血清白细胞介素18水平的变化，探讨其在诊断移植排斥反应中的作用。血清白细胞介素18主要由活化的T、B淋巴细胞、NK细胞、Th1细胞等分泌产生，并与多种肾脏疾病、自身免疫病的发生发展密切相关［1］。肾移植术后1周内，血清白细胞介素18水平的增高是机体应激反应引起血清白细胞介素18这种应激蛋白分泌增加，与移植肾有无功能关系不大。然而发生急性排斥反应时，体内免疫活性细胞受异体肾脏抗原激活，可以释放血清白细胞介素18 ，促进B淋巴细胞活化、增殖，促进CTL的分化及NK细胞的杀伤活性，而血清白细胞介素18水平在排斥反应症状出现前1-3 d即可升高，因而具有一定的预测作用，可为急性排斥反应的治疗赢得了时间。本组12例急性排斥反应患者中，术后1周血清白细胞介素18仍维持高水平，应用MP冲击治疗后血清白细胞介素18降至肾功能稳定组水平，排斥反应逆转，而难治性排斥反应患者经OKT3冲击治疗或切除移植肾后血清白细胞介素18水平也逐渐下降，从而提示血清白细胞介素18在肾移植急性排斥反应的发生、治疗中具有重要意义。
白细胞介素范文6
[关键词] 白细胞介素-10；反复自然流产；绒毛；蜕膜
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）21-11-03
反复自然流产是一种常见的妊娠并发症，发病原因极其复杂，约50%的患者病因不明，已被公认与免疫有关 [1]，其中Th1/Th2细胞因子与反复自然流产关系密切[2-3]。白细胞介素-10（IL-10）是一类主要由Th2细胞分泌的细胞因子，国内外已有不少学者研究了反复自然流产患者外周血中IL-10的变化[4-6]，关于反复自然流产患者蜕膜和绒毛组织中IL-10蛋白表达的研究不多。我们的研究对反复自然流产患者蜕膜、绒毛组织中IL-10的蛋白表达进行定位和半定量分析，以进一步探讨自然流产发生的免疫机制，为临床治疗提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年3月～2011年2月在包头医学院附属医院妇产科门诊就诊的反复自然流产患者30例作为实验组，年龄22～40岁，平均（28.8±6.3）岁。实验组入选标准：既往2次或以上自然流产病史；无染色体、解剖、内分泌异常和感染、自身免疫性疾病。随机选取同期正常早孕的人工流产者30例作为对照组，年龄20～38岁，平均（27.5±5.3）岁，孕龄6～10周，既往均有生育健康子女，无自然流产、死胎、死产史，B超提示胚胎发育正常，无染色体疾病和其他系统疾病。收集刮宫后绒毛和蜕膜组织，生理盐水清洗样本，然后用10%甲醛溶液固定，经脱水、透明、浸蜡、包埋制成蜡块保存。
1.2 主要试剂
免疫组化SABC试剂盒，兔抗人IL-10多克隆抗体， DAB显色试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。
1.3 免疫组织化学染色
将蜡块切为6μm厚的组织切片，经脱蜡和水化；0.3%双氧水-甲醇室温孵育20min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min，使抗原位点暴露出来；滴加兔抗人IL-10抗体工作液（1100），阴性对照用PBS代替一抗，4℃过夜；加二抗后置于37℃温箱中30min；加SABC后置于37℃温箱中30min；DAB- H2O2室温显色，苏木素复染细胞核，脱水、透明、封片。
1.4 图像处理
实验组和对照组各30例，每例取绒毛组织切片和蜕膜组织切片各2张，应用捷达801图像分析系统进行分析，分别于绒毛组织的滋养层细胞、蜕膜组织的蜕膜细胞、腺上皮细胞随机取2个单位面积，测量平均光密度作为测量数据。
1.5 统计学分析
数据采用SPSS10.0软件进行统计分析，计算平均值与标准差，结果以（）表示，实验组与对照组组间进行t检验，P
2 结果
2.1 IL-10蛋白在绒毛和蜕膜中的组织学定位
在蜕膜组织中，实验组和对照组的蜕膜细胞和腺上皮细胞胞质内均有棕黄色阳性反应颗粒。在绒毛组织中，实验组和对照组IL-10蛋白的表达主要定位于绒毛滋养层细胞的胞质内，呈综黄色颗粒，两组阳性反应强弱不等。见图1～4。
2.2 IL-10蛋白在绒毛和蜕膜中的半定量结果
在蜕膜组织中，实验组IL-10的蛋白含量相对降低，与对照组比较有显著差异（P
3 讨论
目前许多研究结果表明T辅助细胞亚型Th1、Th2 细胞因子平衡与妊娠结局密切相关。正常妊娠表现为一种特殊的Th2现象，Th1处于一种抑制状态，当发生向Th1型细胞因子的偏离时，可能会导致自然流产[7-8]。
IL-10是一类主要由Th2细胞分泌的具有抗炎和抗过敏作用的细胞因子， 具有蜕膜组织的抗炎和抑制免疫活性的作用。近年来的研究发现， IL-10与妊娠的生理病理过程有密切的联系。Izzo研究显示在妊娠早期IL-10与子宫内膜对胚胎植入的容受性形成有关，防止对滋养层细胞和胎儿的继发损伤，维持了正常妊娠的顺利进行[9]。邵剑春等[10]研究发现正常妊娠者外周血的IL-10高于非妊娠者，而反复自然流产患者外周血的IL-10水平低于健康组。本实验显示IL-10蛋白主要定位于绒毛组织的滋养层细胞及蜕膜组织的蜕膜细胞、腺上皮细胞的细胞质内，在反复自然流产者的绒毛组织和蜕膜组织中IL-10蛋白表达相对含量明显低于正常妊娠妇女，其结果与李静等[11-12]研究结果一致，反复自然流产患者早孕绒毛组织及蜕膜组织IL-10表达的下降，可能使细胞免疫增强，滋养层细胞植入异常，影响胚胎的正常发育，而导致早期自然流产。