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青涩体验范文1
【关键词】角色体验；生活世界；同频
德国哲学家胡塞尔曾提出“生活世界”理论，所谓“生活世界”是那个唯一实在的，通过知觉实际地被给予的、被经验到并能被经验到的世界。而幼儿的“生活世界”是幼儿生活其中并能获得生活意义的世界，在幼儿的眼里，世界是自由与宽松的，充满想象与情趣的。那么，教师如何用回归幼儿的“生活世界”视野分析目前幼儿园儿童体验角色游戏的现状，如何在保障幼儿游戏权益、发展幼儿多方面能力的同时，促进教师专业能力的发展？
发现问题：
儿童体验角色游戏与幼儿的“生活世界”是否真正同频？
角色游戏一直被孩子推崇和喜爱着，每每到了体验游戏的时候孩子们总是那么兴奋，也许是体验各种社会角色的强烈吸引力使得游戏倍增魅力，儿童体验角色游戏是实现教育教学的游戏目标，也是促进幼儿身心全面和谐发展的重要途径之一，但是，有些儿童体验角色游戏中的某些内容已渐渐远离了幼儿的“生活世界”，教师不能很好的顾及到幼儿是否真正获得游戏性的心理体验，而更多注重游戏材料是否高端，游戏内容是否新颖，注重强调课程教学目标实现的功利化的游戏价值观，让儿童体验角色游戏失去了发展的土壤。
案例分享：在游戏室“未来星职业体验馆”中“伶俐饰品”店是女孩子原本最爱玩的游戏了，在伶俐饰品店中我们投放了很多各式各样的饰品，有成人女士手表、项链、仿真女士戒指、发夹、耳环等等，只有少量的是孩子们不用的头箍和发夹，孩子们一开始兴趣盎然，有的用彩色绳串彩色不同形状的珠珠；有的小朋友进行简单买卖，有的在挑选饰品在试样，有的用废旧的彩色吸管自制各式项链、手链等，但一阵新鲜感后就失去了兴趣，渐渐的，伶俐饰品店变得门市冷落，每每呈现出来的状态便是一来玩就是个别孩子在串珠珠了，其他的角色职业提体验内容便不再进行下去了。
分析反思：饰品对于女孩子来说可能是情有独钟的，所以，“伶俐饰品”店女孩子光顾最多，但是每次游戏的时间不长，一种买卖、职业体验的状态不是太理想，最多的镜头也就是孩子们不停的串珠珠，自由散漫的摸着看着每种精美的成人饰品，真正模仿生活中的角色内容很少，孩子们只见的语言交流更是甚少，结合案例点滴，于是便结合幼儿的“生活世界”分析，其实，孩子们对于饰品的概念来源于妈妈那里，已有的认知经验仅仅局限于陪妈妈逛商场买一些饰品而已，对于孩子们来说，饰品与他们的世界有点隔离，所以，孩子们在店里不知道怎样玩，不知道怎样扮演这种社会角色，而不是表演属于孩子生活世界里的这种角色。又如将“伶俐饰品”店里的进行买卖的游戏材料调整为都是孩子们的饰品而非是妈妈们的饰品，然后提供一些娃娃仿真模特或幼儿本身，就可以进行实际饰品装饰的游戏，这样是否可以激发出幼儿更多的属于她们自己的游戏内容呢。作为一线教师，我们能否采取顺应幼儿的策略，在适宜的时候提供必要的场景和材料，满足了幼儿的兴趣和活动开展的需要，解决了游戏中出现的问题，使游戏开展得更加有声有色。让幼儿感觉一种属于孩子们的游戏天地，还原孩子们真实的“生活世界”。这也许是孩子们可以获得游戏经验的一个途径。
同频策略：
为孩子创设“有备而来”的环境促游戏水平的提升
环境对于幼儿的学习和提升有着不可估量的教育作用，对幼儿的游戏水平发展也有着长远的影响，创设一种有规划、有准备的环境对于幼儿来说激发其内在的游戏动机是非常关键的。那如何有规划、有准备呢。我们根据现有的游戏活动室进行重新调整、重新规划。六个游戏区域重新摆放规划，让幼儿进行新游戏环境的尝试，一开始幼儿还有点不适应，游戏进行了几次后这样的状况几乎可以忽略了。在游戏中，我们的孩子有着自己独立而又独特的游戏想法，这种游戏利益是教师不可随意改变的，教师需要做的是尊重孩子们的游戏意愿，《纲要》中指出，教师要做幼儿游戏的支持者、参与者和合作者。在这些角色中，同样也要为幼儿的游戏创设丰富又有价值的游戏环境，引发幼儿和促进幼儿外在和内在的游戏学习和发展动机，使得孩子在与一种有计划、有准备的游戏环境的生生互动、师生互动中，把“真游戏”还给幼儿，帮助幼儿获取知识、积累经验。真正的让我们的孩子走近游戏里，走进游戏里。
游戏精神 自主发展
我们一直在提倡践行游戏精神，自由、自主、愉悦……教育家卢梭主张“教育始于自然归于自然”，要求教育遵循“自然”的游戏天性，在学期初的时候，我们发动家长资源，共同创设一个有价值、有准备的游戏环境，使环境中的每个角落都散发游戏魅力，让每个家长都能在幼儿的游戏室里做一份游戏贡献。将老师、家长、孩子三维合体巧妙利用各种资源，真正的让其成为促进幼儿自主游戏互动的良田肥土。在游戏活动室的六大区域创设游戏情境中，教师首先要引导幼儿主动思考、大想象，关于游戏，大胆鼓励幼儿提出自己的观点和想法，如在游戏区域设置中，有些游戏区域需要固定的、相对长期稳定的空间，譬如“大润发”、“体检中心”、“梦想小舞台”；但有些游戏区域如“大喜来创意坊”“伶俐饰品”、“形象设计”等区域则要根据幼儿的游戏兴趣与游戏时间和需要及时进行调整。让幼儿在一种自主开放而具有发展挑战的的游戏环境中，根据自己自身的兴趣、最近发展的需要和能力自主自由选择游戏区域、游戏材料和游戏同伴，做他们真正最想做的事，玩他们真正最想玩的游戏，运用各种感官充分经验感知和情感体验，真切自然、创造性的表达自己的游戏意愿，让他们在充满乐趣的游戏中体验快乐、感受幸福，在与游戏材料、游戏环境、游戏同伴的充分互动中获得游戏认知与发展游戏经验。教师给予幼儿自主空间的同时要关注幼儿的角色游戏扮演，以增强幼儿的角色意识。所以，我们在馆内的每个场所中工作人员教师都提供了相应的服装和工作卡，帮助幼儿明确自己的角色，加强个巩固幼儿的角色意识，这样让幼儿在角色扮演中也更加的投入，例如：幼儿对于“体检中心”游戏是充满兴趣的，特别对于医生这个角色充满向往。当孩子穿上白大褂，戴上听筒，孩子对于这个角色身份立即有了一种外显的表现，体现在：医生要认真地帮别人检查身体，细致地提醒别人每个项目都要检查到等；从被检查者与医生认真对话中都可以看出孩子们对于医生这一职业的崇敬。
游戏时间 极限充裕
纵观我们开展的一些游戏，几乎不可能做到一直让幼儿玩到尽兴的时间节点，只能说为了延续幼儿的游戏兴趣和游戏内容不被阻隔，适当延长幼儿的游戏时间，因为给予幼儿充裕的游戏时间，幼儿才能真正专注的投入到某一个角色体验中去，才能回到属于她（他）自己的生活世界。在诸多的游戏观察中不难发现：“儿童对游于戏活动的需要要远比对食物的需要更为强烈”，所以，教师需要真正的给予幼儿极限充裕的游戏时间，让幼儿在自己的“生活世界”里体验游戏的快乐，如果在游戏快要结束时仍有幼儿还有未结束的自主游戏的角色体验活动，教师可以鼓励幼儿自主安排游戏时间，或适当延伸游戏活动的时间，让幼儿继续专注游戏兴趣，让他们尽情体验其中的游戏乐趣。
投放材料 适度为基
在每个区域投放游戏材料r，我们总想着多投放点，孩子们也许玩的会更好、会更有趣、游戏专注力的时间会更长，其实不然，游戏材料的投放并不意味着多就是好，游戏材料的投放值得教师思考研究。教师在思考在游戏中，需要投放哪些材料，哪些辅助材料，游戏材料应该如何摆放等问题。例在“迎桂小吃”店中，由于过多的投放了各种常州的名小吃和点心，孩子们的分类整理还很缺乏的状态下，这个点每次游戏后都会出现点心乱乱的放在各个小蒸笼里，教师应该适量选择投放游戏材料只需满足每次的游戏时间的量即可。又例在“伶俐饰品”中，大大小小各种色彩的珠珠有很多盒，最不良的状态就是每次一玩，孩子们便不知道该如何将那么多盒的珠珠分类整理到位，整理材料的时候也就是随意不管什么珠珠都放在盒子里了，下次玩的时候又是乱的，孩子们选择会出现选择障碍。在以上的游戏点滴中，教师在投放游戏材料前一定要充分思考，投放这些材料的游戏目的是什么，什么时候需要增加或减少材料，这些游戏材料的投放对幼儿的游戏发展有什么促进作用；在游戏进行中，教师更要剖析，如何让简单的材料也能玩出大花样，如何让丰富的游戏材料发生高级的转化，让幼儿探索、体验游戏材料的多变性、组合性和可代替性的特点。在游戏的经验方面，教师能否引导幼儿还原生活世界中的生活经验，以便让幼儿产生更多创造性游戏的发展内容呢。诸多等等都是需要我们教师一环一环静心思考和尝试调整的。
游戏角色 定位正确
《纲要》中指出，教师是幼儿游戏活动的支持者、合作者和参与者，对于教师的角色定位在幼儿的游戏过程中有着不可替代的作用。教师与幼儿的角色关系是游戏的核心，它将直接影响幼儿游戏的兴趣，在很大程度上决定儿童体验角色游戏活动的效果。在游戏时，我们不难看到这样的一幕，教师随时随地的介入，孩子们在游戏的很投入时，教师自以为幼儿的一行为会影响游戏的质量而出现教师干预的身影和言语，其实，殊不知有时候教师自以为自己是在帮助幼儿，更多的时候反而会阻碍了幼儿的游戏发展；另一种则是教师完全作为旁观者的身份，走马观花，看似忙碌于各个区域，其实有点放任不管。因此，在儿童体验角色游戏中，教师要明确自己的角色定位，什么时候是参与者的角色，什么时候又是引导或支持者的角色，在引导幼儿积极主动地进行儿童体验角色游戏活动的同时，还应该根据幼儿游戏能力需要的差异设计不同的引导策略，提供不同层次难度的材料，在游戏区域中更好的弥补进而实现个别化教育，真正成为幼儿游戏的观察者、引导者和合作者，进一步激发他们的好奇心、求知欲和探索欲望，促进幼儿向更高的游戏水平发展。
评价方式 科学有效
每每游戏开展的结束之余教师总会给予一些评价，唯有评价能让教师、幼儿知晓每次开展的游戏是否有亮点经验可获或是在自己原有的游戏水平上能够再获一些游戏经验，又或是还有未完未尽兴的游戏如何继续等等，所以使用科学有效的多元化的评价时必要的，使用有效的评价方式科学合理的评价可以促进和提高幼儿再次投入游戏的积极性。现代认知心理学认为：幼儿只有在民主平等的游戏氛围中，才能自由的思考游戏、提出游戏的新问题、发表自己的意见或建议，才能有新的游戏发现和创新。因此，教师在对幼儿儿童体验角色游戏评价时，要根据幼儿的年龄特点及实际问题采用适当的方法进行评价，采取激励性的评价语言，教师尽量从正面加以引导，而且尽量以教师评价、幼儿自评、同伴互评三种评价方式的有机结合为主，鼓励幼儿发现自己和同伴的优点，以及引导幼儿发现同伴在游戏过程中是如何解决问题的，从而推进儿童体验角色游戏的活动的有效开展。
《纲要》中指出：“游戏是幼儿园的基本活动”。儿童体验角色游戏，带给孩子们的不仅仅是一种职业角色的扮演和模仿，更多的是为孩子们现有的生活认知游戏经验的积累上又上了一个台阶，角色体验游戏对于还原孩子们的生活世界来说是一件具有长远而有意义的事情。教师要让幼儿在享受生活游戏紧密融合，游戏中生活、生活中游戏的字眼中，奠定其终身的心灵基调与精神底蕴，完全以幼儿的视角，让他们在属于自己的角色体验游戏中快乐成长，为一个个鲜活的生命注入无限的游戏光环。
【参考文献】
[1]（德）胡塞尔.欧洲科学危机和超验现象学[M].北京：商务印书馆，2001
青涩体验范文2
【关键词】高校；体育教学改革；特色课程；沿海地理特点
2002年，《高等学校体育课程教学指导纲要》的颁布进一步加快了教育教学改革的进程，全国高校都在进行着积极的研究与实践，探索出了许多好经验。本文就基于地域特点的青岛市高校体育教学特色课程改革作一探讨。
一、高校体育课程改革的基本目标
21世纪的高等教育正在向国民教育、终身教育、教育民主化和教育现代化等方向发展。随着高等教育的发展变化，高校体育课程也同步发生了深远的变化。生活教育、身体教育、情感教育、竞技教育及保健教育成为现代高等体育教育的主体，为此，我们应与时俱进，从学生发展需求出发，从社会发展的需求出发，建立全新的课程目标体系。
1、追求学生身心健康和谐发展
在新的高校体育课程改革中，要以“健康第一”为指导思想，重视学生的身心健康和谐发展，在教学中充分发挥体育的健身健心功能，将身体教育与心理教育结合起来，通过体育教学的原理、方法、手段达到学生生理健康、心理健康和具有良好的社会适应能力的目的。
2、提高学生体育素养
全国高等学校体育课程教学指导纲要中提出了提高体育素养的总体目标。提高体育素养的内涵十分丰富，它以育人为最高目标，以知识技能为主导，以培养能力为重点，身心发展相协调，终身体育为方向。体育素养既包涵了身体的、心理的素养，又突出了体育作为文化的一面，它作为一种体育素质或能力，应该包括：认知要素、技能要素、操作要素、情感要素。这对大学生的未来发展有导向作用，因此体育素养的培养应成为体育课程教学的中心。
3、培养终身体育能力
高校体育教学是学校体育的最高层次，是学生掌握体育知识、技能、养成自我锻炼习惯、培养终身体育思想的关键时期。运用终身教育的理念重新审视学校体育，必将形成职前的学校体育与职后的社会体育结合起来，从学校体育开始，贯穿于人生职业生涯全过程的一个连续过程的大体育的形态。
二、创建有沿海特色的体育课程
20世纪90年代，教育部颁布了《高等学校体育课程指导纲要》，该文件不称为“大纲”而称为“指导纲要”，实现了由指令性计划向指导性计划的转变，为高等学校制定各有特色的课程模式提供了可能性。2003年的《全国普通高等学校体育课程改革指导纲要》对课程的理念和课程的目标提出了新的要求，而对具体的运动项目分类及课程模式的构建方面，没有任何的规定。在宏观上求“和”，以达到体育课程各部分要素的协调和整合总体要求的前提下，实现中观和微观上求“异”，以追求高校体育课程发挥各校风格和特色，构建大学体育课程模式多元化的创新思路。
这样，各高校体育课程改革就可以在《指导纲要》统筹指导下，遵循体育教育规律，立足于学生未来发展和社会需求，充分挖掘学校潜力，发挥学校优势，建立有特色、有个性的体育课程模式，通过对原生模式、派生模式、子项模式的演变、实现课程模式的多元化发展。
1、原生模式体育课程改革
模式的生成方式有三种：第一种是原生课程模式，是通过对特定对象进行系统分析，在归纳和演绎的前提下，创造出的原来不存在的课程内容。例如：2008年奥运会帆船项目在青岛举行，借此机会青岛市提出打造东方帆船之都的口号，在市委大力支持下，大学生帆船项目得到了蓬勃的发展，青岛市大学生帆船赛等体育竞赛也积极推广，青岛市各高校在帆船教学资源上也得到了社会的大力协助，借此机会高校体育课程可以跳出原有的教学内容和模式增加帆船、帆板等航海特色运动，拓宽学生视野，打造属于青岛高校的特色体育课程内容。
2、派生模式体育课程改革
派生模式，它是借助已经建立的课程模式，派生出新的课程模式。例如：足球项目作为世界第一运动，在日常体育教学过程中已经成为了高校体育教学的必备课程，常年单一的场地训练模式难免会使得学生感觉到枯燥。借助地域特点，青岛高校体育课程可以使用沙滩、海水浴场等免费的地理资源，使学生走出校门，充分享受大自然，开展沙滩足球、沙滩排球等项目，并在原有的竞赛规则上适当做出修正，使得学生更容易的融入到体育课程中去，通过授课环境和场地状态的改变，调动学生的主观能动性，使得学生积极参与到体育锻炼中来。
3、子项模式体育课程改革
子项模式，它是在对体育课程进行系统分析的基础上，提出一个课程的基本模式，以这样的基本模式为母体，在基本模式允许的范围内，构建出新的课程模式。例如：由公开水域游泳、长跑、自行车三个项目的铁人三项赛由于其比赛的艰苦，对运动员身体素质和意志力的高标准要求而文明。而这个项目在高校体育课程中开展有着一定的难度，但是我们可以取其一项或两项内容结合地域特点添加在日常体育课程内容中，利用海水浴场资源开展公开水域游泳的训练，利用沙滩或者青岛市丘陵地形的特点开展越野跑的练习，从而磨练学生意志品质，达到健身健志的目的。
以上三种课程模式生成方式表明，青岛高校体育课程模式构建完全可以根据自身情况结合青岛海洋、沙滩、丘陵地带地域特征，借鉴别的学校的经验和模式进行再创造，也可以根据有关规定，以基本模式为基础，创造出新的教学内容，使学生亲近自然，走进自然，充分调动学生的主观能动性，使学生走出校门，接触到更多的体育形式和体育教学内容，以促进体育课程的多元化发展。
【参考文献】
［1］毛振民.体育教学改革新视野[M].北京体育大学出版社，2003.
［2］辜伟节.学校课程开发与管理的现状和策略[J].教育理论与实践，2001.
［3］顾书明.特色教育的发展与课程改革的校本化发展[J].江西社会科学，2003.
【作者简介】
青涩体验范文3
[关键词] 肺炎支原体； 代谢组学； 超高效液相色谱飞行时g质谱； 模式识别
Serum metabonomics in mice infected with mycoplasma
pneumoniae by UPLCQTOFMS
WEI Wenfeng， CHU Yantao， LIU Ye， HUO Jinhai， WANG Weiming*
（Heilongjiang Academy of Chinese Medical Sciences， Harbin 150036， China）
[Abstract] Ultra high performance liquid chromatography coupled with tandem quadrupole time of flight mass spectrometry（UPLCQTOFMS） was applied to metabonomics study in BALB/c mice infected with mycoplasma pneumoniae（MP） to analyze the changes in serum endogenous metabolites， identify potential biomarkers associated with mycoplasma pneumoniae pneumonia（MPP）， analyze the metabolic pathway and explore the pathogenic mechanism of MPP. The BALB/c mice were inoculated with MP by repeated intranasal infectious routes to establish MPP models， and the results of the lung tissue biopsy， IgM and mycoplasma nucleic acid content determination showed that the models of MP in BALB/c mice were successfully established. UPLCQTOFMS was used to analyze the serum metabolic profiling of BALB/c mice infected with MP， and then principal component analysis（PCA） was combined with orthogonal partial least squares discriminant analysis（OPLSDA） for data processing. The results showed that there were significant differences in serum metabolic profile between the MP infected mice and the normal mice. Fortyseven potential biomarkers such as ornithine， cortisol， vitamin A and tryptophan were screened out by database searching and MS information matching. These potential biomarkers related to 17 metabolic pathways including retinol metabolism， arginine and proline metabolism， steroid hormone synthesis and so on. The metabonomic research method for serum of mice infected with mycoplasma pneumoniae based on UPLCQTOFMS was established in this study. The metabolic changes of endogenous small molecules in mice infected with MP were reflected in the overall level， laying the foundation for the selection and evaluation of MPP drugs.
[Key words] mycoplasma pneumonia； metabolomics； ultraperformance liquid chromatography coupled with quadrupole timeofflight mass spectrometry； pattern recognition
肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）是引起呼吸道疾病和全身性病变的重要致病菌之一，可引起肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）。它是学龄前儿童和青少年时期最常见的肺炎之一，发病率为19.6%～21.9%，呈逐年增加趋势[1]。小儿肺结构发育不完善，经过反复感染后，极易受损。MP主要通过飞沫传播，引起上呼吸道和肺部感染，同时引起脑炎、 心肌炎、 肝炎、 关节炎等肺外组织或器官的病变。临床表现多种多样，严重时出现暴发型肺炎，发展迅速，最终因呼吸衰竭而死亡[2]。
MPP临床检测主要利用病原体培养法和血清学检测确证。病原学检测结果阳性率低，病原体培养结果明显滞后，并且每种诊断都有其局限性，临床上常采用多种检测手段联合应用的方式，但是仍有高达40%～50%的社区获得性肺炎不能确定相关病原体，严重影响早期的抗菌药物选择[3]。代谢组学从整体观出发，以机体代谢物组变化为载体，以时空动态性和全局性观点，试图全面解析疾病对机体的影响[4]。代谢组学技术已经在实验动物模型评价中展现了其特色和优势[56]，但目前关于支原体肺炎代谢组学的研究尚未见报道。
本研究利用代谢组学研究方法，以MP感染小鼠血清为研究对象，采用UPLCQTOF 液质分析，并通过化学计量学模式识别的方法，发现潜在的生物标志物（potential biomaker）并鉴定，解析代谢通路。从代谢组学角度阐明MPP的致病机制，为其有效防治提供新理论，促进治疗MPP药物的筛选和开发。
1 材料
ACQUITYTM UPLC液相色谱仪（美国Waters公司）；Sciex 5600+型质谱仪（美国AB Sciex公司）；IKA MS3 digital涡旋振荡器（广州仪科实验室技术有限公司）；DH5000型电热恒温培养箱（上海一恒仪器有限公司）；LDZX75KB型立式蒸汽灭菌锅（上海申安医疗器械厂）；DLCJ1N型超净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司）；ST16R型高速低温离心机（美国赛默飞世尔科技有限公司）。
肺炎支原体国际标准菌株FH（ATCC15531，美国菌种保藏中心）；PPLO培养基（碧迪医疗器械有限公司）；乙醚（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司）；核酸定量检测试剂盒（广州中山大学达安基因股份有限公司）；甲醇（色谱级，Merck公司）；乙腈（色谱级，Merck公司）；甲酸（色谱级，Thermo Scientific）；屈臣氏蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）。
BALB/c雄性小鼠20只，SPF级，体重（20±2）g，北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012001。饲养于黑龙江中医药科学院动物实验中心，环境温度 （20±2） ℃，相对湿度 （50±20）%。
2 方法
2.1 支原体培养与造模方法 支原体培养参见文献[7]。小鼠支原体肺炎模型采用支原体滴鼻感染方法，将20只BALB/c小鼠随机分为空白组和模型组，每组10只，乙醚麻醉，模型组取MP培养液20 μL缓慢滴入BALB/c小鼠鼻孔内，每日1次，连续感染3 d。空白组给予无MP的培养液。
2.2 样品采集与预处理 小鼠于造模结束后24 h采集颖荆采集前禁食12 h，各组由眼眶取血，血液静置1 h后于3 000 r・min-1离心10 min取血清，-80 ℃冻存。取血后处死小鼠，剪取左肺组织10%甲醛固定，用以病理切片观察；剪取右肺组织用于支原体核酸定量检测。
HE 染色实验：取甲醛固定的肺组织，用乙醇梯度脱水，二甲苯透明2 次，放入石蜡内进行包埋。蜡块修好后固定于石蜡切片机上切片，将完全展开的蜡片贴附于清洁载玻片上，常规HE 染色，在显微镜下进行MP 特异性病变间质性肺炎的病理组织学检查。
血清IgMMP测定：取各组血清样品，同时设定对照孔和标准样品孔，每孔加入50 μL样品，50 μL IgM结合物，室温孵育1 h，洗去孔内液体，加入100 μL底物，室温孵育30 min，加入100 μL终止液，于450 nm下读取吸光度值。
支原体核酸含量测定：取肺组织100 mg加入100 μL纯水，匀浆，吸取20 μL，加入等量DNA提取液，100 ℃保温10 min，8 000 r・min-1离心5 min，取上清液2 μL用于测定，同时设立标准曲线样本、质控样本，测试方法参照试剂盒说明书设定相关程序。
代谢组学样本测定：每个样本取100 μL血清，加400 μL甲醇，涡旋30 s，4 ℃条件下13 000 r・min-1离心10 min，取上清液用于代谢组学分析。
2.3 色谱条件 Waters Acquity UPLC BEH C18 色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相0.1%甲酸水（A）0.1%甲酸乙腈（B），梯度洗脱，0～3 min，95%～40%A，3～4 min，40%A，4～9 min，40%～0%A，流速0.3 mL・min-1； 柱温50 ℃；样品仓温度4 ℃；进样量3 μL；色谱仪流出液不分流直接注入质谱仪进行正负离子扫描检测。
2.4 质谱条件 采用ESI离子源，离子化模式为电喷雾正、负离子模式，正离子扫描模式参数：离子源电压5 500 V；离子源温度550 ℃；雾化气55 psi（1 psi=6.895 kPa）；辅助气55 psi；气帘气35 psi；去簇电压80 V；碰撞能量35 eV；碰撞能量扩展15 eV；TOFMS扫描范围80～1 500；Product Ion扫描范围50～1 500。扫描方式：IDA设置响应值超过100 cps的8个最高峰进行二级质谱扫描，并开启动态背景扣除（DBS）。Analyst TF 1.6 software采集工作站；采用AB Sciex公司的CDS质量校正系统在线校正。负离子扫描模式：离子源电压-4 500 V；去簇电压（DP）-80 V；碰撞能量（CE）-35 eV；其余参数同正离子扫描模式。
2.5 数据处理 将所有生物样本的UPLCMS数据导入MarKerview软件，进行峰匹配、峰对齐、峰提取和归一化处理，进而进行主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法判别分析（OPLSDA），并采用正交信号校正技术过滤变量信息，通过代谢轨迹变化趋势分析模型组与空白组的差异，确定主成分和潜在生物标志物（Marker）。利用QTOF测定各Marker的精确相对分子质量，对所筛查的具有显著性差异的代谢物进行分析，计算其可能的分子式。再通过分子式检索Human Metabolome Database（HMDB）数据库，结合文献和标准品确证的方式，鉴定潜在生物标志物的化学结构。通过检索代谢途径数据库KEGG和MetPA，结合相关文献、生物化学及分子生物学知识，探讨潜在生物标志物相关生物学意义。
3 结果
3.1 小鼠肺组织病理变化 小鼠肺组织病理切片评分系统由1 个0～26分的可数评分组成[8]，5 个分类评价系统由管腔周围浸润而致的细支气管和支气管数目、管腔周围浸润的程度、管腔内渗出的严重度、血管周围浸润的频度、实质性肺炎的严重度合并后记分，每张切片选择5 个视野评分。空白组支气管、肺泡、血管等无明显病变，上皮细胞状态良好，肺组织中未见炎性细胞浸润；模型组支气管中度改变，官腔有大量分泌物，肺泡上皮坏死，弥漫性细胞浸润，边缘模糊，病变面积较大，肺泡腔内伴以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，严重者伴有红细胞渗入（表1，图1）。
3.2 血清IgM与MP核酸定量 与空白组相比，模型组血清IgM含量极显著升高（P
3.3 小鼠血清代谢组学分析 采用UPLCMS进行血清样本的分离与数据采集，将所得数据导入MarkerView软件进行PCA无监督分析（图4），在正离子2个主成分（PC1：82.2；PC2：4.6）和负离子2个主成分（PC1：56.1；PC2：11.2）构建的得分图可直观看出，空白组与模型组有显著分开趋势。为进一步区分不同组别差异，对2组血清代谢物进行有监督的OPLSDA分析（图5），正离子模式的模型参数为R2=0.959 5，Q2=0.880 9，负离子模型参数为R2=0.986 2，Q2=0.961 4，参数显示所构建模型有效，可用于后续组间差异成分的寻找及分析。结合MarkerView软件中t检验包筛选在2组中有显著性差异（P1.5倍，筛选出对分型贡献较大且具有显著性差异的离子作为潜在的生物标志物进行分析鉴定（图6）。
3.4 MPP潜在生物标志物鉴定 潜在标志物的鉴定方法为通过一级质谱信息确定相对分子量， 利用二级质谱信息获得其结构碎片信息。通过HMDB，KEGG，METLIN等多个数据库检索，共推断出47个生物标志物，并列举了各生物标志物在空白组和模型组中的表达水平。与空白组相比，模型组代谢物水平升高的有20种，降低的有27种（表2）。
3.5 代谢通路分析 应用MetPA网站构建分析代谢通路，并选择小鼠物种，将推断的47个代谢物的HMDB编号输入进行代谢通路分析（图7）。利用拓扑分析，代谢通路影响的临界值设置为0.01，大于这个值将选择作榍痹诘墓丶代谢通路（表3）。与支原体肺炎相关的代谢通路共涉及视黄醇代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、甾类激素合成、色氨酸代谢、嘌呤代谢等17个代谢途径。
3.6 生物标志物与生化病理指标的相关性分析 选取OPLSDA中Fold Change>2的差异变量化合物与IgM含量、MP含量及病理切片中病变面积总分进行相关性分析，找出代谢物与病理生化指标的相关性并列出相关系数（表4）。结果表明，5羟吲哚乙酸、2氨基辛酸、赖氨酸、L色氨酸与MP含量有极度相关性，D2羟谷氨酸、赖氨酸、L色氨酸、对甲酚与病理面积总分有极度相关性，D2羟谷氨酸、2氨基辛酸、赖氨酸与IgM含量极度相关。
4 讨论
经前期实验摸索，本研究从生化指标和肺组织病理指标判断，MPP模型动物造模成功，进一步利用代谢组学方法结合UPLCQTOFMS技术，研究MPP小鼠血清内源性代谢物的变化规律。本课题组已熟练掌握肺炎支原体培养、测定及滴鼻感染小鼠的造模方法[8]，经前期实验摸索确定了肺炎支原体感染小鼠的剂量。在UPLCQTOFMS测定中，每间隔5个样品进样1个QC样品，选取QC样品中不同保留时间段内响应值高的5个化合物质控分析，选取化合物的保留时间及峰面积的RSD均小于1.0%，保证此评价方法的可靠性。利用模式识别的数据处理方式初步判定47个生物标志物，发现其中对正常组和模型组区分贡献较大的代谢物涉及了17条代谢通路。
维生素A（VA）涉及到视黄醇代谢，对维持视觉并促进机体生长发育有重要作用，另外可以增强机体的免疫反应[9]。VA的缺乏可引起气管、支气管上皮细胞发育受阻，细胞脱落，气道上皮完整性遭到破坏。本研究中，模型组VA水平降低，提示MPP可引起VA水平下降，进而导致气道上皮完整性的破坏和机体免疫功能下降。
鸟氨酸和乙酰氨基丁酸涉及精氨酸和脯氨酸代谢，本研究中模型组小鼠的鸟氨酸水平降低，鸟氨酸转化作用增强，乙酰氨基丁酸水平降低，说明聚肽类进一步转化的作用下降，提示腐胺等聚肽类水平升高，直接或间接影响细胞的pH[10]。文献报道，在小鼠哮喘模型的肺组织中聚肽类水平有所增加。同时因为VA的缺乏，气道上皮的损伤和脱落，炎性细胞的浸润等，气道壁结构易发生改变，气道动力出现滞缓，在一定程度上导致了支原体肺炎患者的哮喘症状。
色氨酸涉及色氨酸代谢，体内氨基酸作为蛋白质合成原料及分解代谢产物，参与多种生理和病理过程，其水平的高低往往可以反映机体的代谢情况。色氨酸是人体必需氨基酸之一，在肝脏以外，色氨酸主要通过降解为犬尿氨酸进行代谢，该过程受吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）影响，IDO是色氨酸犬尿氨酸转化途径的限速酶，炎症因子干扰素γ（IFNγ）是其诱导剂[11]。本研究中，模型组色氨酸水平降低，加速了色氨酸犬尿氨酸途径，提示机体炎症明显。
次黄嘌呤和尿酸涉及嘌呤代谢，嘌呤是动物基因结构的一部分，在机体中起着代谢调节、能量供应等重要作用。次黄嘌呤和尿酸是腺嘌呤和鸟嘌呤的代谢产物，其中，次黄嘌呤来自一磷酸腺苷的分解代谢，该过程受氧气含量影响较大，缺氧时，一磷酸腺苷会加速分解，导致次黄嘌呤含量在血中增加[12]。本研究中，模型组次黄嘌呤和尿酸含量升高，可能由于肺组织充血、水肿等，导致气管和支气管管壁增厚，管腔变得狭窄，进而影响通气，同时肺泡腔因为渗出阻碍气体交换，从而引起缺氧环境而致。
综上所述本研究采用UPLCQTOFMS技术结合模式识别数据分析手段，进行了小鼠支原体肺炎的血清代谢组学研究。共标识了47种生物标志物，并且呈现一定的上调或下调趋势，这些生物标志物涉及17条代谢通路，其中视黄醇代谢、精氨酸与脯氨酸代谢、甾类激素合成等代谢途径与肺组织损伤、炎症反应、免疫抑制有密切关联。本研究从整体水映了支原体肺炎内源性小分子的代谢变化，有助于MPP代谢网络的全面构建及疾病诊断，为抗MPP药物的选择与评价奠定了基础。
[参考文献]
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[10] Benson R C， Hardy K A， Morris C R. Arginase and arginine dysregulation in asthma[J]. J Allergy（Cairo），2011，2011：736319.
青涩体验范文4
谁还会欣赏那生机勃勃的春
在枯寂的冬苦苦寻找
花叶的身影
谁不愿意
开在春的温室里
可是
谁又能忍耐
那份初熟的悸动
谁不愿意
在春意盎然的环境中茁壮成长
可是
还为何去体验那分暴雪的苦楚
经过风雨的洗礼
在败落后
终于
终于明白了
自己的薄弱
却又体验到了
枯燥中的点滴华丽
青涩中的点滴甜蜜
最终留下的
青涩体验范文5
天才少女的心态
《80’后》的编导李芳芳也是80后,曾经以《十七岁不哭》掀起社会对于青春期学生的关注,她也获得飞天奖和金鹰奖的剧本一等奖。片名从《分开我们就坠落》到《天长地久之伤害》、《天长地久》,再到《80’后》,说明了导演创作心态之翻覆,是将自我个人的生命体验与国家这三十年来的历程扣合在一起。
一个女人的史诗
《80’后》成为一个女人的心灵史诗,李芳芳和电影中的女主人公刘冬所经历的一切,偶然的家庭变故、破碎的情感、青春期的萌动、友谊与爱和怕的多重奏组成,反倒那些大事件只是他们的背景而已。她们虽然不能代表80后,却属于80后一部分人的体验。
肥皂剧似的冲突
李芳芳以肥皂剧似的戏剧冲突,却带出很少见的感情处理手法,刘冬与黄明的爱那么纯粹与青涩,却又难以在正常环境中成长,只能借助于逃离、远走和囚禁、救赎来换回电影结尾时的再相逢,李芳芳给观众的信息庞杂,几近血肉模糊情感几乎没有归路。
评论
李芳芳的执念
如果观众能够被片中故事吸引,那么痛彻就是很标准的情绪反馈。假设观众对导演的讲述不屑一顾,或者说我也有我的讲法。80后一代都在讲古了,他们觉得自己有了足够的曲折经历来倾诉,作为80前的观众可能会认为他们自作多情,而90后的观众对这份铭肌镂骨报以忽视的神态也很寻常,以十年为标尺划分当然难说科学,然而大众应该正视所有人的沉重或轻浮的记忆。既然李芳芳选择了执念,骨子里就是要说法,爱恨别离之间,苦恼人其实不分年代。80后是第一代独生子女,且电影中的诸位都是破碎家庭,更是难以排解烦恼,爱了却又疑惧失去,外力总是强大到改变他们努力描红的现实。越是美好的越容易破碎,今天的爱人明朝未必不会出卖。《80’后》与《长生殿》、《桃花扇》、《胭脂扣》、《霸王别姬》等优秀作品构成互文关系,承诺是毒、兑现是苦,人情冷暖如此,可还是要再来一回。
访谈
十年后,所有80后将经历电影里的故事
南都娱乐:电影之前叫《天长地久》,后来听说是韩三平建议改成《80后》?
李芳芳:这个是江湖传言,真实的原因仅仅是之前的名字有重名,因为电影的主题就是:绝望地渴望被爱,但却不懂如何去爱。这就是所有80后不可避免的。
南都娱乐:虽然电影中有高考、非典、还有申奥,但就个人而言,很多人的生活很平淡。
李芳芳:我这样说吧,你去想明朝历史,一定想起来的是张居正、于谦这些大人物对吧,我需要用一些更集中、更有力量的故事去表达80后这个群体,我相信,十年后,所有80后将经历这一切,亲人离开,一份得不到的爱情等等。
青涩体验范文6
没有家庭温暖的男人是青涩的,他会有过多的叛逆、过多的锐利。遇到事情他会像一支出弦的箭,谁也拉不回他。一个男人,性格中若少了“顾虑”,便少了一份“担当”的魅力。只有当一个男人真正有家有子之后,他才真正学会了“怕”,怕生命无常,怕妻儿无依……有家庭的男人多了一份人性的圆润。
有一个红颜知己
妻子让男人慢慢长大,而红颜知己则让男人学会渐渐成熟。人们总觉得女人爱唠叨,实际上男人也有倾诉生活烦闷的欲望。当然,他对面的听众最好是个女人,一个细腻温柔懂得体谅的女人。男人在妻子之外有个能谈心的异性朋友,算得上美事一桩。
有一个患难之交
就像某个啤酒广告所说的那样“无需干杯,只需心领神会”,男人一生若没有这样一个可患难、可过命的朋友,那绝对算不上真正的男人。男人间的友谊是铁打的,可以万年不坏,那才是真正的手足情。一个没有兄弟情的男人是干枯的,那种男人与男人间的交流也只有兄弟间才能懂。
有一个奋斗的事业
没有事业的男人不是真正的男人,至少女人是这样认为的。女人不是爱钱,女人是爱正在赚钱的男人。男人的奋斗气质对异性而言是种无法抗拒的吸引力,而对世界上任何一个物种来说,异性的欣赏都是最佳的兴奋剂――事业永远是男人信心的源头。
有一次失败的历练
一辈子没经过失败的男人是狂妄的,他学不会宽容、学不会体谅、学不会替他人着想。就像中国的古训所言“不经磨砺,难成大器”,一个男人的一生总会结结实实地经历一次失败,而这次失败就是他人生的另一个起点。由此开始,他学会了冷静、宽容、智慧。
有一次成功的拼搏
只经历过失败没经历过成功的男人大多是天生的悲观主义者,对人、对事他们多抱怨,久而久之变得畏首畏尾、不知去奋力一搏,这样的男人注定是失败者。男人若不能得到一次成功的体验,便会丧失霸主的强姿态,这也是每个男人最不愿面对的难堪。