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霸道游戏范文1
1、首先将U盘插入电脑，电脑检测U盘成功；
2、把游戏的安装包放进U盘里；
3、双击安装包，开始安装，将安装目录选择U盘，进行安装；
霸道游戏范文2
汤唯的第一任男朋友是主演过电视剧《奋斗》、《我的青春谁做主》的朱雨辰，两人都是彼此的初恋，他们从相识到相爱的过程充满了浪漫色彩。那是1995年的春天，汤唯和朱雨辰在中戏表演系的杭州考场上第一次相见。那一天，一身红衣不时低头拨弄头发的汤唯，无意间发现一个男孩正定定地凝视着自己，她的脸一下红了，朱雨辰也因为第一次与异性对视而心跳加速。不久后，两人在雨中再次邂逅，他们欣喜地发现，原来两人同在一所学校。因为热恋，两人高考时双双落榜。第二年，朱雨辰顺利考入中戏，遗憾的是汤唯再次落榜。失意中的汤唯带着幸福小女人的甜蜜陪朱雨辰到北京上学，中戏旁边胡同里300元包月的平房就是两人爱的小窝。2000年，汤唯连续三年终于如愿考上了中戏。然而在那年高考前夕，两人爆发了一次大的争吵，汤唯冒雨离开，朱雨辰哭着去追，却如何也遍寻不见。失踪两个礼拜后，汤唯打电话对朱雨辰说：“我们俩分手吧！”随后，两人各自在演艺圈开创了自己的天地，朱雨辰曾对好友表示，永远不看《色・戒》，不看关于汤唯的任何新闻。
谢霆锋∈做厨神老爸
谢霆锋是出了名的二十四孝老爸，为了两个宝贝儿子吃得好，他更是立志学做厨神。除了积极上网搜罗食谱外，他一天可能会逛五六次超市找材料，用心程度可见一斑。某次家里的菲佣对谢霆锋说：“你煮的菜好味，但是餐具不够漂亮！”于是谢霆锋改日就带着菲佣去高档餐具店扫货。
邓丽君&林青霞∈互相拍
邓丽君和林青霞是金陵女中的校友，邓丽君是学姐，林青霞是学妹。两人当年都对地中海有一种特殊情怀，曾多次结伴去地中海游玩。有一次途经地中海畔的里维拉海滩，邓丽君心血来潮地问林青霞是否有胆量裸泳？林青霞回答：“如果你敢，我一定奉陪。”邓丽君说：“如果你敢，我哪有不敢？”在林青霞率先脱下内衣后，邓丽君也卸下了心房，两人不但畅游地中海，还互相给对方拍了十张的照片。事后担心照曝光，林青霞专门请一名女性摄影师好友冲洗照片，且每版只洗一张，然后她和邓丽君便相约一起把底片封存。
张惠妹∈慷慨大姐大
去年收入约4600万人民币的张惠妹，今年初大手笔砸下25万元招待经纪公司的25位同事远赴长滩岛度假。张惠妹对工作人员向来慷慨，定下出游的地点是长滩岛后，她立刻选中了当地最奢华的香格里拉度假村下榻。该酒店建筑在长滩岛最美的一段沙滩旁，最便宜的房间一天也要2100元，而张惠妹住的别墅型房间一天则需8400元。度假期间，张惠妹某天下午突然通知所有人晚上到她房间开party。为了给大家营造一个热带风情的浪漫party，她请人在地板上洒满了鲜花花瓣，各个角落都点满蜡烛，仅2100元每瓶的香槟就足足点了八瓶。这场加码的派对，一下子又令张惠妹的账单多添了4万元。
霸道游戏范文3
关键词：霸道行为表现；小班幼儿；成因探析
中图分类号：G613文献标识码：A 文章编号：1992-7711（2014）15-085-1随着社会环境的巨变，计划生育的普及，现在家庭中一般只有一个孩子，幼儿处于“独生时代”。可每年的九月份，幼儿园都将迎来新入园的小班幼儿。幼儿离开家庭进入幼儿园是他们成长过程中跨出一大步。由于现在幼儿大部分是独生子女，小霸王似的，不管什么好处和利益，就是自己得头一份，别人都得让着他，便养成了幼儿霸道的习惯，特别是小班的幼儿。
为什么幼儿会以自我为中心，存在较多的攻击行为？
一、家庭教养方式不当的影响
幼儿处于独生时代，幼儿成了家庭的中心，父母对孩子的过多保护与迁就，让他成为了小魔王，唯我独尊，什么事都要顺着他自己，和同伴之间的交往也少，不会和同伴交往。
二、幼儿园环境的影响
幼儿园教师、同伴、环境对幼儿常见犯行为的影响。
1.教师的影响。幼儿教师的一举一动都受到孩子的关注、模仿和影响，每个孩子都会跟着教师学，跟着教师唱，跟着教师玩，幼儿是最天真活泼，纯洁可爱。
2.同伴的影响。幼儿同伴之间的相互作用又会影响幼儿社会行为的发展。当一个幼儿通过攻击别人达到了某种目的时，其他的幼儿看到这种行为带来的“好处“，也会去模仿这种行为，同伴榜样的作用是引发幼儿攻击行为的一个重要因素。
3.环境的影响。幼儿园是幼儿基础教育的基地，环境如何对幼儿教育有着直接影响。幼儿为争夺物品和空间是幼儿攻击行为的最主要的起因，所以当幼儿园玩具数量不充足，活动场地不宽敞，设备不具备，幼儿活动受到限制，就会为拥有某个玩具、某块场地进行争夺，必然也就会发生攻击、侵犯的行为，来达到自己的满足和需求。
三、来自幼儿自身认知因素的影响
在学习中，我们尝试到认知对幼儿常见犯行为的影响，认知在幼儿的攻击行为中起着重要的中介和调节作用，幼儿在面对一个意图不明的消极结果时，攻击性幼儿容易把它归因为同伴处于“坏孩子”的敌意造成的，于是便对同伴实施侵犯。
四、大众传媒的影响
随着电视、电脑网络的普及，看电视已经成为幼儿生活中不可缺少的一部分，过多的电视暴力影响到幼儿的心态，他们将暴力行为看作是解决问题的有效途径，于是幼儿便会模仿电视中的暴力行为而在现实生活中加以应用，模仿，引发了幼儿的攻击犯行为的发生。
五、生物因素的影响
心理学家托马斯等人将婴儿的气质划分为容易型、困难型、迟缓型三种：困难型婴儿时常大哭大闹，发脾气，适应能力较差，这种气质类型的婴儿在其成长中易发生攻击犯行为。
结合上述原因，笔者认为可以采取以下有效策略：
1.要为幼儿提供一个良好的家庭环境
家庭是幼儿成长的第一个摇篮。父母要学会尊重孩子，然后再去严格要求孩子，尤其每个家庭都有自己的期望和各自的价值标准塑造着孩子，因此要以正确、科学的方法去引导自己的幼儿，使其有良好的家庭和社会的教养。
2.老师要关心每一个孩子，为幼儿构建和谐温暖的家园
幼儿园是幼儿成长是第二摇篮，幼儿老师要真诚地去爱一个孩子，老师要关心、尊重每一个幼儿，合理评价每个孩子。
3.对幼儿常见侵犯行为进行惩罚教育
在化解幼儿的攻击犯行为时，应适当对孩子的攻击行为实施恰当惩罚。惩罚必须说理，要让孩子明白为什么要惩罚他，切忌暴力打骂造成恐惧心理，老师和家长可以采用“冷处理”的惩罚方式。但惩罚不能过于频繁，每次持续的时间要适可而止，当孩子有悔意时，要及时撤去对孩子的惩罚。
4.利用媒体、网络信息搭建沟通平台
幼儿园应有目的地利用动画、幻灯、投影、录音、录像等多种现代教育技术手段讲解什么是幼儿常见犯行为，通过媒体捕捉周围环境和艺术作品施教感化，使幼儿在直观生动的媒体艺术欣赏中甑别善恶是非，提高幼儿是非对错、好坏善恶的甑别能力。
5.家长要正确指导幼儿收看电视
现代幼儿看电视已成家庭常事，但电视中暴力行为往往引发幼儿的兴趣和模仿，因幼儿分辨是非能力较差，易诱发幼儿的攻击犯行为的产生，所以家长要为孩子选择节目内容，要让孩子多看一些知识性、趣味性的节目，陪孩子讨论电视节目中暴露的问题，引导幼儿分清是非、美丑、善恶，让自己的孩子知道应该学习哪些行为，哪些行为不该模仿。
霸道游戏范文4
【关键词】VBA 防伪开票系统 用友软件 数据导入
一、数据转换接口的开发既具有必要性又具有可能性
增值税防伪税控系统是1994年国家税务总局联合航天工业总公司等部门研制开发的，作为国家金税工程的重要组成部分，其在全国各企业中普遍使用。防伪开票子系统，是增值税防伪税控系统的四个子系统之一，是专门用于企业开具专用发票的应用软件。然而，在V7.23.10之前的版本（以下简称旧版），防伪开票子系统在发票填开过程中只能采用手动填开的方式，且其开票数据不支持导出。因此，在销售业务中，税务会计需要将业务部门提交的开票信息输入开票系统开具发票，销售会计需要将已开具发票信息输入财务软件生成记账凭证。原始数据的重复输入造成工作繁琐、效率低下、出错率高等问题，同时也大大地消耗了企业的人力和时间。因此，设计一款数据转换接口，实现开票系统数据直接导入财务系统生成记账凭证，十分必要。
防伪开票子系统的升级为数据转换接口的开发提供了保障。实现数据导入，前提是获得需要导入的数据。然而，旧版防伪开票子系统是不支持已开具发票数据导出的，为此，在防伪开票子系统接口领域，出现了许多商业化软件。由于相关标准的缺失，各商业化接口价格差异较大，技术水平也良莠不齐，价格低的，纳税人担心接口是否会对原系统造成损害，后续服务是否及时；价格高的，对于中小企业纳税人来讲，是一笔额外的负担。然而，随着国家税务总局2014年第17号公告的，这个问题得到了较好地解决。公告中指出，为进一步减轻纳税人负担，优化纳税服务，国家税务总局决定对纳税人使用的增值税发票税控开票软件数据接口规范予以。根据公告的要求，新版的防伪开票子系统可以将已开具的发票数据从税控开票软件中导出（导出数据提供XLS和XML两种格式），满足纳税人内部管理信息系统与税控开票软件的衔接需要，数据接口规范的使得个人用VBA开发数据转换接口的成为了可能。
用友U8软件总账工具提供了良好的数据导入接口。在用友U8软件中，总账工具是总账系统中携带的一个应用子程序，它可以实现不同账套或同一账套不同机器之间的数据传递，总账工具中的凭证引入功能可以按标准格式将TXT文本文件引入到凭证库中。了解了标准格式TXT文件，用VBA技术将防伪开票系统导出的数据转换成标准文件，即可实现数据的引入。
VBA 是Visual Basic for Application的简称，可用来扩展Windows应用程序（特别是Excel）的功能。Excel与VBA的结合，可以使大量重复、繁琐的工作自动化，成倍地提高工作效率，在办公自动化中应用广泛。此外，VBA代码并不需要逐句编写，用户可通过录制宏来产生所需要的代码，然后对录制的代码稍加修改便可得到自己需要的代码，这大大降低了学习VBA的门槛。本文利用VBA处理表格方面的优越特性和易学性，将开票系统导出的XLS文件，加工处理后生成能够直接导入用友U8软件的标准格式TXT文件，实现开票数据的共享。
二、数据转换接口设计思路
首先，先从“防伪税控开票子系统”中导出开票数据。打开开票系统，点击“报税处理＼抄报税管理＼开票数据导出”功能，系统弹出文件导出对话框，输入月份、开票日期及购方信息等，点击“确定”按钮，在系统弹出的对话框中选择导出文件存放路径，输入文件名，选择保存类型为XLS，点击“保存”按钮即可完成数据导出，在导出文件存放路径下可以查看到导出的文件。
从开票系统导出的数据表（以下简称数据表）结构如下：第1至第5行为纳税企业的基本信息；第6行为发票各项目的名称，A～P列依次为：A发票代码，B发票号码，C购方企业名称，D购方税号，E银行账号，F地址电话，G开票日期，H单据号，I商品名称，J规格，K单位，L数量，M单价，N金额，O税率，P税额；第7行及以下为所导出发票的具体数据。以第8行为例，列示数据如下：
A8：000001，B8：01002，C8：B公司，D8：11B，E8：X银行，F8：XX市，G8： 2014-1-2，H8：00B，I8：商品2，J8：GG02，K8：EA，L8：10，M8：20.00，N8：200.00，O8：17%，P8：34.00
假设数据表所在工作表的名称为“发票数据”，在VBA中表示为Sheets（"发票数据"）。“发票数据”的第6行显示发票各项目名称，如发票代码、发票号码等，表的第7行及以下是对应项目的值，如C8单元格表示票号为“01002”的发票所对应的购方企业为“B公司”，C8单元格的值在VBA中表示为Cells（8，3），Cells两个参数8和3分别指单元格所在的行和列。根据“发票数据”中的数据，足以编制出对应的分录，以第8行为例，假设出售商品2为XX公司主营业务，记入“主营业务收入”科目，XX公司设置“应收账款”科目，该科目按客户分类核算，则该分录如下：
摘要：销售B公司商品2#1002
借：应收账款（1122）——B公司（11B） 234.00
贷：主营业务收入（6001） 200.00
应交税费——应交销项税（22210105）
34.00
在该分录中，“摘要”并不能直接获取，它是将几个单元格的值和一些其他字符重新组合而成，若以ZY表示摘要，则ZY=“销售”&Cells（8，3）&Cells（8，9）&“#”&Right（Cells（8，2），4），&为字符串连接符号，Right函数用于取发票号的后四位。
其次，需要了解用友软件可识别的标准格式TXT文件。标准格式TXT文件内容如下：第1行数据“填制凭证，V800”，第2行及以下数据“日期，类型，凭证号，附件张数，摘要，科目，借方 ，贷方，数量，外币，汇率，制单人，结算方式，发票号码，发生日期，部门，个人，客户，供应商”。
其中，“填制凭证，V800”是文件标识，表示该文件可被用友U8软件识别且执行“填制凭证”功能，该标识对每一个TXT文件只有一个，位于文件第一行。标识以下是该文件所包含的会计分录信息，其中：“日期”指填制凭证的日期，格式为“XXXX-XX-XX”；“类型”指凭证类型，值为“现”“银”“转”；“科目”指分录中对应的科目编码；“借方”“贷方”指借贷金额，每行数据只能包含“借方”“贷方”二者之一；“部门”“个人”“客户”“供应商”均指该项对应编码。在标准格式TXT文件中，每一行数据描述分录中某一会计科目的各项信息，由此不难得出，上文中提到的会计分录转换成标准格式TXT文件如下：
20X4-1-2，"转"，"1"，1，"销售B公司商品2#1002"，"1122"，234.00，，，，，"张三"，，"01002"，，""，""，"11B"，""，
20X4-1-2，"转"，"1"，1，"销售B公司商品2#1002"，"6001"，，200.00，，，，" 张三"，，""，，""，""，""，""，
20X4-1-2，"转"，"1"，1，"销售B公司商品2#1002"，"22210105"，，34.00，，，，" 张三"，，""，，""，""，""，""，
通过以上的分析得出，对于“发票数据”中的每行数据，在产生的标准格式TXT文件中对应3行数据。考虑构造一个辅助表格（简称为辅助表），在该表格的第1行A～S列依次输入：“日期”“类型”“凭证号”“附件张数”“摘要”“科目”“借方”“贷方”“数量”“外币”“汇率”“制单人”“结算方式”“发票号码”“发生日期”“部门”“个人”“客户”“供应商”，假设其所在工作表名为“凭证”。“凭证”的格式已类似于标准格式TXT文件，只要调用VBA中文件操作的相关函数，依次将表中的数据写入TXT文件中即可。
再次，考虑如何建立“发票数据”与“凭证”的联系。不难看出，“发票数据”中的第7行数据，对应“凭证”中第2、第3、第4行数据，分析这种对应关系，得出“发票数据”中的第i行数据（i>=7），对应“凭证”中的第3*i-19，3*i-18，3*i-17行数据。以“日期”为例，“发票数据”中“开票日期”在G列，“凭证”中“日期”在A列，假定凭证填制日期为开票日期，对于“发票数据”中的第i行数据，则有：
Sheets（“凭证”）.Cells（3*i-19，1）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，7）
Sheets（“凭证”）.Cells（3*i-18，1）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，7）
Sheets（“凭证”）.Cells（3*i-17，1）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，7）
“=”为赋值符号，含义为将等号右边的值赋给等号左边。
再来看一下借贷方金额的表示，“发票数据”中 N7单元格对应“凭证”中H3单元格，P7单元格对应H4单元格，N7与P7单元格数值加和对应G2单元格，于是对于“发票数据”中的第i行数据，则有：
Sheets（“凭证”）.Cells（3*i-19，7）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，14）+Sheets（"发票数据"）.Cells（i，16）
Sheets”凭证”）.Cells（3*i-18，8）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，14）
Sheets（“凭证”）.Cells（3*i-17，8）= Sheets（"发票数据"）.Cells（i，16）
同理，也可建立其他数据之间的对应关系。
最后，看一下如何将“凭证”中的数据输出到TXT文件。VBA中的“Print #语句”可以将EXCEL中的数据顺序写入文件，具体语法可参考VBA书籍。对于“凭证”中每一行数据，连接规则是：同行中不同单元格数据用“&”连接，保证其在输出TXT文件中位于一行；不同单元格之间以“，”分割，但若单元格值为字符串，则该单元格前后需添加“””。以Line2表示第2行数据，SDH表示"，" ，SYH表示""""，则：
Line2 = Sheets（"凭证"）.Cells（2， 1） &SDH
Line2 = Line2&SYH& Sheets（"凭证"）.Cells（2， 2）.&SYH&SDH
以此类推，通过循环赋值，可将第2行所有单元格的值赋给Line2，完成赋值后，使用Print#语句可将其输出到文件。
三、数据转换接口设计实例
以上分析厘清了接口制作的思路，并对制作过程中的关键点作了说明，为了更直观地了解整个过程，下面提供一个简化案例作为展示，对该案例，作如下假设：
1.XX公司每卖一批商品开具一张发票，开票系统中导出的工作表名称为“发票数据”，“发票数据”所在工作簿含有名称为“凭证”的工作表。
2.XX公司根据每张发票生成1张记账凭证，凭证类型为“转”，附件张数为2，填制日期为“开票日期”，制单人为“张三”。
3.XX公司出售商品为主营业务，主营业务科目编码为6001，公司应收账款按客户分类核算，应收账款科目编码为1122，客户编码为“购方税号”。
根据以上假设，做如下操作，打开存放开票信息的EXCEL表格，使用“Alt+F11”快捷键，进入VBA界面，点击“插入＼模块”子菜单，在插入的代码输入窗口中输入以下代码：
Sub 数据转换接口（）
Dim Line_head As String
Dim sLine As String
Dim sFName As String
Dim iFNnumber As Integer
Const SDH As String = "，"
Const SYH As String = """"
On Error Resume Next
sFName = "E：＼凭证引入.txt"
sLine_head = "填制凭证，V800"
hmax = Sheets（"发票数据"）.Range（"A65 535"）. End（xlUp）.Row
With Sheets（"凭证"）
For i = 7 To hmax
.Cells（3 * i - 19， 6） = "2211"
.Cells（3 * i - 18， 6） = "6001"
.Cells（3 * i - 17， 6） = "22210105"
.Cells（3 * i - 19， 7） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 14）
.Cells（3 * i - 19， 7） =.Cells（3 * i - 19， 7） + Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 16）
.Cells（3 * i - 18， 8） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 14）
.Cells（3 * i - 17， 8） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 16）
.Cells（3 * i - 19， 14） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 2）
.Cells（3 * i - 19， 18） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 4）
For j = 0 To 2
.Cells（3 * i + j - 19， 1） = Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 7）
.Cells（3 * i + j - 19， 2） = "转"
.Cells（3 * i + j - 19， 3） = i - 6
.Cells（3 * i + j - 19， 4） = 2
.Cells（3 * i + j - 19， 5） = "销售" & Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 3）
.Cells（3 * i + j - 19， 5）= .Cells（3 * i + j - 19， 5） & Sheets（"发票数据"）.Cells（i， 9）
.Cells（3 * i + j - 19， 12） = "张三"
Next j
Next i
iFNnumber = FreeFile
Open sFName For Output As #iFNnumber
Print #iFNnumber， sLine_head
t = 2
Do
sLine = .Cells（t， 1） & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 2） & SYH & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 3） & SYH & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 4） & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 5） & SYH & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 6） & SYH & SDH
sLine = sLine & Format（.Cells（t， 7）， "0.00"） & SDH
sLine = sLine & Format（.Cells（t， 8）， "0.00"） & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 9） & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 10） & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 11） & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 12） & SYH & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 13） &S DH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 14） & SYH & SDH
sLine = sLine & .Cells（t， 15） & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 16） & SYH & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 17） & SYH & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 18） & SYH & SDH
sLine = sLine & SYH & .Cells（t， 19） & SYH & SDH
Print #iFNnumber， sLine
t = t + 1
Loop Until IsEmpty（.Cells（t， 1））
End With
Close #iFNnumber
End Sub
点击“保存”按钮，关闭VBE界面，点击“开发工具＼代码＼宏”，在弹出的对话框中选中“数据转换接口”，点击“执行”，即可看到处理后的工作表，并且在E盘下找到“凭证引入.txt”文件。利用VBA的封装技术可以将以上的代码封装成dll文件或EXE文件，注册后即以按钮的形式存在于EXCEL选项卡中，点击按钮即可实现相应功能，在此不作详述。
点击“用友U890＼系统服务＼总账工具”，打开总账工具界面，在“数据源＼文件数据”处选择“E：＼凭证引入.txt”，双击“凭证引入”，即可将凭证引入到用友软件中。
四、小结
本文利用Excel VBA在处理表格方面的优越特性，将新版防伪开票子系统导出的数据加工处理，生成了能直接导入用友软件的标准格式TXT文件，减轻了会计人员账务处理的负担。然而，针对该问题本文更多地是提供一种处理思路，虽然文中给出了一个案例的完整代码，但所用案例建立在众多假设之上。在实际会计业务中，这些假设不一定全部满足，需要具体问题具体分析。尽管如此，本文提出的处理思路仍具有重要的理论价值和应用价值，各企业可根据企业的实际情况，结合VBA的强大功能，设计出适合于自己企业的数据转换接口。
参考文献
[1] 郭刚.Excel VBA 入门与应用典型实例[M].北京：北京希望电子出版社，2009.
霸道游戏范文5
一、幼儿在游戏中常见的心理问题及成因
1.自私的心理。幼儿在游戏中常常有自私心理，这种心理的表现是：本该大家共同玩的玩具由（她）本人独自占有；别的小朋友要玩时，便攻击对方。造成这种心理问题的原因主要有两个方面：一是人的本能所致。人一生下来，就有许多种本能的欲望。自私就是一种近似于一种本能的欲望而隐藏在人的心灵深处。二是客观环境所致。现在的孩子由于多是家中的“独苗”，来自物质和心理上的关心过多，久而久之，孩子便以家庭中的“中心人物”自居，逐渐形成了“唯我独大、唯我独尊”的心理特征。一旦这种心理形成，便会在生活中表现出来。
2.无意识的心理。3～6岁的幼儿在游戏过程当中，常常有无意识的心理。这种心理主要表现为：顺从他（她）人意志；不按照玩具的规则行事，乱摆乱放。这种心理的形成有两个原因：一是幼儿正处于身体的成长发育期，精力集中时间较短，多数时间都处在一种身心放松的无意识状态。二是游戏较难，使幼儿由精力集中变成了放任自流。于是，思考被瞬间放弃，无序就成了乐趣和好玩。
3.无聊的心理。幼儿在游戏过程当中，有时也会产生无聊的心理，这种心理主要表现为：面无表情，不愿动手；心不在衍，动作缓慢；个别孩子表现为烦躁、哭泣。形成这种心理有两个原因：一是游戏形式、样式老化，简单重复，令他（她）兴趣索然。二是由于现如今丰富的玩耍方法和多样化的视觉刺激，使他（她）有更多的要求，如看电视、玩电脑、手机等。
4.忌恨的心理。有这种心理的孩子不多，个别单亲家庭的孩子有这种心理。这种心理主要表现为：看到别的小朋友忘情地玩玩具时愤恨不满，并伺机抢夺他人玩具；当别的小朋友将玩具摆搭好而他没有摆上时，将别人的抢过来据为己有，或将别人搭好的玩具破坏掉。形成这种心理的原因主要是受到的关爱很少，或受到父母常常吵架的影响，心理发生扭曲。
二、在游戏中进行心理疏导的方法
1.自主分配法。这种方法主要是针对自私心理的。就是在进行玩具游戏前，凡是需要平均分配的玩具，都由小朋友自主去拿，小朋友拿完后，由老师评价小朋友谁拿的多、谁拿的少，并让小朋友说明为什么，这样经过多次反复后，就能使小朋友懂得礼让的道理，从而消除自私心理。
2.单人游戏法。这种方法主要是针对无意识和无聊心理的，主要解决精力集中和兴趣问题。首先让大家共同玩，再单独玩。这种方法主要适用于智力方面的游戏，如摆积木等，使每个孩子都有思想上的压力，从而达到精力集中的目的。
3.特殊关怀法。这种方法主要是针对有忌恨心理的孩子的。在玩游戏时老师对其特殊关照，或择机对其进行表扬，有时，还让他（她）帮助其他小朋友进行游戏，从而消除他（她）的隔阂心理，逐渐纠正他（她）扭曲的心灵。
三、在游戏中进行心理疏导需要注意把握的问题
1.处理好程序性教学与创新性教学的关系。程序性教学是指按照教学大纲完成教学任务；创新性教学是指在教学大纲范围内，进行教学创新，高标准地完成教学任务。教师在备课过程中，要按照教学任务的要求，积极动脑筋，把最新的富有创意的东西植入到游戏教学中，最大限度地运用最新的科技手段进行教学，把那些陈旧的、过时的游戏快速淘汰掉，提倡教师自己编排游戏和制作游戏道具，这样才能更好地完成教学任务。
霸道游戏范文6
关键词: Bcl-2;砷化物;凋亡;雄黄;白血病，髓样，慢性
摘 要:目的 研究Bcl-2和Bax在硫化砷诱导的K562细胞凋亡中的表达，探讨其在硫化砷诱导的细胞凋亡中的作用. 方法 K562细胞经一定剂量硫化砷作用特定时间后，MTT法检测细胞生长、增殖状态，光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况，S-P免疫组化染色检测Bcl-2、Bax的表达并进行图像分析. 结果 硫化砷对K562细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用;175～1400μg・L-1 硫化砷作用18～144h后，K562细胞出现凋亡细胞的形态学改变;免疫组化染色表明K562细胞低表达Bcl-2蛋白（A值为0.152±0.023，阴性对照A值0.108±0.012），硫化砷处理后对其表达无明显影响（A值为0.138±0.028，P>0.05）.硫化砷作用后，Bax蛋白的表达量A值由0.240±0.013增加到0.316±0.021（P
Keywords:proto-oncogene proteins c-Bcl-2;arsenicals;apoptosis;realgar;leukemia，myeloid，chronic
Abstract:AIM To study the expression and the effects of Bcl-2and Bax protein in apoptosis of K562cell induced by ar-senic sulfide.METHODS After being incubated in culture medium containing variable levels of arsenic sulfide，cell growth and proliferation of K562cell was analyzed with MTT assay;apoptosis was detected with cell morphology by light and transmission electron microscopy.The expression of Bcl-2and Bax protein was determined with S-P immuno-histochemical stainning and imaging analysis.RESULTS After the treatment，cell growth and proliferation of K562cell was inhibited in a dose-and time-dependent manner.Morphologically，after treatment with175to1400μg・L-1 of arsenic sulfide for18to144h，K562cells presented some features of apoptosis.The baseline Bcl-2expression of K562cell was very low（A:0.152±0.023）while the absorbance（optical density）value（A）of negative control was0.108±0.012.No significant difference was found after the treat-ment（A:0.138±0.028）（P>0.05），but the expression of Bax protein in K562cells co-cultured with arsenic sulfide（A:0.316±0.021）was increased，compared with the untreated（A:0.240±0.013）（P
0 引言
雄黄在我国传统医学中有悠久的历史，主要成分为硫化砷（As4 S4 和As2 S2 ）.近年来国内学者将其用于治疗恶性血液病，取得一定进展［1-3］ .用单味雄黄或含雄黄的复方如青黄散、慢粒片等治疗慢性粒细胞性白血病（CML）获得了较好的疗效［1］ .我们研究发现硫化砷能诱导CML细胞株K562细胞凋亡，与张晨等［4］ 的报道一致.但其进一步机制目前未见报道.Bcl-2和Bax是重要的凋亡相关蛋白［5-7］ ，为探讨其在硫化砷诱导的K562细胞凋亡中的作用，进一步阐明硫化砷治疗CML的机制，为硫化砷临床应用提供理论依据，我们研究了Bcl-2和Bax在硫化砷诱导的K562细胞凋亡中的表达.
1 材料和方法
1.1 材料 雄黄购自西安中药集团（产自湖南），经酸洗、水飞法炮制后，溶于RPMI1640（Gibco）培养液，灭菌分装，取样用原子吸收光谱法作砷（As）含量测定，用时以完全培养液稀释.MTT和二甲基亚砜（DMSO）均购自Sigma公司.MTT溶液配制同文献［8］ .鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax均为Maxim Biotech，Inc产品，UltraSensitiveTM S-P Kit购自福州迈新生物技术开发公司.K562细胞是一种建株于慢性髓细胞白血病急性变患者骨髓细胞的细胞株［9］ ，将细胞以2×108 ・L-1 密度接种于含或不含药物的新鲜RPMI1640完全培养液［内含100mL・L-1 小牛血清（杭州四季青产），100×103 U・L-1 青霉素，100×103 U・L-1 链霉素］中，在37℃、饱和湿度、含50mL・L-1 CO2 培养箱中进行培养，隔日换液以保证细胞密度在（2～5）×108 ・L-1 .
1.2 方法
1.2.1 细胞形态学观察 培养细胞经不同浓度硫化砷溶液作用一定时间后，涂片，分别进行Wright染色及HE染色，光镜下观察细胞形态及凋亡情况.取1×106 细胞，经戊二醛、四氧化锇固定后脱水，浸透，EPON812包埋，超薄切片，铀及铅双重染色，透射电镜观察.
1.2.2 MTT法检测细胞生长增殖状态 将对数生长期细胞以2×108 ・L-1 密度接种于96孔板，试验组加入等体积含各浓度硫化砷的培养液，对照组加入等体积培养液，每组设4个平行孔，并各设空白孔（即只加入药液和培养液，不加细胞）以调零.分别在培养18，42和70h后，加入MTT20μL，继续培养4h，离心，弃去上清，加入DMSO150μL，混匀，570nm处测A值.细胞生长抑制率=（1-处理组A值/对照组A值）×100%.重复3次取平均值.
1.2.3 免疫组化检测Bcl-2，Bax表达 按照Ultra-SensitiveTM S-P Kit说明书操作.细胞滴片经H2 O2 阻断过氧化物酶活性后，以非免疫性动物血清封闭，分别与一抗（鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax）室温下孵育60min，先后与生物素标记的二抗及链亲和素-过氧化物酶孵育，DAB显色，苏木素复染，光镜下观察.以上各步骤均在室温下进行，各步骤间均以pH7.4的PBS充分漂洗，每次染色均设阴性及阳性对照.结果用北航CMIAS真彩色病理图像分析系统处理，用吸光度平均值（A）代表染色强度.
2 结果
2.1 细胞的形态学观察 175～1400μg・L-1 硫化砷作用18～144h后，Wright及HE染色均可见凋亡细胞:细胞体积缩小，细胞核固缩、浓染，断裂成小团块分散在胞膜周边，而细胞膜完整.透射电镜下可见在细胞膜及核膜均完整的情况下，核染色质边集，沿核膜边缘形成月牙状电子密度增高区.
2.2 K562细胞生长和增殖 MTT实验发现，硫化砷对K562细胞生长、增殖有明显抑制作用，且此作用呈现明显的剂量及时间依赖性（Tab1）.
表1 雄黄对K562细胞生长和增殖的抑制率 略
2.3 Bcl2和Bax的表达 Bcl-2蛋白借其末端一个由19个氨基酸组成的疏水性羧基末端与膜相连，定位于细胞膜、内质网、线粒体膜及核膜上.免疫组化染色表明K562细胞Bcl-2蛋白表达很低，硫化砷处理对其表达无明显影响（Fig1）.图像分析测阴性对照A值为:0.108±0.012，K562细胞Bcl-2蛋白基础表达量A值为0.152±0.023，硫化砷处理后A值为0.138±0.028，无显著性差异（P>0.05）.Bax蛋白主要定位于细胞质，K562细胞经硫化砷处理后，Bax染色强度明显增加（Fig2）.图像分析测定硫化砷处理前后，Bax蛋白表达量A值分别为0.240±0.013和0.316±0.021，差异显著（P
3 讨论
已有的研究发现CML发病与凋亡受抑有关［9，10］ .我们发现，硫化砷在175μg・L-1 及以上浓度时能抑制K562细胞的生长、增殖并诱导其凋亡，说明在一定剂量下，硫化砷可通过抑制细胞增殖、诱导凋亡而起作用.现已发现许多基因与细胞凋亡有关，包括bcl-2家族、Apo-1/Fas（CD95）、c-myc、白细胞介素-1β转化酶（ICE）家族（即Caspases家族）、p53等.这些基因在凋亡过程中起着不同的作用.Bcl-2蛋白家族是凋亡的主要调节者，其家族成员包括抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-XL ，Mcl-1，Al/Bfl-1和凋亡蛋白Bax，Bcl-XS，Bak，Bik和Bad.这些蛋白彼此形成二聚体，它们之间的比率影响着肿瘤细胞对各种凋亡刺激因子的敏感性或抗性，最终决定细胞的生死存亡［7，11］ .其中研究最多的是Bcl-2和Bax.Bcl-2（B cell leukemia/lymphoma-2）基因最早是从小鼠B细胞淋巴瘤中分离出来的，其编码的蛋白质由239个氨基酸残基组成，Mr 26.由于Bcl-2能够抑制许多因素介导的细胞凋亡，而引起人们的极大关注［12，13］ .Bax与Bcl-2具21%同源性，由192个氨基酸残基组成，Mr 21.Bax/Bax二聚体在体内过量表达时，可促进细胞凋亡.Bcl-2行使其功能是通过与Bax形成异二聚体机制的.半胱氨酸蛋白酶（caspases）原通过与凋亡诱导蛋白Apaf-1的NH2 -末端区域结合而激活，抗凋亡蛋白如Bcl-XL 则可直接与Apaf-1结合，抑制它同caspases原的交联，从而抑制caspases-9的激活［14］ .而Bax则可直接拮抗Bcl-XL 的作用，它可把Apaf-1从Bcl-XL 的结合中释放出来，从而激活cas-pases，发生自身催化的化学反应，引起线粒体膜电位下降，细胞内活性氧物质升高，降解，激活内源性核酸内切酶，引起降解，形态上可见的凋亡出现［7］ .
图1 － 图2 略
我们发现，K562细胞低表达Bcl-2蛋白，与文献［6］ 报道一致.硫化砷处理后对K562细胞Bcl-2蛋白表达无明显影响，而Bax蛋白在硫化砷作用后表达明显增加.据此可认为，在硫化砷抑制K562细胞生长增殖并诱导其凋亡的过程中，Bax蛋白通过上述途径起了重要作用.由此推想，可否用基因转染等方法增强Bax蛋白的表达，来增加K562细胞对硫化砷等凋亡诱导剂的敏感性，这将是很有意义的.
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