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声速的测定范文1
关键词：橙汁饮料 维生素C 碘量法 淀粉
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2016）06（a）-0041-02
维生素C是人体重要的维生素之一，其参与体内的氧化还原反应、多种羟化反应，有防止贫血的作用，可促进伤口愈合，维持牙齿、骨骼、血管和肌肉的正常功能。人体不能自身制造维生素C，所以人体必须不断地从食物中摄入维生素C。德国营养研究会建议，每人每天应摄取50～100 mg的维生素C。而30 mg的维生素C是人体1 d摄取维生素C的最少值，如果低于30 mg，身体就会缺乏维生素C，使得部分机能无法正常运作，长期以往，甚至出现坏血症。
1 实验原理
维生素C分子式C6H8O6，在空气中稳定，但在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化，生成脱氢抗坏血酸。分子结构中的烯二醇基具有还原性，可被I2定量地氧化成二酮基，抗坏血酸分子中的烯二醇基被I2完全氧化后，则I2与淀粉指示剂作用而使溶液变蓝，因而可用I2标准溶液直接测定。其滴定反应式如下：C6H8O6+I2=C6H6O6+2HI。所以当滴定的溶液出现蓝色时即为终点。
2 实验仪器与试剂
2.1 仪器
50 mL滴定管、滴定管、250 mL锥形瓶、250 mL容量瓶、25 mL移液管、500 mL烧杯、研钵、玻璃棒、电子分析天平等。
2.2 试剂
2.2.1 K2C2O7标准溶液（约为1/3的1.42×10-2 mol/L）
准确称取0.35～0.36 g的K2C2O7基准物质于小烧杯中，加入适量蒸馏水，待其全部溶解后转移至250 mL容量瓶中，定容、摇匀、备用。
2.2.2 I2溶液（约为1.42×10-2 mol/L）
称取1.8I2和3.5 gKI，置于研钵中加少量水，充分研磨。待I2全部溶解后，将溶液转入棕色试剂瓶，加水稀释至500 mL，摇匀，放置暗处保存。
2.2.3 Na2S2O3标准溶液（约为2.90×10-2 mol/L）
称取3.5 gNa2S2O3・5H2O置于500 mL烧杯中，加入新煮沸冷却的蒸馏水，使其全部溶解，再加入少量的Na2CO3，加水稀释至500 mL，将溶液转入棕色试剂瓶保存。
2.2.4 KI溶液（100 g/L）
用托盘天平称取30 gKI固体，于500 mL烧杯中，加水溶解，稀释至300 mL，将溶液转入棕色试剂瓶，置于暗处保存。
2.2.5 0.5%淀粉指示剂
称取1 g可溶性淀粉于小烧杯中，加少许蒸馏水调成浆，搅拌下加到200 mL沸水中，冷却后备用。
2.2.6 1∶1HCl溶液
量取100 mL浓盐酸边搅拌边缓慢注入100 mL蒸馏水中，将溶液转入透明试剂瓶中保存。
3 实验步骤
3.1 Na2S2O3溶液的标定
准确移取25.00 mL的K2C2O7标准溶液于碘量瓶中，加入10 mL的1∶1HCl溶液，15 mL的100g/LKI溶液，盖上盖子，放在暗处5 min，待反应完全后，加入100 mL蒸馏水，用待标定的Na2S2O3溶液滴定至淡黄色，然后加入2 mL0.5%的淀粉指示剂，继续滴定至溶液呈现亮绿色为终点，平行标定3次。
3.2 I2标准溶液的标定
准确移取25.00 mLNa2S2O3溶液于250 m锥形瓶中，加入50 mL蒸馏水，2 mL0.5%的淀粉指示剂，用碘溶液滴定至稳定的蓝色，30 s内不褪色即为终点。平行标定3次。
3.3 橙汁饮料中维生素C含量的测定
准确移取25.00 mL已标定的I2标准溶液于250 mL容量瓶中，定容，摇匀。用移液管移取25.00 mL橙汁饮料，置于250 mL锥形瓶中，加入50 mL蒸馏水，2 mL0.5%的淀粉指示剂，立即用稀释10倍的I2标准溶液滴定至出现稳定的浅蓝色，30 s内不褪色即为终点，平行测定3份。
4 数据处理
5 结果与分析
5.1 结果分析
实验测得的橙汁饮料中维生素C的含量为35.50 mg/100 mL，与该橙汁饮料的包装上标明的维生素C含量4～43 mg/100 mL相符，检测合格。
5.2 产生误差的原因
（1）碘溶液不稳定，易挥发损失，常加入过量I―减少挥发，但空气能氧化I―，引起I2浓度增加。
（2）Na2S2O3溶液不稳定，易分解，在滴定过程中，可能有微小的浓度变化。
（3）维生素C的强还原性，极易被氧化而使其含量减少，从而使I2的体积消耗减少。
（4）实验过程中不可避免地出现操作误差和仪器误差，如读数和移取溶液体积的微小差异等。
（5）橙汁饮料本身有比较深的橘黄色，使得滴定终点颜色变化不明显，不容易判断滴定终点。
参考文献
[1] 郭小容，李乐.化工分析[M].北京：化学工业出版社，1998.
声速的测定范文2
关键词：水利建设；定西；城市化
甘肃地处温带，大陆性气候特征明显，干旱少雨，农业发展面临极大的困难。而定西市位于甘肃中部，相比甘肃其他地方，定西市素有“陇中苦瘠甲天下”名声，属于全国最贫苦的地方之一，主要原因在于不仅降水稀少，而且地表水和地下水资源极为短缺。定西市大部分地区属于丘陵沟壑区，除了少量河谷耕地有狭小的区域可以灌溉之外，大多土地无法灌溉，主要“靠天吃饭”。为了发展定西经济，提高人民的生活水平，在定西市发展水利建设，势在必行。对其存在的主要问题进行思考，分别应对，非常必要。
1、 水利建设的主要方式问题
定西市以河流为主的地表水资源极为短缺，而且沟壑纵横，农田面积狭小，因此定西市水利建设的主要方式必然不是大型水利工程，而是小型水利。小规模的水利工程建设，规模很小，可受益的范围有限。同时，由于规模小，往往导致相应的其他问题，例如小机井，小机井随意开掘，毫无布局，不仅对地下水资源掠夺式利用，而且建筑质量很差，再加上黄土高原水土流失严重，因此很容易坍塌淤平，很容易失去防洪节水、抗旱浇灌的作用。本市大部分灌溉使用土渠，缺乏科学的节水措施，大量的水资源遭到浪费，主要采用粗糙的漫灌方式，跑水、渗漏频发。面对这种情况，需要对小型水利建设进行总体规划，统一管理。在地表水资源相对丰富的地区，加强渠道建设和水费、电费管理。在地表水资源相对丰富的地区，加强渠道建设和水费、电费管理。在缺乏地表水资源的地区，加强雨水集流工程的建设投入。与水利建设相配套，应该加强抗旱作物的推广和地膜耕作的普及，尽量使农民能够旱涝保收。
2、 城市化过程中的水利问题
定西市随着城市规模的扩大和城市人口的增加，两个问题随之凸显：第一，城市用水的来源问题；第二，城市建设中的排洪问题。安定区处于严重缺水地区，一直供应城区用水的区域，但是内官盆地、卧龙川盆地和香泉盆地的地下水，经过擦探测，“已无进一步开发利用的潜力”。通渭、陇西和渭源等县城的用水都没有稳定的保证，问题相当严重。可以说，定西市各县城都面临着城市用水难以为继的局面，这种情况下甘肃省启动了引洮工程。引洮工程受益面很大，其中定西市就包括渭源、临洮、安定、陇西、通渭。这是一项甘肃中部的重点扶贫项目，不仅可以解决城乡生活用水和工业用水，而且能够解决一部分农业灌溉等问题。
城市化的另外一个问题，就是城市化建设中的排洪问题。城市的快速扩展导致大面积的地面硬化，从而暴雨径流量剧增，而定西市的大部分县城的排洪设施几近于无。其结果就是县城经常遭遇水淹，损失严重。第二，侵占河道，破坏生态系统。在经济利益的驱动下，河道和排洪支流往往被侵占使得城区排水能力骤减。天降暴雨时排水不畅，堵塞淤积严重，人为导致洪涝灾害。围河造地、挤占河道、违章建筑为城市排洪造成了很大的压力。第三，缺乏整体规划。因为水利部门职能管理河道规划，而其余的城市道路、城市排水等规划掌握在其他部门的手里，故而很难协调。因此，从整个城市来说，往往缺乏综合考察供水、景观和排洪在内的整体规划。
3、水利建设管理问题
由于体制的原因和定西市水资源的状况，导致定西市水利管理比较落后。首先，因为水利部门并不能综合考察、规划、管理水利情况，从而导致政出多门，相互抵触，导致无法做出整体性的水利管理。另外，城市污水往往排入灌溉用水，从而影响水源，污染河道，危机农作物。其次，由于定西的地貌和水资源匮乏，定西的水利建设以小型项目为主，从而导致水利管理极为困难。要解决上述问题，需要建立协调管理机构，能够从整体上进行规划和管理。同时，明确规章制度，严格杜绝各种盲目打井等混乱现象。此外，需要引进合适的水利人才，引进科学的水利知识，提高水利设施的技术水平，科学利用水资源。
4、水利建设资金问题
定西市属于贫困地区，在水利建设方面巨大的资金缺口。这种缺口体现在多个方面。首先，从水利管理部门来说，由于缺乏足够的资金支持，无法启动新的水利建设工程，无法有效地更新和维护设备，无法引进高层次的人才。从农民的角度来说，由于农民收入普通偏低，其经济承受能力极为低下。要解决资金短缺问题，要争取向中央财政申请更多的帮扶基金，通过地方的资金配套，再通过受益人的参与投资，多渠道筹集资金。
综合言之，以上四个问题相互联系，不可分割，自然资源的不利因素，导致规模化问题，同时也导致城市化的水问题，以及资金匮乏和管理不善。要想真正推动定西市的水利建设，必须综合考虑，联合多方力量，集思广益，多方投资，方能解决问题。
5、结束语
作为国民经济的基础性工程，基层水利工程的建设与管理十分重要，尤其是基层水利工程的管理，对基层水利工程充分发挥其职能、促进当地的工农业的发展具有重要的现实意义。
参考文献：
[1]韩发旺，李守业，周特奇，浅谈水利工程施工管理[J]，河南水利与南水北调，2010（3）：45，48.
声速的测定范文3
关键词：高效液相色谱法；维生素；复合维生素B片
【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1674-7526（2012）08-0283-02
复合维生素B片是由维生素B1、维生素B2、烟酰胺、维生素B6和泛酸钙组成。用于预防和治疗B族维生素缺乏所致的营养不良、厌食、脚气并糙皮病等。维生素B1是糖代谢所需辅酶的重要组成成份。维生素B2为组织呼吸所需的重要辅酶组成成份，烟酰胺为辅酶I及II的组分，脂质代谢，组织呼吸的氧化作用所必需。维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。泛酸钙为辅酶A的组分，参与糖、脂肪、蛋白质的代谢。均为维持机体正常代谢和身体健康必不可少的重要物质。该品种收载于卫生部药品标准化学药品及制剂第一册，没有建立四种维生素同时通过HPLC法进行含量测定的方法[1]。本文建立了一种采用高效液相色谱方法同时测定B族维生素含量的方法。样品处理简单，方法准确，灵敏度高，可作为复合维生素B片的质量控制方法。
1仪器与试药
Waters 1225 高效液相色谱仪，烟酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100115-200703，含量99.9%），维生素吡哆辛（中国药品生物制品检定所，批号：100116-200502），维生素B1（中国药品生物制品检定所，批号：100090-200502），维生素B2（中国药品生物制品检定所，批号：100369-200502）；庚烷磺酸钠为分析纯，冰醋酸、三乙胺和甲醇均为色谱纯；复合维生素B片（自制：批号分别为20101001、20101002和20101003）。
2方法与结果
2.1色谱条件的选择。色谱柱：Boston Green ODS C18（250mm x4.6mm，5μm）；流动相：甲醇一庚烷磺酸钠溶液（庚烷磺酸钠0.6g+三乙胺1.0mL+冰乙酸6.0mL+水至1000mL）（20：80，用2M NaOH调节pH至3.80）；检测波长为280nm，柱温：30℃，流速1.0mL・L-1。
2.2溶液的制备：对照品溶液的制备：避光操作。精密称取烟酰胺对照品约50mg，维生素B1对照品15mg，维生素B2对照品7.5mg，置500mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，精密加入维生素B6对照品溶液（精密称取盐酸吡哆辛对照品10mg置50mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度）5mL，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。
供试品溶液的制备：避光操作。取20片精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当1片量），置50mL棕色容量瓶，加5%冰醋酸溶液适量，超声15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.3系统适用性试验：取对照品溶液及供试品溶液在上述色谱条件下测定，理论板数均应不低于2000，各相邻峰之间的分离度大于1.5。
2.4专属性考察：按处方比例及工艺自制分别缺烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6之中一种的阴性溶液、对照品溶液及供试品溶液各20μL进样，结果（见图1-6），由图可见，在上述色谱条件下，烟酰胺、维生素B1、维生素B2和维生素B6峰分离良好，空白辅料对样品测定无干扰，本法具有良好的专属性。
2.5线性关系考察：精密称取精密称取烟酰胺对照品约400mg，盐酸吡哆辛对照品8mg，维生素B1对照品125mg，维生素B2对照品60mg，置200mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液超声溶解15～20min，放冷至室温，用5%冰醋酸溶液稀释至刻度作为贮备液。精密量取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，置100mL棕色容量瓶中，加5%冰醋酸溶液稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液进样20μL。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线：烟酰胺：A=2344.3C+12365，r=0.9993，n=3；维生素B1：A=13891C+11990，r=0.9993，n=3；维生素B2：A=49003.316C+37112.365，r=1.0000，n=3；维生素B6，：A=27074C+13357。r=0.9993.n=3；结果表明：烟酰胺在：41.02～369.18μg・ml-1；维生素B1在12.45～112.06μg・ml-1；维生素B2在 6.152～55.37μg・ml-1；维生素B6在08140～7.326.18μg・ml-1范围内均呈良好的线性关系。
声速的测定范文4
1 测定原理[1]
2 试剂与仪器
2.1血清标本 收集浓度约为2.30mmol/L无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人的TG，混合血清。
2.2 维生素C标准液(5.68mmol/L)取规格为5ml：1g的维生素C(分子量为176.13)注射液1支，加蒸馏水稀释至1000ml。
2.3 其他试剂上海玉兰生物技术有限公司生产的甘油三酯GPO-PAP法单试剂检测试剂盒。
2.4 仪器 赛诺迈德(中国)SBA-730半自动生化分析仪。
3 试验方法[2]
3.1 样品制备
①基础样品血清0.9ml+蒸馏水0.1ml；②干扰样品I 血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.05ml＋蒸馏水0.05ml；③干扰样品Ⅱ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.06ml+蒸馏水0.04 ml；④干扰样品Ⅲ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.07 ml+蒸馏水0.03 ml；⑤干扰样品Ⅳ：血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.08 ml+蒸馏水0.02ml；⑥干扰样品Ⅴ 血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.09ml+蒸馏水0.01 ml；⑦干扰样品Ⅵ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.1ml；⑧维生素C样品蒸馏水0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.1ml。
3.2 甘油三酯值测定取各样品按GPO-PAP法单试剂检测试剂盒说明书操作。
3.3 计算干扰物加入值(mmol/L)＝干扰物溶液浓度×
3.4 计算结果（表1）。
4 结果与讨论
4.1 在此酶法的Trinder反应中，由于过氧化物酶(POD)的特异性较差，还原性物质维生素C可以和氧化酶(GPO)反应生成的H2O2发生反应，即与色原性物质竞争H2O2，产生竞争性抑制，消耗反应过程中产生的H2O2，使部分H2O2不能参与POD的偶联反应，从而降低显色程度，使测定结果偏低，产生负的测定误差。从试验结果可以看出，维生素C对GPO法测定TG结果有负干扰。
4.2 干扰试验是用于测定某物质加到样品中所产生的恒定系统误差，干扰值即偏差 (Bias)。根据我国卫生部临床检验中心推荐使用美国CLIA'88允许偏倚范围TC为靶值±25％的标准，TC在医学决定水平(Xc)为2.30mmol/L时的允许偏差(EA)为0.58mmol/L。与之比较在该干扰试验中，当血清中维生素C的浓度达到0.511mmol/L时，对TC的干扰率为29.4％，偏差(Bias)为0.59mmol/L、Bias大于EA有统计学意义，表明血清中维生素C浓度达到0.511mmol/L。以上时，对该反应产生干扰所引起的偏差会对临床检验结果有影响。
4.3 由于在实际工作中，存在着临床用药对某些检验结果的干扰，这就要求我们检验工作者在日常的工作中要密切与临床的联系，了解病人的用药情况，改进检验方法，去除干扰，减少误差，确保检验结果的准确。目前双试剂在自动化分析仪的使用，有效解决了维生素C对Trinder反应的干扰这一问题。即在酶法测定葡萄糖、胆固醇、甘油三酯等的试验中，第一试剂中加入维生素C氧化酶。当样品中加入第一试剂后，37℃作用5分钟，可将样品中维生素C分解掉，从而排除了维生素C对Trinder反应的干扰作用。
声速的测定范文5
关键词：X荧光；生物样品；K、Na元素
中图分类号：O657.34 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161131007
1 实验目的
1.1 生物样品测定的重要性
随着社会的进步，经济的快速发展，人们越来越注重身体的健康，那么食品安全以及人们生活的环境状况就越来越得到大家的重视。生物样品包括植物样品和动物样品，在很大的程度上能够反映出其所生长环境的污染情况，同时可以直接的反映出食品中个元素的含量，从而判断食品的质量。因此测定生物样品已经在很多部门、很多行业得到了广泛的应用。
1.2 生物样品的测定方法
1.2.1 生物样品中Cu、Pb、Zn、As、Cd、Cr、Co、Ni、Mo、B、Mn、P、Fe、Ca、Mg、K、Na等元素的测定
高压消解法。称取0.1000～0.5000g样品置于聚四氟烯消化罐内，加硝酸4mL浸泡过夜。再加过氧化氢（30%）2mL。盖好内盖，旋紧不锈钢外套。放入恒温干燥箱于140℃保持5h，在箱内自然冷却至室温，转入25mL容量瓶中，用水冲洗消解罐，定容摇匀。.
微波消解法。称取0.1000～0.2000g样品置于聚四氟烯消化罐内，加硝酸2～4mL浸泡过夜。再加过氧化氢（30%）2～3mL。装好消解装置，在微波消解仪中消解样品，反应结束后，取出消解罐，将消解液移入25mL比色管中，定容。
于ICP-MS测定Cu、 Pb 、Zn 、As 、Cd 、Cr、 Co 、Ni、 Mo、 B；ICP-AES测定P、 Fe、 Ca 、Mg、 K、 Na；或GFAAS测定 Pb 、Cd 、Cr、 Co、 Ni ，AAS测定 Fe 、Ca 、Mg、 K 、Na 、Cu、 Zn 、Mn等元素，分取溶液于AFS测定As、Hg、Se。
1.2.2 生物样品中Si的测定
称取0.1000～0.5000g样品于铂坩埚中放入马弗炉，渐升温至600℃使样品呈灰白色，取出冷却后加入2g无Na2CO3，混匀，置950℃熔融30min，取出冷却后加水提取，加HCI酸化，提取坩埚，定容至100mL，吸取清液10～20mL，硅钼兰比色法测定Si。
因为测定结果很好，所以现在比较常用这种方法测定生物样品，但就操作步骤来说较为复杂，而且需要的实验周期也很长。
1.3 X荧光光谱法测定生物样品
X荧光光谱法是近几十年来新兴的一种利用大型仪器X荧光光谱仪来测定样品的方法，X荧光光谱仪经过许多科研人员和实验人员的不断研究与实验测试，已经形成了比较成熟的一系列测定方法。X荧光光谱法具有测定结果准确度高、精密度好、测定速度快等特点，现在已经广泛应用于农业样品和地质样品的测定。将X荧光光谱法应用到生物样品中的测定，既能够降低实验成本，又能大大提高工作效率。
2 仪器及试剂
2.1 仪器
X荧光光谱仪：美国热电ADVANT，XP+
压样机：中国科学院长春科新公司 YJD-60
2.2 试剂
硼酸：沈阳化学试剂厂。
3 校准曲线
3.1 样品制备
先将标准样品于105℃烘干，准确称取6.00g标准样品[1]，用硼酸镶边垫底，在40MPa压力下压制时间为30S（压片时间长能够样品压得更牢固，不易脱落），制成外径为40mm，式样直径为32mm的圆片编写样号后置于干燥器中待测。测定时应注意，用手拿样品的边缘，避免X射线测量面的污染[2]。
3.2 仪器条件
本方法选用热电ADVANT，X型号X荧光光谱仪对样品进行测定，仪器测量条件见表1。
3.3 标准物质
本实验选用国家一级生物标准物质包括岩石GSB1―GSB4，GSB7、GSB11、GSB12、GSB19、GSB24、GSB26各元素都有覆w足够的含量范围和含量梯度，各组分的测定范围见表2。
3.4 校准曲线
按表1的仪器测量条件对选用的标准样品进行测量。计算各元素的分析净强度（103s-1）。
采用一点法扣除背景，按下式计算分析净强度Ii（103s-1）
Ii =IP - IB
式中：IP为分析线谱峰强度，103s-1 ，IB 为分析背景强度，103s-1。
本试验采用的是经验系数法进行曲线回归。
3.5 分析步骤
按校准曲线标准试样制备步骤制备未知样，将制备好的试样装入样品盒置于试样架中，启动相应的程序进行测定，测定结果自动储存于计算机中。
4 准确度
本实验对国家级标样GSB4、GSB12、GSB19、 GSB26进行测定，测定结果与标准值对照见表3、表4。
5 讨论
本方法较原有的生物样品测定方法有以下优点：
前处理简单，节约试剂降低了实验成本；
测定速度快，工作量小，节约人力资源；
具有样品前处理简单，测定结果准确等优点。
本实验在标准曲线的建立上考虑到了个元素的浓度梯度，基本能够覆盖样品k、Na元素分析所要求的含量范围。在样品制备方面，以往X荧光光谱法测定的样品制备非常简单，将样品称4.50g，直接在在40MPa下压片5s即可。但由于生物样品的特殊性，为保证样品的厚度本实验在称样量上有所增加（由4.50g增至6.00g），压样时间也有所延长（由5s延长至30s）。从测定结果上来看，标准物质的测定值与真实值间的相对误差都在误差允许的范围内，能够满足实验测试的要求，同时本方法测定结果准确，测定速度快，大大提高了工作效率。
6 方法的展望
本文针对生物样品中k、Na元素利用X荧光光谱仪进行了方法研究实验，结果令人满意。在此基础之上，在以后的工作中还可以对其他元素进行实验测试，把测定的元素范围和浓度范围进一步扩展，已达到测定更多元素的目的，从而能够丰富生物样品的测定方法。
参考文献
声速的测定范文6
【摘要】本文建立了反相色谱法同时测定细胞培养基M199中维生素A、维生素E醋酸酯、维生素D2的含量的方法。采用Lichrospher C18，5μm，225×4mmid柱，可变波长UV检测器，甲醇为流动相，样品在10分钟内达到了基线分离。该方法简便、快速，结果可靠，可用于细胞培养基的质量控制。
【关键词】细胞培养基 维生素 高效液相色谱法
细胞培养基作为细胞工程重要的原材料，其品质的优劣直接影响到生物制品的质量，是生物制品企业非常重视的基础原料。而细胞培养基中含有氨基酸、维生素等必需的营养物质，它们是维持和促进细胞生长、增殖的主要因素。这些物质含量的多少、是否符合规定已成为衡量细胞培养基质量的重要指标。其中的某些维生素成分如维生素A、维生素E、维生素D2等对空气、光照和热极不稳定，且在培养基中的含量极少，是细胞培养基质量稳定性的重要影响因素。在细胞培养基M199中这三种维生素组分的含量在0.01μg/ml～0.14μg/ml之间，参考已报道的文献，脂溶性维生素的测定大都是含量较高的复合制品，而从含有61种成分的M199细胞培养基中提取这三种维生素并进行测定还未见报道［1～4］。由于这三种维生素的含量极低，在同一波长下难以同时测定三种组分，因此，我们采用可变波长UV检测器，利用多波长切换来分别测定VA、VD2和VE，以提高检测灵敏度，获得了良好的结果。
1实验部分
1.1 仪器和试剂：HP1050型高效液相色谱仪包括：HP 四元梯度泵、HP自动进样器、HP 可变波长紫外检测器、HP Pheonix Dos化学工作站；分析天平BS210S，赛多利斯；旋转蒸发器RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂；维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素E醋酸酯均为sigma试剂；甲醇为色谱纯；氯仿、异丙醇为分析纯。细胞培养基M199，无锡市美迪生物制品有限公司。
1.2 色谱条件：色谱柱：Lichrospher C18，5μm，225×4mmid；流动相：甲醇；流速： 1.0ml/min，柱温控制：40℃；进样量：30μl；波长切换程序：时间0.0～6.0min 检测波长320nm，时间6.0～8.5min 检测波长265nm，时间8.5～10.0min 检测波长295nm。
1.3 标准品溶液：精密称取维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素E醋酸酯适量，用异丙醇溶解并稀释至下列浓度：维生素A醋酸酯1.4μg/ml、维生素D2 1.0μg/ml、维生素E醋酸酯0.1μg/ml，作为标准品溶液。
1.4 样品制备：取M199细胞培养基5g，精密称定，置250ml分液漏斗中，加入50ml纯化水完全溶解；加入氯仿振摇萃取，萃取5次，每次加入氯仿20ml；合并氯仿层放入250ml旋转烧瓶中，置旋转蒸发器上旋转蒸发至干（35℃），精密量取5.00ml异丙醇至烧瓶中溶解残渣，溶液即为供试品溶液。
2结果与讨论
2.1 色谱分离：根据1.2色谱条件进行色谱分离试验。结果表明，该条件下10分钟内可以有效的使维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素E醋酸酯三种组分达到基线分离，色谱图见图1。
图1维生素色谱分离图
2.2 线性关系：分别取维生素A醋酸酯、维生素E醋酸酯和维生素D2标准品溶液0、1、2、2.5、3ml，置10ml容量瓶中，用异丙醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别进样30μl，计算浓度C（μg/ml）与峰面积（A）之间的线性回归方程：维生素A醋酸酯 A=96.95C-1.76，R=0.9998；维生素D2 A=62.83C-0.45，R=0.9998；维生素E醋酸酯 A= 13.09C+0.20，R=0.999；结果表明，维生素A醋酸酯在0.14～0.42μg/ml、维生素E醋酸酯在0.01～0.03μg/ml、维生素D2 0.1～0.3μg/ml内，与峰面积有良好的线性关系。
2.3 精密度试验：分别取标准品溶液的1ml稀释液，重复进样6次，计算峰面积的相对标准偏差，RSD（n=6）分别为：维生素A醋酸酯1.45%、维生素D2 1.31%、维生素E醋酸酯3.17%，精密度良好。
2.4 回收率试验：在样品中加入三种组分，按上述色谱条件测定维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素E醋酸酯的回收率，平均回收率为95.9%～100.8%，见表1
2.5 样品测定：取三批样品适量，精密称定，按1.4样品溶液制备方法制备供试品溶液，进样量30μl测定峰面积，按外标法计算样品含量，结果见表2
2.6 讨论
维生素A醋酸酯、维生素D2、维生素E醋酸酯的紫外最大吸收波长分别为320nm、265nm和295nm；由于三种组分在细胞培养基中含量都极小，浓度分别为0.14μg/ml、0.10μg/ml和0.01μg/ml，故本法采用多波长切换来进行测定，以提高检测灵敏度；另外细胞培养基成分非常复杂，给脂溶性维生素分离带来相当大的困难，我们在样品前处理时采用了溶媒萃取法；上述两个原因给分析测定带来一定的偏差。由于这三种脂溶性维生素对光、热、空气极不稳定，故我们可以通过测定这三个组分的含量来反映细胞培养基的质量稳定性。本法较好的测定了细胞培养基M199中脂溶性维生素的含量，为细胞培养基的质量控制提供了检测手段。
参考文献
［1］ 高效液相色谱法及其在食品分析中的应用 北京大学出版社1988
［2］ 裘立群、高艾英，高效液相色谱法测定水果中脂溶性维生素含量的研究［J］.广州化工，2010，38（10）151-153
［3］ 李雷、陈文利，高效液相色谱法测定脂溶性维生素的含量［J］.化工时刊，2003，17（8）40-42
［4］ 张慧、裴志东，HPLC测定注射用脂溶性维生素中4种成分的含量［J］.中国现代应用药学杂志，2009，26（6）480-482