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液相色谱仪范文1
液相色谱仪是由输液系统、进样器、色谱柱（柱温箱）、检测器和数据记录处理装置等部分组成的分析仪器。液相色谱仪利用试样中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附特性的差异，由流动相将试样带入色谱柱中进行分离，经检测器检测，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。
1.测量依据：JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》
2.环境条件：温度：（10-30）℃，湿度：（20-85）%RH
3.测量标准：液相色谱仪检定装置；测量范围，标准物质：萘-甲醇溶液（1×10-4～1×10-7）g/mL； 温度：（0-400）℃；不确定度：6%（k=2）。
3.测量对象：液相色谱仪（紫外可见光及二级管阵列、荧光和示差折光检测器）
5.测量过程：用电子天平和秒表检定流量设定值误差和流量稳定性误差；用数显温度计检定柱箱温度设定值误差和温度稳定性能；用微量进样器和标准物质检定仪器的检测限、定性定量重复性。
二、数学模型
（1）
式中：CL-最小检测浓度，g/mL
Nd-基线噪声，mm（mV）
C-标准溶液的浓度，g/mL
H-标准溶液的色谱峰高，mm（mV）
V-进样体积，μL
三、不确定度的来源和分析
根据不确定传递由（1）式得出
（2）
式中各不确定度分量比此独立，灵敏系数为+1
1.不确定度来源
1.1 B类不确定度
1.1.1 标物的相对不确定度是检定液相色谱仪的不确定度的主要来源，直接影响检定结果。标准物质的相对不确定度通常由标准物质证书给出，国家标准物质目录上列的检定液相色谱仪的标准物质为GBW（E）130168，其定值不确定度为4%，包含因子k=2，所以：u1=0.04÷2=0.02。
1.1.2 游标卡尺的标准不确定度u2
游标卡尺经上级传递，符合其技术要求，其最大允许误差为±0.02nm，半宽区间为0.02nm，在此区间认为均匀分布，故覆盖因子k= ，由游标卡尺引起的标准不确定度为：
1.1.3微量注射器的标准不确定度u3
微量注射器经上级传递，符合其技术要求，相对标准偏差1%，所以：
1.2 A类不确定度
1.2.1峰面积或峰高测量值的相对不确定度u4
峰面积或峰高测量不确定度主要是仪器测量的重复性引起的，重复进样6次，检定规程规定定量重复性为3%，因此
1.2.2流动相流速测量的不确定度u5
流动相流速测量的不确定度是由流量的不稳定性，电子天平，使用电子天平引起的不确定度，可以通过对流速连续重复测量得到，采用A类方法进行评定。
以一台北京东西电子研究所生产的高效液相色谱仪为例，用甲醇作流动相，设定流量1.0mL/min，进行重复测量，测量结果如下：
其标准偏差：
相对标准偏差：
流动相流速测量的不确定度
1.2.3 基线噪声测量的不确定度u6
基线噪声测量的不确定度主要来自游标卡尺的不确定度和用卡尺测量的不确定度，一般为0.02，如果用色谱工作站记录基线噪声，则其不确定度优于0.01。
2.不确定度分析
为标准物质的相对不确定度；
为标准高或峰面积测量的相对不确定度，还包括流动相流速测量的不确定度和游标卡尺的标准不确定度；
为微量注射器的标准不确定度。
四、不确定度的合成
五、扩展不确定度的评定
液相色谱仪范文2
[关键词]液相色谱仪；应用；关键性评价方法
中图分类号：TH833 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）14-0022-01
在今天，很多领域都得到了全面性和快速性的发展，并且已经研发出很多高科技产品，在很大程度促进了我国社会及科学技术的发展，液相色谱仪就是其中一项高科技技术，现在不但在医药分析领域得到了广泛应用，还在食品分析领域、环境分析领域和生化分析领域得到了深入性、规范性及广泛性应用，已经影响到我们生活的方方面面。液相色谱仪与其他分析性仪器相比，不但具有范围广和灵敏度高的优势，还同时具备分析快速化、样品量小化、使用方便化等优势，因此成为各种实验室最重要的仪器设备。所以本文作者根据自己对液相色谱仪的了解，结合自己相关实验工作经验，对液相色谱仪关键性能评价方法及其应用进行了深入分析。
1 液相色谱仪的简单概述
1.1 液相色谱仪
利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱（LLC）及液-固色谱（LSC）。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。
1.2 工作原理
相关仪器包括储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等，储液器中液相色谱仪的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
1.3 液相色谱仪的构成部分及特点
主要有由进样系统、输液系统和分离系统等组成，具有如下：①进样系统及其特点：一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。
②输液系统及其特点：包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分，其中高压泵压强为l.47～4.4X10Pa，流速可调且稳定，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。③分离系统及其特点：包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱长度为10～50cm，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管等材料制成，有惰性、多孔性和比表面积大等特点。
2 液相色谱仪关键性能评价方法研究
2.1 输液泵性能评价方法
2.1.1 输液泵流量准确度与稳定性测量方法
在泵出口加一适当背压，以二次蒸馏水或脱气甲醇为流动相，设定合适流量，待输液泵运行稳定后，用称重过的称量瓶收集一定时问内的流动相，根据流动相的密度，计算得出实际流量值。
2.1.2 输液泵脉动测量方法
由于液压泵流量脉动具有频率高、流量大的特点，现有流量计无法测试频率超过300Hz的流量脉动，因此测试高频液压泵流量脉动只能采用间接法测试。
2.1.3 微流量测量方法
主要通过以下几种传感器来实现，但要保证液相色谱流量
①差压式流量传感器：测量原理在于通过伯努利和连续性方程，来对流体压差信号进行测量，最后将测量的流量情况反映出来。②科里奥利质量流量传感器：测量原理在于在流体振动管中流动特定流体，产生科里奥利力，然后与质量流量形成正比关系，最后通过比例测出科里奥利力，得出质量流量大小。③流体振动型微流体流量传感器：测量原理在于通过流体在流道里产生的流体振荡频率，对流量进行测量。④热式微型流量传感器：测量原理在于先进温度传感器（2个）放到流体中，然后通过加热的方式使流体的温度上升，以达到温度传感器能够传感的范围内，使2个不同温度传感器之间形成温度差，最后通过不同的温度差比例测量出相应的流体流量。
2.2 紫外-可见光检测器原理及主要性能评价方法
2.2.1 紫外-可见光检测器检测原理
其工作原理是基于光吸收定律――朗伯-比尔定律，其公式为式（1）：
其中A被表示为吸光度，Io被表示为入射光强度，I被表示为透射光强度，被表示为吸光系数，b被表示为液层厚度，c被表示为溶液浓度，值与检测器的灵敏度呈正相关关系。
2.2.2 紫外-可见光检测器静态基线噪声和漂移测试方法
将检测器波长设置在254nm，采用检测池为空池（充满空气或氮气），ASTM中采用检测池充满甲醇，响应时间为1.0s。开机预热90min后，记录基线1h，取1h内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移。
2.2.3 紫外-可见光检测器波长准确度与重复性测试方法
采用0.05moUL硫酸溶液作为紫外波长标准溶液空白液，对紫外波长标准溶液0.06019/L重铬酸钾的0.05mol/L硫酸溶液在235nm、257nm、31lnm和350nm附近逐点测量吸光度或进行光谱扫描，针对有自动回零功能的可采取步进进样方式。通过软件计算光谱图中波峰与波谷对应的波长示值，并计算与理论值的偏差。
3 液相色谱仪应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
结语
综上所述，不管是在化W领域，还是医药及食品等分析领域，液相色谱仪都已经在各项实验中得到了广泛应用，并在很大程度上推动了我国经济及科学事业的发展，引来了各领域相关研究专家们的重视。对此，上文先对液相色谱仪及其特点及工作原理系统进行简要概述，然后对液相色谱仪关键性能评价方法进行了详细分析，最后对其应用进行了简要分析，希望能够给相关人士提供一定的参考价值。
参考文献
[1] 邹月利，徐雅琴，白靖文，赵李霞.实验室高效液相色谱仪的管理与使用维护[J].实验科学与技术，2014，02：214-217.
[2] 王冠杰，季士委，田利，曹守春，邹健，杨洋.高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定[J].化学分析计量，2013，05：69-71.
[3] 王冠杰，杨洋，肖镜，田利，祁Z琨.WHO药品预认证对液相色谱仪性能验证的要求及比较分析[J].中国药事，2013，05：504-507.
液相色谱仪范文3
【关键词】 液相色谱仪 最小检测浓度 不确定度
1 概述
（1）测量依据：JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程
（2）环境条件：温度：（15～30）℃，湿度（20～85）%RH
（3）测量标准：的萘/甲醇溶液GBW（E）130167
（4）被测对象：Agilent1260液相色谱仪（配紫外-可见光检测器）
（5）测量过程：用标准溶液萘/甲醇测量液相色谱仪最小检测浓度，将20μl标准溶液注入仪器内，从工作站读得相应量的峰高，根据公式直接计算出，分析标准溶液的浓度、峰高、进样量及基线噪声的不确定度便可求最小检测浓度的不确定度。
（6）评定结果的使用：在符合上述条件下，实验室通用液相色谱仪的紫外检测器的最小检测浓度的不确定度，一般可以直接使用本不确定度。
2 数学模型
（1）数学模型：
式中：——紫外检测器的最小检测浓度（g/ml）；——基线噪声（μV）；
——标准溶液的进样量体积（μl）；——标准溶液的进样量浓度（g/ml）；
——标准溶液萘/甲醇峰高的算术平均值（μV）。
不确定度传播率：=+++
本式中各不确定度皆为相对不确定度
（2）灵敏系数：上式中各分量彼此独立，灵敏系数皆为1。
3 标准不确定度的评定
输入量的不确定度主要有：峰高的不确定、进样量体积的不确定度、标准样浓度的不确定度及基线噪声的不确定度。
3.1 输入量H的不确定度的评定
主要来源于色谱仪的测量重复性，通过连续测量得到的测量数据列，采用A类方法评定。在上述条件下，连续10次测得的峰高数列分别为（单位：μV）：1270，1273，1265，1285，1257，1250，1272，1261，1258，1269，根据公式计算其相对标准偏差，。
3.2 输入量C的标准不确定度的评定
证书GBW（E）130167给出的标准溶液的相对不确定度4%（扩展因子），则浓度为的标准溶液的相对标准不确定度为。
3.3 输入量V的标准不确定度的评定
微量进样器的标准不确定度1.4%，服从均匀分布，按B类方法评定，则=1.4%/=0.808%
3.4 输入量N的标准不确定度的评定
基线噪声的最小分度值为0.1μv，按均匀分布，用B类方法评定，故基线噪声的相对标准不确定度。
3.5 标准不确定度汇总表（见表1）
3.6 合成不确定度的计算
3.7 扩展不确定度的评定
取包含因子，则扩展相对标准不确定度为：
4 测量不确定度报告
根据以上分析可知，对液相色谱仪最小检测浓度不确定度影响最大的分量是标准溶液引入的不确定度分量。根据规程可知其使用的标液中，BW5022丙三醇水溶液带来的相对标准不确定度最大，为，而GBW（E）130169硫酸奎宁高氯酸标液带来的相对标准不确定度最小，为，其余分量参照奈/甲醇溶液评定执行，可得液相色谱仪最小检测浓度的不确定度为
参考文献：
[1]JJF 1059.1-2012测量不确定度评定与表示.国家质量监督检验检疫总局，2012，12，03.
液相色谱仪范文4
【关键词】含量测定；高效液相
本药物收载于中华人民共和国卫生部标准第十四册，按照《药品注册管理办法》、中药、天然药物分类及申报资料要求，已有国家标准的中成药和天然药物制剂的注册申请，质量标准应当有所提高。为此，对本药物质量标准进行了研究提高工作，除保留了原产品中华人民共和国卫生部所规定的检验项目外，又建立了蛇床子素的含量测定，并进行了方法学考察。
1.成分
蚕蛾渣、海龙、蛇床子等。
2.含量测定方法
2.1仪器与材料
2.1.1仪器
岛津高效液相仪（泵LC-10ATVP 紫外检测器SPD-10AVP）。
2.1.2材料
实验样品、蛇床子素对照品、其它试剂均为分析纯。
2.2试验的条件及方法
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙晴-水（65：35）为流动相；检测波长为322nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不底于3000。
对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约2g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml。称定重量，放置两小时，超声处理（功率300w，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量。精密量取上清液5ml，置10ml的量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇均，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3考察项目
2.3.1空白试验
按处方组成份量，取蛇床子外的其余药味按工艺要求制成缺蛇床子样品，同供试品溶液制备方法制得空白对照溶液。
取空白对照溶液与供试品溶液及对照品溶液各10μl，依次注入液相色谱仪，测定。空白对照溶液在与对照品溶液相应的位置上不出峰，说明空白无干扰。
2.3.2线性关系考察
（1）相关系数及直线回归方程：
相关系数：是表示两个变量间直线关系亲密程度和相关方向的统计指标，用γ表示。
直线回归方程：在直线回归分析得到一个直线方程，成为直线回归方程.公式如下：
Y=b+aX
（2）分析方法：
分别取对照品溶液浓度为2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml各10μl注入液相色谱仪，测得峰面积，以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一直线。
2.3.3精密度试验
同一供试品溶液依法测量8次，考察仪器的精密度。
2.3.4 重现性试验
按拟定的含量测定方法，取同一批样品6份，同一供试品溶液依法测量2次.计算相对标准偏差（RSD），检验方法的重现性。
2.3.5回收率试验
取同一批样品6份准确称取蛇床子对照品适量加入已知含量的样品（约为测定方法中样品的半量）中，按正文含量测定方法测定，计算回收率。
3.结果
3.1空白试验的结果
表1 空白试验结果
按处方组成份量，取蛇床子外的其余药味按工艺要求制成缺蛇床子样品，注入液相色谱仪，测定。样品溶液在与对照品溶液相应的位置上不出峰，说明空白无干扰。
3.2线性回归方程与相关系数
表2 不同浓度对照品含量测定的试验结果
根据上述浓度与峰面积的关系，得出：
γ=0.9999 b=20245.8737 a=-1677.5911
线性回归方程：
y=-1677.5911+20245.8737x
3.3精密度试验的结果
表3 样品测量8次的试验结果
同一供试品溶液依法测量8次， RSD=1.91%。说明仪器的精密度较好。
3.4重现性试验结果
表4 重现性的试验结果
取样品6份，按正文含量测定法操作， RSD=1.50%。说明仪器的精密度较好。
3.5回收率试验结果
表5 已知样品含量的测定结果
表6 加入蛇床子对照品后样品的试验结果
表7 回收率测定结果
回收率平均值102.54%，RSD=1.81%。
4.结论
本品的含量测定使用高效液相色谱仪，有较好的线性。试验测得精密度，重现性，回收率均符合规定。说明高效液相色谱仪能够完成对本药物的含量测定。
通过前述的空白、线性关系、精密度、重现性和回收率五项试验，根据求得的RSD的结果可知，本次试验的设计方法是可行的、结果是准确可靠的，对本药物的含量测定方法做出有效的论证。建议今后药品生产企业对本药物的含量测定可根据上述方法进行。
【参考文献】
[1]中华人民共和国国家药典委员会・中国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2010.
液相色谱仪范文5
关键词：恩替卡韦 对映异构体测定 高效液相色谱法
Enantiomers of Entecavir by HPLC
Zhao Hai-qiao Wu Shuang-jun Fu Jian Su Gui-yong
（Shandong Fangming Pharmaceutical Group CO.，LTD.，Dongming 274500 ，China）
Abstract：Objective To establish a method for the enantiomers of Entecavirby HPLC.Methods The determination was carried out on CHIRALPAK AD-H，with Hexane - Isopropanol -ethanol - trifluoroacetic acid （70：10：：30： 0.5） as the mobile phase at the flow rate of 0.8ml？min-1 .The detection wavelength was 254nm. Results The method showed good linearity with a correlation coefficient （r） of 0.9999； the precision and stability were satisfactory with all RSDs below 2%. Conclusion This method is an accurate，fast and simple method for the enantiomers of Entecavirtablets.
Key word： entecavir Enantiomers HPLC
恩替卡韦（Entecavir）为最新抗乙肝病毒的一线药物，恩替卡韦是环戊酰鸟苷类似物。II/III期临床研究表明，成人每日口服0.5mg能有效抑制HBV-DNA复制，疗效优于拉米夫定；III期临床研究表明，对发生YMDD变异者将剂量提高至每日1mg能有效抑制HBVDNA复制。对初治患者治疗1年时的耐药发生率为0，但对已发生YMDD变异患者治疗1年时的耐药发生率为5.8%。我国SFDA也已批准用于治疗慢性乙型肝炎患者。恩替卡韦对映异构体测定目前还未有报道，本文建立的方法，方法简便，结果可靠。
一、仪器与试药
1.仪器 日本岛津 SPD-20A高效液相色谱仪。
2.试药 恩替卡韦对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1301001）；正己烷、三氟乙酸、无水乙醇为色谱纯；对映异构体对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1205001）；恩替卡韦（山东方明药业集团股份有限公司；批号：1310001、1310002、1310003）
二、方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为CHIRALPAK AD-H （250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸（70：30：0.5）为流动相，流速为0.8ml﹒min-1，检测波长为254nm，柱温为30℃，进样量为20μl。
2.供试品溶液的制备
取恩替卡韦对照品约20mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加稀释剂（正己烷：无水乙醇=1：1）溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
3.对照溶液的制备
精密量取恩替卡韦供试品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
4.专属性试验
为考察空白溶剂对本品异构体检测的影响，进行专属性试验。取恩替卡韦对映异构体及恩替卡韦对照品各约5mg，分别置两个100ml量瓶中，加稀释剂适量超声使溶解，放冷至室温，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取分离度试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果表明，空白溶剂不干扰本品异构体的检测。恩替卡韦与其对映异构体能有效分离。
5.线性关系考察
通过试验考察本品对照溶液浓度与峰面积在一定范围内是否呈线性关系。①线性储备液的配制：取恩替卡韦对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂超声使溶解并稀释至刻度；精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。②样品溶液的配制：精密量取线性储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0ml，分别置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系列线性溶液。③测定方法：精密量取上述样品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用最小二乘法，以恩替卡韦峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，进行线性回归。结果显示本品在浓度为0.10μg /ml～2.00μg /ml的范围内与峰面积具有良好的线性关系，回归方程为y=74478x-3302.1，相关系数r=0.9999。
6.精密度试验
以在相同条件下，由同一分析人员对同一样品重复进样6次峰面积的偏差为考察目的，配制本品0.1%对照溶液进行精密度试验。结果显示RSD为0.51%，小于2%，表明进样精密度良好。
7.稳定性试验
样品检测过程中可能会将样品溶液在室温里放置数小时，为考察样品溶液在室温放置的稳定性，进行溶液稳定性考察。试验结果显示，供试品溶液室温放置8小时，主峰峰面积的RSD为0.75%，小于2.0%，结果表明，样品溶液在8小时内稳定性良好。
8.样品测定
对批号为1310001，1310002，1310003的恩替卡韦样品，按照“2.2及2.3”项下方法制备供试品及对照溶液，结果均未检出。
三、结果与讨论
1.流动相的选择
刚开始选正己烷-无水乙醇（1：1），结果发现主峰出峰时间太长，改用正己烷-无水乙醇-三氟乙酸（60：40：0.1）分离效果好，且峰形比较好，故选择该流动相。
2.检测波长的选择
以无水乙醇为溶剂，配置 0.05 mg·mL的溶液，在 200～400nm 范围内扫描，结果表明，在 254nm 波长有最大吸收，故将 254nm 作为检测波长。
参考文献
液相色谱仪范文6
摘要：目的采用高效液相色谱法测定舒冠颗粒中二苯乙烯苷的含量。方法十八烷基硅烷键合硅胶柱（Alltima，5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇水（32∶68），检测波长320 nm。结果二苯乙烯苷进样量在0.165～1.650 μg范围内线性关系良好r=0.999 9（n=6），平均加样回收率为99.56%(n=6); 精密度RSD=0.95%(n=6)。结论 该方法操作简便、快速、准确。
关键词：高效液相色谱法； 舒冠颗粒； 二苯乙烯苷
Determination of 2，3，5，4′ teterahydroxystibene 2 O βD Glucoside in Shuguan Granule by HPLC
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC for determination of 2，3，5，4′teterahydroxystibene 2 O βD glucoside in Shuguan Granule.MethodsIt was carried out on an ODS column(Alltima，5μm，4.6 mm×250 mm) using mobile phase of Methanolwater(32∶68)，and detection wavelength was 320nm.ResultsThe 2，3，5，4′teterahydroxystibene 2O β D glucoside sample showed a good linear relationship at the range of 0.165～1.650μg (r=0.999 9; n=6)，the average recovery of the added sample was 99.56%(n=6)and method precision RSD was 0.95%(n=6).ConclusionThe method was simple， available and accurate.
Key words：HPLC; Shuguan Granule; 2，3，5，4′teterahydroxystibene 2 O β D glucoside
舒冠颗粒是由部颁标准中药成方制剂收载品种舒冠片经改剂型而成的品种，全方由制何首乌、川芎、制黄精、红花、羊藿、丹参等7味药组成，具有养阴活血、益气温阳等功效。用于防治冠心病、心绞痛、动脉粥样硬化、高脂血症及抗血栓形成等。方中制何首乌为君药，并且用量最大，加上本制剂的提取工艺为水提醇沉工艺，所以可以采用高效液相色谱法测定舒冠颗粒中2，3，5，4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量以控制该产品的质量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters 2996 PDA检测器，Waters 600 pump、Millennium 32色谱数据工作站；岛津CTO10ASCVP柱温箱、紫外分光光度计：PERKIN ELMER Lambda12。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸水。二苯乙烯苷对照品：购自中国药品生物制品检定所（084420003，供含量测定用）。舒冠颗粒：自制。
2 方法
2.1 色谱条件色谱柱：Alltima C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇水（32∶68），流速1.2 ml/min；柱温：25℃；检测波长320 nm，进样量：20μl。
2.2 实验液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品适量，加50%的乙醇制成每毫升中含60μg的溶液，即得［1］。
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2.2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物，研细，精密称取适量（约1.5 g），加入50%的乙醇溶液50 ml，称定重量，水浴回流1 h，取出，放冷至室温，用50%的乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，再过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液置棕色瓶中，避光保存，即得。
2.2.3 阴性对照实验 取按处方及工艺制备的不含制何首乌原药材的样品，按供试品溶液的制备实验，结果在二苯乙烯苷的峰位上未出现色谱峰，说明阴性对照无干扰。结果见图1。
2.3 线性关系的考察精密称取二苯乙烯苷对照品0.8 mg置10 ml量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，从中分别精密吸取2，4，8，12，16，20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以二苯乙烯苷的浓度（mg/ml）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=5 394 199X＋654，r=0.999 9（n=6），结果表明二苯乙烯苷进样量在0.165～1.650 μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度实验精密吸取同一对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，测定峰面积值，结果RSD=0.95%，表明该仪器和方法精密度良好。
2.5 重复性实验取同一批号样品，按上述测定方法重复测定6次，得其平均含量为1.147 2 mg/g，RSD为1.12%。
2.6 回收率实验精密称取已知含量的舒冠颗粒（二苯乙烯苷含量1.147 2 mg/g）适量，精密加入一定量的二苯乙烯苷对照品，按上述测定方法测定，计算回收率。结果见表1。表1 二苯乙烯苷回收率实验结果（略）
2.7 样品测定实验按上述测定方法分别测定10批样品。结果见表2。表2 舒冠颗粒中二苯乙烯苷的含量（略）
3 讨论
关于何首乌中的二苯乙烯苷的含量测定已经有了很多的报道［2］，测定条件各异，但是对于在该品种的质量控制中建立以何首乌中二苯乙烯苷为含量测定指标的研究，还未有报道，我们针对目前许多企业大力开发该产品的情况特研究了舒冠颗粒中的二苯乙烯苷的含量测定方法。经方法学研究表明该方法简便、快速、准确。可以作为舒冠颗粒的质量控制指标。在本次研究中我们发现文献报道的流动相针对本项目不能达到很好的分离效果，最后确定以甲醇水（32∶68），流速1.2 ml/min时，主峰与其他成分峰能较好的分离。在样品处理方面，我们考察了用甲醇回流提取，稀乙醇回流等方法，结果发现甲醇处理的样品不稳定，在8 h内峰面积降低很快，但是选用稀乙醇回流处理的样品溶液在8 h内稳定。故我们选择用50%的乙醇溶液水浴回流1 h作为供试品溶液的制备方法。
参考文献：