前言：寻找写作灵感？中文期刊网用心挑选的不同运动训练对大鼠AMPK分泌的影响，希望能为您的阅读和创作带来灵感，欢迎大家阅读并分享。
作者：王兵 单位：西安工业大学体育学院
1材料与方法
1．1动物模型的建立
健康雄性SD大鼠60只，体重约200～250g．室温20～22℃，相对湿度保持在45％～55％之间，动物饲养房采取12h黑暗与12h光照交替循环的模式．实验大鼠购入后先适应性饲养l周后，将大鼠随机分为安静对照组（C组）、中等强度运动组（ME组）和大强度运动组（HE组），每组20只．安静对照组常规饲养，不加干预．运动组在电动鼠类跑台上进行不同强度的运动训练，持续8周，每周训练6天，训练强度参照Bedford［3］的运动负荷标准．运动强度分级为：中等强度运动的大鼠跑速12m／min、大强度运动的大鼠跑速18m／min，持续时间20min，隔日增加速度分别至15m／min和18m／min增加时间30min，依次累加，当跑速分别达20m／min和30m／min，时间60min后，跑台倾斜5°，维持此强度运动，5d／w，持续8w结束．
1．2试剂与仪器
1．2．1试剂采用ampkα1／2抗体，β—actin抗体，其余试剂均为国产分析纯试剂．
1．2．2主要仪器采用MINI－PROTEIN垂直电泳糟，低温高速离心机，Odyssey红外扫描仪，匀浆机（PT－MR2100，CE）．
1．3蛋白表达的蛋白质印迹（WesternBlot）分析ME组和HE组于训练结束后24h内进行，大鼠戊巴比妥钠（注射量为：40mg／100g体重）进行腹腔注射麻醉后，暴露大鼠的胸腔并取出心脏，将其放入生理盐溶液进行血液洗净．依据现有文献资料，从左心室心尖部位剪取少量的心肌组织，按每lmg心肌组织加入40μL匀浆缓冲液内，用匀浆机制备成匀浆．将肌肉匀浆分装于准备好的离心管中，温度定位80℃，持续加热5min，置于－20℃冰箱保存［4］．使用时先进行解冻，100℃持续加热5min，10000r／min离心3min后即刻取上清液进行上样．蛋白分离我们采用的是SDS－PAGE系统，采用Laemmli积层胶（浓度为4％）的及浓度为10％的分离胶，每道上样孔加样约为3g的蛋白质样品，在20mA／gel的恒流电下进行电泳，后转膜．转膜完毕取出膜放入封闭缓冲液中封闭60分钟后．放入一抗（1∶1000稀释）中，4℃摇动过夜．一抗孵育结束后，TBS清洗．将膜置于二抗（1∶10000稀释）室温避光轻摇1h，TBS清洗［5］．使用推广度较高的Odyssey红外扫描仪，选择激发波长（anti－rabbit，700nm）对整个膜进行扫描，并得出最终的实验结果．
1．4图像分析及数据统计采用传统的Image软件对所有图像进行分析，选择样本目标条带，测定条带光密度．用Origin7．0软件对实验蛋白进行半定量分析．各组有效实验数据均采用mean＋SEM的形式表示，并使用SPSS社会统计学软件对随机区组的有效设计资料进行方差分析．p＜0．05时认为差异有显著性．
2结果与分析
2．1一般状况实验过程中，各组大鼠自由进食和饮水，饮食与尿量均无异常、体重按计划（1．3％～1．5％的增长速度）增长、毛色光滑亮泽、自主活动无异常、零死亡．饲养房室温控制在22℃～24℃，湿度35％～55％，遵循自然光日照时间（7：00～19：00）．
2．2各组大鼠心肌组织中AMPK表达图1结果显示β?actin为内参蛋白表明各孔道蛋白上样量基本相同．相对于同步对照组，中等强度运动组（ME组）和大强度运动组（HE组）AMPK含量表达升高．大强度运动组（HE组）升高较明显．在真核细胞中AMPK是一种异源三聚体形式存在包括催化亚基α和调节亚基β﹑γ．α亚基含有一个N端激酶结构域和一个C端结构域，N端是催化核心部位，C端负责与β和γ亚基结合．C端还含有变构结合位点，参与和AMP的结合．β亚基是一个脚手架结构其N端负责AMPK与膜相互作用时的定位，中间部分为一段糖原结合结构域（GBD）C端KIS和ASC分别与α和γ亚单位结合［6］，γ亚基包括核苷酸结合区［7］，心肌中α2活性远高于α1，大鼠大强度运动骨骼肌AMPK表达显著增加，中等强度却没有增加［8］，研究发现：心肌在大强度运动中AMPK表达显著增加，与骨骼肌表达一致；运动可能增加AMP量，而降低磷酸肌酸量［9］使AMPK容易变构激活［10］，最近研究认为单次中等强度的刺激骨骼肌AMPKα2活性增加明显［11］．DavidL．Coven等发现大鼠单次运动，其骨骼肌AMPKα1和AMPKα2都随运动强度增加而增加，且AMPKα2增加更明显［12］，在我们研究中心肌α2亚基在不同强度训练中表达与AMPK总量的表达基本一致．现有研究表明：在整个运动过程中，随着心脏做功的增加，心肌收缩力，心率，血压都在增加，这些都可能激活AMPK［13］，但心肌AMPK表达增加的具体机制还不太清楚，有待以后进一步研究．
2．3AMPK在运动中作用图2结果显示与同步对照组相比，中等强度运动组AMPK1（ME组）呈升高趋势，但没有统计学意义，（p＞0．05）而大强度运动组（HE组）与中等强度运动组（ME组）相比，有统计学意义，（p＜0．05）图3结果显示：与同步对照组相比，中等强度运动组（ME组）有统计学意义，（p＜0．05）而大强度运动组（HE组）与中等强度运动组（ME组）比呈升高趋势，有统计学意义，（p＜0．05）心脏有着非常高的能量需求，24h所产生和消耗的能量（ATP）远高于其他脏器．心脏中的能量储备非常低，一但ATP产生停止，则数秒内心脏中的ATP供应就会完全耗竭，所以AMPK作为能量代谢中心感受器和调节器的作用在心脏中显得尤为重要，在缺血、缺氧、高血压等刺激下，使心肌AMPK活化，促进线粒体对脂肪酸摄取和氧化［14］，还能提高葡萄糖摄取和糖酵解．一方面可调节细胞生长和增生，细胞膜，线粒体再生及细胞凋亡和自噬尽管长时间的运动中AMPK在脂肪酸氧化中起的作用还不确定，但是单次运动中AMPK可导致骨骼肌的丙二酰COA减少，脂肪酸氧化增加，另一方面AMPK通过减少细胞内吞作用增加肌纤维膜上的葡萄糖转运蛋白（GLUT4）数量，从而增加细胞对葡萄糖的摄取和利用．有利于提高运动员的运动成绩．运动员AMPK表达增高后，机体产能增加，可以提高运动水平，但AMPK的上下游信号通路需我们进一步研究的．#p#分页标题#e#
3结论
大鼠经不同强度运动训练后，心肌组织中AMPK表达随运动训练强度的增加，呈现逐渐递增趋势，相对于低强度运动训练，高强度训练对于大鼠心肌AMPK的影响更大．提示心肌AMPK表达对不同强度运动产生适应性改变．