微生态制剂防治上呼吸道感染功效

微生态制剂防治上呼吸道感染功效

上呼吸道感染即中医所称“感冒”,全年皆可发病,冬春季节多发。70%~80%的感冒由病毒引起,另有约10%的为链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、支原体或衣原体引起,但临床治疗却普遍使用抗生素。如杨永弘等[1]对某儿童医院冬季急性呼吸道感染患者的门诊处方进行了调查,发现抗生素使用率高达95%。滥用抗生素不仅造成了财物的浪费,还会破坏微生态平衡,降低免疫力,增加了耐药菌株的产生,使疾病迁延不愈或继发各种并发症[2]。因此,利用中药及微生态制剂防治感冒就成为了越来越多的医务工作者关心和研究的问题。

笔者观察了玉屏风散及甲型链球菌(α-Hemolyticstrep-tococcus,简称甲链)对青霉素所致上呼吸道微生态失调小鼠口咽部菌群的调节作用,期望能从微生态角度阐释中药和微生态制剂在防治上呼吸道感染方面的作用机制。

1材料与方法

1.1材料

昆明种小白鼠(SPF级),32只,雌雄各半,体重18~22g,购自四川省医学科学院实验动物研究所[许可证号:SCXP(川)2004-16],实验期间于云南中医学院实验动物中心层流架饲养,自由饮食。

玉屏风散中黄芪∶白术∶防风=1∶2∶1(《丹溪心法》),于云南中医学院白塔路门诊部购买,云南中医学院中药教研室鉴定。

甲型链球菌、乙型链球菌(p-hemolyticStreptococcus,简称乙链)为云南省第一人民医院微生物检验科提供的临床分离培养菌株。

1.2方法

1.2.1动物分组情况

按随机分组的方式将小白鼠分为4组:空白组、造模自然恢复组(以下简称模型组)、玉屏风散组(以下简称玉组)、玉屏风散+甲链组(以下简称玉甲组),每组8只。模型组、玉组、玉甲组连续3d腹腔注射青霉素进行造模(根据临床成人用量,按动物体表面积等效剂量计算方法,每20克小鼠体重给药0.0156g/d),空白组注射0.9%NaCl溶液;后续7d,空白组、模型组灌胃给0.9%NaCl溶液,玉组、玉甲组灌胃给玉屏风散,玉甲组同时加口咽部滴注甲型链球菌;第11~13天用乙型链球菌经口咽部滴注攻击各组小鼠。

1.2.2药液制备、给药剂量及方法

采用水煎法煎煮玉屏风散,并浓缩为100%滤液。将成人每日所需生药量按动物体表面积等效剂量计算方法换算,小鼠给药剂量为0.312g/(d•20g),通过灌胃给药,连续7d。

1.2.3菌液准备

甲链接种:小鼠灌胃后半小时对口咽部滴注甲链菌液0.01mL(106CFu/mL)进行接种,之后禁水禁食2h,连续3d。

乙链攻击:小鼠口咽部滴注乙链菌液0.01mL(106CFu/mL)进行攻击,之后禁水禁食2h,连续3d。

1.2.4采样方式、采样时间及微生态指标检测

在小鼠咽后壁以医用男性拭子反复涂抹取样。样品同时在羊血培养基和巧克力培养基上培养,对菌群进行纯化、染色、镜检以及生化鉴定。

通过检测菌群密集度、甲型链球菌、菌群多样性三项指标来反映小鼠口咽部微生态情况,时间分别为:第1天(造模前)、第4天(造模后)、第11天(攻击前,即给药后)、第14天(攻击后)。

菌群密集度为每毫升样本中的菌落形成单位(colonyformingunit,CFU),甲型链球菌数量为每毫升样本中的甲链菌落形成单位,菌群多样性指标为每个样本所含的菌属数量总和。如造模后小鼠口咽部菌群种类和数量明显减少,有对抗生素不敏感的细菌出现,则表示造模成功[3-4]。

1.3统计学处理

对分布呈偏态的数据以M(QR)[中位数(四分位数间距)]表示,通过Excel2003和SPSS17.0进行统计分析。采用秩和检验,经Kruskal-WallisH检验后,两两比较进行秩转换后采用LSD法进行。

2结果

2.1造模前后小鼠口咽部菌群密集度、甲型链球菌、多样性的比较

结果显示:小鼠口咽部菌群密集度、甲链数量、菌群多样性(P=0.000,P=0.000,P=0.000)在造模后均大幅降低,经统计学比较,三项指标造模前后的差异均具有统计学意义,表明小鼠上呼吸道菌群失调模型制作成功。

2.2乙型链球菌攻击前后小鼠口咽部微生态指标比较(乙链攻击前后比较)

见表2。攻击后与攻击前相比,空白组、玉组菌群密集度减少,差异有统计学意义(P=0.010,P=0.013);空白组、玉组和玉甲组甲链数量均明显减少,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.000,P=0.000);模型组菌群多样性减少,差异有统计学意义(P=0.030)。

乙链攻击后各组与空白组比较,模型组、玉组和玉甲组菌群密集度均高于空白组,差异有统计学意义(P=0.030,P=0.003,P=0.000);玉组、玉甲组甲链数量高于空白组,差异有统计学意义(P=0.004,P=0.011);各组的菌群多样性与空白组比较差异无统计学意义。

乙链攻击后各组与模型组比较,菌群密集度、甲链数量、菌群多样性的差异均无统计学意义。

3讨论

上呼吸道感染,即感冒患者常伴随有口咽部菌群失调的状况[5-6]。正常人体口咽部保持微生态平衡,存在着以甲型链球菌为主的多种菌群。国内外学者[7-10]的研究均发现,呼吸道感染后出现微生态失调,条件致病菌代替了优势菌,应用抗生素后又出现菌群抑制现象,所有生态裸露菌明显减少,其中在正常人群呼吸道表现为优势菌的甲型链球菌的变化最为明显。表明呼吸道正常菌群在抵抗病原菌的入侵,预防呼吸道感染,提高治愈水平方面发挥着重要作用。

玉屏风散由黄芪、白术、防风三味药组成,载于元代著名医家朱震亨的《丹溪心法》,是中医扶正固本的经典方剂,临床常用于防治体虚感冒,疗效甚佳[11]。玉屏风散可以提升患者的“正气”以抵御外邪。方中黄芪益气固表止汗为君,白术补气健脾为臣,佐以防风走表而散风邪。前两味药,以扶正为主,而防风则以祛邪为主,该方正是“标本兼治”的巧妙结合。本研究团队的前期研究结果[3-4]表明玉屏风散治疗感冒的机理之一可能是通过扶持机体正气,促使口咽部的微生态状态由失衡转为平衡。笔者在此基础上进一步观察了在遭受致病菌攻击的情况下,玉屏风散加甲链共同作用对上呼吸道微生态的调节作用。

乙型链球菌族型众多,其A、B、C、D、F、G族对人类有致病能力。其中A族乙型溶血性链球菌为溶血性链球菌中最常见的且致病力最强的病原菌,是急性呼吸道感染尤其是上呼吸道感染的重要致病原。常见上呼吸道感染的细菌性感染病例中,乙链感染占90%以上,且常发生在2~13岁儿童[12]。患者尤其是儿童如不及时接受抗感染治疗,可能导致急性扁桃体炎、猩红热、风湿性心脏病、风湿性关节炎和急性肾小球肾炎等严重疾病。#p#分页标题#e#

笔者在本研究中用临床分离培养的乙链菌株经口鼻滴注的方法对各组小鼠进行攻击。发现,乙链攻击后,各组小鼠菌群密集度、甲链数量均有所减少,显示乙链对各组动物的总菌群及优势菌都造成了一定影响,动物机体抵抗力在致病菌攻击后有所下降。在多样性方面,各组动物在乙链攻击后,菌群多样性都有所下降,其中模型组下降最明显,差异有统计学意义(P=0.030),这提示遭受有害菌攻击时,该组动物抵抗力最为低下。各实验组平行比较的结果同样也支持玉屏风散和甲链有一定的对抗有害菌攻击的作用的结论。乙链攻击后,玉组、玉甲组小鼠菌群密集度、甲链数量、菌群多样性均高于空白组和模型组。表明玉屏风散在调节菌群平衡,维持其多样性方面是起到了一定作用的,而同时辅以甲链的话,则可在一定程度上增强这种作用。

维护好上呼吸道的微生态平衡是保持机体健康的关键因素之一。但目前临床上仍然存在的针对上呼吸道感染患者滥用抗生素的现象,不仅破坏了患者的微生态平衡,导致耐药菌株的产生增加,而且患者还可能出现药物过敏和其他毒副作用,同时也增加了患者的医疗负担[7]。因此,临床亟需找到一种疗效可靠,价格低廉,且毒副作用较低的药物来替代抗生素治疗。玉屏风散治疗感冒疗效甚佳,毒副作用小,且价格优势明显,可作为临床用药的良好选择。如用药时辅助甲链等微生态制剂,可提高治疗效果,但其用药方式、剂量等尚待研究。